menghitung spora dan jamur
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI Menghitung Jumlah Spora Atau Sel
dan Mengukur ukuran mikroorganisme mikroorganisme
Disusun oleh: Nama
: Kas Andika Putri
NPM
: E1J012133
Hari, tanggal, jam praktikum : Rabu, 24 April 2013 (12.00-14.00) Dosen pembingbing
: Ir.Djamilah,MP
Pelatih (coass)
: Muhimmatul Husna
Laboratorium Ilmu Hama Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Bengkulu 2013 A.TUJUAN PRATIKUM 1. Mahasiswa dapat menghitung spora dengan menggunakan haemocytometer
2.
Mahasiswa dapat mengukur sel menggunakan Skala micrometer okuler(SMOK) dan Skala micrometer obyektif.
B.DASAR TEORI
Mikrobiologi adalah sebuah cabang dari ilmu biologi yang mempelajari mikroorganisme (organism hidup yang ukurannya terlalu kecil untuk dapat dilihat dengan mata biasa) atau mikroba. Oleh karena itu objek kajiannya biasanya adalah alga miskroskopik, protozoa, archaea dan virus. Virus dimasukkan dalam obyek kajian walaupun sebenarnya ia tidak sepenuhnya dapat dianggap sebagai mahluk hidup. (Black, 2005) Mikroorganisme adalah mikroba atau organisme yang berukuran sangat kecil sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat pembesar. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal meskipun beberapa protista bersel tunggal masih dapat terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel yang tidak dapat terlihat oleh mata telanjang. Mikroorganisme Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota, protista dan alga renik. Fungi terutama yang berukuran kecil dan tidak membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai bagiannya meskipun banyak yang tidak menyepakatinya. Haemocytometer adalah alat untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keselu ruhan Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur berdasarkan konsentrasi sel (jumlah sel per satuan isi kultur) ataupun destilasi sel (berat kering dari sel-sel persatuan isi kultur). Dua parameter ini tidak selalu sama karena berat kering sel rata-rata bervariasi pada tahap berlainan dalam pertumbuhan kultur, kedua para meter tersebut juga tidak bermakna sama dalam penelitian mengenai biokimia mikroorganisme atau gizi mikroorganisme. Densitas sel adalah kuantitas yang lebih bermakna, sedangkan dalam penelitian mengenai inaktivitas mikroorganisme, kosentrasi sel adalah kuantitas yang bermakna (Pratiwi, 2008). Mikroba berukuran sangat kecil dan untuk mengetahuinya digunakan mikrometer. Mikrometer merupakan kaca berskala dan dikenal 2 jenis micrometer yaitu mikrometer okuler dan mikrometer objektif. Mikrometer okuler dipasang pada lensa okuler mikroskop, sedangkan micrometer objektif berbentuk slide yang ditempatkan pada meja preparat mikroskop. Jarak antar garis skala pada mikrometer okuler tergantung pada perbesaran lensa objektif yang digunakan yang menentukan lapang pandang mikroskop. Jarak ini dapat ditentukan dengan mengkalibrasi antara mikrometer okuler dan objektif. Mikrometer objektif memiliki skala yang skala yang telah diketahui, menjadi tolak ukur untuk menentukan ukuran skala micrometer okuler. 1 skala micrometer objektif = 0,01 mm / 10 µm.
Mikrobiologi adalah sebuah cabang dari ilmu biologi yang mempelajari mikroorganisme (organism hidup yang ukurannya terlalu kecil untuk dapat dilihat dengan mata biasa) atau mikroba. Oleh karena itu objek kajiannya biasanya adalah alga miskroskopik, protozoa, archaea dan virus. Virus dimasukkan dalam obyek kajian walaupun sebenarnya ia tidak sepenuhnya dapat dianggap sebagai mahluk hidup. (Black, 2005) Mikroorganisme adalah mikroba atau organisme yang berukuran sangat kecil sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat pembesar. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal meskipun beberapa protista bersel tunggal masih dapat terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel yang tidak dapat terlihat oleh mata telanjang. Mikroorganisme Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota, protista dan alga renik. Fungi terutama yang berukuran kecil dan tidak membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai bagiannya meskipun banyak yang tidak menyepakatinya. Haemocytometer adalah alat untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keselu ruhan Pertumbuhan mikroorganisme dapat diukur berdasarkan konsentrasi sel (jumlah sel per satuan isi kultur) ataupun destilasi sel (berat kering dari sel-sel persatuan isi kultur). Dua parameter ini tidak selalu sama karena berat kering sel rata-rata bervariasi pada tahap berlainan dalam pertumbuhan kultur, kedua para meter tersebut juga tidak bermakna sama dalam penelitian mengenai biokimia mikroorganisme atau gizi mikroorganisme. Densitas sel adalah kuantitas yang lebih bermakna, sedangkan dalam penelitian mengenai inaktivitas mikroorganisme, kosentrasi sel adalah kuantitas yang bermakna (Pratiwi, 2008). Mikroba berukuran sangat kecil dan untuk mengetahuinya digunakan mikrometer. Mikrometer merupakan kaca berskala dan dikenal 2 jenis micrometer yaitu mikrometer okuler dan mikrometer objektif. Mikrometer okuler dipasang pada lensa okuler mikroskop, sedangkan micrometer objektif berbentuk slide yang ditempatkan pada meja preparat mikroskop. Jarak antar garis skala pada mikrometer okuler tergantung pada perbesaran lensa objektif yang digunakan yang menentukan lapang pandang mikroskop. Jarak ini dapat ditentukan dengan mengkalibrasi antara mikrometer okuler dan objektif. Mikrometer objektif memiliki skala yang skala yang telah diketahui, menjadi tolak ukur untuk menentukan ukuran skala micrometer okuler. 1 skala micrometer objektif = 0,01 mm / 10 µm.
Kalibrasi dilakukan dengan menghimpitkan skala mikrometer objektif dan okuler pada perbesaran yang diinginkan. Skala ke nol (garis pertama) kedua mikrometer disimpulkan menjadi 1 garis kemudian dilihat pada skala ke berapa berap a kedua jenis mikrometer tersebut bertemu/berhimpit kembali. Dari hasil tersebut dapat diketahui satu satu satuan satuan panjang pada skala mikrometer okuler itu berdasarkan beberapa jumlah skala kecil mikrometer objektif yang berada di antara garis yang berhimpit tadi. (Muslim, 2011) Pertumbuhan
adalah
penambahan
secara
teratur
semua
komponen
sel
suatu
jasad.Pembelahan sel adalah hasil dari pertumbuhan sel. Pada jasad bersel tunggal (uniseluler),pembelahan atau perbanyakan sel merupakan pertambahan jumlah individu. Misalnya pembelahansel pada bakteri akan menghasilkan pertambahan jumlah sel bakteri itu sendiri. Pada jasad berselbanyak (multiseluler), pembelahan sel tidak menghasilkan pertambahan jumlah individunya, tetapihanya merupakan pembentukan jaringan atau bertambah besar jasadnya. Dalam membahaspertumbuhan mikrobia harus dibedakan antara pertumbuhan masing-masing individu sel danpertumbuhan kelompok sel atau pertumbuhan populasi (Suharjono, 2006). Kecepatan pertumbuhan merupakan perubahan jumlah atau massa sel per unit waktu.Pertumbuhan mikroba dalam suatu medium mengalami fase-fase yang berbeda, yang berturut-turutdisebut dengan fase lag, fase eksponensial, fase stasioner dan d an fase kematian. Pada fase kematianeksponensial tidak diamati pada kondisi umum pertumbuhan kultur bakteri, kecuali bila kematiandipercepat dengan penambahan zat kimia toksik, panas atau radiasi (Sofa, 2008).
C.BAHAN DAN ALAT 1. Menghitung jumlah spora atau sel 1. Bahan : 1 cawan biakan Saccharomyces.sp 2. Alat : 1 unit Haemocytometer,1 buah jarum ent,1 buah gelas penutup,1 buah pipet tetes, 1 unit mikroskop 2. Mengukur mikroorganisme
1. Bahan : 1 cawan biakan khamir(Saccharomyces sp),10 sp),10 aquades,100 ml alkohol 70% 2.
Alat: 1 set mikrometer(objektif dan okuler),1 buah pipet tetes,1 buah jarum ent,1 buah gelas objek,1 buah gelas penutup,1 unit mikroskop
D.CARA KERJA 1. Menghitung jumlah spora atau sel 1. Sel dipanen dari biakan dengan cara menuang 5 ml aquades kedalam cawan biakan sambil digosokan batang gelas bentuk L kemudian suspensi sel dipipet dan daimsukkan dalam gelas erlenmeyer 50 ml.Pemanenan diulangi lagi sampai mendapatkan 20 ml suspensi atau sampai sesuai yang dibutuhkan. 2. Haemocytometer dibersihkan dengan menggunakan alcohol sampai benar-benar bersih, kemudian
dikeringkan. Perlu diingat bahwa kotak pada haemocitometer ukurannya sangat kecil sehingga kemasukan satu butir debu saja sudah cukup menyumbat kotak. 3.
Suspensi spora dikocok kemudian dipipet dan diteteskan pada haemoytometer tepat pada ruang hitungnya, sebanyak satu tetes.
4.
Tetesan suspensi ditutup menggunakan gelas penutup dan dijaga agar tidak menjadi gelembung udara dala kotak-kotak haemocytometer.
5. Preparat diamati dengan menggunakan mikroskop dan dihitung jumlah sel dalam setiap kotak. Jika antar kotak jumlahnya tidak seragam, ulangi langkah ke 3(dikocok lagi) 6.
Pada praktikum dihitung dari 3-9(ganjil) kotak ruang hitung, kemudian dirata-rata dan dihitung jumlah sel setiap koloninya.
1.
2.Mengukur mikroorganisme Gelas objek dibersihkan menggunakan alkohol 70% sampai bebas debu dan lemak, kemudian
ditetesi aquades. 2.
Sel dipanen dari biakan dengan cara menuang 5 ml aquades kedalam cawan biakan sambil digosokan batang gelas bentuk L kemudian suspensi sel dipipet dan daimsukkan dalam gelas erlenmeyer 50 ml.Pemanenan diulangi lagi sampai mendapatkan 20 ml suspensi atau sampai sesuai yang dibutuhkan. 3. Massa sel diambil menggunakan jarum ose,kemudian diletakkan di atas gelas obyek kemudian ditutup dengan gelas penuup dan dijaga agar tidak timbul gelembung udara. 4. Preparat diamati dengan menggunakan mikroskop pada pembesaran dimana obyek terlihat paling jelas. 5. Micrometer okuler diasang dalam lensa okuler untuk mengukur obyek dengan men ggunakan skala yang ada dalam micrometer okuler, dengan cara menggeser-geser meja benda pada mikroskop dam memutas lensa okuler sampai tepat pada obyek yang di ukur.
