NUTRISI DAN MEDIA PERTUMBUHAN JAMUR Tugas Mikologi ( T )
Disusun Oleh : Kelompok 2
NAMA KELOMPOK : 1. 2. 3. 4.
Arindi Amiranti (P27903115048) Fitria Dwiastuti (P27903115058) Rochmi Andayani Utami (P27903115078) Yoppie Puspitasari (P27903115089)
Tingkat / Semester : 2 B / IV
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN KEMENKES BANTEN JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2017
Nutrisi dan Media Pertumbuhan Jamur Nutrisi Nutrien dalam media perbenihan harus mengandung seluruh elemen yang penting untuk sintesis biologik organisme baru. Nutrien diklasifikasikan berdasarkan elemen yang mereka suplai. a. Karbon Senyawa karbon dibutuhkan untuk sumber energi jamur, seperti : monosakarida, polisakarida, asam organik, asam amino, alkohol, asam lemak, lemak, selulosa dan lignin dapat digunakan oleh jamur. Sekitar separuh dari berat kering sel jamur terdiri dari karbon, yang menjadi indikasi pentingnya unsur karbon pada dinding sel. b. Nitrogen Jamur memerlukan nitrogen sebagai sintesis protein dan membentuk protein yang dibutuhkan untuk membentuk protoplasma. Penambahan unsur nitrogen dikarenakan jamur tidak dapat menghambat nitrogen bebas dari udara. Jamur dapat menggunakan nitrogen anorganik untuk pembentukan nitrat, nitrit, ammonia atau nitrogen organik untuk pembentukan asam amino. c. Phospor Fosfat (PO43-) dibutuhkan sebagai komponen ATP, asam nukleat dan sejumlah koenzim seperti NAD, NADP dan flavin. Selain itu, banyak metabolit, lipid (fosfolipid) komponen dinding sel (teichoic acid), beberapa polisakarida kapsul dan beberapa protein adalah bergugus fosfat. Fosfat selalu diasimilasi sebagai fosfat anorganik bebas (P). d. Mineral Jamur membutuhkan mineral dalam konsentrasi yang kecil, namun mineral juga berperan dalam siklus hidup jamur. Sejumlah besar mineral dibutuhkan untuk fungsi enzim. Ion magnesium (Mg 2+) dan ion ferrum (Fe2+) juga ditemukan pada turunan porfirin yaitu magnesium dalam
molekul klorofil, dan besi sebagai bagian dari koenzim sitokrom dan peroksidase. Mg2+ dan K+ keduanya sangat penting untuk fungsi dan kesatuan ribosom. Ca2+ dibutuhkan sebagai komponen dinding sel gram positif, meskipun ion tersebut bebas untuk bakteri gram negatif. Banyak dari organisme laut membutuhkan Na+ untuk pertumbuhannya. Dalam memformulasikan medium untuk pembiakan kebanyakan mikroorganisme, sangatlah penting untuk menyediakan sumber potassium, magnesium, kalsium dan besi, biasanya dalam bentuk ion-ion (K +, Mg2+, Ca2+ dan Fe2+). Banyak mineral lainnya (seperti Mn2+, Mo2+, Co2+, Cu2+ dan Zn2+) dibutuhkan; mineral ini kerapkali terdapat dalam air kran atau sebagai kontaminan dari kandungan medium lainnya. Pengambilan besi dalam bentuk hidroksida yang tak larut pada pH netral, difasilitasi pada banyak bakteri dan fungi dengan produksi senyawa siderofor yang mengikat besi dan mendukung transportasinya sebagai kompleks terlarut. e. Vitamin Seperti halnya mineral, vitamin dibutuhkan oleh jamur dalam jumlah yang kecil. Vitamin dibutuhkan oleh jamur bukan sebagai sumber energi melainkan sebagai koenzim. Vitamin yang umum diperlukan oleh jamur diantaranya: vitamin B1 (tiamina),
vitamin B7 (biotin), vitamin B3
(nikotinat), dan B5 (pantotenat).
Faktor yang mempengaruhi pertumbuhan fungi Pada umumnya pertumbuhan fungi dipengaruhi oleh faktor substrat, kelembapan, suhu, derajat keasaman substrat (pH), dan senyawa-senyawa kimia dilingkungannya.
a.
