Manual de Practicas de Hemostasia Completo

Facultad de Bioanálisis, Veracruz

Manual de Prácticas de Hematología

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

HEMOSTASIA ELABORÓ:

Q.C. MARIA ESTHER DESCHAMPS LAGO

Hemostasia

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HEMOSTASIA: PRACTICA NO.1 OBTENCIÓN DE LA MUESTRA DE SANGRE 1. INTRODUCCIÓN Obtención De Sangre Capilar Es el método empleado empleado cuando se necesita tan solo una pequeña cantidad cantidad de sangre, ya que los estudios a realizar así lo requieren. El sitio más apropiado para obtener sangre capilar es la yema del dedo. En los niños más pequeños, pequeños, es más conveniente conveniente obtenerla del talón talón ó del dedo pulgar del pie. Los detalles relativos a los recipientes y portaobjetos que se utilizan, se indican a continuación. VENTAJAS.

Facilida

•

d con que puede obtenerse Especial

•

mente útil en pacientes geriátricos y en niños, en particular, recién nacidos. DESVENTAJAS.

Sólo

•

logra obtenerse una pequeña cantidad de sangre que puede ser insuficiente. Es

•

un

método por lo general tardado y que tiende a provocar hemólisis de la muestra En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se realiza realiza la punción punción despué despuéss de 8 a 10 min. de contact contacto o con la piel con un buen antiséptico. •

Obtención De Sangre Venosa . Es el principal método de extracción de sangre en el laboratorio de análisis clínicos, ya que es relativamente fácil de realizar. VENTAJAS.

Nos permite hacer múltiples exámenes y en repetidas veces si se desea, con la misma muestra. Las alícuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura futura referencia. •

•

DESVENTAJAS • • •

Puede provocar la coagulación de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo. Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada. Puede dificultarse en niños, pacientes obesos ó en estado de shock.

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•

• • •


Puede ocasionarse hemólisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por las siguientes causas: Por forzar el paso de la sangre al tubo Por agitar el tubo enérgicamente Por extraer sangre de un hematoma

Anticoagulantes Empleados. Estas sustancias impiden la formación de coágulos. El mecanismo por el que se evita la coagulación, varía según el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se unen con el calcio, mientras que la heparina impide la conversión de protrombina en trombina. Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato citrato de sodio, y heparina en forma forma de sal de litio ,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada después e la recolección, de acuerdo con las instrucciones del fabricante. 2. PRINCIPIO PRINCIPIO Y METODOLOGÍA METODOLOGÍA . El sitio sitio más práctic práctico o para obtener obtener sangre sangre venosa venosa es la flexura flexura anteri anterior or del brazo, brazo, de preferencia preferencia justo justo por arriba de alguna de las ramas venosas venosas que allí se encuentran. encuentran. Las venas superficiales superficiales de la cara anterior anterior del antebrazo antebrazo son las más comúnes comúnes para la venopunción. Las tres venas principales que se utilizan son: 1) vena cefálica, cefálica, ubicada ubicada en la parte superior del antebrazo antebrazo y del lado del pulgar de la mano; 2) vena basílica, basílica, ubicada ubicada en la parte inferior inferior del antebrazo antebrazo y del lado del dedo meñique meñique de la mano; y 3) vena cubital cubital mediana, mediana, que conecta conecta las venas basílica basílica y cefálica cefálica en la fosa antecubital antecubital ( flexión flexión del del codo) codo) y es la la vena de elección. elección.Si Si el paciente paciente aprieta el puño después de aplicar el torniquete, la vena se tornará más más prominente. El torniquete facilita la obtención. En los niños pequeños se pueden utilizar otros sitios; si es así, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja puntiaguda, puntiaguda, nunca nunca menor de calibre calibre 21 y una jeringa de 5 ml ó de 10 ml. Tanto la aguja aguja como la jeringa jeringa deberán estar estar limpias, limpias, secas y estériles. estériles. Con Con práctica práctica se puede obtener obtener sangre usando sólo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre hasta los tubos en los que se recoge la muestra. Para esta técnica se utilizan agujas de calibre 19. 3. LISTA DE REQUERI REQUERIMIENT MIENTOS OS 3.1 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 2 1 1 1 1 1 1 Hemostasia

DESCRIPCIÓN Tubos de recogida de muestras con EDTA Aguja de de Vacutainer Contenedor de Vacutainer Jeringa Lanceta Torundas de algodón con alcohol isopropílico Ligadura 3



4. PROCED PROCEDIMI IMIENT ENTO. O. 4.1 Punción Capilar 4.1.1 Indicaciones. En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna ó externa del talón.En niños de más de un año, en la superficie palmar de la última falange del segundo, tercero ó cuarto dedo dedo de la mano. ano.La La punc punció ión n no debe deberá rá real realiz izar arse se en una una part parte e edem edemat atos osa a ó congestionada, ó donde la piel se encuentra fría y cianótica.

4.1.2 Identificación del Paciente Asegurarse de que el paciente llegue en condiciones óptimas y tranquilizarlo.  Colocar al paciente adecuadamente.  Checar el material para la extracción: 

4.1.3 Técnica. 4.1.3. 4.1.3.1 1 Limpiar Limpiar cuidadosa cuidadosamen mente te la piel en el sitio de punción punción y a su alrededor alrededor con algodón mojado en algún desinfectante , como alcohol de 70%. 4.1.3.2 4.1.3.2 Secar el el área con gasa gasa estéril estéril seca. seca. 4.1.3.3 4.1.3.3 Puncionar Puncionar con una lancet lanceta a estéril ó aguja desechab desechable. le. El movimie movimiento nto debe ser ser rápido y la punción suficientem suficientemente ente profunda profunda para asegurar asegurar que la la sangre sangre fluya libremente.La salida de la sangre sangre puede facilitarse ejerciendo una suave presión en la cara lateral del dedo. A corta distancia del sitio de punción. 4.1.3.4 La sangre deberá fluir libremente. Si se ejerce demasiada presión, se diluirá con los líquidos tisulares, lo que la puede hacer inapropiada para estudio. 4.1.3.5 4.1.3.5 Descartar Descartar siempre siempre la primera primera gota gota de sangre, sangre, limpiándo limpiándola la con una una gasa seca seca y dejar el sitio de punción limpio y seco. Obtener la cantidad cantidad requerida requerida de muestra, muestra, aspirando aspirando la sangre sangre con con pipeta pipeta ó 4.3.1.6 Obtener colocándola en un portaobjetos.

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4.2 Punción Venosa 4.2.1 Indicaciones. Debe indicarse al paciente la posición correcta, que puede ser sentado ó recostado, apoyando bien el brazo en posición horizontal. Elegir la vena adecuada, prefiriéndose la cubital mediana, la vena basílica, la cefálica, las venas de la muñeca, tobillo y mano, ya que resultan fáciles de palpar.

4.2.2 Técnica 1. Desinf Desinfect ectar ar la piel en el sitio sitio de punción punción con algodón algodón mojado mojado en un desinfe desinfecta ctante nte apropiado como alcohol de 70%. 2. Preparar la la jeringa jeringa y la aguja, aguja, ó en su su defecto defecto la aguja aguja con el contened contenedor or en el caso caso del sistema de tubos al vacío, cuidando que la técnica sea aséptica. 3. Aplica Aplicarr un torniq torniquet uete e en el brazo ( por arriba arriba del sitio de punción), punción), sufici suficient enteme emente nte apretado para que restrinja el flujo flujo de la sangre venosa. 4. Desi Desinf nfec ecta tarr nueva nuevame ment nte e el sitio sitio de punció punción, n, y secar secar la piel piel con algod algodón ón ó gasa gasa limpios, secos y estériles. 5. Asegura Asegurarse rse de que el émbolo de la jeringa jeringa esté hasta hasta el fondo , es decir, que la jer jerin inga ga no cont conten enga ga aire. aire. Inse Insert rtar ar la aguja aguja de la jerin jeringa ga en una vena vena con un movimiento preciso. 6. Jalar lentame lentamente nte el el émbolo émbolo y obtener obtener 2 a 3 ml de sangre. sangre. 7. Retirar Retirar la jeringa jeringa de la aguja y sustitui sustituirla rla por otra otra jeringa jeringa que contenga contenga la solución solución anticoagulante de citrato de sodio. O directamente introducir el tubo del sistema de vacío. 8. Obtener Obtener el volumen volumen de sangre deseado jalando jalando el émbolo muy despaci despacio. o. 9. Soltar el torniquete torniquete y colocar colocar una gasa gasa seca sobre el sitio sitio de la la punción, punción, retirando retirando después la aguja con un solo movimiento. movimiento. 10. Presi Presiona onarr lige ligeram ramen ente te la la gasa gasa sob sobre re el el sit sitio io de de punci punción ón duran durante te alg alguno unoss momentos momentos y después después pedir al al paciente paciente que continúe continúe aplican aplicando do la presión presión durante durante unos minutos. 11.Cuando 11. Cuando la sangre se obtiene obtiene empleando empleando sólo una aguja aguja sin jeringa, jeringa, se emplea emplea el mismo procedimiento procedimiento y cantidad cantidad de anticoagulant anticoagulante. e. Deben usarse tubos graduados graduados para obtener la proporción adecuada de anticoagulante y sangre.