6.
Pada praktikan dilakukan pengukuran panjang panjan g 5 sel dan lebar 5 sel kemudian ukuran sekala dicatat pada table pengamat.
7.
Setelah selesai mengukur obyek denga sekala oku ler, preparat diambil dari menja benda kemudian diganti dengan micrometer obyektif untuk kalibrasi skala micrometer. Harus diingat bahwa pembesaran lensa mikroskop yang digunakan hars sama antara pengukuran selnya.
8.
Skala micrometer okuler (SMOK) diatur supaya berimpit dengan skala micrometer obyektif (SMOB), dengan cara menggeser-geser mejabenda pada mikroskop dan memutar lensa okuler.
9.
Setelah garis skala masing-msing ada yang saling berimpit, dilakukan kalibrasi dengan cara membandingkan kesetaraan SMOK danSMOB, yaitu denganmenghitung jumlah SMOK dan jumlah SMOB.
10. Dalam praktikum kalibrasi atau penyetaraan dilakukan sebanyak 5 kali,untuk mendapatkan ukuran 1SMOK: x smob 11. Kemudian dihitung ukuran sel menurut ukuran mikrometer ob yektif( 1SMOB= 10 µm).
E.DATA HASIL PRATIKUM 1.Menghitung Spora Atau Sel Gambar
Keterangan Gambar Kotak 1= 6 sel Kotak 2= 4 sel Kotak 3= 6 sel Kotak 4= 10 sel Kotak 5= 8 sel Kotak 6= 3 sel Kotak 7= 5 sel Kotak 8= 5 sel Kotak 9= 5 sel Perhitungan :52/9=5,77 sel Jumlah spora dalam satu cawan =416,6 juta sel
2.Mengukur Mikroorganisme Obyek sel Pengamatan Ukuran Sel(SMOK) Ulangan Panjang Sel Lebar Sel 1 63 27 2 19 4 3 9 5 Obyek mikromter Skala Yang Berimpit Ulangan SMOK SMOB 1 20-45 2 2 45-70 3 3 70-90 3
F.PERHITUNGAN dan PEMBAHASAN
1.Perhitungan Menghitung Spora Atau Sel Rata-rata kotak kecil berisi =5,77 sel Volume satu kotak kecil =0,05mm x 0,05mm x 0,1mm
0,05mm x 0,05mm x 0,1mm =5,77 sel 25 x 10-5 mm3 =5,77 sel 3 1 mm =5,77 sel/25x10-5 =5,77 x 105/25 sel
1 mm3 Jadi dalam 1 ml suspensi
= 23080 sel =1 cm3x23080 sel =10 mm x 10 mm x 10 mm x23080 sel =23.080.000 sel =23,08 juta sel =23,08x106 sel Maka pada hasil panen 20 ml suspensi atau dalam satu cawan berisi 20 x 23,08.106 sel =461,6 . 106 =46,16 . 107 =461,6 juta sel
Mengukur Mikroorganisme Ukuran rata rata panjang sel =63+19+9 / 3 = 30,33 SMOK Ukuran rata rata lebar sel =27+4+5 /3 = 12 SMOK Kaliberasi mikrometer 1. 25 SMOK = 2 SMOB 2. 25 SMOK = 3 SMOB 3. 20 SMOK = 3 SMOB 70 SMOK = 8 SMOB 1 SMOK = 8/70 SMOB =0,1142 SMOB Ukuran rata rata panjang sel =30,33 x 1,142 µm = 34,637 µm =34,64 µm Ukuran rata rata lebar sel = 12 x 1,142 µm = 13,70 µm Jadi ukuran rata rata sel = 34,64 µm x 13,70 µm
2.Pembahasan Pada praktikum ini kami melkukan acara dengan judul menghitung jumlah spora dan
mengukur sel.pada bagian meghitung jumlah sel kami melakukuan pengamatan menggunakan bahan
biakan
saccharomyces
sp,dan
menggunakan
alat
haemocytometer,pipet
tetes,mikroskop,gelas penutup objek. Haemocytometer adalah perangkat awalnya dirancang untuk penghitungan sel darah . Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Dalam menghitung ini kami meghitung sel dalam 9 kotak,setelah diamati masing-masing kotak berisi:Kotak 1 =6 sel,Kotak 2 =4 sel,kotak 3 = 6 sel,kotak 4 = 10 sel,kotak 8 = 0 sel,kotak 7 = 5 sel, kotak 8 = 5 sel,dan kotak 9=5 sel Dari hasil perhitungan didapatkan jumlah rata-rata sel pada setiap kotak : 5,77 sel, Volume satu kotak kecil itu yaitu 0,05mm x 0,05 mm x 0,1 mm.dari maka dihitung dari hasil itu didapatkan dalam 1 mm3 terdapat 23080 sel.dari jumlah sel dalam 1 mm3 itu didapatkan dalam 1 ml suspensi terdapat 23,08 juta sel atau 23,08 x 106 sel.
Maka pada hasil panen 20 ml suspensi atau dalam satu cawan berisi 20 x 23,08 .106 sel =46,16 x 10 7 sel atau sama dengan 416,6 juta sel Pada kegiatan mengukur ukuran sel kami menggunakan biakan khamir,alkohol,kemudian alat alatnya yaitu mikrometer(obyektif dan okuler),pipet tetes,gelas obyek,gelas penu tup,dan 1 unit mikroskop.sebelummelakukan pengamatan atau pengukuran terhadap sel,kami melkukan kalibrasi terlebih dahulu. Kalibrasi dilakukan dengan menghimpitkan skala mikrometer objektif dan okuler pada perbesaran yang diinginkan. Skala ke nol (garis pertama) kedua mikrometer disimpulkan menjadi 1 garis kemudian dilihat pada skala ke berapa kedua jenis mikrometer tersebut bertemu/berhimpit kembali. Dari hasil tersebut dapat diketahui satu satuan panjang pada skala mikrometer okuler itu berdasarkan beberapa jumlah skala kecil mikrometer objektif yang berada di antara garis yang berhimpit tadi. (Muslim, 2011) Setelah melakukan kalibrasi,didapatkan hasilnya 25 SMOK,2 SMOB: 25 SMOK,3 SMOB:20 SMOK,3 SMOB .dari hasil itu didapatkan hasil 1 SMOK yaitu 0,1142 SMOB. Kemudian kami mengukur ukuran sel nya dengan 3 kali pengulangan,dari hasil pengukuran yang kami lakukan itu didapatkan panjang selnya berturut-turut yaitu 63,19,9 dan rata rata nya 30,33 SMOK. Kemudian ukuran lebar sel n ya berturut turut yaitu 27,4,5 dan rata rata n ya yaitu 12 SMOK. Dari hasil tersebut didapatkan ukuran rata rata panjang sel nya setelah dikalikan dengan kalibrasi mikrometer yaitu 30,33 x 1,142 µm =34,637 µm atau 34,64 µm,dan ukuran rata rata lebar sel nya yaitu 12 x1,142 µm =13,70 µm Jadi dari hasil itu didapatkanlah ukuran rata rata sel yaitu 34,64 µm x 13,70 µm G .KESIMPULAN Kecepatan pertumbuhan merupakan perubahan jumlah atau massa sel per unit
waktu.Pertumbuhan mikroba dalam suatu medium mengalami fase-fase yang berbeda, yang berturut-turutdisebut dengan fase lag, fase eksponensial, fase stasioner dan fase kematian Haemocytometer adalah alat untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan Dari percobaan di dapatkan hasil pada cawan berisi sebanyak 461,6 juta sel dan ukuran rata rata sel 34,64 µm x 13,70 µm
H.DAFTAR BACAAN o o
A Muslim, Ahmadi. 2011. Menghitung jumlah bakteri. Bandung:erlangga
Pratiwi, 2008. Seleksi dan Karakterisasi Mikroba Antagonis.Depok:UI o
o
Purnomo, Bambang Ir MP. 2013. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi. Bengkulu: lab ilmu hama dan penyakit tanaman. Universitas Bengkulu.
o
Sofa, 2008. Dasar – Dasar Mikrobiologi. UI – Press. Jakarta Suharjono, 2006. Karakteristik dan pertumbuhan sel.Jurusan Biologi FMIPA Universitas Brawijaya. Malang.
haemacytometer
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme adalah mikroba atau organisme yang berukuran sangat kecil sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat pembesar. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal meskipun beberapa protista bersel tunggal masih dapat terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel yang tidak dapat terlihat oleh mata telanjang. Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota, protista dan alga renik. Fungi terutama yang berukuran kecil dan tidak membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai bagiannya meskipun banyak yang tidak menyepakatinya (Tria, 2012).
Penghitungan jumlah bakteri hidup terbagi atas dua, yaitu secara (tidak langsung) Misalnya perhitungan pengurangan jumlah substrat dan secara langsung. Penghitungan mikroba secara langsung antara lain:
1. Plate Count (hitungan cawan)
Plate count atau viable count didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni setelah ditumbuhkan dalam media pertumbuhan dan lingkungan yang sesuai. Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut (Mikapin, 2012).
2. Turbidimetri
Turbidimetri merupakan metode yang cepat untuk menghitung jumlah bak teri dalam suatu larutan menggunakan spektrofotometer. Bakteri menyerap cahaya sebanding dengan volume total sel (ditentukan oleh ukuran dan jumlah). Ketika mikroba bertambah jumlahnya atau semakin besar ukurannya dalam biakan cair, terjadi peningkatan kekeruhan dalam biakan. Kekeruhan dapat disebut optical density (absorbsi cahaya, biasanya diukur pada panjang gelombang 520 nm – 700 nm). Untuk mikroba tertentu, kurva standar dapat memperlihatkan jumlah organisme/ml (ditentukan dengan metode hitungan cawan) hingga pengukuran optical density (ditentukan dengan spektrofotometer) (Mikapin, 2012).
3. Hemasitometer
Hemasitometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis. Ruang hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm². Satu kotak besar di tengah, dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,05 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel bakteri yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah bakteri per satuan volume dapat diketahui (Mikapin, 2012).
Tujuan
Tujuan praktikum ini adalah adalah untuk melakukan perhitungan spora dengan menggunakan alat haemacytometer.
TINJAUAN PUSTAKA
Hemasitometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Bentuknya terdiri dari 2 counting chamber dan tiap chamber-nya memiliki garis-garis mikroskopis pada permukaan kaca. Luas total dari chamber adalah 9 mm2. Chamber tersebut nantinya akan ditutup dengan coverslip dengan ketinggian 0.1 mm di atas chamber floor (Rio, 2012).
Spora tumbuhan yang berkembang biak dengan spora antara lain paku, jamur, ganggang dan suplir. Spora terdapat pada daun tumbuhan bagian belakang, berbentuk serbuk dan disimpan di dalam
kotak
spora
yang
disebut
sporangium.
