MODE OPERASIONAL DAN APLIKASI KROMATOGRAFI GAS S.SI Oleh : Irfan Ariefianto, S.Si * *
Sekolah Pasca sarjana UPI , Prodi IPA-Kimia
A. Mode Operasional GC
Komponen-komponen yang ada dalam cuplikan akan terpisah satu sama lain di dalam kolom akibat perbedaan distribusi di antara fasa diam dan fasa gerak. Semakin lama komponen tersebut berada dalam fasa gerak, maka komponen tersebut akan terelusi lebih dulu. Waktu yang dibutuhkan oleh setiap komponen untuk berada pada masingmasing fasa sangat dipengaruhi oleh beberapa faktor. Suhu merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi pemisahan komponen dari suatu campuran dengan metode kromatografi gas. Parameter yang sangat menentukan adalah pengaturan suhu injektor dan kolom. Perbedaan suhu sekitar 0,5 0C saja dapat menyebabkan perbedaan yang cukup berarti berarti1. Suhu kolom dapat mempengaruhi posisi kesetimbangan distribusi analit di antara fasa diam dan fasa gerak, dimana kesetimbangan distribusi akan lebih cepat tercapai seiring dengan meningkatnya suhu. Dengan demikian, pada suhu rendah, analit yang memiliki titik didih rendah akan lebih lama berada dalam fasa gerak dibandingkan analit yang memiliki titik didih lebih tinggi. Akibatnya, analit bertitik didih rendah akan terelusi lebih dulu. Faktor Faktor suhu, terutama terutama suhu di dalam kolom, tentu saja menjadi salah satu faktor faktor yang harus diperhatikan dalam sebuah analisa kuantitatif menggunakan kromatografi gas. Oleh karena itu, dalam pengoperasian kromatografi gas dikenal dua mode operasional, yaitu : 1. mode operasi operasi isotermal isotermal Pada pengukuran dengan menggunakan mode operasi isothermal, suhu kolom dijaga tetap selama pengukuran berlangsung. Pengukuran dengan cara ini dapat dilakukan apabila analit yang ingin dipisahkan memiliki titik didih yang tidak berdekatan. 2. mode operasional suhu terprogram (Programming suhu)
pada pengukuran dengan cara ini, suhu kolom divariasikan selama pengukuran berlangsung. Peningkatan suhu kolom pada analisa menggunakan kromatografi gas dikenal sebagai gradien suhu1. Gradien suhu adalah perubahan suhu per satuan waktu, bukanlah peningkatan suhu per panjang kolom. Pengukuran dengan mode operasi ini memungkinkan analit yang memiliki titik didih yang berdekatan untuk saling memisah dengan baik, sehingga diperoleh peak yang tidak saling bertumpukan. Gambar 1 dibawah ini menunjukan perbandingan kromatogram yang dihasilkan oleh mode operasi isothermal dan mode operasi pemograman suhu1.
Gambar 1 Perbandingan kromatogram yang dihasilkan dari mode operasi isothermal
(a) pada 168 0C, (b) gradien suhu 6 0C/menit dimulai dari 50 0C
Gambar 1.a dan 1.b adalah kromatogram yang dihasilkan oleh mode operasi isothermal dan suhu terprogram untuk sample yang mengandung 7 komponen, yaitu : 1. pentana 2. heksana 3. heptana 4. 1-oktena 5. dekana 6. 1-dodekana 7. tetradekana Kromatogram yang dihasilkan dari pengukuran dengan mode isothermal menunjukan bahwa analit tidak terpisah dengan sempurna karena beberapa puncak saling bertumpukan, yakni puncak 1 sampai dengan 4. Hal tersebut terjadi karena analit yang menghasilkan puncak 1-4 memiliki titik didih yang berdekatan sehingga terelusi secara hampir bersamaan. Dengan mode operasi isotermal ini tak mungkin memisahkan campuran komponen dengan titik didih/sifat kimia fisika yang sangat bervariasi. Pada suhu rendah, komponen-komponen bertitik didih rendah mungkin dapat terpisah dengan baik, tetapi yang bertitik didih tinggi akan teretensi dengan kuat pada kolom. Pada suhu tinggi, komponen-komponen dengan titik didih tinggi mungkin terpisah dengan baik dengan waktu retensi yang tidak terlalu besar, tetapi komponen-komponen bertitik didih rendah tidak akan terpisah dan terelusi pada awal pemisahan7. Lain halnya dengan kromatogram yang dihasilkan dari pengukuran dengan mode operasi suhu terprogram dengan kenaikan suhu 6 0C. Peningkatan suhu menyebabkan perbedaan waktu retensi yang lebih baik dari analit-analit dengan titik didih yang berdekatan, akibatnya pemisahan terjadi dengan baik seperti ditunjukan oleh puncak 1 sampai dengan 4 pada kromatogram. Peningkatan suhu secara bertahap memungkinkan kecepatan masing-masing analit untuk mencapai kesetimbangan distribusi berbeda-beda.
