Manual De Procedimientos De Laboratorio Clinico Veterinario: Indice

Facultad de Bioanálisis, Veracruz

Manual de Procedimientos de Laboratorio

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO CLINICO VETERINARIO INDICE I.

La His Histo tori riaa Clín Clínic icaa y su su uso uso een n el Diag Diagnó nóst stic ico o Clín Clínic ico o Vet Veter erin inar ario io..

II.

Méto Método doss de suj sujec eció ión n y obt obten enci ción ón de mue muest stra rass para para dia diagn gnos osti tico co de de laboratorio en animales domésticos.

III.

IV. IV.

V.

VI. VI. VII.

VIII.

IX.

X.

XI.

XII. II. XIII.

El método de flotación para la identificación de huevecillos de Nematodos en cánidos y felinos. El método de sedimentación para la identificación de huevecillos de Trematodos en heces. El método de Harada Mori Mori para para cultivo cultivo larvario larvario de Ancylostoma de Ancylostoma y Uncinaria en perros y gatos. Iden Identi tific ficaci ación ón de llar arva vass de de nema nematodo todoss pulm pulmon onar ares es p por or el méto método do de Baerman Técnicas Hematológicas en medicina veterinaria. Diagnóstico de Mastitis mediante las pruebas de Hotis y del Azul de Bromotimol Elaboración de autovacuna en la terapéutica de la Papilomatosis bucal canina. acill us anthracis anth racis Tinción de esporos de Bacillus Prueb Pruebaa de intr intrade aderm rmo-r o-rea eacci cción ón pa para ra detecc detecció ión n de Fa Fasci sciol olaa y Tuberculosis Dete Determ rmin inac ació ión n de co copt pto o aant ntíg ígen enos os Reacciones de aglutinación pruebas serológicas y lácteas para la determinación de Brucelosis.

Laboratorio Clínico Veterinario

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Facultad de Bioanálisis, Bioanálisis, Veracruz


METODOS DE SUJECION Y OBTENCION DE MUESTRAS PARA DIAGNOSTICO DE LABORATORIO LABORATORIO EN ANIMALES DOMESTICOS. 1. INTR INTROD ODUC UCCI CION ON Los veteri veterinar narios ios tiene tienen n la nece necesida sidad d de cons consult ultar ar labora laborator torios ios para para reso resolv lver er dete determ rmin inad ados os prob proble lema mass de diag diagnó nóst stic ico. o. Sin Sin emba embarg rgo, o, este este esfuerzo puede verse mermado por una selección, preparación, manejo y envío envío inadec inadecua uado do de las muestr muestras. as. Esta situaci situación ón puede puede ser evita evitada da mediante el seguimiento cuidadoso de algunos principios generales:       

La muestra seleccionada deberá ser representativa del padecimiento. Suele ser preferible el envío de varios especimenes del mismo lugar. Las muestras deberán ser perfectamente identificadas. Deberá incluirse la Historia Clínica del individuo. Para cada caso se elegirá elegir á el tipo de recolección, manejo, conservación y envío más adecuado, a la especie y tipo de padecimiento presentado. Cuidar en lo posible, el manejo estéril de la muestra y en una cantidad adecuada. En caso de envío Postal, especificar en la envoltura el tipo de muestra, forma de manejo y verificar que se lleve a cabo en el menor tiempo posible.

En esta práctica se llevarán a cabo las técnicas de Punción venosa en distintas especies domésticas, así como la toma de Muestra de orina y Recolección Recolecc ión de heces.

2. PRINCIPIO PRINCIPIO Y METODO METODOLOGIA LOGIA DE LA DETERMINAC DETERMINACIÓN IÓN TECNICA DE PUNCION VENOSA En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan más satisfactoriamente satisfactoriamente con la l a sangre venosa. La punción venosa, venosa, se realiza con aguja y jeringa de distintas medidas según el caso, ejecutándola sobre cualq cualquie uiera ra de las venas venas super superfici ficiales ales del individ individuo uo:: Por ejemplo ejemplo en el caballo, la vaca y la oveja se emplea la vena yugular; Las venas safena y radi radial, al, pued pueden en suge sugerir rirse se para para el perr perro o y gato gato;; El cerd cerdo o es sang sangra rado do

