Jamur merupakan tumbuhan yang berkembang biak dengan spora. Kita tahu jamur tidak pernah berbunga apalagi berbiji, sebab biji baru ada apabila ada bunga yang dapat dibuahi dengan cara penyerbukan. Bentuk spora serupa dengan biji, namun bentuknya sangat kecil sehingga tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Spora dapat dilihat dengan bantuan alat yang disebut dengan mikroskop. Spora ini berasal dari sel yang berubah fungsi menjadi alat perkembangbiakan. Perkembangbiakan pada jamur yang tumbuh liar di kebun terjadi pada saat spora jatuh ke tanah yang lembab dan subur. Spora yang jatuh tersebut berubah menjadi alat perkembangbiakan dan mengisap makanan, sampai akhirnya tumbuh menjadi tumbuhan jamur yang baru (Mikapin, 2012).
Haemocytometer adalah perangkat awalnya dirancang untuk penghitungan sel darah. Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Hemositometer ini ditemukan oleh Louis-Charles Malassez dan terdiri dari tebal kaca slide mikroskop dengan lekukan persegi panjang yang menciptakan sebuah kamar. Ruang ini diukir dengan laser-terukir
grid garis tegak lurus. Perangkat ini dibuat dengan hati-hati sehingga daerah yang dibatasi oleh garis diketahui, dan kedalaman ruang ini juga diketahui. Oleh karena itu mungkin untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan (Mikapin, 2012).
Prinsip dari perhitungan Petroff-Hauser yaitu melakukan perhitungan dengan pertolongan kotakkotak skala, di mana dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak kecil. Alat haemocytometer digunakan di bawah mikroskop, sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm. Sedangkan satu kotak sedang berukuran nilai 0,2 mm. Dan tebal nya adalah 0,1 mm. Jumlah sel per ml sampel dapat dihitung sebagai berikut:
Jumlah sel dalam 25 kotak besar = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak
Jumlah sel per mm3 sampel = Jumlah sel dalam 25 kotak besar × (1/0,02)
Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per mm3 sampel × 103 = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak× (1/0.02)x 10^3
Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak × 50 × 103
Jumlah sel per mL sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106
Misalnya : didapatkan jumlah mikroba yang mau dihitung 12 s el mikroba, maka jumlah sel per ml sampel adalah: 12 × 1,25 × 106 = 1,5 × 107 (Mikapin, 2012).
Biasanya sebelum mikroorganisme diperiksa perlu diencerkan, jika kepadatan tinggi sel akan membuat tidak mungkin menghitung. Kebutuhan untuk pengenceran adalah kerugian, karena setiap pengenceran menambahkan ketidakakuratan untuk pengukuran. Keuntungan metode ini adalah menjadi murah dan cepat, membuat metode perhitungan ini yang lebih disukai dalam
percobaan biologis cepat dalam yang perlu hanya ditentukan apakah kultur sel telah tumbuh seperti yang diharapkan (Rio, 2012).
Haemocytometer Neubour memiliki kelemahan dan kelebihan dalam penggunaannya dalam proses perhitungan bakteri secara langsug. Kelebihannnya antara lain ialah cepat dalam menghasilkan data dan tak perlu menunggu lama, serta datanya atau jumlah selnya langsung didapat pada saat itu juga setelah menghitung menggunakan rumusnya dan menghemat biaya. Sedangkan kelemahannya ialah tidak dapat membedakan antara sel yang mati dengan yang hidup karena perhitungannya secara keseluruhan dan data yang dihasilkan tidak akurat karena setiap pengamat memiliki mata yang berbeda-beda dan terdapat keterbatasan dalam melihat serta menghitung sel yang ada dalam kamar Haemocytometer Neubour. Sebaiknya menggunakan alat yang lebih canggih lagi dalam perhitungan jumlah sel karena setiap peralatan elektronik memilki kesensitifan yang tinggi dibandingkan dengan mata manusia, seperti alat particle count (Alex, 2013).
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan
Bahan yang digunakan adalah alkohol, pathogen cendawan dan aquades.
Alat
Alat yang digunakan adalah haemachytometer, mikroskop, vortex, tabung reaksi, gelas beker dan jarum ent.
Tempat dan Waktu
Praktikum ini dilaksanakan di laboratorium Fitopatologi Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru. Pada hari Kamis tanggal 5 Desember 2013 pukul 10.00-12.00 Wita.
Prosedur Kerja
1.
Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
2.
Membersihkan alat haemachytometer dengan tissue yang sudah diberi alkohol.
3.
Setelah itu haemachytometer ditutup dengan cover glass yang sudah dibersihkan.
4.
Lakukan pengenceran dengan tabung reaksi 106.
5.
Masukkan air aquades kedalam botol yang berisi pathogen cendawan kemudian digoyang-
goyang dengan jarum ent agar spora terangkat.
6.
Mengisi tabung reaksi dengan 1 ml larutan pathogen cendawan yang sudah terisi 9 ml air
aquades sebelumnya.
7.
Kemudian divortex selama 15-30 detik agar memisahkan atau memecah spora, lakukan terus
hingga pada tabung 106.
8.
Mengambil 1 ml larutan dari tabung reaksi pengenceran pada tabung ke 106 dengan
menggunakan pipet isap.
9.
10. Amati dengan menggunakan mikroskop hitung berapa jumlah sel dalam satu kotak.
11. Gunakan rumus :
Jumlah sel per ml sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106.
Meneteskan larutan tadi pada alat haemachytometer ±1 tetes.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Hasil dari praktikum yang telah dilakukan adalah:
Tabel 1. Pengamatan Spora Dengan Haemachytometer No.
Gambar
Keterangan
Pathogen cendawan
Memasukkan air pada isolat cendawan
Mengoyangkan pathogen agar homogen dengan air dan spora terangkat
Mengambil 1 ml larutan (isolat cendawan)
Tabel 1.Lanjutan
Melakukan pengenceran
Menghomogenkan dengan menggunakan vortex
Mengambil larutan setelah pengenceran
Meneteskan pada cover glass haemachytometer
Amati dengan mikroskop
Pembahasan
Penghitungan konsentrasi sel pada heamacytometer ini bergantung pada volume dibawah coverslip. Pada chamber terdapat 9 kotak besar berukuran 1 mm2 dan kotak-kotak kecil, di mana satu kotak besar sama dengan 25 kotak kecil sehingga satu kotak besar tersebut memiliki volume sebesar 0.0001 ml. Adapun kotak yang paling kecil berfungsi untuk mempermudah perhitungan sel. Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan haemacytometer adalah dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan. Misalnya, bila pewarna trypan blue dicampukan ke dalam larutan sel maka sel yang hidup tidak akan berwarna dan sel yang mati akan berwarna biru. Kelebihan lainnya adalah morfologi sel dapat diamati, dapat mengevaluasi homogenitas dan data mendeteksi kontaminasi
Pada praktikum sebelum mikroorganisme diperiksa perlu diencerkan, jika kepadatan tinggi sel akan membuat tidak mungkin menghitung. Kebutuhan untuk pengenceran adalah kerugian, karena setiap pengenceran menambahkan ketidakakuratan untuk pengukuran. Keuntungan metode ini adalah menjadi murah dan cepat, membuat metode perhitungan ini yang lebih disukai dalam percobaan biologis cepat dalam yang perlu hanya ditentukan apakah kultur sel telah tumbuh seperti yang diharapkan, setelah melakukan pengenceran maka teteskan larutan spora cendawan pada slide glass yang berada pada haemachytometer setelah itu lakukan pengamatan dengan menngunakan mikroskop dan kemudian lakukan perhitungan spora cendawan.
Melakukan perhitungan spora cendawan dengan pertolongan kotak-kotak skala, di mana dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak kecil. alat haemacytometer digunakan di bawah mikroskop. Sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm. sedangkan satu kotak sedang berukuran nilai 0,2 mm. dan tebalnya adalah 0,1 mm. Jumlah sel per mL dapat di hitung sebagai berikut :
Jumlah sel dalam 25 kotak besar
= jumlah sel per kotak besar x 25 kotak
Jumlah sel per mm3 sampel
= jumlah sel dalam 25 kotak besar x (1/0,02)
Jumlah sel per ml sampel
= jumlah sel per mm3 sampel x 103
= jumlah sel per kotak besar x 25 kotak x (1/0,02) x 10^3
Jumlah sel per mL sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106
Dari hasil praktikum yang telah dilakukan didapat bahwa jumlah sel per kotak besar adalah ad alah 10 sel, yang diamati pada mikroskop, jadi perhitungannya adalah :
Jumlah sel per mL sampel = 10 x 1,25 x 106
= 12,5 x 106
= 1,25 x 107
= 12.500.000
KESIMPULAN
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari praktikum yang telah dilakukan adalah sebagai
berikut:
1.
Haemacytometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel
secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah.
2.
Penghitungan konsentrasi sel pada haemacytometer ini bergantung pada volume dibawah
coverslip. Pada chamber terdapat 9 kotak besar berukuran 1 mm2 dan kotak-kotak kecil, di mana satu kotak besar sama dengan 25 kotak kecil sehingga satu kotak besar tersebut memiliki volume sebesar 0.0001 ml.
3.
Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan haemacytometer adalah dapat menghitung
jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan.
4.
Dari hasil praktikum yang telah dilakukan didapat bahwa jumlah sel per kotak besar adalah
adalah 10 sel, yang diamati pada mikroskop, jadi total perhitungannya adalah 1,25 x 107 atau 12.500.000.
DAFTAR PUSTAKA
Alex. 2013. Laporan perhitungan Mikroba. http://Alexchemistry.blogspot.com Diakses pada tanggal 6 Desember 2013.
Mikapin .2012. Tes Jurnal Praktikum Mikrobiolgi Jilid VI (Penghitungan Jumlah Mikroba Dengan Ruang Hitung). Artikel Teknis Kimia.
Rio, Sapni. 2012. Langkah Metode Couning Cell . http://idwikipedia.org/wiki/ Langkah Metoder Couning Cell html. Diakses pada tanggal 6 Desember 2013. Tria Ardi Puspa Laga. 2012. Laporan Praktikum Mikrobiologi Menghitung Jumlah Sel . Laboratorium Ilmu Hama Dan Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian. Universitas Bengkulu.
haemacytometer
PENDAHULUAN
Latar Belakang
Mikroorganisme adalah mikroba atau organisme yang berukuran sangat kecil sehingga untuk mengamatinya diperlukan alat pembesar. Mikroorganisme seringkali bersel tunggal meskipun beberapa protista bersel tunggal masih dapat terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa spesies multisel yang tidak dapat terlihat oleh mata telanjang. Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota, protista dan alga renik. Fungi terutama yang berukuran kecil dan tidak membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai bagiannya meskipun banyak yang tidak menyepakatinya (Tria, 2012).