Analit yang bertitik didih rendah akan lebih cepat mencapai kesetimbangan distribusi daripada analit yang bertitik didih lebih tinggi.
B. Aplikasi Kromatografi Gas
Kromatografi gas adalah metode yang cocok bagi pemisahan, identifikasi, dan analisa kuantitatif komponen gas atau bahan organik yang mudah menguap dan tidak mudah rusak oleh pengaruh panas3. Metode ini dapat diaplikasikan bagi senyawa organik dan gas yang memiliki titik didih kurang dari 250 0C, dimana keduanya memiliki tekanan uap yang cukup tinggi sehingga dapat terbawa oleh fasa gerak yang berupa gas inert1. Tekhnik ini telah digunakan untuk menyelesaikan masalah analitik yang sangat luas selama lebih dari 40 tahun.1,6. Perlakuan yang dilakukan terhadap parameter analisa berdasarkan kromatogram yang dihasilkan, baik oleh GC maupun LC, adalah sama1. Baik pada GC maupun LC, waktu retensi atau volume retensi sama-sama digunakan untuk mengidentifikasi analit yang terelusi. Begitu pula dengan tekhnik yang digunakan untuk analisa kuantitatif, dimana baik pada GC maupun LC, luas area puncak digunakan untuk menentukan konsentrasi analit3. . 1. Analisa Kualitatif
Tujuan utama kromatografi adalah memisahkan komponen-komponen yang terdapat dalam suatu campuran. Dengan demikian, jumlah puncak yang terdapat dalam kromatogram menunjukan jumlah komponen yang terdapat dalam suatu campuran. Selain digunakan untuk keperluan pemisahan, kromatografi juga sering kali digunakan dalam analisis kualitatif senyawa-senyawa yang mudah menguap2. Misalnya, analisa komponen pestisida yang dipisahkan dengan kolom (panjang 1,5 m dan diameter 6 mm) yang berisi fasa diam 1,5% OV-17 dan dideteksi dengan detektor ECD. Dari hasil pengukuran, diperoleh kromatogram sebagai berikut :
Gambar 2. Kromatogram Pestisida
Berdasarkan
kromatogram
pada
gambar
2
diatas,
maka
kita
dapat
mengidentifikasi setiap komponen yang menghasilkan puncak. Dari hasil analisa kualitatif, komponen –komponen yang menghasilkan puncak A, B, C, D, dan E berturutturut adalah Aldrin, heptaklor, aldrin, dieldrin, dan DDT2. Untuk mengidentifikasi tiap peak dalam kromatogram dapat dilakukan dengan berbagai macam cara, antara lain2 : a.
membandingkan waktu retensi analit dengan waktu
retensi standar. Waktu retensi standar diperoleh melalui pengukuran senyawa yang diketahui pada kondisi pengukuran yang sama dengan sampel. Misalnya, menentukan waktu retensi eldrin saja, atau DDT saja, kemudian dibandingkan dengan waktu retensi yang dihasilkan oleh sampel. Bila kedua waktu retensi tersebut sesuai, maka kita dapat mengidentifikasi puncak pada kromatogram. b.
melakukan
ko-kromatografi,
yaitu
dengan
cara
menambahkan larutan standar kepada cuplikan untuk kemudian diukur dengan menggunakan kromatografi gas. Bila luas area salah satu peak bertambah, maka dapat dipastikan bahwa analit tersebut identik dengan standard. c.
menghubungkan GC dengan detektor spektrometer
massa atai IR. Dengan menghubungkan GC dengan spektrometer massa atau IR, maka spektra dari setiap peak dapat direkam secara menyeluruh. d.
setiap komponen yang telah keluar dari kolom
kemudian dikondensasi dan selanjutnya dilakukan analisis lebih lanjut dengan menggunakan spektrometri NMR. Cara ini dapat dilakukan apabila detektor yang digunakan pada GC tidak bersifat destruktif, misalnya TCD.