Actividades: - Practicar la toma de sangre capilar. - Practicar la toma de sangre venosa.

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-Realizar esquemas de punción capilar .

-Realizar esquemas de punción venosa y de las principales venas empleadas.

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-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extracción: jeringa y sus partes; sistema vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .

- Reporte de resultados.____________________________________________

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HEMOSTASIA:PRÁCTICA No. 2 “EXTENDIDOS DE SANGRE” 1. INTR INTROD ODUC UCCI CIÓN ÓN.. Los extendidos de sangre se realizan dentro del estudio del hemograma completo, ó bien de manera aislada .En ellos se pueden estudiar los eritrocitos, los leucocitos y las plaquetas, y el propósito de ello es determinar las características morfológicas de cada tipo celular y evaluar la frecuencia relativa de los distintos tipos de leucocitos. Se deben teñir con una de las tinciones de Romanowsky las cuales varían en sus propiedades de tinción, y por lo tanto, tanto, es importante seleccionar una y familiarizarse con ella. La coloración de Wright es muy confiable y sencilla, pero otras también lo son, tales como la de Giemsa. Leishman ó May-Grünwald, las cuales son igualmente satisfactorias, aunque puede variar la tinción de un lote a otro de colorante. 2.

PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .

Los Los frot frotis is de sangr sangre e debe deben n conf confec ecci cion onars arse e con lámin láminas as porta portaobj objet etos os de vidr vidrio io que que previamente se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar cualquier resto de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar así una mala calidad en la tinción. Los frotis de sangre son esenciales para el estudio morfológico y cuantitativo de las células sanguíneas. Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrán distinguir en él tres áreas importantes: la cabeza ó zona de inicio, el cuerpo ó zona media y la cola ó área final del mismo. mismo. Un frotis frotis no deberá ser ni grueso ni delgado, delgado, pues en ninguno de ellos se podrán apreciar bien las áreas antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la tinción será de mejor calidad.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Materiales de Laboratorio

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4. PROCEDIMIENTO. Técnica de los dos Portaobjetos. 1. Colo Coloca carr a una una dist distan anci cia a de 1.5 1.5-1 -1.9 .9 cm cm del del extr extrem emo o dere derech cho o de un un port portao aobj bjet etos os,, una una pequeña gota desangre ( del tamaño de 3 cabezas de de alfiler) obtenida por punción capilar del talón, del lóbulo lóbulo de la oreja ó por extracción venosa. venosa. 2. Si se emp emplea lea sangr sangre e venos venosa a mezc mezcla lada da con con ant antic icoag oagul ulan ante te,, el frot frotis is deb deberá erá real realiz izars arse e lo más pronto pronto posibl posible, e, debido debido a que el contacto contacto prolonga prolongado do con éste éste altera altera la morfolo morfología gía celular. 3. Apro Aproxi xima marr el port portao aobj bjet etos os exte extens nsor or a la gora gora,, deja dejand ndo o que hag hagan an cont contac acto to y que que por capilaridad éste se extienda a lo largo del borde. 4. Se desl desliz iza a el port portaob aobjet jetos os ext exten enso sorr haci hacia a el extr extrem emo o cont contrar rario, io, para para logra lograrr una una pelí pelícu cula la delgada de sangre. 5. dejar secar y teñir.

NÚMERO DESCRIPCIÓN 2 Tubos de recogida de muestras 1 Aguja de de Vacutainer 1 Contenedor de Vacutainer 1 Jeringa 1 Toru orundas de alg algodó odón con alcohol isopropí opílico 1 Ligadura 1 Caja de portaobjetos limpios ACTIVIDADES: -Realizar 10 frotis correctamente confeccionados. -Realizar esquema que muestra las partes de un frotis .

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-Realizar esquema de tres frotis: demasiado grueso, demasiado delgado y correctamente realizado.

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- Reporte de resultados.____________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________

HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 3 “TINCIÓN DE WRIGHT Y REACTIVOS COMUNMENTE EMPLEADOS EN HEMATOLOGIA “ 1. INTR INTROD ODUC UCCI CIÓN ÓN La finalidad finalidad de la tinción tinción de Wright es lograr que el alumno se sienta sienta capacitado capacitado para prepa preparar rar adecu adecuad adam ament ente e algu algunos nos de los los react reactiv ivos os y colora colorant ntes es más más comú comúnm nmen ente te empleados en las áreas de hematología y microbiología, que como químico clínico tiene la obligación de conocer y dominar. 2. PRINCI PRINCIPIO PIO Y METO METODOL DOLOGÍ OGÍA A. COLORANTES. A los colorantes de les puede clasificar en tres tres grupos: 1) Acidos. Son aquellos constituídos constituídos por sales cuya base es incolora incolora y cuyo ácido es coloread coloreado. o. A este este grupo pertene pertenecen cen las eosinas. eosinas. Estas Estas soluciones soluciones se usan para la coloración citoplasmática ó coloración de fondo. 2) Basico Basicos. s. Son aquel aquella lass sales sales de ácid ácido o inco incolor loro o y base base colo colore reada ada como como el clorhidrato de azul de metileno. Estos colorantes tiñen por lo general algunos elementos del núcleo. Hemostasia 11



3) Neutros. Neutros. Son aquellas sales con el ácido y la base coloreados, por ejemplo, los eosinatos de azul y azur de metileno , los más empleados en hematología. El método de Romanowsky, que que empl emplea ea esto estoss colo colora rant ntes es,, ha sido sido la base base de las las colo colora raci cion ones es panó panópt ptic icas as util utiliz izada adass en la actu actual alida idad d ya que que ha tenid tenido o un gran gran éxit éxito o en la tinc tinció ión n diferencial de la mayoría de las estructuras normales y anormales de la sangre. La mayor parte de estos colorantes policromos derivados del método de Romanowsky, se disuelven en alcohol metílico, combinando así, la fijación con la tinción. Los más conocidos de todos ellos, son los de Giemsa y de Wright. Tipo de Error Tinci inción ón dem demas asia iado do azu azull Tinc Tinció ión n dem demas asia iado do rosa rosa

Precip Precipita itació ción n de de color colorant ante e

Causas Tiem iempo exc exces esiv ivo o de tin tinci ció ón Lavado deficiente Ph muy alcalino Tiem Tiempo po insu insufifici cien ente te de tinc tinció ión n Lavado excesivo pH muy ácido

Como se Corrige Disminuir el tiempo de tinción Lavar adecuadamente Acidificar el pH Aumentar el tiempo de tinción Lavar adecuadamente Elevar el pH

Coloran Colorante te no filtra filtrado do Filtrado de colorante Secado de la laminilla durante laProcurar que siempre haya un tinción. buen menisco de colorante durante la tinción.

ANTICOAGULANTES. Los 4 anticoagulantes más usados son: mezcla de oxalato amónico y de potasio ( ó simplemente oxalato oxalato amónico ), citrato trisódico, sequestrene ( EDTA ), y heparina. Los 3 primeros impiden la coagulación sustrayendo el calcio del plasma sanguíneo por precipitación ó fijación en forma no ionizada. La heparina neutraliza la trombina y otras fases de la activación de los factores de coagulación. El citrato citrato trisódi trisódico, co, el EDTA y la heparin heparina, a, pueden pueden emplea emplearse rse para impedir impedir la coagulación de la sangre destinada a transfusiones, sin embargo, la mezcla de oxalatos, no, por ser tóxica. Los oxalatos pueden usarse para determinaciones como hemoglobina, hematocrito y recuentos globulares, aunque para extensiones sanguíneas puede usarse tan sólo en los primer primeros os minutos, minutos, pues más tarde pueden pueden desarroll desarrollarse arse alterac alteracione ioness de las células células sanguíneas como formas dentadas de los hematíes, vacuolización en el citoplasma de los granuloc granulocito itos, s, fagoci fagocitos tosis is de los crista cristales les de oxalat oxalato, o, artefa artefacto ctoss en los núcleos núcleos de los linfocitos y monocitos, etc.Además no deben emplearse para determinaciones químicas de nitrógeno y potasio. Para investigaciones de coagulación, es muy útil el citrato trisódico. El EDTA ó sequestrene es tal vez el anticoagulante más usado para el el recuento de células células sanguí sanguíneas neas.. Se le compara compara con el oxalat oxalato o para para el estudio estudio del hematocri hematocrito to y hemoglobina, pero para estudios morfológicos, es todavía mejor, pues con él, no se forman

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alteraciones ni artefactos en las células sanguíneas, aún después de un buen tiempo de estar hecha la mezcla, si la sangre se refrigera ( 2 horas a 24 horas ). La heparin heparina a tambié también n puede puede usarse usarse para determ determina inacion ciones es como como hemato hematocri crito to y hemoglobina, pero no de óptimos resultados en las extensiones sanguíneas, ya que produce un fondo azul en aquéllas a quéllas que son teñidas con el colorante coloran te de Wright.

