Mastitis Bovina
Víctor Cotrino DMV Director Científico LMV Ltda. Bogotá, Colombia
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Introducción Prueba de Mastitis California (CM! oma de Muestra de Lec"e #ecuento de C$lulas %omáticas &nálisis Bacteriológicos Monitoreo
Introducción Por las características e'idemiológicas, clínicas etiológicas, las diferencias en las 'olíticas de tratamiento de'endiendo del agente in)olucrado la )ariabilidad en la resistencia de los micr microo oorg rgan anis ismo mos, s, el diag diagnó nóst stic ico o de Masti Mastiti tis s Bo)i Bo)ina na debe debe esta estar r orientado al conocimiento de la 're)alencia de la enfermedad en el "ato "ato,, ti'o ti'o e'ide 'idem miológ ológic ico o de la enfer nferm medad edad la resi resist sten enci cia a bacteriana de los agentes in)olucrados. Cuan Cuando do cono cono*c *cam amos os todo todos s estos estos facto factores res en un "ato "ato se 'odr 'odrá á estimar las '$rdidas económicas 'or disminución en la 'roducción, identificar corregir los 'untos críticos +ue fa)orecen la difusión de la enfermedad, definir las 'olíticas de tratamiento establecer el sist sistem ema a de monit onitor oreo eo +ue +ue enci encien enda da las alar alarm mas cuan cuando do se sobre'asan los límites establecidos. Para el control de la mastitis bo)ina es necesario 'oner en marc"a un 'rograma integrado +ue in)olucre la salud de los animales, el sistema de maneo durante el orde-o, las condiciones ambientales del aloamiento del orde-o, las características condiciones de
funcionamiento del e+ui'o de orde-o, el control de los microorganismos causantes el ni)el de ca'acitación de las 'ersonas res'onsables del orde-o. n un 'rograma de esta naturale*a, el diagnóstico es 'ilar fundamental 'ara definir las acciones a tomar. n muc"as o'ortunidades se acude al diagnóstico sobre muestras indi)iduales, casi siem're de animales +ue no "an dado res'uesta 'ositi)a a uno o )arios tratamientos el obeti)o es identificar el agente causante e)aluar su sensibilidad a los antibióticos 'ara recomendar el 'rinci'io acti)o más a'ro'iado in )itro, +ue no necesariamente da resultados clínicos fa)orables debido al tiem'o de e)olución de la enfermedad las lesiones de ti'o fibroso +ue caracteri*an estos casos crónicos. /n 'lan de diagnóstico integral del "ato, com'rende0 •
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Pruebas de Cam'o Prueba de Mastitis California (CM!. oma de muestras 'ara culti)o microbiológico. Pruebas de Laboratorio #ecuento de c$lulas somáticas (#C%! Culti)os microbiológicos Caracteri*ación del microorganismo Pruebas de sensibilidad antimicrobiana Monitoreo #ecuento de C$lulas %omáticas del tan+ue ( #C%1!
Prueba de Mastitis California (CMT) sta es una 'rueba de cam'o de fácil maneo buena sensibilidad +ue se fundamenta en la ca'acidad +ue tiene el reacti)o Lauril %ulfato de %odio 'ara reaccionar con el D2& celular 'roduciendo )iscosidad directamente 'ro'orcional al n3mero de c$lulas somáticas 'resentes en la muestra de lec"e. /na )e* la )aca está lista 'ara ser orde-ada con 'e*ones lim'ios secos, se escurren los 4 ó 5 'rimeros c"orros de lec"e de cada 'e*ón en los com'artimentos de la bandea a'ro'iada. %e inclina la bandea en un ángulo de 678 'ara igualar la cantidad de lec"e en cada uno (deben +uedar entre 9 5 mL de lec"e!. %e agrega una cantidad igual de reacti)o se inicia un 'roceso sua)e de agitación 'or rotación durante :; a 97 segundos. Leer e inter'retar la 'rueba.