Penghitungan jumlah bakteri hidup terbagi atas dua, yaitu secara (tidak langsung) Misalnya perhitungan pengurangan jumlah substrat dan secara langsung. Penghitungan mikroba secara langsung antara lain: 1. Plate Count (hitungan cawan) Plate count atau viable count didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni setelah ditumbuhkan dalam media pertumbuhan dan lingkungan yang sesuai. Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut (Mikapin, 2012). 2. Turbidimetri Turbidimetri merupakan metode yang cepat untuk menghitung jumlah b akteri dalam suatu larutan menggunakan spektrofotometer. Bakteri menyerap cahaya sebanding dengan volume total sel (ditentukan oleh ukuran dan jumlah). Ketika mikroba bertambah jumlahnya atau semakin besar ukurannya dalam biakan cair, terjadi peningkatan kekeruhan dalam biakan. Kekeruhan dapat disebut optical density (absorbsi cahaya, biasanya diukur pada panjang gelombang 520 nm – 700 nm). Untuk mikroba tertentu, kurva standar dapat memperlihatkan jumlah organisme/ml (ditentukan dengan metode hitungan cawan) hingga pengukuran optical density (ditentukan dengan spektrofotometer) (Mikapin, 2012). 3. Hemasitometer Hemasitometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis. R uang hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm². Satu kotak besar di tengah, dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,05 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel bakteri
yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah bakteri per satuan volume dapat diketahui (Mikapin, 2012).
Tujuan
Tujuan praktikum ini adalah adalah untuk melakukan perhitungan spora dengan menggunakan alat haemacytometer.
TINJAUAN PUSTAKA
Hemasitometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Bentuknya terdiri dari 2 counting chamber dan tiap chamber-nya memiliki garis-garis mikroskopis pada permukaan kaca. Luas total dari chamber adalah 9 mm2. Chamber tersebut nantinya akan ditutup dengan coverslip dengan ketinggian 0.1 mm di atas chamber floor (Rio, 2012). Spora tumbuhan yang berkembang biak dengan spora antara lain paku, jamur, ganggang dan suplir. Spora terdapat pada daun tumbuhan bagian belakang, berbentuk serbuk dan disimpan di
dalam
kotak
spora
yang
disebut
sporangium.
Jamur merupakan tumbuhan yang berkembang biak dengan spora. Kita tahu jamur tidak pernah berbunga apalagi berbiji, sebab biji baru ada apabila ada bunga yang dapat dibuahi dengan cara penyerbukan. Bentuk spora serupa dengan biji, namun bentuknya sangat kecil sehingga tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Spora dapat dilihat dengan bantuan alat yang disebut dengan mikroskop. Spora ini berasal dari sel yang berubah fungsi menjadi alat perkembangbiakan. Perkembangbiakan pada jamur yang tumbuh liar di kebun terjadi pada saat spora jatuh ke tanah yang lembab dan subur. Spora yang jatuh tersebut berubah menjadi alat perkembangbiakan dan mengisap makanan, sampai akhirnya tumbuh menjadi tumbuhan jamur yang baru(Mikapin, 2012). Haemocytometer adalah perangkat awalnya dirancang untuk penghitungan sel darah. Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Hemositometer ini ditemukan oleh Louis-Charles Malassez dan terdiri dari tebal kaca slide mikroskop dengan lekukan persegi panjang yang menciptakan sebuah kamar. Ruang ini diukir dengan laser-terukir grid garis tegak lurus. Perangkat ini dibuat dengan hati-hati sehingga daerah
yang dibatasi oleh garis diketahui, dan kedalaman ruang ini juga diketahui. Oleh karena itu mungkin untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan (Mikapin, 2012). Prinsip dari perhitungan Petroff-Hauser yaitu melakukan perhitungan dengan pertolongan kotak-kotak skala, di mana dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak kecil. Alat haemocytometer
digunakan di bawah mikroskop, sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm.
Sedangkan satu kotak sedang berukuran nilai 0,2 mm. Dan tebal nya adalah 0,1 mm. Jumlah sel per ml sampel dapat dihitung sebagai berikut: Jumlah sel dalam 25 kotak besar = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak Jumlah sel per mm3 sampel = Jumlah sel dalam 25 kotak besar × (1/0,02) Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per mm 3 sampel × 103 = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak× (1/0.02)x 10^3 Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak × 50 × 103 Jumlah sel per mL sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106 Misalnya : didapatkan jumlah mikroba yang mau dihitung 12 sel mikroba, maka jumlah sel per ml sampel adalah: 12 × 1,25 × 106 = 1,5 × 107 (Mikapin, 2012). Biasanya sebelum mikroorganisme diperiksa perlu diencerkan, jika kepadatan tinggi sel akan membuat tidak mungkin menghitung. Kebutuhan untuk pengenceran adalah kerugian, karena setiap pengenceran menambahkan ketidakakuratan untuk pengukuran. Keuntungan metode ini adalah menjadi murah dan cepat, membuat metode perhitungan ini yang lebih disukai dalam percobaan biologis cepat dalam yang perlu hanya ditentukan apakah kultur sel telah tumbuh seperti yang diharapkan (Rio, 2012).
Haemocytometer Neubour memiliki kelemahan dan kelebihan dalam penggunaannya dalam proses perhitungan bakteri secara langsug. Kelebihannnya antara lain ialah cepat dalam menghasilkan data dan tak perlu menunggu lama, serta datanya atau jumlah selnya langsung didapat pada saat itu juga setelah menghitung menggunakan rumusnya dan menghemat biaya. Sedangkan kelemahannya ialah tidak dapat membedakan antara sel yang mati dengan yang hidup karena perhitungannya secara keseluruhan dan data yang dihasilkan tidak akurat karena setiap pengamat memiliki mata yang berbeda-beda dan terdapat keterbatasan dalam melihat serta menghitung sel yang ada dalam kamar Haemocytometer Neubour. Sebaiknya menggunakan alat yang lebih canggih lagi dalam perhitungan jumlah sel karena setiap peralatan elektronik memilki kesensitifan yang tinggi dibandingkan dengan mata manusia, seperti alat particle count (Alex, 2013).
BAHAN DAN METODE
Bahan dan Alat
Bahan
Bahan yang digunakan adalah alkohol, pathogen cendawan dan aquades.
Alat
Alat yang digunakan adalah haemachytometer, mikroskop, vortex, tabung reaksi, gelas beker dan jarum ent.
Tempat dan Waktu
Praktikum ini dilaksanakan di laboratorium Fitopatologi Fakultas Pertanian Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru. Pada hari Kamis tanggal 5 Desember 2013 pukul 10.00-12.00 Wita.
Prosedur Kerja
1.
Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan.
2.
Membersihkan alat haemachytometer dengan tissue yang sudah diberi alkohol.
3.
Setelah itu haemachytometer ditutup dengan cover glass yang sudah dibersihkan.
4.
Lakukan pengenceran dengan tabung reaksi 106.
5.
Masukkan air aquades kedalam botol yang berisi pathogen cendawan kemudian digoyang-goyang dengan jarum ent agar spora terangkat.
6.
Mengisi tabung reaksi dengan 1 ml larutan pathogen cendawan yang sudah terisi 9 ml air aquades sebelumnya.
7.
Kemudian divortex selama 15-30 detik agar memisahkan atau memecah spora, lakukan terus hingga pada tabung 106.
8.
Mengambil 1 ml larutan dari tabung reaksi pengenceran pada tabung ke 106 dengan menggunakan pipet isap.
9.
Meneteskan larutan tadi pada alat haemachytometer ±1 tetes.
10. Amati dengan menggunakan mikroskop hitung berapa jumlah sel dalam satu kotak. 11. Gunakan rumus : Jumlah sel per ml sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Hasil dari praktikum yang telah dilakukan adalah: Tabel 1. Pengamatan Spora Dengan Haemachytometer No.
Gambar
Keterangan
Pathogen cendawan
Memasukkan air pada isolat cendawan
Mengoyangkan pathogen agar homogen dengan air dan spora terangkat
Mengambil 1 ml larutan (isolat cendawan)
Tabel 1.Lanjutan
Melakukan pengenceran
Menghomogenkan dengan menggunakan vortex
Mengambil larutan setelah pengenceran
Meneteskan pada cover glass haemachytometer
Amati dengan mikroskop
Pembahasan
Penghitungan konsentrasi sel pada heamacytometer ini bergantung pada volume dibawah coverslip. Pada chamber terdapat 9 kotak besar berukuran 1 mm2 dan kotak-kotak kecil, di mana satu kotak besar sama dengan 25 kotak kecil sehingga satu kotak besar tersebut memiliki volume sebesar 0.0001 ml. Adapun kotak yang paling kecil berfungsi untuk mempermudah perhitungan sel. Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan haemacytometer adalah dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan. Misalnya, bila pewarna trypan blue dicampukan ke dalam larutan sel maka sel yang hidup tidak akan berwarna dan sel yang mati akan berwarna biru. Kelebihan lainnya adalah morfologi sel dapat diamati, dapat mengevaluasi homogenitas dan data mendeteksi kontaminasi Pada praktikum sebelum mikroorganisme diperiksa perlu diencerkan, jika kepadatan tinggi sel akan membuat tidak mungkin menghitung. Kebutuhan untuk pengenceran adalah kerugian, karena setiap pengenceran menambahkan ketidakakuratan untuk pengukuran. Keuntungan metode ini adalah menjadi murah dan cepat, membuat metode perhitungan ini yang lebih disukai dalam percobaan biologis cepat dalam yang perlu hanya ditentukan apakah kultur sel telah tumbuh seperti yang diharapkan, setelah melakukan pengenceran maka teteskan larutan spora cendawan pada slide glass yang berada pada haemachytometer setelah itu lakukan pengamatan dengan menngunakan mikroskop dan kemudian lakukan perhitungan spora cendawan. Melakukan perhitungan spora cendawan dengan pertolongan kotak-kotak skala, di mana dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak kecil. alat haemacytometer digunakan di bawah mikroskop. Sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm. sedangkan satu kotak sedang berukuran nilai 0,2 mm. dan tebalnya adalah 0,1 mm. Jumlah sel per mL dapat di hitung sebagai berikut : Jumlah sel dalam 25 kotak besar
= jumlah sel per kotak besar x 25 kotak
Jumlah sel per mm3 sampel
= jumlah sel dalam 25 kotak besar x (1/0,02)
Jumlah sel per ml sampel
= jumlah sel per mm3 sampel x 103
= jumlah sel per kotak besar x 25 kotak x (1/0,02) x 10^3 Jumlah sel per mL sampel = jumlah sel per kotak besar x 1,25 x 106 Dari hasil praktikum yang telah dilakukan didapat bahwa jumlah sel pe r kotak besar adalah adalah 10 sel, yang diamati pada mikroskop, jadi perhitungannya adalah : Jumlah sel per mL sampel = 10 x 1,25 x 106 = 12,5 x 106 = 1,25 x 107 = 12.500.000
KESIMPULAN
Kesimpulan yang dapat diperoleh dari praktikum yang telah dilakukan adalah sebagai berikut: 1.
Haemacytometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah.
2.
Penghitungan konsentrasi sel pada haemacytometer ini bergantung pada volume dibawah coverslip. Pada chamber terdapat 9 kotak besar berukuran 1 mm2 dan kotak-kotak kecil, di mana satu kotak besar sama dengan 25 kotak kecil sehingga satu kotak besar tersebut memiliki volume sebesar 0.0001 ml.
3.
Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan haemacytometer adalah dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan.
4.
Dari hasil praktikum yang telah dilakukan didapat bahwa jumlah sel per kotak besar adalah adalah 10 sel, yang diamati pada mikroskop, jadi total perhitungannya adalah 1,25 x 107 atau 12.500.000.
DAFTAR PUSTAKA
Alex. 2013. Laporan perhitungan Mikroba. http://Alexchemistry.blogspot.com Diakses pada tanggal 6 Desember 2013. Mikapin .2012. Tes Jurnal Praktikum Mikrobiolgi Jilid VI (Penghitungan Jumlah Mikroba Dengan Ruang Hitung). Artikel Teknis Kimia. Rio, Sapni. 2012. Langkah Metode Couning Cell . http://idwikipedia.org/wiki/ Langkah Metoder Couning Cell html. Diakses pada tanggal 6 Desember 2013. Tria Ardi Puspa Laga. 2012. Laporan Praktikum Mikrobiologi Menghitung Jumlah Sel . Laboratorium Ilmu Hama Dan Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian. Universitas Bengkulu.
KUANTITAS MIKROBA , HITUNGAN MIKROSKOPIS LANGSUNG. Posted on 1:07:00 AM by Net Tv
Laporan Praktikum Mikrobiologi dasar dan lingkungan Nama
:
Nim
:
Kelompok
: 10
Hari/Tanggal
: 7,Maret 2014
Waktu :13:00 PSP
:Emil Wahdi
Asisten
:Ramadhani :Ivone
KUANTITASI MIKROBE , HITUNGAN MIKROSKOPIS LANGSUNG
TEKNIK DAN MANAJEMEN LINGKUNGAN PROGRAM DIPLOMA INSTITUT PERTANIAN BOGOR 2014
PENDAHULUAN
Organisme mikroskopis adalah organisme yang hanya bisa dilihat dengan menggunakan mikroskop. Salah satunya adalah bakteri yang merupakan organisme mikroskopis. Keadaan bakteri di alam ini ada yang bersifat menguntungkan dan ada yang bersifat merugikan bagi kepentingan manusia. Bakteri yang menguntungkan dan merugikan bagi kepentingan organisme perlu dipelajari supaya bakteri yang menguntungkan, keberadaannya (kapasitas jumlahnya) dapat diperbanyak sedangkan untuk bakteri yang merugikan (patogen) jumlah populasinya dapat ditekan dan dapat dilakukan tindakan pencegahan atau antisipasi infeksi bakteri tersebut . (Umam, 2008). Setelah kita mempelajari bagaimana menumbuhkan suatu koloni bakteri pada minggu sebelumnya, tentu harus mengatahui kuantitas dan kualitas dari bakteri tersebut. Dalam hal ini yang akan dibahas adalah bagaimana mengetahui kuantitas dari suatu bakteri. Ada berbagai cara untuk menghitung jumlah sel bakteri, Terdapat dua metode penghitungan bakteri yaitu metode hitungan mikroskopis langsung (direct microscopis count) dan metode hitungan tak langsung (indirect count) dengan hitungan cawan, baik dengan metode penyebaran maupun metode penuangan.
Dalam praktikum ini kita akan mengamati banyaknya koloni dalam suatu bakteri dengan menggunakan Mikroskop cahaya yang mempunyai perbesaran maksimum 1000 kali. Mikroskop cahaya mempunyai kaki yang berat dan kokoh dengan tujuan agar dapat berdiri dengan stabil. Mikroskop cahaya memiliki tiga sistem l ensa, yaitu lensa obyektif, lensa okuler, dan kondensor. Lensa obyektif dan lensa okuler terletak pada kedua ujung tabung mikroskop. Lensa okuler pada mikroskop bias berbentuk lensa tunggal (monokuler) atau ganda (binokuler). Pada ujung bawah mikroskop terdapat tempat dudukan lensa obyektif yang bisa dipasangi tiga lensa atau lebih. Di bawah tabung mikroskop terdapat meja mikroskop yang merupakan tempat preparat. Sistem lensa yang ketiga adalah kondensor. Kondensor berperan untuk menerangi obyek dan lensa-lensa mikroskop yang lain. Sedangkan media yang akan kita gunakan untuk menghitung bakteri secara langsung kita menggunakan Hemasitometer, yaitu suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel/bakteri secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Hemasitometer pada mulanya diperuntukkan untuk menghitung sel darah, yang ditemukan oleh Louis-Charles Malassez. Penghitungan konsentrasi sel pada hemasitometer ini bergantung pada volume dibawah coverslip.Pada chamber terdapat 16 persegi besar yang memiliki persegipersegi kecil di dalamnya, di mana sisi persegi kecil besarnya 0,05 mm. Jika di atas bagian yang diasah tadi diletakkan sebuah kaca penutup, maka akan terbentuk ruangan yang tingginya 0,1 mm. Sehingga volume dari satu persegi kecil adalah 0,05*0,05*0,1 mm3=25.10-5 mm3. Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan hemasitometer adalah dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan.Misalnya, bila pewarna trypan blue dicampukan ke dalam larutan sel maka sel yang hidup tidak akan berwarna dan sel yang mati akan berwarna biru. Kelebihan lainnya adalah morfologi sel dapat diamati, dapat mengevaluasi homogenitas dan data mendeteksi kontaminasi.( Hansen, 2003).
Tujuan
Menghitung Jumlah sel pada sampel menggunakan teknik hitungan mikroskopis secara langsung
Alat dan Bahan
Alat Mikroskop,Hemocytometer,cover glass,counter, pipet tetes. Bahan Suspensi Yeast/Khamir, Air Sulingan, Tisu, Alchol
Metode
Persiapkan alat-alat dan bahan-bahan yang akan kita pergunakan/kitaperlukan,selanjutnya Suasana steril harus diciptakan dari awal praktikum hingga akhir praktikum tujuanya agar medium dan bakteri yang akan kita amatiti tidak terkontaminasi. Terlebih dahulu, tangan dicuci dengan sabun dan dibilas dengan air hingga bersih. Tangan dikeringkan dan kemudian tangan dan meja dibasahi dengan alcohol 70% hingga tangan dan area kerja steril serta kering. Haemocytometer dibasahi pula dengan alcohol 70% hingga Haemocytometer tersebut steril. Mikroskop dihidupkan dan diatur cahayanya, jangan terlalu terang dan jangan terlalu gelap,mainkan kondensor sesuai kebutuhan. Haemocytometer diletakkan di atas meja objektif. Lalu kamar-kamarnya dicari dan diamati di bawah mikroskop dengan menggunakan perbesaran mikoskop 4x10. Putar knop kasr dan halus hingga mencapai focus, Jika kamarnya telah ditemukan, khamir diletakkan di atas Haemocytometer dengan mikropipet dengan volume tertentu yang kita kehendaki. Kemudian khamir diamati dibawah mikroskop dengan perbesaran yang lebih besar yaitu 10x10 agar lebih jelas terlihat. Jumlah khamir yang berada di kotak kecil di dalam kamar kaca dihitung dengan menggunakan bantuan alat penghitung. Perhitungan dilakukan secara diagonal maupun acak tersetruktur. Setelah dihitung, jumlah khamir dicatat dan perhitungan dilakukan.
Data dan Hasil Pengamatan
Dari pengamatn yang kami lakukan pada tanggal 7,Maret 2014 di peroleh hasil seperti di bawah ini Titik 1 sebanyak 105
Titik 2 sebanyak 57
Titik5 sebanyak 128
Dengan Total
Titik 4 sebanyak 97
=105+57+128+97+91=478 X= 95,6 Jumlah sel/ml =X.25. =95,6
Titik 3 sebanyak 91
perhitungan
= 2390 sel/
Pembahasan Proses sterilisasi sangat penting dibutuhkan sebelum memulai maupun mengakhiri sebuah pekerjaan di laboratorium,Khususnya apabiala kita ingin melakukan percobaan berupa pengamatan mikro organism,tahap pertama yang mesti dilakukan Alkohol 70% disemprotkan pada tangan dan meja, bahkan tangan pun sebelumnya harus dicuci dengan sabun terlebih dahulu. Hal tersebut berfungsi untuk membunuh mikroorganisme yang tak diinginkan agar mendapatkan pengukuran yang akurat. Setelah itu, Haemocytometer dibasahi dengan alcohol 70% untuk membersihkan alat te rsebut dari kotoran maupun mikroorganisme, karena pada saat diamati di bawah mikroskop alat harus bersih dan steril agar pengamatan terlihat jelas oleh mata dan mempermudah perhitungan mikroba pada saat kita menghitung. Tersedia banyak teknik di dalam laboratorium untuk m engukur pertumbuhan mikroba . Alatalat yang ada tersebut berkisar dari peralatan yang masih sederhana seperti sebuah kaca objek dengan olesan yang diwarnai. Selain itu, terdapat pula metode-metode yang lain dalam pengukuran pertumbuhan mikroba, misalnya dengan metode hitung cawan, pengukuran kekeruhan dari suatu suspensi, pengukuran dengan menggunakan membran atau filter molecular dan penentuan berat. Suatu bakteri juga dapat dihitung secara elektronik yaitu dengan cara memasukkan biakan melalui lubang yang sangat kecil pada alat penghitung partikel counter. Alat penghitung tersebut dapat dipakai secara rutin untuk memecah sel darah, namun dapat pula disesuaikan untuk memecah bakteri (Volk 1993). Hemasitometer adalah suatu ruang kaca dengan sisi yang menjulang dan kaca penutup yang akan menahan cairan tepat 0.1 mm dari atas lantai ruang kaca. Ruang hitung memiliki total luas permukaan . Penghitungan konsentrasi sel pada hemasitometer didasarkan pada volume di bawah kaca penutup. Satu kotak besar memiliki volume 0,0001 ml (panjang x lebar x tinggi = 0,1 cm x 0,1 cm x 0,01 cm = 0,0001 cm3 = 0,0001 ml). Hemasitometer diisi oleh gaya kapiler. Satu tetes dari larutan campuran sel yang terlarut dengan baik dipipet pada ujung tepi dari hemasitometer dan kemudian perlahan-lahan dibuang kelebihannya supaya cairan tertarik masuk ke dalam ruang o leh gaya kapiler. Khamir adalah mikroorganisme eukariotik bersel tunggal yang tergolong fungi. Berukuran antara 5 dan 20 mikron. Khamir termasuk organisme uniseluler yang bersifat aerob. Tetapi jenis khamir fermentatif dapat hidup secara anaerob meski pertumbuhannya lambat. Umumnya khamir tumbuh pada makanan yang banyak mengandung gula dan ber pH rendah, seperti sirup dan buah-buahan. Karenanya khamir sering digunakan dalam proses fermentasi. Khamir memiliki sekumpulan enzim zymase yang berperan pada fermentasi senyawa gula. P roses fermentasi ini digunakan dalam proses pembuatan roti, tape dan anggur. Namun sifat ini juga dapat merugikan, karena khamir sangat menyukai buah-buahan, sehingga dapat menyebabkan kerusakan yang tidak diinginkan sehingga buah tidak dapat dikonsumsi maupun diolah lebih lanjut.