3. LIST LISTA A DE REQUE REQUERI RIMI MIEN ENTO TOS S 3.1 3.1 React Reactiv ivos os.. NUM. 1 2 3 4 5 6 7

NOMBRE DEL REACTIVO Colorante de Wright Metanol Na2HPO4 KH2PO4 EDTA Oxalato de amonio Agua destilada

CANTIDAD 0.1 g 60 ml 2.56 g 6.66 g 3g 0.8g 1.5L

3.2 Equipo Equipo de Labora Laborator torio io Balanza Granataria Balanza Analítica

3.3 Materiales Materiales de Laboratorio Laboratorio CANTIDAD 1 2 1 4 1 3 1 1 10

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DESCRIPCIÓN Mortero Probetas de 100 ml Matraz Volumétrico de 100 ml Varillas de vidrio Frasco de vidrio color ambar de 1L de capacidad Frascos de vidrio color ámbar de 150 ml de capacidad Jeringa ó sistema vacutainer para toma de muestra Ligadura Portaobjetos



3.4 Preparación de los reactivos 3.4.1Colorante de Wright: Colorante de Wright: Metanol:

0.1 g 60 ml

Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; ésto se hace poco a poco. Esta operación operación debe durar 30 min. hasta hasta completar completar disolución. disolución. Se deja deja reposar dos días y se filtra.

3.4.2 - Amortiguador ó Buffer de fosfatos Na2HPO4 KH2PO4 Agua destilada para aforar a

2.56 g 6.66 g 1L

Mezclar Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando agregando poco a poco más agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco ámbar de 1 L.

3.4.3- EDTA. EDTA Agua destilada

3g 100 ml

Mezclar el EDTA poco a poco con el agua destilada.

3.4.4 -Solución de Oxalato de amonio. Oxalato de amonio Agua destilada

0.8 g 80 ml

Mezclar poco a poco el oxalato de amonio con el agua destilada. En ambos, se utiliza 1 gota de solución por ml de sangre.

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4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Técnica: Tinción de Wright. 4.1.1. Seleccio Seleccionar nar un portaobjetos portaobjetos nuevo de 25 X 75 mm para hacer extendidos, extendidos, que tenga la orilla relativamente lisa. 4.1.2 Obtener una pequeña cantidad de muestra de sangre periférica. 4.1.3Colocar una pequeña gota de sangre a 2 ó 3 mm de la orilla de un portaobjetos limpio y seco. Colocar el portaobjetos para hacer extendido en un ángulo de 30 a 45 grados con respecto al portaobjetos que tiene la muestra y hacer contacto cn la gota. Esta debe debe extender extenderse se rápidam rápidament ente e a lo largo largo de la orilla orilla del portaob portaobjet jetos os para hacer hacer los extend extendidos idos.. Deslizar Deslizar el portaobj portaobjeto etoss de extensi extensión ón sobre sobre la superfici superficie e dispers dispersand ando o la muestra de sangre. El extendido de de sangre debe medir aproximadamente 30 mm de largo . El portaobjet portaobjetos os de extensión extensión no se despegará despegará hasta haber haber extendido extendido toda la la sangre. El grueso del extendido de sangre puede regularse modificando modificando el ángulo del portaobjetos de extensión, variando el tamaño de la gota de sangre, la presión ó la velocidad de extensión. 4.1.4 El extendido de sangre se seca con el aire. Una vez seco, se escribe con lápiz el nombre del paciente en una orilla del portaobjetos. 4.1.5 Fijar el extendido de sangre en alcohol metílico absoluto durante 2 a 3 minutos. El colo colorr del del exte extend ndid ido o de sang sangre re camb cambia iará rá de rojo rojo a café café clar claro. o. Esta Esta fija fijaci ción ón es recomendable recomendable aunque el colorante que se vaya a emplear emplear se encuentre encuentre diluído en alcohol metílico absoluto. 4.1.6 Cubrir el portaobjetos completamente con el colorante. Después de 3 minutos añadir un volumen igual de amortiguador. Soplar ligeramente para mezclar uniformemente. Aparecerá un brillo metálico verde. 4.1.7 4.1.7 Después Después de 5 minut minutos os enjuaga enjuagarr cuidado cuidadosame samente nte con agua agua de la llave llave ó amortiguador amortiguador de fosfatos, fosfatos, al principio principio con chorro delgado y suavemente suavemente y después con el chorro fuerte para eliminar todo exceso de colorante. Limpiar el reverso del portaobjetos en posici posición ón erecta erecta.. Cuando Cuando se haya haya secado, secado, cubrir el portaob portaobjet jetos os con un cubreobj cubreobjeto etoss rectangular y fijarlo con una gota de líquido de montaje. Se puede usar sólo aceite de inmersión en una preparación temporal. El alumno deberá ensayar tiempos hasta ajustar aquellos aquellos que más convengan para una óptima coloración. Así, con tres frotis más deberá ensayar: 2 minutos de colorante y 4 de amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de colorante y 11 minutos de amortiguador.

4.2 Resultados Esperados. Los resultados esperados en la tinción serán los siguientes: Hematíes en color rosa. Núcleos de los leucocitos de azul púrpura, con la cromatina y paracromatina netamente diferenciadas. Gránulos neutrófilos del citoplasma, lila ó violeta Hemostasia 15



Gránulos eosinófilos, rojo tirando a naranja. Gránulos basófilos, púrpura tirando a azul oscuro. Plaquetas, color lila oscuro. Citoplasma de los linfocitos, azul claro. Citoplasma de los monocitos, ligero azul.

Actividades: -Practicar la tinción de Wright Wright con frotis frotis de de sangre periférica. -Corregir de acuerdo al recuadro , errores encontrados en la la tinción. - Reporte de resultados .________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________

HEMOSTASIA:PRÁCTICA No. 4 “EVALUACIÓN DE SANGRE PERIFÉRICA” 1.INTRODUCCIÓN. Una vez que se ha hecho y teñido un frotis satisfactorio, éste puede ser evaluado en búsqueda búsqueda de anormalidade anormalidades. s. Cada examen debería incluir análisis con bajo poder ( 10X ), con alto poder ( 40 ó 45 X), e inmersión ( 100X ).Un error común consiste en comenzar el examen con el objetivo de inmersión.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades morfológicas significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean empleados. La presencia presencia de eritroci eritrocitos tos anormales anormales en el frotis frotis de sangre sangre perifér periférica ica a menudo brinda brinda importa importante ntess claves en el diagnós diagnóstic tico o difere diferencia nciall de las anemias, anemias, y puede puede ser tambié también n de ayuda ayuda en el diag diagnóst nóstico ico de otra otrass enfer enfermed medades ades.. La morf morfolo ología gía de los los eritrocitos puede verse alterada con cambios en el tamaño, en la forma, en las propiedades tintoriales de células individuales ó por la presencia de ciertos materiales dentro de ellas. Incluso, Incluso, la presencia presencia de solo solo una única única célula célula con ciertos ciertos cambios, cambios, puede puede considerarse considerarse