Los criterios básicos de la inter'retación se resumen en la tabla siguiente0 Grado Tipo de elación Celularidad ! "l 2egati)o Me*cla se mantiene lí+uida < 977.777 ra*as Ligera )iscosidad 977.777 1 ;77.777 : Me*cla )iscosa no ad"erida al fondo 577.777 1:.;77.777 9 Me*cla )iscosa +ue se ad"iere al fondo =77.777 1 ;.777.777 4 Me*cla mu )iscosa fuertemente ad"erida +ue forma un solo grumo. >;.777.777 CM mide en forma indirecta el n3mero de c$lulas somáticas ? mL. 2ormalmente la lec"e de una glándula mamaria sana tiene menos de :77.777 cel?mL donde el =7@ de las c$lulas son macrófagos el 97@ ó menos corres'onden a 2eutrófilos. Cuando "a inflamación originada en un 'roceso infeccioso el n3mero de c$lulas somáticas
aumenta 'or incremento de los 2eutrófilos +ue acuden a cum'lir su acción fagocítica en el sitio de la infección llegando a re'resentar "asta el A7@ del recuento de c$lulas somáticas. n la literatura no "a coincidencia sobre el n3mero de c$lulas a 'artir del cual se considera +ue una glándula mamaria esta afectada de mastitis, 'ero en t$rminos generales recuentos su'eriores a ;77.777 cel?mL con más del ;7@ de 2eutrofilos se deben considerar como cuadros de mastitis. 23mero +ue se )erá incrementado "asta )arios millones seg3n la intensidad etensión de la lesión. l CM es una 'rueba +ue tiene una alta sensibilidad 'ero 'resenta algunas deficiencias en es'ecificidad, dando falsos 'ositi)os durante la 'rimera semana des'u$s del 'arto 'ero mu es'ecialmente en )acas +ue tienen más de meses de 'roducción )arios 'artos. n estos casos el grado de )iscosidad es similar en los 5 'e*ones. To"a de Muestra de #ec$e Las condiciones de toma de muestra de lec"e son determinantes 'ara el $ito del diagnóstico es'ecialmente 'ara el aislamiento e identificación del agente infeccioso. Pre)io a la toma se debe la)ar, secar desinfectar mu bien el 'e*ón, escurrir 4 ó 5 c"orros en un reci'iente est$ril, descargar ?1 ; ml de lec"e. Las muestras deben ser trans'ortadas al laboratorio en refrigeración teniendo cuidado +ue la "umedad no altere la identificación de cada tubo. Para un estudio com'leto se recomienda tomar muestra a todos cada uno de los 'e*ones +ue tengan una reacción de : ó más a CM. & criterio del 'rofesional, de'endiendo de la 're)alencia de la enfermedad del conocimiento +ue se tenga del "ato, se 'uede reducir el n3mero de muestras "asta en un ;7@ de los 'e*ones 'ositi)os a CM. ecuento de C%lulas &o"'ticas Diferentes metodologías se a'lican 'ara el recuento de c$lulas somáticas (#C%!E las más utili*adas son el recuento microscó'ico directo (#MD!, el recuento electrónico como contadores de 'artículas el recuento automati*ado so'ortado en e'ifluorescencia.
Por dis'onibilidad de e+ui'os 'osibilidades de a'licación se anali*an los 'asos fundamentales del recuento microscó'ico directo0 •
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Determinación del diámetro del cam'o microscó'ico (d! en milímetros utili*ando una lámina microm$trica . Cálculo del factor microscó'ico FM FM G 57.777 ? 4.:5:6 dH Volumen de lec"e eaminado :7l etendido en un cmH .
Por eem'lo, un microsco'io +ue tenga un cam'o de 7.:57 mm de diámetro en aumento :77J tiene un factor microscó'ico de 677.777 uno con diámetro de 7.:=7 mm tiene un FM de 577.777. La descri'ción com'leta de la muestra esta descrita en Standard Methods for The Examination of Dairy Products, :6K dición. l 'rocesamiento de las muestras se inicia con una buena "omogenei*ación luego etender :7l de lec"e en un área de : cmH en una lámina 'ortaobetos (caben ; etendidos 'or lámina!. %e fia al aire, se 'uede audar con un flameo sobre el mec"ero. Las muestras fiadas se desengrasan con un la)ado con Jilol las láminas se colorean con &*ul de Metileno al :@ durante un minuto. Los frotis coloreados se obser)an al microsco'io utili*ando obeti)o :77J, se deben recorrer como mínimo :7 cam'os en diferentes 'untos del frotis. l 'romedio del n3mero de c$lulas 'or cam'o, se multi'lica 'or el FM el )alor obtenido corres'onderá al n3mero de c$lulas?ml. ambi$n es 'osible "acer la diferenciación morfológica de macrófagos, c$lulas e'iteliales neutrófilos 'ara aclarar el diagnóstico 'or ti'o de c$lulasE de igual manera se 'uede obser)ar la morfología básica de los microorganismos causantes de la infección. n'lisis Bacteriolóicos l obeti)o del análisis microbiológico es "acer el aislamiento caracteri*ación de los microorganismos causantes de la mastitis del "ato +ue 'ermita su agru'ación en causantes de0 Mastitis contagiosa0 Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Corynebacterium bovis, Mycoplasma spp. •
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Mastitis originada en la 'iel de los 'e*ones0 Staphylococus no aureus S. hyicus, S. chromogenes otros, Streptococcus no agalactiae S. dysgalactiae, S. bovis, S. uberis, entre otros. Mastitis ambiental. Escherichia coli , Enterobacter spp, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella spp, Serratia spp, Citrobacter freundii . Mastitis iatrog$nica. &sociada al uso inadecuado de cánulas intramamarias con la etiología de Mo"os ó Le)aduras de los g$neros0 Candida, Cryptococcus Trichosporum. l as'ecto cremoso de la secreción láctea, el largo 'eriodo de e)olución de la enfermedad, la no res'uesta clínica a antibióticos el uso re'etido de los mismos 'or )ía intramamaria son factores +ue se deben tener en cuenta 'ara sos'ec"ar de estos microorganismos.