3. LIST LISTA DE REQUER REQUERIMIE IMIENT NTOS OS 3.1 Reacti Reactivo voss NUM. CLAVE

NOMBRE DEL REACTIVO Alcohol Benzal Xilol Vaselina pura Xilocaina Ketamina

CONC. 70° 100% 10% 50%

CANTIDAD 1L 1L 50 ml 500 gr 100ml 100 ml

3.2 Equipos Equipos de Laborator Laboratorio io 1. Micr Micros osco copi pio o 3.3 Materiales de laboratorio laboratorio NUM. CANTIDAD DESCRIPCION 7 Guantes desechables 7 Jeringas desechables de 3 ml 4 Agujas desechables del No 21 3 Agujas desechables del No 22 2 Agujas desechables del No 25 3 Jeringas de insulina 1 Sonda de alimentación infantil 1 Cinta adhesiva opaca, tela adhesiva de 2-3 cm. 5 m. Cordón de algodón de 0.5 cm de diámetro 1 Tijeras 5 Gradillas 5 Tubos de ensaye 13 x 100 10 Porta objetos de vidrio 10 Cubreobjetos de vidrio 1 lanceta o bisturí 3 Hojas de bisturí 1 paquete Algodón 5 Ligas 10 abate lenguas 10 Cucharillas rectales o tubos de vidrio 10 frascos de vidrio

















4 Gato adulto 5 Rata ata bla blan nca o rat rató ón. 4.

TECNICA O PROCEDIMIENTO

4.1 TECNICAS DE SANGRADO EN ANIMALES DE LABORATORIO. 

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PUNCIÓN INTRACARDIACA. Se coloca al individuo en posición dorsal, se palpa entre la 2a y 3a costilla del lado izquierdo, se coloca la aguja entre las citadas costillas, costill as, se presiona ligeramente sobre la zona y se jala él embolo de la jeringa para obtener la muestra (Es necesario cuidar la introducción introducción de aire para evitar producir embolia gaseosa). PUNCIÓN EN LA VENA MARGINAL DE OREJA . Se coloca una torunda dentro del conducto auditivo del conejo, se limpia con alcohol y se recorta el pelo de la oreja con una tijera. Se pasa un algodón con xilol para irritar la zona, con una lanceta o bisturí se podrá obtener la muestra. PUNCIÓN DE VENAS CAUDALES. RESERCION DE COLA Y DEDOS. SANGRADO EXHAUSTIVO Y DECAPITACION .

4.2 TECNICAS DE SANGRADO EN PERRO Y GATO. El sangrado en perro y gato se lleva a cabo principalmente en las venas safena y radial. Lo más importante para una correcta obtención de muestra será la adecuada sujeción del individuo. Posteriormente se deberá ocluir la vena por presión digital o torniquete. La piel sobre la vena es móvil, por lo cual se deberá inmovilizar con los dedos de la mano que sujeta el miembro. La aguja deberá insertarse con el bisel hacia arriba (No 21 para perros y 22 al 25 para gatos). Se deberá evitar interrumpir la circulación por tiempos prolongados para evitar hemoconcentración. La cantidad a obtener será de 5 a 10 ml. evitando colapsar la vena. Al final se retirará la aguja y se vaciará cuidadosamente en un tubo previamente preparado.

4.3 TOMA DE MUESTRA DE ORINA. El análisis de orina es uno de los procedimientos de laboratorio más

















Para Para su recole recolecció cción n es nece necesar sario io emple emplear ar recipien recipiente tess limpios, limpios, preferentemente estériles. La muestra se recogerá durante la micción o por sondeo, siendo este último más adecuado por estar libre de detritus uretral o vaginal. Es difícil cateterizar a un perro más de una o dos veces al día puesto que que la reacción tisular al traumatismo, traumatismo, causa un un estrechamiento estrechamiento del del lumen uretral a través del os penis.

4.4 RECOLECCION DE MUESTRA DE HECES. Es indispensable la aplicación de medidas higiénicas estrictas como medida de protección en la toma de muestras muestras de heces, así como seguir las indicaciones especificas para cada tipo de animal, utilizando recipientes limpios o estériles estéril es para la recolección de la muestra. En las especies de talla grande es más práctico e higiénico obtener muestras directamente del recto del animal, con un guante de plástico. Una vez obtenida una muestra adecuada, el guante es reversado hacia adentro, sirviendo de esta forma como recipiente de recolección, una vez colectado se sella, se identifica y se envía refrigerada al laboratorio. En los animales pequeños, las muestras fecales son obtenidas por medio del termómetro o una varilla de vidrio, aunque esta pequeña cantidad será apenas suficiente para un examen directo. En caso de no ser posible la recolección directa se procederá a tomar la muestra directamente del recto, se cuidara que la defecación ocurra sobre un piso previamente lavado. En este caso la muestra se recogerá con guante plástico, espátula de madera, tomando solo la capa superior que no entró en contacto con el suelo.