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sign signifific icat ativ iva; a; en otros otros,, la anorm anormal alid idad ad se consi consider dera a impor importa tant nte e sólo sólo si un núme número ro significativo de células se ven afectadas. Asimismo, en la serie blanca, es importante realizar el recuento diferencial, aún cuando los nuevos contadores electrónicos den un resultado anticipado del mismo, ya que sólo puede confirmarse éste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarán anormal anormalida idades des en las células células blancas blancas y éstas éstas se report reportarán arán,, así como como la presencia presencia de células que normalmente no se ven en sangre periférica, sino únicamente en médula ósea, a menos que exista alguna patología presente. Lo mism mismo o apli aplica ca para para las las plaq plaque ueta tas, s, las las célu célula lass más más pequ pequeñ eñas as de sang sangre re periférica.Se puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando así se requiera, y buscar buscar anormali anormalidade dadess en su forma y en su tamaño tamaño.. Algunas Algunas anormal anormalida idades des pueden pueden requerir que se indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden diferir de observador a observador, conduciendo a una variación considerable en el análisis del mismo frotis de sangre. Los laborat laboratorio orioss actual actualmen mente te tratan tratan de control controlar ar estas estas inconsi inconsiste stencia nciass desarrollando desarrollando criterios criterios para estandarizar estandarizar la evaluación evaluación de la morfología. morfología. Así, muchos laboratorios usan un método semicuantitativo de evaluación, consistente en los términos: leve, moderado ó severo. O bien un sistema " por cruces" :1+, 2+, 3+, etc. Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante también la selección de una área apropiada del frotis para la evaluación. En un frotis en " cuña ", en el área "aplumada "aplumada"" ó termin terminal al del frotis, frotis, demuestr demuestran an cambios cambios que pueden pueden considerarse patológicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, células en "diana ", etc. En el área área grues gruesa a del del frot frotis is,, las las célul células as puede pueden n inte interpr rpret etars arse e como como micr microc ocít ític icas as en form forma a equivocada, y la morfología puede ser difícil de evaluar. También tenderán a formar apilamientos ( rouleaux ) en esta área. Por ello, el área ideal para examinar un frotis, es aquella aquella que contiene aproximadament aproximadamente e 200-250 200-250 células por campo a seco fuerte. Esto Esto corresp corresponde onde a una una área en donde donde los los eritroci eritrocitos tos se tocan tocan pero pero no se encim enciman. an. En el verdadero Roleaux, los márgenes individuales de las células son difíciles de distinguir y dan una imagen como de pilas de monedas que han sido empujadas y tiradas, imagen que persiste persiste aún en las áreas más delgadas delgadas del frotis, frotis, aunque ahí exista exista menor cantidad cantidad de células. La intensidad de la formación de "rouleaux" depende de la concentración de las proteínas plasmáticas, especialmente el fibrinógeno. En enfermedades inflamatorias, los niveles de fibrinógeno fibrinógeno pueden aumentar. También la elevación de gama globulinas, como se observa en el Mieloma múltiple, provoca formación de "rouleaux".

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2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA . 2.1 Análisis con bajo poder. Este objetivo debe utilizarse para evaluar la calidad de la tinción.Las células blancas deberían verse fácilmente con este aumento.Si no es asi, el frotis debe ser nuevamente teñid teñido. o.El El bord borde e aplu apluma mado do debe debe ser ser exam examin inad ado o para para busc buscar ar cúmu cúmulo loss de plaq plaquet uetas as ó filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta evid evidenc encia ia de coagu coagula laci ción ón podrí podría a inte interf rfer erir ir con con much muchas as prueb pruebas as hemat hematol ológ ógic icas. as. Los Los extr extrem emos os late latera rale less y aplum plumad ado o debe deben n eval evalua uars rse e en búsq búsqu ueda eda de un núme número ro desproporcionado de leucocitos.,Las células más grandes ( por ejemplo los neutrófilos y los monocitos, monocitos, tienden tienden a acumularse más en estos lugares lugares y si el frotis está mal hecho, se acumularán más en estas áreas, las cuales están fuera del área ideal de observación.Si la mayoría de las células se encuentran en el borde aplumado, el frotis deberá descartarse y prepararse uno nuevo. 2.2 Análisis con alto poder. Con este objetivo existen dos problemas por resolver. En primer lugar, se debe seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial. Esta debe ser donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, y puede ser un área en donde se encuentren 200 eritrocitos eritrocitos por campo. Si la cuenta cuenta de leucocitos leucocitos es muy baja, puede puede ser necesario necesario incluir incluir áreas áreas fuera fuera del área área ideal ideal con el fín de encontrar encontrar suficien suficientes tes células células blancas.E blancas.Ell segundo problema por resolver con este objetivo, será estimar la cuenta total de leucocitos. Estando en el área ideal, contar el número de células blancas observadas en cinco a diez campos y determinar el promedio. El promedio, multiplicado por un factor de corrección que a menudo está entre 2000 y 2,500 ( 2 a 2.5 en miles) representará la cuenta total del del leucocitos. 2.3 Análisis Análisis con objetivo de inmersión. inmersión. Con este objetivo, la cuenta diferencial de leucocitos debe estimarse, la cuenta de plaquetas, también debe poder estimarse y los tres tipos de células ( leucocitos , eritrocitos y plaquetas ) deben observarse en búsqueda de anormalidades morfológicas. La cuenta diferencial consiste en identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos, y reportar reportar estos estos valor valores es como como un porcenta porcentaje. je. Es import important ante e inclui incluirr las células células de los márgenes, así como las del cuerpo del frotis. Así, para lograr esto, debe seguirse el patrón de observación de la imagen siguiente:

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El número de plaquetas también puede ser estimado con este objetivo. Empleando la misma área que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este número será será conve convert rtido ido en no. no. de plaque plaqueta tas/ s/μl μl de sangre sangre,, como como se hizo con con la cuenta cuenta de leucocitos. Deberá calcularse el número promedio de plaquetas por campo, y dicho número se multiplicará por un factor determinado por el propio laboratorio en base a la combinación de los objetivos y oculares empleados en sus microscopios. Por ejemplo, cada plaqueta, obser observa vada da repre represe sent nta a 15,0 15,000 00 plaq plaque ueta tass ó 20,0 20,000 00 / μl. μl. Si se lleg llegaro aron n a observ observar ar un promedio de 12 plaquetas por campo, entonces, la cuenta total de plaquetas sería de 180,000/ μl en el primer caso, ó 240,000 / μl en el segundo caso. La última actividad actividad a realizar con este objetivo, objetivo, sería evaluar evaluar la morfología morfología celular. Esto puede irse haciendo a medida que se va realizando la cuenta diferencial. Cualquier anorm anormal alid idad ad ó incl inclusi usión ón en célu célula lass rojas rojas y blanc blancas, as, deber deberá á repor reporta tars rse. e. Tamb Tambié ién n es importante importante evaluar la forma y el tamaño de los eritrocitos eritrocitos en esta misma área. Las células suelen suelen distor distorsio sionars narse e en áreas áreas muy delgad delgadas, as, ó demasi demasiado ado gruesas. gruesas. Las plaquet plaquetas as también deberán evaluarse en su tamaño y forma. Más de una forma inusualmente grande de plaquetas, en cada cinco campos deberán ser reportadas .

3. LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Equipo de laboratorio. Microscopio de Luz

3.2 Materiales de Laboratorio CANTIDAD 1

DESCRIPCIÓN Froti otis de sangre per periférica teñidos co con col colo orante de Wright

4. PROC PROCED EDIM IMIE IENT NTO. O. 4.1 Análisis con bajo poder. 4.1.1Evaluar la calidad de la tinción.

Hemostasia 19



4.1.2Examen en el borde aplumado del frotis en búsqueda de cúmulos de plaquetas ó filamentos de fibrina. 4.1. 4.1.3E 3Eva valu luar ar extr extrem emos os late latera rale less y aplu apluma mado do en búsq búsque ueda da de leuc leucoc ocititos os desproporcionados.

4.2 Análisis con alto poder. 4.2.1Seleccionar el área apropiada para iniciar la cuenta diferencial. 4.2.3Estimar la cuenta total de leucocitos. 4.3Análisis con objetivo de inmersión. 4.3.1Realizar el recuento diferencial, contando cien células en total, y diferenciando la línea celular a la que pertenecen. 4.3.2Realizar el recuento indirecto de plaquetas. 4.3.3B 4.3.3Busca uscarr anormal anormalida idades des morfol morfológi ógicas cas tanto tanto de los leucoc leucocito itoss como como de los eritrocitos y de las plaquetas.

ACTIVIDADES: - Reporte de resultados 1. Análi Análisis sis con bajo bajo pode poder. r. Calidad de la tinción:_________________________________________________ __________________________________________________________________ 1.1

Examen del borde aplumado del frotis ___________________________________ __________________________________________________________________ 1.2

Examen de lo los ext extremos laterales y aplumado del frotis.____________________________________________________________________ _________________ 1.3

2. Análi Análisis sis con alto pod poder. er. Seleccionar el área ideal para búsqueda de anormalidades en las células: (donde los eritrocitos se tocan, pero no se sobreponen, en el cuerpo del frotis )_que es la misma donde se realizará el recuento diferencial de 2.1

Hemostasia 20



leucocitos.________________________________________________________________ __________________

3. Análi Análisis sis con obje objetiv tivo o de inmersi inmersión. ón. 3.1

Recuento indirecto de plaquetas

3.2

Búsqueda de anormalidades morfológicas de:

plaquetas___________________________________________________________

HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 5 “RECUENTO DIRECTO DE PLAQUETAS “ 1.