odas las bacterias causantes de mastitis se multi'lican bien en &gar %angre con)irti$ndose en el medio básico 'ara el 'roceso de aislamiento del agente etiológico. Con el fin de aumentar las 'osibilidades de $ito del aislamiento a'ro)ec"ando las 'ro'iedades de la lec"e como medio de culti)o, las muestras 'ueden ser 'reincubadas a 48 C durante 6 a = "oras 'osteriormente sembrar en &gar %angre. Cuando se toma esta alternati)a se debe estar seguro +ue la muestra "a sido tomada en condiciones as$'ticas, de lo contrario microorganismos contaminantes )an a enmascarar el diagnóstico. l es+uema adunto sinteti*a los 'rocedimientos bacteriológicos utili*ados en el laboratorio. La descri'ción más detallada de todos los 'asos 'uede ser consultada en el manual Microbiological Procedures for the Diagnostics of ovine !dder "nfection del 2ational Mastitis Council, de stados /nidos. Pruebas de &ensibilidad nti"icrobiana Por facilidad de maneo dis'onibilidad de reacti)os la 'rueba de sensibilidad antimicrobiana más usada es el m$todo de difusión con discos sobre &gar Mueller inton. La selección de 'rinci'ios acti)os a 'robar de'enderá de0 la dis'onibilidad de 'roductos comerciales en el mercado local, la legislación del 'aís sobre uso de antibióticos, el ti'o de microorganismo aislado, si es 'ara )aca en lactancia o en el 'eriodo seco si se )a a usar )ía 'arentenal o )ía intramamaria. n una caa de &gar de :77 mm de diámetro se 'ueden colocar = sensidiscos como máimo.
Como 'auta general en la tabla adunta, se listan los 'rinci'ios acti)os +ue 'resentan una buena, limitada o 'obre distribución en la glándula mamaria seg3n la )ía de a'licación. n nuestro laboratorio usamos sensidiscos seleccionados de la lista adunta seg3n el ti'o de microorganismo. enemos en cuenta el inter$s 'articular +ue tenga el solicitante sobre un determinado 'rinci'io acti)o siem're cuando cum'la con los re+uisitos farmacológicos, seg3n )ía de a'licación.