2. Analisa Kuantitatif
Kromatografi gas juga dapat digunakan untuk keperluan analisa kuantitatif, yang didasarkan pada dua pendekatan, yaitu luas area dan tinggi puncak pada kromatogram. Pendekatan tinggi peak kromatogram dilakukan dengan cara membuat base line pada suatu peak dan mengukur tinggi garis tegak lurus yang menghubungkan base line dengan peak 3. pendekatan ini berlaku jika lebar peak larutan standar dan analit tidak berbeda. Pendekatan luas area peak memperhitungkan lebar peak sehingga perbedaan lebar peak antara standar dengan analit tidak lagi menjadi masalah. Biasanya, kromatografi gas modern telah dilengkapi dengan piranti untuk menghitung luas area peak secara otomatis. Secara manual, luas area peak dihitung dengan menggambarkan segitiga pada peak tersebut, kemudian luas segitiga dihitung.
(a)
(b)
Gambar 3. Pendekatan pada analisa kuantitatif
(a) Pendekatan luas area : A = w1/2.tinggi (b) pendekatan tinggi puncak
Analisa kuantitatif dengan kedua pendekatan tersebut masih sangat kasar, sehingga diperlukan koreksi terhadap hubungan antara luas/tinggi area puncak dengan jumlah analit yang menghasilkan puncak tersebut, yang biasanya dinyatakan sebagai faktor respon detektor. Faktor respon detektor berhubungan dengan kemampuan detektor untuk mendeteksi setiap komponen yang terelusi dari kolom4.
Berdasarkan cara memperoleh harga respon detektor (f) maka analisa kualitatif dapat dibedakan menjadi beberapa metode. Metode tersebut antara lain, metode kalibrasi, metodel standar internal, dan metode adisi3. a. Metode kalibrasi
Metode kalibrasi dilakukan dengan cara menyiapkan sederet larutan standar yang berbeda konsentrasinya tetapi komposisinya sama dengan komposisi cuplikan. Kemudian larutan standar dan cuplikan diukur dengan kromatografi gas sehingga diperoleh kromatogram untuk setiap larutan standar dan cuplikan. Selanjutnya, luas area atau tinggi puncak diplot terhadap konsentrasi larutan standar. Plot data harus berupa garis lurus yang memotong titik nol. Konsentrasi analit ditentukan berdasarkan plot luas area/tinggi puncak terhadap konsentrasi larutan standar. Sebagai contoh, pada penentuan kandungan iodium dalam air dengan metode kalibrasi, larutan standar iodium dengan konsentrasi 2x10-8 M sampai dengan 16 x 10-8 M dan cuplikan yang mengandung iodium diukur secara terpisah dengan menggunakan kromatografi gas. Selanjutnya dibuat plot luas area puncak terhadap konsentrasi larutan standar. Misalkan, Plot yang dihasilkan ditunjukan oleh gambar 4.
Gambar 4. kurva kalibrasi untuk menentukan konsentrasi iodium dalam air 2
Dari hasil pengukuran sampel diperoleh kromatogram cuplikan. Kemudian berdasarkan waktu retensinya ditentukan puncak untuk iodium. Misalkan, setelah dihitung luas area untuk iodium dalam air adalah.0,8. Berdasarkan kurva kalibrasi pada
gambar 2, maka konsntrasi iodium dalam air dapat ditentukan dengan menarik garis tegak lurus terhadap sumbu x pada y=0,8.
b. Metode standar internal
Pada metoda ini kita membuat suatu larutan standar yang mengandung senyawasenyawa yang akan ditetapkan kadarnya, idealnya jumlah larutan standar sama dengan jumlah cuplikan, dan kita membandingkan kromatogram larutan standar dengan kromatogram sampel. Berdasarkan kromatogram larutan standar, faktor respon detektor dapat ditentukan untuk setiap analit5.:
Kemudian luas area dari masing-masing analit dikoreksi dengan mengalikannya dengan faktor respon detektor untuk masing-masing analit. Selanjutnya, konsentrasi analit ditentukan dengan membandingkan luas area suatu peak terhadap total area semua komponen2. Contoh, data kromatogram berikut diperoleh dari suatu kromatogram campuran butil alkohol. Respon detektor diperoleh dari percobaan kromatografi terpisah untuk alkohol murni yang diketahui konsentrasinya pada kondisi operasi yang sama dengan pengukuran sampel.