5. PROCESAMIENT PROCESAMIENTO O DE DE RESUL RESULT TADOS ADOS RESUL RESU LTADOS Y OBSERVACIONES OBSERVACIONES

















CONCLUSIONES

6. BIBL BIBLIO IOGR GRA AFÍA FÍA De la Puente G. José. Manual de Exterior y manejo y Técnicas de sujeción de los animales domésticos. UNAM. México. Oteiza Fernández, José. Manejo de Animales. Editorial Textos Universitarios. México. El Manual Merck de Veterinaria. Veterinaria. Merck & CO. INC. USA.



















EL METODO DE FLOTACION PARA LA IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE NEMATODOS EN CANIDEOS Y FELINOS. 1. INTR INTROD ODUC UCCI CION ON La para parasi sito tolo logí gía a estu estudia dia los los sere seress que viv viven en mome moment ntán ánea ea y/o y/o permanentemente, sobre o dentro de otros organismos vivientes, obteniendo de los mismo mismoss su subsi subsiste stenci ncia. a. Las enfe enferm rmed edade adess parasi parasitar tarias ias son son la interrelación entre el agente etiológico (parásito), el hospedero y el medio ambi ambien ente te,, en dond donde e al romp romper erse se la relac relació ión n de equil equilibr ibrio io se prod produc uce e sintomatología y se origina la enfermedad. Exis Existe ten n alg algunos pará paráme metr tros os que nos sirv sirve en para para dest destac acar ar la importancia que guardan guardan en Medicina Veterinaria, Veterinaria, por ejemplo: ej emplo: la incidencia en anim animales ales domés doméstic ticos, os, la morta mortalida lidad d por por paras parasito itosis, sis, las erogac erogacion iones es económicas producidas a los productores, así como la repercusión social y económica. Todo ello nos lleva a considerar la importancia de conocer no solo a las enfe enferm rmed edad ades es para parasit sitar aria ias, s, sus sus age agentes ntes etiol etiológ ógico icos, s, pato patolo logí gía, a, sintomatología, y la forma de combatirla, sin lograr su control mediante el diagn diagnós óstico tico e identi identifica ficació ción n que que permit permita a el cont control rol de las infest infestaci acion ones es subsecuentes.

2. PRINCIPIO PRINCIPIO Y METODO METODOLOGIA LOGIA DE LA DETERMINAC DETERMINACIÓN IÓN



















3. LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reactivos (soluciones de enriquecimiento) NUM. CLAVE NOMBRE DEL REACTIVO CONC. Solución saturada de sal 1.190 a 20°C Solu olució ción sa saturad rada de de az azúcar 1. 12 120 a 15°C 5°C Solución cloruro de zinc 1.890 a 20°C

CANTIDAD 5L 5L 5L

3.2 Equipo de Laboratorio 1. Micr Micros osco copi pio o 2. Cent Centríf rífug uga a (opcio (opcional nal)) 3.3 Materiales de laboratorio NUM. CANTIDAD DESCRIPCION 5 Vasos de precipitado 100 ml 10 Tubos de ensaye 10 Portaobjetos 10 Cubreobjetos 5 Gradillas 5 Pinzas 5 Coladeras de malla fina de plástico 6 a 7 cm diámetro 10 Abatelenguas o varillas de vidrio 10 Gasas 10 Guantes desechables 5 Lazos de alambre 5 Espátulas



















Se emulsifica una pequeña cantidad de heces en agua y se aplica una peq pequeña ueña capa capa sobr sobre e el port portao aobj bjet etos os.. Se coloc coloca a el cubr cubreo eobj bjet etos os y se examina el frotis en el objetivo de menor aumento, investigando la presencia de huevos, quistes y larvas. Este método es valioso cuando cuando se sospecha de la presencia de larvas de nemátodos o protozoarios protozoarios móviles.