INTRODUCCIÓN. El recuento recuento de plaquetas puede hacerse hacerse de manera directa directa y de manera indirecta. indirecta. El método directo, directo, a su vez, requiere de un contador electrónico electrónico que sea capaz de hacer el recuento de las diferentes células sanguíneas ( leucocitos, eritrocitos y plaquetas), plaquetas), ó en su defecto, podrá hacerse hacerse mediante el método método manual, en el que se empleará la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma. El método indirecto es muy útil cuando se tiene dudas sobre los resultados emitidos por cualquiera de los métodos métodos directo directos, s, y/ó como modo de confir confirmar mar éstos. éstos.Est Esto o sucede sucede por ejempl ejemplo, o, cuando la muestra no fue adecuadamente anticoagulada a la hora de ser tomada, ó cuando se tienen cifras anormalmente altas ó anormalmente bajas,

2. PRIN PRINCI CIPI PIO O Y METODO METODOLO LOGÍ GÍA A En el recuento directo de las plaquetas mediante la cámara de Neubauer, se mezcla la sangre sangre en la pipeta pipeta de de Thoma con un diluyen diluyente te que cause cause la hemólisis hemólisis de los eritrocitos. Se llena el hemocitómetro con dicha mezcla y se recuentan las plaquetas en la cuadrícula central, de preferencia con microscopio de contraste de fases y con el objetivo de 40X. Hemostasia 21


3.


LISTA DE REQUERIMIENTOS NÚMERO DESCRIPCIÓN 2 Tubos de recogida de muestras con EDTA 1 Aguja de de Vacutainer 1 Contenedor de Vacutainer 1 Jeringa 1 Torundas das de algodón odón con alcohol ohol isoprop propíílico 1 Ligadura 1 Cámara de Neubauer 1 Pipeta de Thoma 1 Boquilla y manguera para aspiración 3.1 Reactivos NUMERO 1

NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACIÓN Oxalato de amonio 1%

3.2 Equipo de Laboratorio 3.2. 3.2.1 1 Cent Centrí ríffuga uga 3.2. 3.2.2 2 Agit Agitad ador or eléc eléctr tric ico o 3.2. 3.2.3 3 Micr Microsc oscopi opio o de luz luz

3.3 Materiales de Laboratorio

Hemostasia 22

CANTIDAD 1 ml



4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Técnica 4.1.1 Si se obtiene la la muestra por punción digital, el sitio debe estar limpio y la sangre debe fluir libremente. Limpia la primera gota. Si la muestra es de sangre venosa debe obtenerse con una jeringa de plástico seca ( ó de vidrio siliconizado ) con aguja corta, de calibre no menor al 21.Retirar la aguja antes de poner la sangre en un tubo tubo de plás plástitico co con con EDTA EDTA.. La sang sangre re y el anti antico coag agul ulan ante te debe deben n mezclarse inmediata y cuidadosamente, cuidadosamente, para evitar la la formación de espuma. 4.1.2 4.1.2 El mezclado mezclado de la sangre sangre con anticoagu anticoagulan lante te debe realizar realizarse se suavemen suavemente te y durante unos cinco minutos. 4.1.3 Con la pipeta pipeta de Thoma, Thoma, aspirar aspirar sangre sangre hasta hasta la marca de 1.0 y se se diluye hasta la marca de 101 con el oxalato de amonio ( dil.1:100).Hacer por duplicado. 4.1.4 Colocar las pipetas pipetas en el agitador agitador de 10 a 15 minutos. minutos. 4.1.5 4.1.5 Llenar Llenar la cámara cámara de Neubaue Neubauerr con el conteni contenido do de las pipetas pipetas debidam debidament ente e mezclado, desechando las primeras 4-6 gotas. 4.1.6 4.1.6 Cubrir Cubrir la cáma cámara ra con una una caja caja de Petri Petri de 10 10 a 20 min, min, para para permiti permitirr que las las plaquetas se sedimenten. Colocar un pedazo de algodón ó de papel filtro mojados dentro de la caja para evitar la evaporación. 4.1.7 4.1.7 Emplea Empleando ndo el microsco microscopio pio de contrast contraste e de fases, fases, contar contar las plaqueta plaquetass en la cuadrí cuadrícu cula la centr central al dest destina inada da a la cuen cuenta ta de glób glóbul ulos os rojo rojoss ( 25 cuad cuadros ros centrales )calculando la cifra de plaquetas como sigue: No. De plaquetas /μl= No de plaquetas contadas X factor de dilución( 100) X factor de corrección de volumen ( 10)= No de plaquetas contadas X 1000.

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Cuadrículas ( L ) para recuento de glóbulos blancos

El recuento de plaquetas se realiza en los 25 cuadros del cuadrante central.

Factores de Error en las Cuentas Celulares. 4.2.1 4.2.1 Cuando Cuando se use sangre capilar capilar se requiera requiera una gota gota que fluya fluya libremente. 4.2.2 Las Las mues muestr tras as de sang sangre re anti antico coag agul ulad ada a se debe deben n mezc mezcla lar r cuid cuidado adosa same ment nte e invirt invirtie iend ndo o el tubo tubo de sangr sangre e por por lo meno menoss 20 veces. No se debe agitar el tubo pues se forma espuma que impide medir cantidades exactas. Inclinar el tubo bien mezclado a un ángulo de 45°, ó ligeramente mayor, y pipetear del borde superior del tubo siguiendo las mismas indicaciones que para sangre capilar. 4.2. 4.2.3 3 Las pipet pipetas as deben deben est estar ar lim limpi pias as y seca secas. s. 4.2.4 Tomar las muestras muestras con la pipeta pipeta en forma forma rápida rápida y precisa. precisa. Si se rebasa rebasa la línea del volumen deseado ligeramente, ligeramente, ajustar tocando un papel absorbente absorbente con la punta de la pipeta, 4.2

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4.2. 4.2.5 5 Limp Limpia iarr el ext exter erio iorr de la pipe pipeta ta ant antes es de de intr introd oduci ucirl rla a en la la soluc solució ión n disolvente. 4.2.6 La cámara cámara se llena por acción acción capila capilar, r, regulando regulando el flujo flujo del líquido líquido de la pipeta, pipeta, para que fluya fluya suave suave y rápidamente, rápidamente, Llenar Llenar la cámara cámara completamente completamente,, sin permitir que el líquido rebase los límites. Esperar de 10 a 20 minutos a que las células se asienten en el área de conteo. Proseguir con el conteo. 4.2.7 La cámara del hemocitómetro y el cubreobjetos deben estar limpios y secos secos antes antes de usarse usarse.. Esto evit evita a errores errores graves graves que que se produce producen n por las las huellas digitales y las superficies aceitosas.

1.

ACTIVIDADES. Reportar resultados

- Reporte de resultados .________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________

2. Enum Enumer erar ar todo todoss los los casos casos en que que pued pueda a hab haber er aume aument nto o ó dism dismin inuci ución ón de plaquetas.

HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 6 Hemostasia 25



“TIEMPO DE COAGULACIÓN “

INTRODUCCIÓN. El tiem tiempo po de coag coagul ulac ació ión n es un estu estudi dio o crea creado do en 1939 1939.. Nos Nos da un indi indici cio o aproximado de la eficacia global del mecanismo intrínseco de la coagulación. La prueba carece de valor para las insuficiencias ligeras de distintos factores, porque basta con una pequeña pequeña cantida cantidad d de trombina trombina para producir producir un coágulo coágulo fibrina. fibrina. Todavía Todavía es menos útil para las anomalías de las últimas etapas de la coagulación. 1.

PRINCIPIO Y METODOLOGÍA El tiempo de coagulación coagulación mide el intervalo intervalo de tiempo necesario necesario para que una muestra muestra de sangre complet completa a recién obtenid obtenida a coagule coagule in vitro vitro a 37°C y evalúe evalúe en forma forma general general el mecanismo de coagulación intrínseco. Dos son las finalidades más relevantes de este método: 2.

1. Evaluar la función función del sistema sistema intrínseco intrínseco de la coagulac coagulación ión sanguínea. 2. Vigilar la eficiencia de la administración de heparina. 3

.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1Equipo de laboratorio. 3.1.1Baño María a 37°C 3.1.2Cronómetro

3.2Material de Laboratorio. CANTIDAD 3 1

4.PROCEDIMIENTO.

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DESCRIPCIÓN Tubos de vidrio de 12X75 gradilla



4.1 Método de Lee-White 1. Se extrae sangre venosa con una una jeringa jeringa de 5 ml, y una aguja gruesa ( del No.18 ó 19 ). La punción venosa debe ser perfecta, pues la contaminación con linfa puede modificar los resultados. Preparar el baño María a 37°C, colocando una gradilla dentro de él, con 3 tubos de 2. 12 X 75. 3. Se le realiza realiza al pacient paciente e una punción punción de 3 ml poniendo poniendo en marcha marcha el cronómet cronómetro ro en el momento en que entra la sangre a la jeringa. 4. Terminada Terminada la punción, punción, se deposita deposita 1ml de sangre sangre en cada cada tuboy se vigilan vigilan cada 30 seg., inclinándolos suavemente y anotando el tiempo en que coagula cada uno de ellos. 5. Se suman los los tres tiempos, tiempos, y se calcula calcula el promedio, promedio, obteniendo obteniendo así el el resultado. resultado. 6. Durante Durante el proceso, evitar evitar la agitación, agitación, que que podría retardar retardar el tiempo tiempo de coagulación coagulación..