Tabel 1. Contoh perhitungan dengan metode normalisasi area2
Jenis alkohol n-butil i-butil e-butil t-butil
Luas area (cm3) 2,74 7,61 3,19 1,66 Total area
Faktor respon detektor 0,603 0,530 0,667 0,681
Luas area terkoreksi (cm3) 1,652 4,033 2,128 1,130 8,943
Selanjutnya, persentase masing-msaing komponen luas area total dari semua komponen dihitung, hingga dihasilkan persentasi n-butil, i-butil, e-butil, dan t-butil masing-masing sebesar 18.5%, 45.1%, 23.8%, dan 12.6%
Bila bekerja dengan metoda ini, respons detektor harus tinier untuk setiap senyawa pada kisaran (range) konsentrasi yang digunakan, dan juga kita harus menginjeksikan jumlah yang sama untuk setiap komponen. Oleh karena itu, keberhasilan operasi dari metoda ini tergantung pada kemampuan menginjeksi sampel dengan presisi yang baik 5. c. Metode adisi
Metode adisi digunakan untuk mengurangi kesalahan akibat efek matriks. Efek matriks terjadi apabila cuplikan mengandung pengotor sehingga mengurangi respon detektor sebagai akibat interaksi pengotor dengan analit. Berbeda dengan metode kalibrasi dimana cuplikan dan standar diukur secara terpisah, pada analisa kuantitatif dengan metode ini larutan standar ditambahkan ke dalam cuplikan dengan perbandingan volum yang sama, kemudian diukur secara bersamaan. Bila larutan standar yang digunakan identik dengan salah satu komponen cuplikan, maka luas area atau tinggi puncak akan semakin besar. Kemudian dari kromatogram masing-masing larutan standar, luas area/tinggi puncak diplot terhadap konsentrasi larutan standar. Intersep terhadap sumbu y menunjukan luas area puncak analit, sedangkan faktor respon detektor dinyatakan sebagai kemiringannya. Oleh karena itu, konsentrasi analit dalam cuplikan dapat ditentukan dengan menggunakan persamaan sebagai berikut3 : Aa = f d.Ca, Dimana Aa adalah luas area analit, f d adalah factor koreksi (respon detektor), dan Ca adalah konsentrasi analit dalam cuplikan.
3. Pemilihan Kondisi Kromatografi Gas
Kondisi pengukuran yang tepat tentu saja akan memberikan hasil yang baik, dimana peak pada kromatogram yang dihasilkan berbentuk simetris, tajam, dan terpisah satu sama lain. Pengaturan kondisi pengukuran ini meliputi beberapa hal antara lain, pemilihan kolom, pemilihan fasa gerak, pemilihan detektor, penentuan laju alir fasa gerak yang optimum a. Pemilihan kolom
Kolom merupakan jantungnya kromatugrafi, dimana komponen-komponen dalam cuplikan terpisah satu sama lain. Sehingga pemilihan kolom yang sesuai akan menentukan keberhasilan pemisahan oleh kromatografi gas. Di dalam melakukan pemilihan kolom, terdapat beberapa pertimbangan. Pertimbangan pertama adalah konsistensi kualitas kolom yang diproduksi. Pertimbangan kedua adalah memilih kolom yang sesuai bagi kebutuhan analisis yang spesifik yang meliputi panjang kolom, diameter dalam dari kolom, pemilihan fasa diam yang benar, dan ketebalan fasa diam. Pemilihan jenis kolom, diameter dalam, dan panjang kolom harus disesuaikan dengan kebutuhan analisa, karena menyangkut dengan biaya operasional. Untuk kebutuhan preparasi dan analisa kualitatif, cukup menggunakan kolom kemas. Tetapi untuk kebutuhan analisa kuantitatif, sebaiknya menggunakan jenis kolom kapiler karena memiliki selektivitas yang lebih baik daripada kolom kemas1. Hal tersebut ditunjukan pada gambar di bawah ini.