Khamir/Ragi, seperti kebanyakan jamur, respirasi secara aerobik, tetapi tanpa udara mereka memperoleh energi dengan fermentasi gula dan karbohidrat untuk memproduksi etanol dan karbon dioksida. Ketika ragi diberikan dengan baik gula dan oksigen, koloni tumbuh hingga 20 kali lebih cepat melalui pembelahan sel daripada tanpa oksigen . Khamir berkembang biak dengan pembelahan sel dengan cara pembentukan tunas. Bagi kebanyakan khamir,tunas dapat berkembang dari setiap bagian permukaan sel induk (pertunasan polar) tetapi bagi beberapa spesies hanya pada bagian tertentu saja. Pada khamir dengan pertunasan bipolar pembentukan tunas terbatas pada dua bagian sel yang berlawanan dan sel berbentuk jeruk atau bentuk apikulat. Khamir kurang tahan terhadap suhu tinggi dibandingkan dengan kapang, Suhu optimum untuk pertumbuhannya adalah 20-38 oC. Dan pada suhu 100 oC yeast dan sporanya dapat mati. karena itu pemanasan menjadi cara yang efektif untuk membunuh khamir. Khamir banyak digunakan dalam industri pangan, terutama dari genus Saccharomyces.
Setelah, khamir diteteskan pada kamar bagian atas Haemocytometer dengan volume tertentu menggunakan mikropipet,. Lalu ditutup bagian kamar yang sudah diletakkan khamir dengan kaca tipis. Perbesaran 4x10 pada mikroskop akan menghasilkan gambar yang buram, sehingga diperlukan perbesaran yang lebih yaitu 10x10. Perbesaran 100 kali, tentu akan menghasilkan gambar yang terlihat jelas terutama pada bagian kamar Haemocytometer. Gambar yang terlihat jelas tersebut didapatkan dengan mengatur kenop mikro yang ada pada bagian samping mikroskop sehingga gambar terlihat focus dan tentu dengan bantuan cahaya yang sedikit redup. Satu kotak besar yang menyusun kamar, terdapat 16 kotak kecil didalamnya sehingga kotak kecil dalam kamar berjumlah 400 buah. Setelah khamir yang berhamburan pada kamar Haemocytometer terlihat jelas, maka dilakukan perhitungan dengan menggunakan alat bantu perhitungan jumlah mikroorganisme yang sedang diamati di bawah mikroskop. Khamir akan memecah dan membentuk sel atau bulatanbulatn kecil yang memisah satu sama lain. Lalu ada juga yang bergabung dari dua sampai tiga sel menjadi satu sel saja membentuk koloni, namun jika koloni tersebut masih terlihat gabungan beberapa sel, koloni tersebut tetap dihitung tiga sel, bukan satu sel. Perhitungan pun juga berdasarkan pengambilan sampel secara acal yaitu dengan cara menghitung titik kiri atas, titik kanan atas, titik tengah, titik kiri bawah, dan titik kanan bawah. Perhitungan mendapatkan hasil titik kiri atas, titik kanan atas, titik tengah, titik kiri bawah, dan titik kanan bawah berturut-turut terdapat khamir sebanyak 105,57,128,97 ,91. Perhitungan dilakukan denga rumus seperti perhitungan pada data dan hasil pengamatan, yaitu Jumlah sel per ml= = Jumlah sel.25.
Jumlah sel yang telah dihitung dalam percobaan ialah 478 sel. Sedangkan 25 yaitu jumlah kotak besar yang ada di kamar Haemocytometer. Setelah melakukan perhitungan, terdapat 2390 sel/ sel khamir pada Haemocytometer .
Simpulan
Berdasarkan data dan hasil pengamatan dapat disimpulkan bahwa praktikan dapat megetahui cara perhitungan mikroba secara langsung. Terdapat kurang lebih 2390 sel/ sel khamir yag terdapat di kamar Haemocytometer yang kita amati
Daftar Pustaka -2008. Mikroskop dan Penggunaannya. Diambil pada tanggal 12 Maret 2014, dari http://hafidhamr.com/2008/06/05/macam-macam-mikroskop/trackback -Hansen, 2003, Hemacytometer, http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/ hemacytometer.htm. Tanggal akses: 5 November 2011. -Kurniawan Sodikin .2010, Haemocytometer. [terhubung http://www.sodiycxacun.web.id/2010/08/haemocytometer.html#axzz1ZS1O7adR. [14 Maret 2014: 16 :50] -Volk. 1993. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Erlangga.
Laporan Praktikum Mikrobiologi Acara 6 Menghitug dan Mengukur Sel LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI Acara 6 Menghitung dan Mengukur Sel
Nama : Muhammad Arif Abdullah Humam NPM : E1J012004 Kelompok : 1 (Satu) Jadwal Praktikum : Senin, Shift 4 (14.00-15.40) Dosen Pembimbing : Dr. Ir. Tunjung Pamekas, M.Sc. Coach : Fretty Aritonang
Laboratorium Ilmu Hama dan Penyakit Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Bengkulu 2013 Tujuan Praktikum Mahasiswa dapat menghitung spora dengan menggunakan haemocytometer. Mahasiswa dapat menghitung jumlah spora dan sel menggunakan Skala micrometer okuler (SMOK) dan Skala micrometer obyektif (SMOB). Dasar Teori Mikrobiologi adalah suatu cabang ilmu biologi yang mempelajari tentang mikroorganisme dan interaksi mereka dengan organisme lain dan lingkungannya. (Singleton.2006) Sejarah tentang mikroba dimulai dengan ditemukannya mikroskop oleh Leeuwenhoek (16331723). Mikroskop temuan tersebut masih sangat sederhana, dilengkapi satu lensa dengan ⦁
⦁ ⦁
⦁
jarak fokus yang sangat pendek, tetapi dapat menghasilkan bayangan jelas yang perbesarannya antara 50-300 kali. (Skou, dan Sogaard Jensen. 2007) Mikroba ialah jasad renik yang mempunyai kemampuan sangat baik untuk bertahan hidup. Jasad tersebut dapat hidup hamper di semua tempat di permukaan bumi. Mikroba mampu beradaptasi dengan lingkungan yang sangat dingin hingga lingkungan yang relative panas, dari ligkungan yang asam hingga basa. Berdasarkan peranannya, mikroba dapat dikelompokkan menjadi dua, yaitu mikroba menguntungkan dan mikroba merugikan (Afriyanto 2005). Penentuan jumlah angka mikroorganisme sangat penting dilakukan untuk menetapkan keamanan suatu sediaan farmasi dan makanan. Berbagai metode telah dike mbangkan untuk menghitung jumlah mikroorganisme. Metode tersebut menghitung jumlah sel, massa sel, atau isi sel yang sesuai dengan jumlah sel. Terdapat empat macam cara umum untuk memperkirakan besar populasi mikroorganisme, yaitu perhitungan langsung, pengukuran langsung, perhitungan tidak langsung dan perkiraan tidak langsung (Harmita 2006). Perhitungan langsung (direct count) untuk jumlah sel atau biomassa mikroorganisme dan sel dihitung langsung di bawah mikroskop atau dengan perhitungan partikel elektronik (electronic particle counter). Pengukuran langsung (direct measurement) untuk biomassa mikroorganisme, massa sel dapat ditentukan dengan menimbang atau mengukur berat seluruh sel, dan biomassa dapat dikorelasikan dengan jumlah sel dengan membandingkan pada kurva standar. Perhitungan tidak langsung (indirect count) untuk jumlah sel, mikroorganisme dalam sampel dikonsentrasikan dan ditanam pada media yang sesuai, pertumbuhan mikroorganisme contohnya pembentukan koloni dalam pelat agar, digunakan untuk memperkirakan jumlah mikroorganisme yang terdapat di dalam sampel. Perkiraan tidak langsung (indirect estimate ) untuk biomassa mikroorganisme, biomassa mikroorganisme diperkirakan dengan mengukur komponen biokimia sel mikroorganisme yang relative konstan, seperti protein, adenosine trifosfat (ATP), lipopolisakarida (LPS), murein dan klorofil. Biomassa juga dapat diperkirakan secara tidak langsung dengan mengukur kekeruhan. Perkiraan tidak langsung biomassa mikroorganisme dapat dikorelasikan dengan jumlah sel dengan membandingkan dengan kurva standar (Harmita 2006). Haemocytometer awalnya adalah perangkat yang dirancang untuk penghitungan sel darah. Sekarang juga digunakan untuk menghitung jenis sel serta partikel mikroskopis lainnya. Haemocytometer ini ditemukan oleh Louis-Charles Malassez dan terdiri dari tebal kaca slide mikroskop dengan lekukan persegi panjang yang menciptakan sebuah kamar. Ruang ini diukir dengan laser-terukir grid garis tegak lurus. Perangkat ini dibuat dengan hati-hati sehingga daerah yang dibatasi oleh garis diketahui, dan kedalaman ruang ini juga diketahui. Oleh karena itu mungkin untuk menghitung jumlah sel atau partikel dalam volume tertentu cairan, dan dengan demikian menghitung konsentrasi sel dalam cairan secara keseluruhan.(Wiki, 2013). Mikroba berukuran sangat kecil dan untuk mengetahuinya digunakan mikrometer. Mikrometer merupakan kaca berskala dan dikenal 2 jenis mic rometer yaitu mikrometer okuler dan mikrometer objektif. Mikrometer okuler dipasang pada lensa okuler mikroskop, sedangkan micrometer objektif berbentuk slide yang ditempatkan pada meja preparat mikroskop. Jarak antar garis skala pada mikrometer okuler tergantung pada perbesaran lensa objektif yang digunakan yang menentukan lapang pandang mikroskop. Jarak ini dapat ditentukan dengan mengkalibrasi antara mikrometer okuler dan objektif. Mikrometer objektif memiliki skala yang telah diketahui, menjadi tolak ukur untuk menentukan ukuran skala micrometer okuler. 1 skala micrometer objektif = 0,01 mm / 10 µm. Kalibrasi dilakukan dengan menghimpitkan skala mikrometer objektif dan okuler pada perbesaran yang diinginkan. Skala ke nol (garis pertama) kedua mikrometer disimpulkan menjadi 1 garis kemudian dilihat pada skala ke berapa kedua jenis mikrometer tersebut