Principio ctivo
Bacterias Gra" Positivo
Ident
&MP
&m'icilina :7 g
&MJ
Bacterias *eativo
Gra"
# < :4 % > :
# < :A % > 97 &moacilina :7 g
# < :4 % > :=
CL
Cafaleina 47 g
# < :5 % > :=
CF
Cefalotina 47 g
# < :5 % > :=
CN
Cef+uinome :7 g
# < :5 % > :=
OB
Cloacilina ; g
% > 97
ritromicina :; g
# < :4 % > 94
2O
nrofloacina ; g
% 97
2
R 14 S 18
# :9 % :; entamcina :7 g
L?MQ
Lincomicina 9 g
% > 9:
2F
2eomicina 47 g
# < :9 % > :
Penicilina :7 /I P%
# < 9=>9A
# :5 % :A etraciclina 47 g
%J
rimetro'im9; g
CPF
Cefo'era*ona ; # :; % 9:
R 15 S 21
g
00000000000000
1
Clasificación de antimicrobianos seg3n su 'otencial distribución en la ubre des'u$s de la a'licación 'arenteral o intramamaria0 Parenteral Intra"a"aria Buena Distribución ritromicina ilosina s'iramicina Lincomicina Pirlimicina Florofenicol rimetro'in Oitetraiclina nrofloacina Penetamato ritromicina ilosina s'iramicina Lincomicina Pirlimicina
Florofenicol rimetro'in Penetamato &m'icilina moacilina 2o)obiocina nrofloacina Distribución Limitada %ulfameta*ina Penicilina &m'icilina &moacilina Cloacilina Meticilina Cefalotina Cefa'irina Cefuroime Penicilina Cloacilina Oacilina Cefalotina Cefacetrila Ce'acetril Cefuroime Cetiofur Cefa'erasona Oitetraciclina
Distribución Pobre Cefaleina Cetiofur Cefo'era*ona (Di"idro! 2eomicina &'ramicina Ranamicina &miSacin entamicina Polimiina Vancomicina
stre'tomicina
B
stre'tomicina 2eomicina &'ramicina Ranamicina &miSacina entamicina obramicina s'ectinomicina &minosidina Polimiina Colistina #ifaimina
B
&da'tado 'or Dr. Ti) . Q tomado de The #eterinary Clinical of Volumen =0: $orth %merica. De la lista original se eliminaron algunos 'rinci'ios acti)os 'or+ue no tienen 'resentaciones 'ara uso )eterinario en Colombia. Monitoreo l recuento de c$lulas somáticas de la lec"e de tan+ue #C% 1 ó una muestra re'resentati)a de todos los 'orongos +ue se 'roducen en la finca es el meor indicador 'ara monitorear la situación de mastitis en el "ato estimar las '$rdidas 'or 'roducción. a una alta coincidencia en el literatura mundial +ue un #C% 1 de 977.777 c$lulas?ml es una cifra a'ro'iada 'ara un "ato +ue tiene una 're)alencia inferior al 6@ de cuartos afectados de mastitis subclínica +ue su 'roducción no se )e afectada 'or esta enfermedad.
elación entre el C&+T, el porcenta-e de cuartos infectados . el porcenta-e de "er"a de producción (#C% 1 !?ml Porcentae cuartos infectados Porcentaes merma 977.777
6 7 ;77.777 :6 6 ;77.777 :6 6 :.777.777 49 := :.;77.777 5= 9A Para estimar las '$rdidas económicas se 'uede a'licar el criterio de una disminución en la 'roducción de lec"e del 9.;@ 'or cada :77.777 c$lulas +ue aumenten el #C% 1 sobre 977.777. oma de Muestra de Lec"e 'ara el #C% 1 . l grado de "omogenei*ación de las muestras es fundamental 'ara +ue el recuento sea confiable. Cuando se toma del tan+ue de enfriamiento se debe encender el agitador como mínimo :7 minutos antes de la toma de la muestra +ue se recolecta 'or la 'arte su'erior (nunca tomar muestras utili*ando el sifón del tan+ue!. Cuando la lec"e del "ato está almacenada en )arios 'orongos cada una debe ser "omogenei*ada 'or agitación fuerte mínimo durante 9 minutos. Con la auda de una eringa o una 'i'eta se toman cantidades iguales de cada reci'iente +ue se de'ositan en un frasco lim'io 'ara tomar una submuestra 're)ia "omogenei*ación.
La cantidad de muestra condiciones de trans'orte de'enderá de la t$cnica +ue use el laboratorio. Cuando se usa un contador de 'artículas se toman ; ml de lec"e sobre un fiador +ue entrega el laboratorio el trans'orte se "ace bao refrigeración. Para los recuentos microscó'icos contadores automati*ados las muestras se deben trans'ortar en agua con "ielo a 48 C. 2ormalmente de las muestras +ue se en)ían 'ara análisis microbiológicos se 'ractica el recuento. n muc"os 'aíses el #C% 1 se encuentra incor'orado al es+uema de 'ago se 'ractica una )e* a la semana. sta 'eriodicidad es ideal cuando se utili*a en el monitoreo de la mastitis del "ato 'or+ue 'ermite una reacción rá'ida o'ortuna cuando el n3mero de c$lulas se )e incrementado. %in embargo, 'ueden utili*arse otros 'lanes de muestreo con 'eriodicidad no maor a un mes.
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