Substrat Substrat merupakan sumber nutrien utama bagi fungi. Nutrien-nutrien baru
dapat dimanfaatkan sesudah fungi mengekskresi enzim-enzim ekstraseluler yang
dapat mengurai senyawa-senyawa kompleks dari substrat tersebut menjadi senyawa-senyawa yang lebih sederhana. Fungi yang tidak dapat menghasilkan enzim sesuai komposisi subtrat dengan sendirinya tidak dapat memanfaatkan nutrien-nutrien dalam substrat tersebut.
b.
Kelembapan Faktor ini sangat penting untuk pertumbuhan fungi. Pada umumnya fungi
tingkat rendah seperti Rhizopus atau Mucor memerlukan lingkungan dengan kelembapan nisbi 90%, sedangkan kapang Aspergillus, Penicillium, Fusarium, banyak Hyphomycetes lainnya dapat hidup pada kelembapan nisbi yang lebih rendah, yaitu 80%. Dengan mengetahui sifat-sifat fungi ini penyimpanan bahan pangan dan materi lainnya dapat mencegah kerusakannya.
c.
Suhu Berdasarkan kisaran suhu lingkungan yang baik untuk pertumbuhan, fungi
dapat dikelompokkan sebagai fungi psikrofil, mesofil, dan termofil. Secara umum pertumbuhan untuk kebanyakan fungi adalah sekitar 25 – 30 0C. Beberapa jenis fungi bersifat psikrotrofik yakni dapat tumbuh baik pada suhu lemari es dan ada fungi yang masih bisa tumbuh secara lambat pada suhu dibawah suhu pembekuan, misalnya -5 0C sampai -10 0C. Selain itu, ada jamur yang bersifat termofilik yakni mampu tumbuh pada suhu tinggi.km
Mengetahui kisaran suhu
pertumbuhan suatu fungi adalah sangat penting, terutama bila isolat-isolat tertentu atau termotoleran dapat memberikan produk yang optimal meskipun terjadi peningkatan suhu, karena metabolisme funginya.
d.
Derajat keasaman (pH) pH substrat sangat penting untuk pertumbuhan fungi , karena enzim-enzim
tertentu hanya akan mengurai suatu substrat sesuai dengan aktivitasnya pada pH tertentu. Umumnya fungi menyenangi pH dibawah 7,0. Namun beberapa jenis khamir tertentu bahkan dapat tumbuh pada pH yang cukup rendah, yaitu pH 4,5 – 5,5.
e.
Senyawa kimia
Selama pertumbuhannya fungi menghasilkan senyawa-senyawa yang tidak diperlukannya lagi dan dikeluarkan ke lingkungan. Senyawa-senyawa tersebut merupakan suatu pengamanan bagi dirinya terhadap serangan oleh organisme lain termasuk terhadap sesama mikroorganisme.
Media Pertumbuhan Fungi 1) Brain-heart infusion (BHI) Agar : Ini adalah media kultur jamur nonselektif yang memungkinkan pertumbuhan jamur hampir semua klinis yang relevan. Hal ini digunakan untuk pemulihan utama saprofit dan jamur dimorfik. 2) Agar Czapek 's: Hal ini digunakan untuk subkultur Aspergillus sp. untuk diagnosis diferensial mereka. 3) Inhibitory Mold Agar (IMA): Pemulihan Primer jamur patogen dimorfik. Jamur saprofit dan dermatofita tidak akan pulih. 4) Mycosel / Mycobiotic Agar : Untuk identifikasi Cryptococcus neoformans. 5) Potato Dextrose Agar (PDA): Ini adalah media yang relatif kaya untuk tumbuh berbagai jamur. 6) Sabouraud’s Heart Infusion (SABHI) Agar : Pemulihan Primer jamur saprofit dan dimorfik, terutama strain rewel. 7) Sabouraud 's dextrose agar (SDA): Untuk isolasi dermatophyta, jamur lain dan ragi, tetapi juga dapat tumbuh bakteri berserabut seperti Nocardia. 8) Potato Flaxe Agar : Pemulihan Primer jamur saprofit dan dimorfik, khususnya rewel dan lambat strain tumbuh. 1. Sabouraud Dextrose Agar (SDA) Sabouraud Dextrose Agar (SDA) adalah media selektif terutama digunakan untuk isolasi dermatophyta, jamur lain dan ragi, tetapi juga dapat tumbuh bakteri berserabut seperti Nocardia. Media ini juga digunakan untuk menentukan evaluasi mikologi makanan, kontaminasi dalam kosmetik dan klinis untuk membantu dalam diagnosis infeksi ragi dan jamur. pH asam dari media ini (pH sekitar 5,0) menghambat pertumbuhan bakteri tetapi
