Método Micro de fenoles totales en vino de Folin-Ciocalteu Este método se utiliza de forma rutinaria en nuestro laboratorio para medir fenoles totales. El procedimiento también se utiliza para el análisis de fenoles totales en el té. Se utiliza el volumen mínimo de reactivos y casi elimina reactivo desperdiciado. Buenas pipetas micro debe ser utilizado para la reproducibilidad. Las cubetas de plástico o de vidrio pueden ser utilizados. Se basa en el método descrito en Slinkard, K.; Singleton, VL Análisis fenol total: Automatización y comparación con los métodos manuales. American Journal of Viticultura y Enología de 1977, 28: 49-55; sólo los volúmenes se han reducido. Si no se puede medir de forma reproducible volúmenes tan pequeños, tratar de reducir los volúmenes lo mas posible. Esto reduce los residuos y el volumen de eliminación. Folin Ciocalteu. Este se suele comprar tal como el reactivo 2N disponible de Sigma (F9252) o de Fisher Scientific (ICN19518690), y otros presumiblemente. Singleton y Rossi AJEV 1965, 16: 144-158, describen la preparación del reactivo de tungstato sódico, molibdato de sodio, sulfato de litio, bromo, y algunos ácidos. Solución de Ácido gálico: En un matraz aforado de 100 ml, se disuelven 0,500 g de ácido gálico seco en 10 ml de etanol y se diluye a volumen con agua. Se puede abrir todos los días, pero para almacenar, mantener cerrado en el refrigerador hasta por dos semanas. Solución de carbonato de sodio.: Disolver 200 g de carbonato de sodio anhidro en 800 ml de agua y llevar a ebullición. Después de enfriar, añadir algunos cristales decarbonato de sodio, y después de 24 horas, filtrar y añadir agua a 1 L. Para preparar una curva de calibración, añadir 0, 1, 2, 3, 5, y 10 ml de la solución madre en matraces volumétricos 100 ml y luego diluir a volumen con agua. Estas soluciones tienen concentraciones de fenol de 0, 50, 100, 150, 250 y 500 mg/l de ácido gálico, el alcance efectivo del ensayo.
De cada solución de calibración, la muestra, o el blanco, se toman con una micropipeta en 20 ul en cubetas separadas, y cada uno se adiciona 1,58 ml (1580 ul), de reactivo a continuación, se añaden 100 ul del reactivo de Folin-Ciocalteu, y se mezcla bien. Se espera entre 30 segundos hasta 8 minutos, a continuación, se añaden 300 ul de la solución de carbonato de sodio anhidro y agitar para mezclar. Deja las soluciones a 20 ° C durante 2 horas y determinar la absorbancia de cada solución a 765 nm frente al blanco (el "0 solución) y determinar la absorbancia frente a la concentración. Alternativamente, se pueden dejar a 40 ° C durante 30 min antes de la lectura de la absorbancia. Crear una curva de calibración con los standares y determinar los niveles en las muestras. No olvidar de multiplicar las concentraciones observadas por cualquier factor de dilución de la muestra original. Los resultados se presentan en el equivalente de ácido gálico, GAE, debido a que los fenoles en el vino contienen fenoles sobre todo otras, y sólo pequeñas cantidades de ácido gálico
Dado que el ensayo mide todos los compuestos fenólicos, la elección de ácido gálico como estándar se basa en la disponibilidad de una sustancia estable y puro, y ácido gálico es a la vez, y es menos costoso que otras opciones. Además, la respuesta al ácido gálico se ha demostrado que es equivalente a la mayoría de los compuestos fenólicos en el vino otros sobre una base de masa. También hemos probado la estabilidad de las soluciones de ácido gálico estándar y se puede decir que pierden menos del 5% de su valor de más de dos semanas cuando se refrigera y se mantiene bien cerrado. Usted debe tomar su propia curva de calibración cada vez que se ejecute el análisis. No utilizar estos datos como una curva estándar. Es aquí solamente como un ejemplo de una curva estándar típica.