Gambar 5. Pemisahan komponen parfum menggunakan kolom pack (atas)
dan kolom kapiler (bawah) dengan fasa diam Carbowax 202 Jika diameter dalam dari suatu kolom semakin besar, maka kapasitas kolom akan semakin besar. Kapasitas kolom berhubungan dengan jumlah fasa diam yang terdapat dalam kolom. Kapasitas kolom yang besar memungkinkan untuk mengukur
sampel dalam jumlah yang banyak 1. Tetapi, semakin besar kapasitas kolom, maka analit akan teretensi lebih lama pada fasa diam sehingga waktu retensinya akan meningkat. Dengan demikian, kapasitas kolom harus seimbang dengan waktu retensinya. Panjang kolom juga harus dijadikan dasar pertimbangan bagi pemilihan kolom. Semakin panjang kolom, maka selektivitas kolom akan semakin tinggi karena jumlah plat teori yang terdapat dalam kolom semakin banyak. Akibatnya, pemisahan komponen dalam cuplikan menjadi lebih baik. Faktor lain yang juga harus dipertimbangkan dalam memilih kolom agar memberikan hasil yang baik adalah pemilihan fasa diam. Pemilihan fasa diam didasarkan pada kepolaran cuplikan yang akan dianalisis. Tabel 2 dan 3 masingmasing menunjukan penggolongan solut dan fasa diam berdasarkan kepolarannya. Tabel 2. penggolongan solut berdasarkan kepolarannya3
I. Kurang Polar Hdrokarbon jenuh
Eter
Oleofin hidrokarbon
Keton
Aromatik hidrokarbon
Aldehid
Merkaptan
Ester
Sulfida
Amin tersier
CS2
Sebyawa nitro (tanpa atom H)
Alkohol
Nitril (tanpa atom H) IV. Sangat Polar Polihidroksi alkohol
Asam karboksilat
Amino alkohol
Fenol
Asam hidroksi
Amin primer dan skunder
Asam poliprotik
Oksim
Polifenol
III. Polar
II. Agak Polar
Senyawa nitro Tabel 3. Penggolongan fasa diam kromatografi gas berdasarkan kepolarannya I. Kurang Polar squalana
II. Agak Polar Dibutil tetrakloro pthalat
SE-30
Dinonilptalat
Apiezon
QF-1
OV-17 DEGS III. Polar Tetrasianoetil pentaeritriol
IV. Sangat Polar Carbowax 20 M
Zonil E-7
Versamid 900
XE-60
Tetrahidroksietilenadiamin
Sebagai contoh, pada pemisahan campuran Caryophyllen (c), kamfer (k) dan mentol (m) dimana masing-masing komponen memeiliki spesifikasi sebagai berikut :
= 140°C --- C=C (ikatan rangkap)
(k) = 160°C --- C=O (keton)
(m) = 110°C --- OH (alkohol tersier)
Dari data tersebut dapat disimpulkan bahwa suhu maksimum sampel 160°C dengan kepolaran Caryophyllen > kamfer > dan mentol. Jika yang digunakan kolom polar (carbowax) maka senyawa polar akan lebih lama tertahan dlm kolom sehingga urutan elusi menjadi mentol-kamfer-Caryophyllen. Tetapi jika kolom non polar digunakan (SE-30) maka Caryophyllen akan terelusi lebih dulu, diikuti oleh kamfer, dan mentol8. Ketebalan lapisan fasa diam juga berpengaruh terhadap pemilihan kolom. Lapisan Fasa diam yang tipis memberikan retensi yang rendah sehingga sangat cocok digunakan bagi analit bertitik didih tinggi. Sebaliknya, lapisan fasa diam yang tebal memberikan retensi yang tinggi sehingga sangat cocok digunakan bagi analit bertitik didih rendah.
b. Pemilihan fasa gerak Pemilihan fasa gerak tidak terlalu bergantung pada cuplikan karena fasa gerak tidak berinteraksi dengan solut-solut yang dipisahkan. Pemilihan fasa gerak didasarkan pada jenis detektor yang digunakan. Tabel 4 dibawah ini menunjukan pemilihan gas pembawa yang disesuaikan dengan detektor yang digunakan.
Tabel 4. gas pembawa yang sesuai dengan detektor 7 Gas pembawa
TCD
FID
ECD
FPD
Helium
+
+
-
-
Hydrogen Nitrogen
+ +
+
+
+
argon
-
-
+
-
Dari tabel 4 diatas, gas nitrogen dapat digunakan sebagai fasa gerak untuk semua jenis detektor. Hal tersebut dikarenakan oleh sifat gas nitrogen yang sangat inert dan murah. Lain halnya dengan hidrogen, yang bersifat inert tetapi mudah terbakar sehingga tidak cocok digunakan pada detektor FID, ECD, dan FPD.
c. Penentuan laju alir fasa gerak optimum Laju alir fasa gerak dapat menentukan kesetimbangan ditribusi analit dalam dafa diam dan fasa gerak. Pada umumnya, laju alir fasa gerak untuk berbagai jenis kolom telah ditentukan oleh produsennya. Misalnya, laju alir untuk kolom kemas, WCOT/SCOT, dan PLOT masing-masing adalah 20-100 ml/menit, 0,5-5 ml/menit, dan 5-10 ml/menit1.