4.2 Valores de Referencia: 4-10 minutos ACTIVIDADES. Realizar la toma se muestra sanguínea como se indica y continuar con los demás pasos de la técnica. Realizar cálculos y obtener resultados. - Reporte de resultados .________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________ Anotar observaciones.

HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 7 “OBSERVACIÓN DEL COÁGULO “ Hemostasia 27



1.

INTRODUCCIÓN. La observación del coágulo formado en un tubo de ensayo proporciona información sobre: a) La concentración concentración del fibrinó fibrinógeno,b geno,b)) el número y función función de las plaquetas plaquetas y c) la actividad del sistema fibrinolítico.

2.

PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 2.1

Aproxim Aproximadam adament ente e el 30% del volume volumen n total total de sangre sangre en el tubo tubo debe debe coagularse En casos de trombocitopen trombocitopenia ia ó de disfunción disfunción plaquetaria plaquetaria muy anormal, anormal, como en la trombastenia, se forma un coágulo grande de estructura débil. Asimismo, Asimismo, en casos de paraproteinem paraproteinemia ia ( mieloma mieloma ó macroglobuline macroglobulinemia mia de Waldenstrom), la retracción del coágulo puede estar muy trastornada. Un coágulo pequeño pequeño de forma regular regular ocurre cuando la concentración concentración del fibrinógeno es baja. Un coágulo pequeño de forma irregular se observa cuando el incremento en la acti activi vida dad d fibr fibrin inol olít ític ica a lo digi digier ere, e, como como ocur ocurre re en la coag coagul ulac ació ión n intravascular diseminada ( CID ). No se observa formación de coágulo alguno.

2.2

2.3 2.4 2.5

1

2.6

2

3

4

Causas de error Tubos de ensayo sucios Contaminación de sangre con anticoagulante

3.

LISTA DE REQUERIMIENTOS.

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3.1Equipo de Laboratorio. Baño María a 37°C

3.2Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIÓN 2 Tubos de vidrio de 13 X 100 de fondo redondo 1 Gancho de alambre 1 Aplicador de madera 1 Caja Petri con papel filtro dentro de ella 1 Jeringa de 5 ml ó Sistema Vacutainer 1 Ligadura 1 Torunda con alcohol isopropílico

4.

PROCEDIMIENTO 4.1 Tomar una muestra de sangre y depositar la muestra en un tubo de vidrio de 13 X 100 4.2 4.2 Colo Coloca carr el tubo tubo con con la la mues muesttra de de sang sangre re en en el bañ baño o Marí María a a 37°C 37°C durante 3 horas. 4.3 4.3 Obse Observ rvar ar despu después és de tran transc scur urri rido do este este tiem tiempo po,, la forma forma del coágu coágulo lo,, rodeado de suero 4.4 4.4 .Ayu .Ayuda dars rse e con con el ganc gancho ho de de alam alambr bre e para para vac vacia iarr el con conte teni nido do del del tub tubo o lentamente a la caja de Petri con un papel filtro dentro de ella. 4.5 4.5 Obser Observar var y busca buscarr un coá coágu gulo lo pequ pequeñ eño o en cas caso o de que que en en el tub tubo o no se se haya apreciado un coágulo grande. ACTIVIDADES Reportar Reportar resultados resultados mediante la descripción descripción del coágulo coágulo formado, formado, ó reportar reportar la ausencia de éste. - Reporte de resultados .________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ________________________________________________________________ ___________________________

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HEMOSTASIA: PRÁCTICA NO 8 TIEMPO DE SANGRADO 1.INTRODUCCIÓN. El tiem tiempo po de sangr sangrad ado o es una una medi medida da de Inte Integr grid idad ad vascu vascula larr y plaq plaquet uetari aria. a. Las plaquetas se adhieren a la colágena expuesta ( subendotelial) y después entre ellas, para formar un agregado que obtura la herida. Para la agregación plaquetaria, plaquetaria, también es necesario un factor del plasma: el factor de Von Willebrand.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA El tiempo de sangrado se mide determinando el tiempo necesario para que dejen de sangrar los pequeños vasos subcutáneos que han sido lesionados por una Incisión estandarizada. Uno de los mayores problemas que confronta la medición del tiempo de sangrado es la reproducibilidad. Por esta razón se han desarrollado tres generaciones de pruebas, cada una con aumento en la estandarización de la herida en profundidad y longitud. El método más antiguo es el de Duke, que consiste en hacer una punción del lóbulo de la oreja con una lanceta estéril. La desventaja de este método es que es muy difícil estand estandar ariz izar ar la prof profund undid idad ad de la inci incisi sión. ón. Adem Además, ás, si el paci pacien ente te tiene tiene un serio serio problema hemorrágico, el sangrado en el tejido celular blando del lóbulo de la oreja puede causar un hematoma grande. El método de Ivy está mejor estandarizado que el de Duke. Se utiliza una lanceta ó estilete estilete para producir una incisión incisión en la cara anterior anterior del antebrazo. antebrazo. La navaja tiene un tope que "mita la profundidad de la Incisión. Además, como la cara anterior del antebrazo es suficientemente larga para permitir varias incisiones, pueden hacerse dos ó tres de ellas y promediar promediar sus resultados. resultados. Adicionalmente Adicionalmente,, en este método está mejor estandarizada la presión del sistema vascular, ya que un esfingomanómetro que se coloca en el brazo (40 mmHg), mantiene la presión venosa dentro de límites reducidos.

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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Equipo de Laboratorio Esfingomanómetro Cronómetro.

3.2Material de Laboratorio CANTIDAD 1 1 1

DESCRIPCIÓN Lancetas desechables estériles Tiras de papel filtro Torundas de algodón con alcohol

4.PROCEDIMIENTO 4.1 Técnica: Método de Duke. 1. Limpia Limpiarr perfectam perfectament ente e el lóbulo de la oreja oreja o la yema de un dedo con una torund torunda a con alcohol. Dejar secar . 2. Punc Puncio ionar nar el siti sitio o eleg elegid ido o con con la lanc lancet eta, a, echa echando ndo a andar andar al mism mismo o tiem tiempo, po, el cronómetro. La punción debe hacerse en un solo movimiento, introduciendo la lanceta hasta el fondo y sin hacer movimientos laterales de ésta para no rasgar la piel o hacer más amplia la punción. 3. Sin tocar tocar la piel, con con una t'ra de papel papel filtro, filtro, secar la la gota de sangre sangre que salga por por el sitio de pund6n cada 30 segundos, hasta que ea papel flltro ya no absorba sangre. 4. Anotar Anotar el el tiemp tiempo o en que que deje deje de sangra sangrarr . Ventajas: es muy sencillo de realizar . Desve Desvent ntaj ajas as:: Las Las cond condic icio iones nes de la prueb prueba a no son son cons consta tant ntes, es, por lo tant tanto o los los resultados son imprecisos.

4.2 Técnica: Método de Ivy. 1. Colocar Colocar el brazalete brazalete del esfingoma esfingomanómetro nómetro en en el brazo del paciente paciente.. limpiar limpiar la cara anterior del antebrazo con una torunda de algodón mojada en alcohol y dejar secar . 2. Inflar Inflar el brazalet brazalete e a 40 mmHg y esperar esperar 30 segund segundos os para permiti permitirr que el llenad llenado o capilar se equilibre. 3. Hacer Hacer tres incision incisiones es en la cara anterior anterior del antebrazo antebrazo,, de preferen preferencia cia donde donde no existe vello y evitando las venas superficiales.

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4. Poner Poner a andar andar un cronómet cronómetro ro para cada herida herida en el momento momento en que comience comience el sangrado, lo que ocurre, generalmente, de 15 a 30 segundos después. 5. Si el sangrado sangrado no se inicia inicia antes de 30 segundos segundos de efectuada efectuada la incisi incisión, ón, oprimir oprimir suavemente la herida entre dos dedos ( esto no modifica el resultado final). 6. Absorbe Absorberr la sangre sangre con el papel papel filtro filtro circular circular cada 15 segundos. segundos. Debe Debe evitarse evitarse el contacto directo entre el papel filtro y la herida. 7. El tiempo tiempo de Sangrad Sangrado o correspon corresponde de al momento momento en que la sangre ya no mancha mancha el papel filtro. Registrar el tiempo en el que esto ocurre para cada incisión . 8. Sacar el promedio promedio del tiempo tiempo de las las tres heridas. heridas. 9. Limpiar Limpiar los sitios sitios de incisión incisión y cubrirlos cubrirlos con vendas adhesiva adhesivass estériles. estériles. Vent Ventaj ajas as:: Las Las cond condic icio ione ness de prue prueba ba son son cons consta tant ntes es,, por por lo que que tien tiene e mayo mayor r reproducibilidad. Desventajas: Es un poco más laboriosa para realizar.