memungkinkan pertumbuhan ragi dan kebanyakan jamur berfilamen. Agen antibakteri juga dapat ditambahkan untuk meningkatkan efek antibakteri. Antibiotik seperti kloramfenikol, gentamisin, dan tetrasiklin dapat ditambahkan sebagai agen selektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri yang berlebihan bersaing mikroorganisme sementara memungkinkan isolasi sukses jamur dan ragi. Berbagai modifikasi lain juga dilaporkan dengan menggunakan cycloheximide, penisilin, streptomisin, neomisin tergantung pada tujuan penggunaan. SDA media terdiri dari enzimatik digest kasein dan jaringan hewan yang menyediakan sumber nutrisi asam amino dan senyawa nitrogen untuk pertumbuhan jamur dan ragi. Dextrose adalah karbohidrat difermentasi tergabung dalam konsentrasi tinggi sebagai sumber karbon dan energi. Agar adalah agen pemadat. Selain antibiotik seperti kloramfenikol dan / atau tetrasiklin bertindak antimikrobial spektrum sebagai luas untuk menghambat pertumbuhan berbagai bakteri gram positif dan gram negatif. Gentamisin ditambahkan untuk lebih menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif. Digunakan pada mikrobiologi :
Untuk budidaya jamur patogen & komensal dan ragi Baik untuk isolasi terutama dermatofit Digunakan untuk menentukan kandungan mikroba dalam kosmetik Digunakan dalam evaluasi mikologi makanan, dan secara klinis membantu dalam diagnosis ragi dan jamur penyebab infeksi.
Komposisi media : Bahan Mikologi pepton (enzimatik mencerna
g/L 10
kasein dan jaringan hewan) Dekstrosa Agar pH 5,6 pada suhu 25o C
40 15
Prosedur untuk persiapan media :
1) Menangguhkan 65 g medium dalam satu liter air murni.
2) Panas dengan sering agitasi dan didihkan selama satu menit untuk benar-benar membubarkan medium. 3) Autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. 4) Keren 45 sampai 50 ° C dan tuangkan ke dalam cawan petri atau tabung untuk miring. 5) Untuk pengolahan spesimen, streak spesimen ke media dengan loop inokulasi yang steril untuk mendapatkan koloni terisolasi. 6) Menetaskan piring di 25 - 30 ° C dalam posisi terbalik (sisi agar up) dengan kelembaban meningkat. 7) Budaya harus diperiksa setidaknya mingguan untuk pertumbuhan jamur dan harus diadakan untuk 4 - 6 minggu sebelum dilaporkan sebagai negatif.
Khas Colony morfologi beberapa jamur di SDA :
Jamur
Morfologi Koloni
Aspergillus flavus
Kuning-hijau, tepung dan pucat kekuningan pada
Aspergillus niger
sebaliknya Pertumbuhan
awal
adalah
putih,
menjadi
hitam
kemudian memberikan "garam dan merica penampilan" yang
dihasilkan
dari
konidia
berpigmen
gelap
ditanggung dalam jumlah besar pada konidiofor dan Rhodotorula sp Aspergillus fumigatus Aspergillus nidulans
reverse balik kuning pucat merah muda-orangish koloni krem Biru - hijau, tepung dan kuning pucat di sebaliknya. Biru kehijauan dengan tepi keputihan, kuning
Trichosporon mucoides Geotrichum candidum
kecoklatan pada sebaliknya Putih untuk krim, kekuningan, berkerut Putih untuk krim berwarna, datar dengan miselium aerial
Sporothrix schenckii
Koloni Trichophyton rubrum var. rodhaini
Candida albicans 2. Potato Dextrose Agar (PDA)
Trichophyton terrestre (Sabouraud agar)
Potato Dextrose Agar (PDA) adalah media yang digunakan untuk isolasi dermatophyta. SDA dengan TA (Asam tartarat) direkomendasikan untuk pemeriksaan mikroba dari produk makanan dan susu. Selain dari Chlortetracycline dianjurkan untuk pencacahan mikroba ragi dan jamur dari kosmetik. PDA dengan Kloramfenikol direkomendasikan untuk budidaya selektif jamur dari sampel campuran. Potato Dextrose Agar (PDA) mengandung dextrose sebagai sumber karbohidrat yang berfungsi sebagai stimulan pertumbuhan, dan infus kentang yang menyediakan dasar nutrisi untuk pertumbuhan lebat kebanyakan jamur. Agar ditambahkan sebagai agen pemadat. Sebuah jumlah tertentu asam tartarat steril (10%) dapat dimasukkan untuk menurunkan pH medium 3,5, sehingga pertumbuhan bakteri akan terhambat. Komposisi PDA: Bahan Dextrosa Ekstrak Kentang Agar