4.2 MÉTODO DE FLOTACION En un vaso de precipitado de 100 ml se mezclan 2 g de heces con algo de solución de enriquecimiento utilizando utilizando para ello el lo una espátula. Luego se agregan 90 ml de solución de enriquecimiento agitando vigorosamente para obtener una mezcla bien homogénea. Si las heces contienen muchas partículas grandes grandes se cuela la mezcla en colador fino. Se debe recordar que algunos huevos quedan en el residuo detenido por la malla del colador. Lugo se deja reposar la mezcla por unos minutos hasta que las burbujas de aire haya hayan n salid salido o y deja dejarr flota flotarr cuid cuidad ados osa ament mente e un cubr cubreo eobje bjeto toss sobr sobre e la superficie del líquido. Los huevos de parásitos flotarán hacia la superficie y se adhe adherirá rirán n al cubre cubreob objet jeto. o. Desp Despué uéss de media media hora hora el cubre cubreobj objeto eto es cuidadosamente tomado con una pinza y colocado sobre el portaobjetos. La preparación preparación es observada observada al microscopio. La flotación de los huevos en la solución de enriquecimiento enriquecimiento se puede acelerar por medio de la centrifugación. El tubo para centrífuga debe ser lo sufi suficie cient ntem emen ente te anch ancho o que perm permitita a colo coloca carr el cubr cubreo eobj bjet etos os sobr sobre e la superficie del líquido. La suspensión se centrifuga con el cubreobjeto sobre la superficie del líquido. Si ello no es posible, la capa superficial del líquido puede ser sacada con un lazo de alambre y luego colocada sobre el portaobjetos.



















CONCLUSIONES

6. BIBLIOGRAFÍA THIENPONT THIENPONT, D; ROCHETTE, ROCHETTE, F; VANPARIJS, ANPARIJS, O.F.J. O.F.J. Diagnóstico de las Helm Helmin intitias asis is por por medio edio del del exam examen en copro coproló lógi gico. co. Jansse Janssen n Research Research Foundation. Beerse Belgica. 1979. QUIROZ, R. H. Parasitología y Enfermedades parasitarias de los animales domésticos. Ed Limusa. México.



















EL METODO DE SEDIMENTACION PARA LA IDENTIFICACION DE HUEVECILLOS DE TREMATODOS TREMATODOS EN HECES. 1. INTRODUCCION La Fascio Fasciolasi lasis, s, Distoma Distomatos tosis is hepá hepátic tica, a, Palomilla Palomilla o Maripo Mariposa sa del hígado, es una una enfermedad enfermedad que afecta comúnmente comúnmente a las ovejas, ovejas , así como a las cabras cabras,, bovin bovinos os,, cerdo cerdos, s, equin equinos os,, event eventua ualme lment nte e al hombr hombre e y a algunos animales silvestres, presentando una amplia distribución mundial. Es una enfermedad parasitaria debida a la presencia y acción del Tremátodo Fasciola hepática . Presenta Presenta un proceso inflamatorio crónico del del híga hígado do y con conducto uctoss bilia biliare res, s, cau causand sando o tras trasto torn rno os dige digest stiv ivos os y nutricionales

2. PRINCIPIO PRINCIPIO Y METODO METODOLOGIA LOGIA DE LA DETERMINAC DETERMINACIÓN IÓN Los huevecillos de tremátodo son fácilmente identificables en frotis directo o por la técnica de sedimentación, debido a la presencia de un opérculo polar, el cual puede ser destruido en soluciones hipertónicas, por lo cual no se recomiendan las técnicas de flotación.

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reactivos NUM. CLAVE

NOMBRE DEL REACTIVO

CONC.

CANTIDAD




















10 20 20 20 10 10 10 10 10 10 10 10


Vasos de precipitado 100 ml Tubos para centrífuga (cónicos) Portaobjetos Cubreobjetos Gradillas Pipetas Pasteur Coladeras de malla fina de plástico palillos finos de madera Gasas Guantes desechables Goteros de cristal Espátulas

3.4 Material Biológico • heces de ovino • heces de bovino 4. TECNICA O PROCEDIMIENTO 4.1 METODO METODO DE SEDIMENTACION SEDIMENTACION SIMPLE





















El sedimento que se forma contiene los huevecillos de tremátodo, y presenta encima una capa de ácido acético y una capa de éter, con una capa de restos de heces entre ambas. 6. Con un palillo fino y largo se afloja el sobrenadante de las paredes del tubo y se decanta, debiendo quedar solo el sedimento. 7. Se agregan unas gotas de agua al sedimento y se mezcla vigorosamente 8. Se toma toman n unas gota gotass de esta sta susp suspe ensió nsión n y se colo coloca can n sobr sobre e el portaobjetos, examinándolo bajo el pequeño aumento. Con este método es posible evaluar la intensidad de la infestación. 5.

5. PROCESAMIENTO DE RESULTADOS RESUL RESU LTADOS Y OBSERVACIONES OBSERVACIONES





















6. BIBLIOGRAFÍA THIENPONT THIENPONT, D; ROCHETTE, ROCHETTE, F; VANPARIJS, ANPARIJS, O.F.J. O.F.J. Diagnóstico de las Helm Helmin intitias asis is por por medio edio del del exam examen en copro coproló lógi gico. co. Jansse Janssen n Research Research Foundation. Beerse Belgica. 1979. QUIROZ, R. H. Parasitología y Enfermedades parasitarias de los animales domésticos. Ed Limusa. México.





