4.3 Valores de Referencia. Método de Duke: 1 a 4 minutos Método de Ivy: de 2 a 6 minutos

- Reporte de resultados .________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________ _________________________________________________________

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HEMOSTASIA: PRÁCTICA No.9 VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR 1. INTR INTROD ODUC UCCI CIÓN ÓN.. La Velocidad de Sedimentación Globular ( VSG ) es útil para monitorizar la evolución de una enfermedad inflamatoria ó diferenciar enfermedades similares. la VSG es normal en los pacientes con artrosis, pero está elevada en los que presentan fiebre reumática, artrit artritis is reum reumat atoi oide dea a o artr artrititis is pióge piógena na.. Esta Esta elev elevada ada en las las fase fasess inic inicia iale less de la enfermedad inflamatoria pelviana aguda o de un embarazo ectópico roto, pero es normal en las primeras horas de una apendicitis aguda. Puede usarse para indicar tuberculosis pulmonar activa.

2. PRINCI PRINCIPIO PIO Y METO METODOL DOLOGÍ OGÍA A Cuando Se deja sangre anticoagulada en reposo un tiempo a temperatura ambiente, los eritrocitos sedimentan hacia el fondo del tubo. La VSG es la cantidad de milímetros que los eritrocitos sedimentan en 1 hora, y es afectada por los eritrocitos, el plasma y factores mecánicos y técnicos. Los eritrocitos tienen una carga superficial neta negativa, por consiguiente tienden a repelerse entre sí. Las fuerzas repulsivas se neutralizan en forma parcial ó total si hay aumento de la cantidad. de proteínas plasmáticas con carga positiva; los eritrocitos sedimentan con mayor rapidez debido a la formación de agregados de eritrocitos o "rodillos". Los ejemplos de macromoléculas que pueden producir esta reacción son: fibrinógeno, beta globulinas e inmunoglobulinas patológicas. Los erit eritro roci cito toss norm normal ales es tien tienen en una una masa masa relat relativ ivam amen ente te pequ pequeña eña y sedim sediment entan an despa despaci cio. o. Algun Algunas as enferm enfermed edade adess como como el miel mielom oma a múlt múltip iple le,, pueden pueden causa causarr la form formac ació ión n de "rod "rodilillo los" s" debi debido do a la alte altera raci ción ón del del fibr fibrin inóg ógen eno o y las las glob globul ulin inas as plas plasmá mátitica cas. s. Esta Esta alter alteraci ación ón cambi cambia a la super superfifici cie e del del eritr eritroc ocitito, o, lo que que gener genera a su aglutinación, aumento de su masa, y una VSG más rápida. esta última es directamente proporcional a la masa del eritrocito e inversamente proporcional a la viscosidad del plasma.

3. LISTA LISTA DE REQUER REQUERIMI IMIENT ENTOS OS 3.1 Material Material de Laboratorio Laboratorio CANTIDAD 1 1 1 1

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DESCRIPCIÓN Tubio de Wintrobe graduado Pipeta Pasteur Gradilla pa para tubos de Wintrobe Tubo con sangre anticoagulada



4.PROCEDIMIENTO. 4.1 Técnica 1. Llenar la la pipeta pipeta de Wintrobe Wintrobe graduada graduada hasta hasta la marca cero cero con sangre sangre anticoagulada con EDTA. 2. colocar colocar la pipeta pipeta en el soporte soporte y dejar dejar sedimentar sedimentar sin tocar 60 min min 3. registrar registrar la cantidad cantidad de milímetros milímetros que descendi descendieron eron los eritrocit eritrocitos. os. La capa leucocitaria no debe incluirse en la Lectura. 4. La VSG se se inform informa a como 1 hora= hora= ______ _________m ___mm m

4.2 Valores de Referencia. Edad

VSG (mm/hr)

Niños

0 a 10

Hombres <50 años >50 años

0 a 15 0 a 20

Mujeres <50 años >50 años

0 a 20 0 a 30

ACTIVIDADES Reportar los resultados obtenidos. - Reporte de resultados .______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________ ____________________________________________________________________

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HEMOSTASIA: PRÁCTICA No.10 MEDICIÓN DEL SISTEMA EXTRÍNSECO TIEMPO DE PROTROMBINA ( TP } EN UNA ETAPA 1. INTR INTROD ODUC UCCI CIÓN ÓN.. El análisis de tiempo tiempo de Protrombina Protrombina es sensible sensible a las deficiencias deficiencias del sistema sistema extrínseco extrínseco de la coagulación ( factores I, II, V, VII ó X ). El TP se utiliza como exploraci6n prequirúrgica para detect detectar ar posibl posibles es problem problemas as hemorrá hemorrágic gicos. os. Un TP prolon prolongad gado o General Generalmen mente te es indicativo de un nivel bajo en uno o más de los factores del sistema de coagulación extrínseco ó común, cuya causa pueden ser trastornos hereditarios de la coagulación, una deficiencia de vitamina K, problemas hepáticos ó ingestión de fármacos. El TP es el análisis de laboratorio más corriente empleado para monitorizar la terapia anticoagulante oral, puesto que es sensible a los factores VII y X. No es sensible sensible a las deficiencias deficiencias del sistema intrínseco intrínseco ( factores factores VIII. IX. XI y XII ) ó a las disfunciones plaquetarias. No puede utilizarse para la monitorización de la terapia de heparina, para la cual está recomendada la determinación del Tiempo de activación Parcial de Tromboplastina ( ATTP)

2. PRIN PRINCI CIPI PIO O Y METODO METODOLO LOGÍ GÍA A El TP es el tiempo requerido para que se coagule el plasma después de agregarle tromboplastina tisular v una cantidad óptima de cloruro de calcio, reponiendo el calcio que fue inactivado con el anticoagulante y agregando una tromboplastina completa para activar la vía extrínseca. El método de referencia de la Prueba del TP en una etapa es el recomendado por el Consejo Internacional de Estandarización en Hematología/Consejo Internacional de Trombosis y Hemostasia (CIEH/CITH). Los resultados obtenidos dependen de numerosos factores como la temperatura, la calidad del agua, el pH, la fuerza iónica, el método de ensayo utilizado, la recogida y conservación de las muestras, y la población de pacientes en consideración. Los rangos normales de muestras deben ser establecidos para cada laboratorio. Para cada nuevo lote de tromboplastina ( preparada en el laboratorio ó comercial ), se deben deben establ establecer ecer valore valoress normal normales es en muestr muestras as de plasma, plasma, de aproxim aproximadam adament ente e 20 hombres ó mujeres que no estén tomando anticonceptivos. Para ello, no es necesario que todas las pruebas se efectúen el mismo día. Es preferible hacerlas en días distintos pues así se consigue agregar la variabilidad de día a día. La media y la desviación estándar se calculan a partir de los resultados. Hemostasia 35



El resultado de la prueba en segundos se convierte a Porcentaje de Actividad normal por medio de una curva de referencia. El Índice de tiempo de Protrombina se calcula dividiendo el TP por el TP medio Del rango normal del laboratorio, representado por una muestra testigo normal. Para emplearse en el control de la medicación anticoagulante, el Índice de Protrombina debe debe desi design gnar arse se en los los info inform rmes es de labo labora rato tori rio o de mane manera ra está estánd ndar ar como como Tasa Tasa Normalizada Internacional de Protrombina ó INR del inglés International Normalizad Ratio. SE SUGIERE PUES, REPORTAR DE LA SIGUIENTE MANERA: TIEMPO DE PROTROMBINA: Testigo del dia ……………………………………..X segundos Plasma Problema …………………………….... …X segundos Porcentaje de actividad ……………………… ……….% INR ………………………………………………………X

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reacti Reactivos vos NUM NOMBRE DEL REACTIVO 1 Reactivo de Tromboplastina.* 2 Diluyente** 3 Anticoagulante Citrato de sodio

CONC 3.2 a3.8%

CANTIDAD 200μl 10 ml 1gota/ml de sangre

*Reactivo de Tromboplastina: Tromboplastina tisular procedente de cerebro de conejo, iones de Caldo V estabilizador . **Dilu **Diluyent yente. e. Estabi Estabiliz lizador adores es y Conserv Conservant antes. es. Contie Contiene ne azida azida sódica sódica al 0.05% 0.05% como conservante.

3.2 Equipo Equipo de Laboratorio Laboratorio - Baño Baño Marí María a con con term termost ostat ato o a 37º C - Cronometro.