d. Pemilihan detektor Terdapat beberapa jenis detektor yang dapat mendeteksi komponen yang terelusi dari kolom. Pemilihan detektor bagi kondisi optimum kromatografi gas didasarkan pada faktor selektifitas, limit deteksi, dan daerah linier 1. Selektifitas detektor menunjukan kemampuan detektor untuk membedakan analit yang akan ditetapkan terhadap komponen lain yang terdapat dalam sampel Setiap detektor memiliki selektifitas yang berbeda terhadap setiap senyawa. Sebagai contoh, detektor FID dan ECD memiliki perbedaan selektifitas dimana FID merupakan detektor universal, tetapi. ECD bersifat selektif karena hanya mampu mendeteksi senyawa yang mengandung atom dengan afinitas elektron yang tinggi, Setiap detektor juga memiliki limit deteksi dan daerah linier yang berbedabeda. Limit deteksi menunjukan jumlah analit yang memberikan respon sinyal pengukuran terendah dalam suatu derajat kepercayaan statistik, yang dapat
diterjemahkan sebagai indikasi terdapatnya analit dalam larutan9. Dapat juga didefinisikan sebagai kepekatan terendah dari analat dalam contoh yang masih dapat memberikan respon sinyal signifikan tanpa dipengaruhi noise alat. Semakin rendah limit deteksi suatu detektor, maka detektor tersebut semakin peka, yang berakibat pada kemampuan yang tinggi dari detektor untuk mendeteksi jumlah sampel yang sangat sedikit. Daerah linear menyatakan kemampuan detektor untuk memberikan hasil yang proporsional terhadap kepekatan analit. Daerah linear diperoleh dengan memplot nilai hasil uji terhadap kepekatan analit. Makin lebar interval jangkuan kerja linear maka detektor makin praktis untuk digunakan. Tabel 5 dibawah ini dapat dijadikan pertimbangan bagi pemilihan detektor untuk kondisi pemisahan oleh kromatografi gas.
Tabel 5. Spesifikasi detektor
Jenis Detektor TCD FID ECD
Limit Deteksi (g/s) 10-5-10-6 10-12 10-14
Daerah Linier 103-104 106-107 102-103
Selektivitas universal universal Selektif (afinitas elektron tinggi) -13 2 FPD 10 10 Selektif untuk S dan P -12 MS 10 a universal -10 2 FTIR 10 10 Molekul polar a : bergantung pada tipe MS dan senyawa yang dianalisa
DAFTAR PUSTAKA
[1]
Rubinson, F. Judith & Rubinson, A. Kenneth. (1998). “Contemporary Chemical Analysis”. USA : Prentice Hall, Inc.
[2]
Hendayana, Sumar. (2006). “Kimia Pemisahan. Metode kromatografi dan Elektroforesis Modern”. Bandung. Rosda.
[3]
Pungor, Erno. (1995). ”A Practical Guide for Instrumental Analysis”. Florida : CRC Presss.
[4]
Dept. of Chemistry University of Adelaide. (Tanpa tahun). “Detector Response Ratio”. [On Line]. :Tersedia : http://www.chemistry.adelaide.edu.au/external/ soc-rel/content/det-resp.htm. [4 Maret 2011].
[5]
De Lux Putra, Effendi. (2004). “Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dalam Bidang Farmasi”. [On Line]. Tersedia : repository.usu.ac.id/bitstream/123456789/ 3616/1/farmasi-effendy2.pdf. [4 Maret 2011]
[6]
Wade, Jr. F.G. (1997). ”Separating and Identifying Mixtures by Chromatography”. [On Line] : tersedia : http://www.cerlabs.com/experiments/10875407099.pdf. [4 Maret 2011]
[7]
Permanasari, Anna. (2010). Presentasi : “Kromatografi Gas”. Bandung : Sekolah Pascasarjana UPI
[8]
Musfirah, Ida. (tanpa tahun). ”Kromatografi Gas”. [On Line]. Tersedia : http://kimorunpad.110mb.com/kfa/KROMATOGRAFI%20GAS.ppt. [4 Maret 2011]
[9]
Arifin, Zaenal. (2011). “Verifikasi Metode Analisis secara HPLC”. [On Line]. Tersedia : http://zonazaenal.wordpress.com/2011/01/02/verifikasi-metodeanalisis -secara-hplc. (4 Maret 2011)