g/L 20 4 15
Keterangan: 4 gram ekstrak kentang setara dengan 200 gram infus kentang Jika ditambahkan : Tartrat 1,4 gram (pH 3,5 pada suhu 25° C) Kloramphenicol 25 mg (pH 5,6 pada suhu 25° C) Chlortetracycline - 40 mg Prosedur Penyusunan media: 1) Menangguhkan 39 gram dalam 1000 ml air suling. Panas sampai mendidih untuk melarutkan media sepenuhnya. 2) Mensterilkan dengan autoklaf pada 15 tekanan lbs (121 ° C) selama 15 menit. Aduk rata sebelum pengeluaran. 3) Dalam pekerjaan tertentu, ketika pH 3,5 diperlukan, media harus diasamkan dengan 10% asam tartarat steril. Jumlah asam diperlukan untuk 100 ml. steril, didinginkan menengah adalah sekitar 1ml. Jangan memanaskan media setelah penambahan asam. 4) Untuk pengolahan spesimen, streak spesimen ke media dengan loop inokulasi yang steril untuk mendapatkan koloni terisolasi. 5) Menetaskan piring di 25 - 30 ° C dalam posisi terbalik (sisi agar up) dengan kelembaban meningkat. 6) Budaya harus diperiksa setidaknya mingguan untuk pertumbuhan jamur dan harus diadakan untuk 4 - 6 minggu sebelum dilaporkan sebagai negatif.
Fungi
Tekstur
Warna
Warna terbalik
permukaan A.candidus A.niger A.sulphureus
Beludru tebal Seperti beludru
Krem putih Sedikit krem Putih dengan spora Kuning
Seperti beludru
hitam yang khas Kotor putih dengan Oranye spora
A. versicolor
Floccose
kuning
untuk
di warna coklat
tengah Putih oranye-krim Orange terang dengan spora hijau
Penicillium
Seperti beludru
di pusat Hijau tua
corylophilum P. expansum
Seperti beludru
krem Hijau gelap dengan Kuning eksudat
Tidak berwarna ke
jelas
dan
berbeda marjin putih Penicillium sp.
Berbedak
steril Hijau kuning
berwarna Oranye
merah,
langsat keriput
dengan marjin putih Fusarium
Floccose
oxysporum
steril Magenta
merah Magenta-red balik
muda
violet
3. Brain-heart infusion (BHI) Agar Brain-heart infusion (BHI) Agar dapat dilengkapi dengan antibiotik, jumlah natrium klorida yang bervariasi, ekstrak ragi dan serum untuk mengoptimalkan pertumbuhan bakteri, ragi, dan jamur patogen. BHI Agar banyak digunakan dalam pengujian makanan dan pengujian air. Nitrogen, vitamin, dan sumber karbon disediakan oleh BHI agar. Dextrose adalah sumber karbohidrat, dan Sodium Klorida mempertahankan lingkungan osmotik, dan agar merupakan agen pemadat. Komposisi BHI Agar :
Bahan Brain-heart infusion pada Enzimatik Digest dari Tissue Animal Enzimatik Digest of Casein Dextrose Natrium klorida Disodium fosfat Agar Keterangan :
pH akhir 7,4 ± 0,2 pada 25o C
g/L 8 5 16 2 5 2,5 13,5
Formula dapat disesuaikan dan / atau ditambah seperti yang diperlukan untuk memenuhi spesifikasi kinerja. Prosedur Pembuatan Media :
1) Menangguhkan 52 g medium dalam 1 liter air murni. 2) Panaskan dengan sering agitasi dan didihkan selama 1 menit
untuk benar-benar membubarkan medium. 3) Autoclave pada 121° C selama 15 menit. Kelemahan media BHI Agar: Dapat mengiritasi mata, sistem pernapasan, dan kulit. Penyimpanan :
Toko disegel botol yang berisi media dehidrasi pada 2-30° C. Setelah dibuka dan menutupnya kembali, tempat kontainer di lingkungan kelembaban rendah pada suhu penyimpanan yang sama. Melindungi dari kelembaban dan cahaya oleh menjaga wadah tertutup rapat.
Gambar S. mutan pada BHI agar
Gambar Sporothrix schenckii pada BHI Agar
DAFTAR PUSTAKA