bertemu/berhimpit kembali. Dari hasil tersebut dapat diketahui satu satuan panjang pada skala mikrometer okuler itu berdasarkan beberapa jumlah skala kecil mikrometer objektif yang berada di antara garis yang berhimpit tadi. (Muslim, 2011). Bahan dan Alat Alat : 1unit haemocitometer, 1 buah jarum ent, 1 buah mikrometer objektif, 1 buah mikrometer okuler 1 buah gelas penutup, 1buah pipet tetes, 1 unit mikroskop. Bahan : 25 ml suspense sel spora ⦁ ⦁
⦁
Cara Kerja Mengukur mikroorganisme Gelas objek dibersihkan menggunakan alcohol 70% sampai bebas debu dan lemak, kemudian ditetesi aquades. Massa sporangium diambil menggunakan jarum ent kemudian diletakkan didalam tetesan air di atas gelas obyek kemudian ditutup dengan gelas penuup dan dijaga agar tidak timbul gelembung udara. Preparat diamati dengan menggunakan mikroskop pada pembesaran dimana obyek terlihat paling jelas. Micrometer okuler dipasang dalam lensa okuler untuk mengukur obyek dengan menggunakan skala yang ada dalam micrometer okuler, dengan cara menggeser-geser mej a benda pada mikroskop dam memutas lensa okuler sampai tepat pada obyek yang di ukur. Pada praktikan dilakukan pengukuran panjang dan lebar 3 s porangium. Setelah selesai mengukur obyek dengan skala okuler, preparat diambil dari menja benda kemudian diganti dengan micrometer obyektif untuk kalibrasi skala micrometer. Harus diingat bahwa pembesaran lensa mikroskop yang digunakan hars sama antara pengukuran selnya. Skala micrometer okuler (SMOK) diatur supaya berimpit dengan skala micr ometer obyektif (SMOB), dengan cara menggeser-geser mejabenda pada mikroskop dan memutar lensa okuler. Setelah garis skala masing-msing ada yang saling berimpit, dilakukan kalibrasi dengan cara membandingkan kesetaraan SMOK danSMOB, yaitu denganmenghitung jumlah SMOK dan jumlah SMOB. Dalam praktikum kalibrasi atau penyetaraan dilakukan sebanyak 2 kali, kemudian dihitung ukuran sel menurut ukuran micrometer obyektif. ⦁ ⦁ ⦁
⦁
⦁
⦁
⦁
⦁
⦁
⦁
Menghitung mikroorganisme
⦁
Haemocitometer dibersihkan dengan menggunakan alcohol sampai benar-benar bersih, kemudian dikeringkan. Perlu diingat bahwa kotak pada haemocitometer ukurannya sangat kecil sehingga kemasukan satu butir debu saja sudah cukup menyumbat kotak. Suspensi spora dikocok kemudian dipipet dan diteteskan pada haemocitometer tepat pada ruang hitungnya, sebanyak satu tetes. Tetesan suspense ditutup menggunakan gelas penutup dan dijaga agartidak menjadi gelembung udara dala kotak-kotak haemocytometer. Preparat diamati dengan menggunakan mikroskop dan dihitung jumlah sel dalam setiap kotak. Jika antar kotak jumlahnya tidak seragam, ulangi langkah ke-2 (dikocok lagi) Pada praktikum dihitung dari 5 kotak(ruang hitung), kemudian dirata-rata dan dihitung jumlah selnya setiap koloni. ⦁
⦁
⦁
⦁
⦁
Data Hasil Pengamatan Mengukur sel Obyek Ulangan SMOK Mikrometer 1 34-46 = 12 2 30-34 = 4 3 30-32 = 2 Total 3 18 Rata-rata 18/3 = 6 SMOK ⦁ ⦁
Obyek Ulangan SMOK SMOB Perbandingan Mikrometer 1 40-80 = 40 21 21/40 = 0,525 2 10-100 = 90 19 19/90 = 0,21 Total 2 130 40 0,735 Rata-rata 130/2 = 65 40/2 = 20 0,735/2 = 0,37
Mengitung sel Obyek Kotak kecil Jumlah sel Sel spora mikoriza 1 6 25 36 48 55 Total 5 kotak 30 Rata-rata 30/5 = 6 sel ⦁
Hasil Perhitungan dan Pembahasan Mengukur Sel Pada percobaan ini, diawali dengan mengganti lensa okuler mikroskop dengan micrometer okuler, kemudian letakkan sebuah kaca objek ke meja preparat, lalu tet eskan setetes suspensi yang berisi mikroba ke kaca objek, lalu menutupnya dengan kaca penutup. Setelah diamati, terdapat beberapa unit sel mikoriza didalam nya, kemudian diukur berdasarkan skala micrometer okuler (SMOK) yang terlihat langsung, pertama, didapat ukuran diameter sel sebesar 12 SMOK,kemudian diulangisampai 3 kali pengukuran, dan didapat hasil selanjutnya yaitu, 4 SMOK dan 2 SMOK. Kemudian hasilnya dirata-ratakan, yaitu (12+4+2)/3=18/3=6 SMOK. Karena SMOK tidak diketahui satuan umumnya, maka SMOK disesuaikan dengan Skala micrometer objektif (SMOB) dengan cara pengkalibrasian. Pengkalibrasian ini diawali dengan meletakkan micrometer objektif keatas meja preparat mikroskop(setelah dipastikan micrometer okuler tetap terpasang), kemudian melihat garis-garis pada kedua micrometer yang berhimpit dan mencatatnya, dilakukan 2 kali,pertama didapat hasil 40 SMOK = 21 SMOB. Maka, 1 SMOK = 21/40 SMOB = 0,525 SMOB. Kemudian hasil kalibrasi yang kedua ialah 90 SMOK = 19 SMOB. Sehingga, 1 SMOK = 19/90 SMOB = 0,21. Rata-rata hasil nya, 1 SMOK = (0,525+0,21)/2 = 0,735/2 = 0,3675 => 0,37 SMOB. Langkah selanjutnya, diameter rata-rata sel dijadikan dalam SMOB, yaitu, 6 SMOK = 6x0,37 SMOB = 2,22 SMOB maka, jari-jari sel tersebut = ½ x 2,22 = 1,11. Kemudian, dihitung luas sel dengan cara menghitung luas lingkaran(karena pada pengamatan, sel berbentuk lingkaran), hasilnya => π.r2 = 3,14 x 1,11 x 1,11 = 3,87 SMOB2. 1 SMOB = 0,01 mm= ⦁ ⦁
10µm, maka, 3,87 SMOB2 = 3,87.102µm2 = 387µm2 = 3,87.10-4mm2. Menghitung Sel Ada beberapa cara perhitungan secara langsung, antara lain adal ah dengan membuat preparat dari suatu bahan (preparat sederhana diwarnai atau tidak diwarnai) dan penggunaan ruang hitung (counting chamber). Praktikum ini menggunakan perhitungan secara l angsung. Penghitungan koloni secara langsung, dilakukan agar mengetahui secar a langsung juga. Penghitungan ini belum tentu akurat, karena hanya berdasarkan pada mikroba yang ada. Mikroba yang ada pada media ataupun sampel yang terhitung tidak hanya mikroba yang hidup, mungkin saja mikroba yang mati juga terhitung. Penghitungan ini menggunakan Haemocytometer. Alat ini memiliki ruang atau kamar-kamar yang nantinya menjadi Ruang hitung, terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm² . Satu kotak kecil luasnya 0,0025 mm2 = 25.10-4mm (terlihat pada Haemocytometer) . Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm=10-1mm . Sehingga, volume satu kotak kecil = 25.10-4mm2 x 10-1mm = 25.10-5mm3 = 0,00025mm3. Sel spora yang tersuspensi a kan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah spora per satuan volume dapat diketahui. Setelah dipastikan alat ini steril, kaca penutup diletakkan di atas Haemocytometer. Peletakkan ini beguna dalam menjaga mikroba yang akan dihitung pada ruang alat tetap bentuknya dan tidak terkontaminasi. Kemudian suspensi diteteskan sekali dengan pipet tetes. Suspensi ini akan bergerak mengalir ke permukaan alat dan akan mengisi ruang alat ini. Ruang yang terisi dengan mikroba pada yang terletak pada ruang atau kotak kecil dapat langsung dihitung dengan menghitung jumlah sel pada masing-masing kota k kecil, lalu ditentukan rata-ratanya. Hasil perhitungan kemudian dibandingkan dengan volume suspense. Hasil praktikum memperoleh bahwa jumlah mikroba dalam suspensi ini pada kotak kecil yang ke-1 terdapat 6 sel, kotak-2 ada 5 sel, kotak-3 ada 6 sel , kotak-4 ada 8 sel, dan kotak-5 ada 5 sel, tak ditemukan sel pada kotak lainnya, sehingga didapat rata-rata sel ialah sel. Kemudian, dihitung jumlah sel per mm3 nya, yaitu 24.000 sel/mm3. Jadi, dalam 1mm3 suspensi, ter dapat 24.000 sel, namun, apabila dikonversi dalam satuan mL (cm3) = 10mmx10mmx10mmx24000sel = 2,4.107 sel/mL sehingga, dapat diduga bahwa dalam 25mL suspensi tersebut terdapat => 25 mL x 24.107sel/mL = 6.108 sel(600juta sel). ⦁
Kesimpulan Mengukur sel mikroba secara langsung belum tentu akurat, karena dapat terj adi kesalahan dalam pengamatan dan penghitungan ukuran sel dandalam melakukan kalibrasi skala micrometer. Menghitung sel mikroba secara langsung menggunakan Haemocytometer juga belum tentu akurat, karena sel yang terlihat belum tentu sel yang hidup ataupun berhimpit, dan dalam penghitungan jumah sel pada masing-masing kotak kecil dapat terjadi kesalahan, sehingga jumlah sel sebenarnya belum tentu sesuai dengan yang ada pada pengamatan, hanya mendekati. Semakin tinggi perbesaran mikroskop, semakin teliti pengukuran dan penghitungan, karena dapat memisahkan sel yang berhimpit, sehingga, dapat memperkecil resiko kesalahan dalam pengukuran maupun penghitungan. ⦁ ⦁
⦁
⦁
Daftar Bacaan Afriyanto,Eddy. Pakan Ikan dan Perkembangannya. 2005. Penerbit Kanisius. Jakarta Harmita. Buku Ajar Analisis Hayati Edisi Ketiga. 2006. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta Muslim, Ahmadi. Menghitung jumlah bakteri. file:///X:/menghitung-perhitungan-jumlah bakteri_26.html. Diakses pada tanggal 24 April 2013. Purnomo, Bambang Ir MP. Penuntun Praktikum Mikrobiologi. 2013. Laboratorium Ilmu
Hama dan Penyakit Tanaman Universitas Bengkulu. Bengkulu Singleton,Paul. Dictionary of Microbiology And Molecular Biology Third Edition.2006. John wiley & Sons Inc. England Skou Torben dan Sogaard Jensen Gunnar. Microbiology.2007. Forfattern Og Systime. England Wikipedia. Hemocytometer. http://id.wikipedia.org/wiki/Hemocytometer. 2013. Diakses pada tanggal 24 April 2013.