EL METODO DE HARADA MORI PARA PARA CULTIVO LARVARIO DE ANCYLOSTOMA Y UNCINARIA EN PERROS Y GATOS. 1. INTRODUCCION La Anquilostomiasis o Uncinariasis es la Infestación causada por la presencia ya acción de larvas y adultos de varias especies de Ancylostoma y Unci Uncina nari ria a en inte intest stin ino o delg delgad ado o y otro otross tejid tejidos os en perr perros os y gato gatos, s, Clínic Clínicam amen ente te se carac caracter teriza iza por por anem anemia ia ferrop ferropén énica ica,, adelga adelgaza zamie miento nto,, diarrea sanguinolenta y en algunos casos edema en patas. Es común en cacho cachorro rross poster posterior ior al deste destete, te, pudié pudiénd ndose ose observ observar ar tambi también én en perro perross confinados.

2. PRINCIPIO PRINCIPI O Y METODOLOGIA DE LA DETERMINACIÓN DETERMINACIÓN El cuadro clínico por tanto es característico en zonas con problemas




















10 10 10


tubos de centrífuga cónico de 15 ml Tapones para los tubos de centrífuga de 15 ml Pipetas

3.4 Material Biológico 1. heces de Perro parasitado o sospechosos 4. TECNICAS Y PROCEDIMIENTOS El cultivo de larvas en heces de perro o gato infectado, se lleva a cabo por el el Método Método de de Harad Harada a Mori Mori dent dentro ro de un un tub tubo o de ens ensaye aye . 1. Se toma una delgada capa de heces de 1 a 2 mm, y se extiende sobre el

papel filtro, colocándola colocándola en el tercio medio. medio. 2. Se agregan 3 ml de agua destilada en el tubo de ensaya. 3. Se coloca el papel filtro con la muestra dentro del tubo, de tal modo, que el extremo inferior haga haga contacto con con el agua (un cm aproximadam aproximadamente) ente) sin que haga contacto el agua con las heces. xtremo mo sup superio eriorr del del tubo tubo se colo coloca ca un tapó tapón n de algo algodó dón n, 4. En el extre sosteniendo el otro extremo del papel.













































IDENTIFICACIÓN IDENTIFI CACIÓN DE D E LARVAS LARVAS DE NEMATODOS NEMATODOS PULMONARES POR EL METODO DE BAERMAN 1. INTRODUCCION Los huevos de nemátodos y larvas en heces de bovinos, son casi los mismos que se encuentran en pequeños rumiantes domésticos y salvajes, en medicina veterinaria, el aparato de Baerman ha sido de gran ayuda para la identificación de parásitos pulmonares de la familia P rotostrongylidae principalmente.























1. Micr Micros osco copi pio o 2. Centr Centríf ífug uga a (opcio (opciona nal) l)

3.3 Material de laboratorio NUM. CANTIDAD DESCRIPCION 10 Embudos de vidrio 10 Soporte universal con pinza 5m Tubo de goma 10 goteros 10 Clips 20 Gasas 10 Mallas coladoras de alambre con abertura de 0.6























RESUL RESU LTADOS Y OBSERVACIONES OBSERVACIONES























TECNICAS HEMATOLOGICAS HEMATOLOGICAS EN MEDICINA VETERINARIA. 1. INTRODUCCION En la práctica veterinaria los exámenes hematológicos se realizan mas satisfactoriamente con la sangre venosa prefiriéndose como se indicó en la primera práctica : la vena yugular para caballos, bovinos, ovejas y cabras; el corazón en conejos, cobayos y ratones, y la vena cava para el cerdo.
























1. 2. 3. 4.

Micro Microce cent ntrí rífu fuga ga Micr Micros osco copi pio o Espect Espectofo ofotó tómet metro ro Disc Disco o lect lector or


























4. Secar mediante calor o aire, evitando la fragmentación fragmentación y crenación de los

eritrocitos. 5. La laminilla laminilla deberá deberá ser identi identifica ficada da y teñid teñida a con con los proced procedimie imient ntos os usuales (Wright).

























10. Cada cuadro cuadro grande posee posee 16 cuadros cuadros secundarios secundarios y presenta un área

de 1 milímetro cuadrado y su profundidad profundidad es de 0.1 mm (cuatro décimas décimas de milímetro cubico a una dilución de 1 a 20).

















































DIAGNOSTICO DE MASTITIS MEDIANTE LAS PRUEBAS DE HOTIS

















































































































































































































































































































































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