TES JURNAL 6 PENGHITUNGAN JUMLAH MIKROBA DENGAN RUANG HITUNG
(Sumber :http://www.samyakinternational.com)
1. Apakah tujuan percobaan kali ini ? - Mahasiswa mampu melakukan pengamatan mikroba pada alat hemasitometer dengan
bantuan mikroskop.
-
Mahasiswa mampu melakukan perhitungan jumlah mikroba dengan menggunakan ruang
hitung.
2. Apa yang Anda ketahui mengenai perhitungan jumlah bakteri ? Penghitungan jumlah bakteri hidup terbagi atas dua, yaitu secara (tidak langsung) Misalnya
perhitungan pengurangan jumlah substrat dan secara langsung. Penghitungan mikroba secara langsung antara lain:
1. Plate Count (hitungan cawan) Plate count / viable count didasarkan pada asumsi bahwa setiap sel mikroorganisme hidup dalam suspensi akan tumbuh menjadi satu koloni setelah ditumbuhkan dalam media pertumbuhan dan lingkungan yang sesuai. Setelah diinkubasi, jumlah koloni yang tumbuh dihitung dan merupakan perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroorganisme dalam suspensi tersebut.
2. Turbidimetri
Turbidimetri merupakan metode yang cepat untuk menghitung jumlah bakteri dalam suatu larutan menggunakan spektrofotometer . Bakteri menyerap cahaya sebanding dengan volume
total sel (ditentukan oleh ukuran dan jumlah). Ketika mikroba bertambah jumlahnya atau semakin besar ukurannya dalam biakan cair, terjadi peningkatan kekeruhan dalam biakan . Kekeruhan dapat disebut optical density (absorbsi cahaya, biasanya diukur pada panjang gelombang 520 nm – 700 nm). Untuk mikroba tertentu, kurva standar dapat memperlihatkan jumlah organisme/ml (ditentukan dengan metode hitungan cawan) hingga pengukuran optical density (ditentukan dengan spektrofotometer).
3. Hemasitometer Hemasitometer adalah metode perhitungan secara mikroskopis. Ruang hitung terdiri dari 9 kotak besar dengan luas 1 mm². Satu kotak besar di tengah, dibagi menjadi 25 kotak sedang dengan panjang 0,05 mm. Satu kotak sedang dibagi lagi menjadi 16 kotak kecil. Dengan demikian satu kotak besar tersebut berisi 400 kotak kecil. Tebal dari ruang hitung ini adalah 0,1 mm. Sel bakteri yang tersuspensi akan memenuhi volume ruang hitung tersebut sehingga jumlah bakteri per satuan volume dapat diketahui.
3.
Apa yang Anda ketahui mengenai Hemasitometer ?
Hemasitometer adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Hemasitometer pada mulanya diperuntukkan untuk menghitung sel darah, yang ditemukan oleh Louis-Charles Malassez. Penghitungan konsentrasi sel pada hemasitometer ini bergantung pada volume dibawah coverslip. Pada chamber terdapat 16 persegi besar yang memiliki persegi-persegi kecil di dalamnya, di mana sisi persegi kecil besarnya 0,05 mm. Jika di atas bagian yang diasah tadi diletakkan sebuah kaca penutup, maka akan terbentuk ruangan yang tingginya 0,1 mm. Sehingga volume dari satu persegi kecil adalah 0,05*0,05*0,1 mm 3=25.105 mm3. Kelebihan perhitungan sel dengan menggunakan hemasitometer adalah dapat menghitung jumlah sel yang hidup maupun yang mati, tergantung dari pewarna yang digunakan. Misalnya, bila pewarna trypan blue dicampukan ke dalam larutan sel maka sel yang hidup tidak akan berwarna dan sel yang mati akan berwarna biru. Kelebihan lainnya adalah morfologi sel dapat diamati, dapat mengevaluasi homogenitas dan data mendeteksi kontaminasi.(id.wikipedia.org) Hemasitometer yang akan digunakan dalam percobaan adalah tipe Neubauer-Improved.
4. Apa saja kelemahan dan kelebihan dari metode perhitungan bakteri secara langsung ? Keuntungan metode ini ialah pelaksanaannya cepat dan tidak memerlukan banyak peralatan.
Namun mempunyai kelemahan sebagai berikut:
Sel-sel mikroba yang telah mati tidak dapat dibedakan dari sel yang hidup . Karena itu
keduanya terhitung. Dengan kata lain hasil yang diperoleh ialah jumlah total sel yang ada di dalam populasi. Pada beberapa macam sel eukariotik, penambahan zat warna tertentu
(misalnya biru metilen sebanyak 0,1 %) pada sampel yang akan dihitung dapat membedakan sel hidup dari sel mati. Pada sel khamir misalnya baik sel hidup maupun sel mati akan menyerap biru metilen namun hanya sel hidup mampu mereduksi zat warna tersebut secara enzimatik menjadi tidak berwarna; jadi sel-sel mati akan tampak biru.
Sel-sel yang berukuran kecil sukar dilihat di bawah mikroskop, seperti bakteri karena
ketebalan hemasitometer tidak memungkinkan digunakannya lensa obyektif celup minyak, sehingga kalau tidak teliti tidak terhitung. Hal ini biasanya diatasi dengan cara mewarnai sel sehingga menjadi lebih mudah dilihat.
Untuk mempertinggi ketelitian, jumlah sel di dalam suspensi harus cukup tinggi , minimal
untuk bakteri 10 6 sel/mL. Hal ini disebabkan dalam setiap bidang pandang yang diamati harus terdapat sejumlah sel yang dapat dihitung
Tidak dapat digunakan untuk menghitung sel mikroba di dalam bahan yang banyak
mengandung debris atau ekstrak makanan, karena hal tersebut akan mengganggu dalam perhitungan sel.
Kelemahan lain adalah sulitnya menghitung sel yang berukuran sangat kecil seperti bakteri karena ketebalan hemasitometer tidak memungkinkan digunakannya lensa obyektif celup minyak. Hal ini biasanya diatasi dengan cara mewarnai sel sehingga menjadi lebih mudah dilihat. Kadang-kadang sel cenderung bergerombol sehingga sukar membedakan sel-sel individu. Cara mengatasinya ialah mencerai-beraikan gerombolan sel-sel tersebut dengan menambahkan bahan anti gumpal seperti dinatrium etilen diamin tetraasetat dan Tween 80 sebanyak 0,1 %.
5. Bagaiman cara menghitung sel mikroorganisme dengan ruang hitung ? Karena letak mikroorganisme tidak beraturan maka perlu dilakukan perjanjian supaya tidak terjadi perhitungan dua kali, yaitu : Sel-sel pada sisi kanan dan bawah tidak dihitung pada kotak yang sedang diamati/dihitung. Sel-sel pada sisi kiri dan atas tetap dihitung pada kotak yang sedang diamati/dihitung. 6. Bagaiman metode perhitungan untuk percobaan kali ini ? Prinsip dari perhitungan Petroff-Hauser yaitu melakukan perhitungan dengan pertolongan
kotak-kotak skala, di mana dalam setiap ukuran skala seluas 1 mm 2 terdapat 25 buah kotak besar dengan luas 0,04 mm2, dan setiap kotak besar terdiri dari 16 kotak kecil. Alat haemocytometer digunakan di bawah mikroskop, sisinya mempunyai ukuran 0,05 mm. Sedangkan satu kotak sedang berukuran nilai 0,2 mm. Dan tebal nya adalah 0,1 mm. Jumlah sel per mL sampel dapat dihitung sebagai berikut:
Jumlah sel dalam 25 kotak besar = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak
Jumlah sel per mm 3 sampel = Jumlah sel dalam 25 kotak besar × (1/0,02)
Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per mm 3 sampel × 103 = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak× (1/0.02)x 10^3
Jumlah sel per ml sampel = Jumlah sel per kotak besar × 25 kotak × 50 × 103
Misalnya : didapatkan jumlah mikroba yang mau dihitung 12 sel mikroba, maka jumlah sel per ml sampel adalah: 12 × 1,25 × 10 6 = 1,5 × 10 7.
7. Apa tujuan dilakukannya scrub pada NA miring yang berisi biakan dan tujuan penggunaan air steril ? Hal ini dimaksudkan agar spora Aspergillus niger dapat lepas dan tersuspensi dalam air
steril.
Penggunaaan air steril untuk membuat suspensi spora dimaksudkan agar tidak terdapat
mikrooba lain yang terlarut dalam suspensi. Tersuspensinya spora dalam air steril ditandai dengan berubahnya warna air steril dari jernih menjadi keruh.
8. Apa tujuan dilakukannya pembersihan hemasitometer menggunakan alkohol Sebelum dilakukan pengamatan, terlebih dahulu harus dibersihkan hemasitometer dan cover glass dengan menggunakan alkohol. Hal ini dimaksudkan agar hemasitomete r bersih dari debu dan kuman yang dapat mengganggu perhitungan.
9. Mengapa setelah membilas, hemasitometer tidak boleh dilap dengan menggunakan tisu biasa ? Setelah dibilas dengan alkohol, hemasitometer dikeringkan dengan menggunakan tisu lensa. Pada saat pengeringan, tisu lensa tidak boleh digosok-gosokkan pada permukaan hemasitometer. Hal ini bertujuan agar garis-garis yang terdapat pada hemasitometer tidak hilang.
10. Setelah dilakukan 2 hal di atas, apa lagi yang harus dilakukan sebelum pengamatan ? Permukaan lensa objektif dan lensa okuler pada mikroskop harus dibersihkan terlebih dahulu dengan menggunakan tisu lensa. Hal ini bertujuan untuk membersihkan debu dan kotoran yang dapat mengganggu proses penghitungan mikroba.
11. Berpakah besar pengamatan yang digunakan untuk pengamatan pada hemasitometer ? 400 kali 12. Apa sebenarnya tujuan dilakukan pengenceran ? Pengenceran ini dilakukan untuk memenuhi syarat penghitungan statistik, yaitu jumlah
mikroba yang dihitung tidak boleh lebih dari 100 dengan demikian, kesalahan penghitungan dapat diminimalkan.
13. Langkah Kerja !