3.3 Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIÓN 1 Micropipeta con punta desechable 1 Tubos de recogi ogida al vacío cío con citrato ato de sodio al 3.2% ó 3.8%. 1 Gradilla. 3 Tubos de de en ensayo de de fo fondo re redondo qu que qu quepan en en la Gr Gradilla. 1 Gancho de alambre me metálico,

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4.PROCEDIMIENTO 4.1Técnica.. 4.1. 4.1.1 1 Calen Calenta tarr previ previam amen ente te un volum volumen en sufi sufici cient ente e del del react reactiv ivo o de trom trombo bopl plast astin ina a reconstituido a 37ºC .Tomar las precauciones necesarias para Impedir la evaporación y no mantener a 37ºC sin tapón durante duran te más de 60 minutos antes del uso. 4.1.2. Etiquetar un tubo de ensayo para cada muestra ( paciente y control) del análisis. 4.1.3. 4.1.3. Agregar 0.1 0.1 ml de muestra muestra al tubo tubo apropiado. apropiado. 4.1.4 Incubar cada muestra muestra y control control a 37ºC de de 3 a 10 min. min. 4.1.5 Con fuerza, fuerza, agregar agregar 0.2 ml del del reactivo reactivo de tromboplast tromboplastina ina precalentad precalentado, o, y al mismo mismo tiempo, iniciar el cronometraje de detección de coagulación. 4.1.6 Anotar el tiempo tiempo en segundos segundos requerido requerido para detectar detectar la coagulació coagulación. n.

4.2 Preparación de la Muestra y del Reactivo. 4.2.1Muestra: No es necesario que el paciente esté en ayunas ni se someta a otra preparación especial. Se recomienda plasma con anticoagulante de citrato de sodio al 3.2% en una proporción de nueve partes de sangre por una de anticoagulante. 4.2.2Reactivo: El reactivo se prepara de la siguiente manera: Reconstituir un vial de reactivo de tromboplastina con un vial de diluyente. Los dos componentes deben ser del mismo lote del kit. Volver a tapar el vial e invertirlo suavemente varias veces para garantizar una rehidratación completa. Dejar reposar durante 30 min. A tempe empera rattura ura ambi ambien ente te.. Inver nverti tirr suav suavem emen entte ante antess de su uso uso para para gara garant ntiz izar ar homogeneidad .El reactivo permanece estable durante cuatro días si se mantiene en el vial origi origina nal,l, tapad tapado o hermé hermétitica came ment nte e y se almac almacena ena a 2-8ºC, 2-8ºC, y regis registr trar ar la fech fecha a de la reconstitución en la etiqueta del vial. ACTIVIDADES: - Realizar la determinación del TP problema y del TP del testigo normal y reportar en segundos. TIEMPO DE PROTROMBINA: Testigo del dia ……………………………………..segundos Plasma Problema …………………………….... segundos Porcentaje de actividad ……………………… ……….% INR ……………………………………………………… Hemostasia 37



- Realizar un esquema ( dibujado) de la vía de la reacción de de la coagulación de TP en en la que se agrega reactivo de tromboplastina, que incluye factor tisular, fosfolípido y Ca++. - Explicar, en base al esquema, un TP prolongado, para deficiencias de qué factores es más sensible y para cuáles es menos sensible.

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HEMOSTASIA: PRACTICA NO.11 "CURVA DE CALIBRACIÓN PARA TIEMPO DE PROTROMBINA" 1.

INTRODUCCIÓN.

El resultado de la prueba de TP ( en segundos) se convierte a porcentaje de actividad normal por medio de una curva de calibración.

PRINCIPIO Y METODOLOGÍA . La Curva de Calibración se prepara mediante el análisis de diluciones de una mezcla de plasmas citratados normales o material de referencia. 2.

3.LISTA DE REQUERIMIENTOS 3.1 Reacti Reactivos vos NUM NOMBRE DEL REACTIVO 1 Reactivo de Tromboplastina.* 2 Diluyente** 3 Anticoagulante Citrato de sodio 4 Solución Salina Fisiológica

CONC 3.2 a3.8%

CANTIDAD 200μl 10 ml 1gota/ml de sangre 10 ml

*Reactivo de Tromboplastina: Tromboplastina tisular procedente de cerebro de conejo, iones de Caldo V estabilizador . **Diluyente. Estabilizadores y Conservantes. Contiene azida sádica al 0.05% como conservante.


3.3 Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIÓN 1 Micropipeta con punta desechable 1 Tubos de recogi ogida al vacío cío con citrato ato de sodio al 3.2% ó 3.8%. 1 Gradilla. 3 Tubos de de en ensayo de de fo fondo re redondo qu que qu quepan en en la Gr Gradilla. 1 Gancho de alambre me metálico, 1 Pool de 5 ó 6 plasmas citratados de pacientes normales. Hemostasia 39



4.PROCEDIMIENTO 4.1 Técnica 4.1.1Preparar las diluciones en solución salina fisiológica según el siguiente esquema. Porcentaje de actividad Dilución Plasma Solución salina

100% Sin diluir 0.5ml 0.0ml

50% 1:2 0.5ml 0.5ml

25% 1:4 0.5ml 1.5ml

12.5% 1:8 0.5ml 3.5ml

4.1.2 Se toma 0.1 ml de cada una de las diluciones y se procede a determinar el tiempo de protrombina por duplicado de cada una de ellas. 4.1.3 Con los datos obtenidos, se traza una curva en papel milimétrico, poniendo el tiempo en segundos en el eje de las ordenadas y la concentración en porcentaje en el eje de las abcisas.

4.2 Resultados. Por Porcent centaj ajee de acti activi vida dad d 100% 50% 25% 12%

Tiemp iempo o de prot protrrom ombi bina na en segu segund ndos os

ACTIVIDADES: Realizar las diluciones como se Indica en la tabla y seguir el procedimiento para las determinaciones de Tp a cada una de ellas. Transferir los datos en papel milimétrico como se indica arriba trazando la curva correspondiente. Efectuar lo mismo en la tabla que se presenta abajo.

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HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 12 CONTROL DE LA TERAPÉUTICA ANTICOAGULANTE: CÁLCULO DE LA TASA NORMALIZADA INTERNACIONAL TNI ó INR 1.INTRODUCCIÓN. El control de la medicación anticoagulante oral se basa en el tiempo de protrombina en una etapa ( TP ) con tromboplastina. El TP debe expresarse como la relación del TP del enfe enferm rmo o con con la del del plasm plasma a norm normal al cont control rol.. Para Para contr control olar ar de maner manera a conf confia iabl ble e la terapé terapéuti utica ca antico anticoagul agulant ante, e, el labora laborator torist ista a y el médico médico deben deben estar estar capacit capacitados ados para comparar sus resultados con los de otros laboratorios y también con los de su propio laboratorio, empleando diversos lotes de tromboplastina. Para este propósito, la OMS recomienda recomienda que todas las tromboplasti tromboplastinas nas deban calibrarse comparándolas comparándolas con un Índice Inte Interna rnaci cion onal al de Sensi Sensibi bililida dad d ó IIS. IIS. La OMS OMS ha estab estable leci cido do un está estánd ndar ar prim primar ario io



HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 12 CONTROL DE LA TERAPÉUTICA ANTICOAGULANTE: CÁLCULO DE LA TASA NORMALIZADA INTERNACIONAL TNI ó INR 1.INTRODUCCIÓN. El control de la medicación anticoagulante oral se basa en el tiempo de protrombina en una etapa ( TP ) con tromboplastina. El TP debe expresarse como la relación del TP del enfe enferm rmo o con con la del del plasm plasma a norm normal al cont control rol.. Para Para contr control olar ar de maner manera a conf confia iabl ble e la terapé terapéuti utica ca antico anticoagul agulant ante, e, el labora laborator torist ista a y el médico médico deben deben estar estar capacit capacitados ados para comparar sus resultados con los de otros laboratorios y también con los de su propio laboratorio, empleando diversos lotes de tromboplastina. Para este propósito, la OMS recomienda recomienda que todas las tromboplasti tromboplastinas nas deban calibrarse comparándolas comparándolas con un Índice Inte Interna rnaci cion onal al de Sensi Sensibi bililida dad d ó IIS. IIS. La OMS OMS ha estab estable leci cido do un está estánd ndar ar prim primar ario io internacional de referencia de cerebro humano, y posteriormente, estándares de referencia de tromboplastinas humanas, de res y de conejo. Estas preparaciones han sido calibradas en relación con el estándar primario original al que se le adjudicó un IIS de 1.0 Debido al ries riesgo go biol biológ ógic ico o impl implica icado, do, el cere cerebro bro huma humano no no debe debe util utiliz izars arse e como como fuent fuente e de tromboplastina. 2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 2.1 Interpretación. La TNI o INR de los pacientes que estén bajo tratamiento con anticoagulantes orales, tales romo la warfarina, debe mantenerse dentro de los límites terapéuticos, ajustando la dosis ron determinaciones periódicas de TP, habitualmente cada 2 a 3 semanas. Se recomiendan los siguientes límites:

Condición -Profilaxis preoperatorio de trombosis venosa profunda -Profilaxis para cirugía de cadera ó para operar un fémur fracturado -Tratamiento de trombosis venosas profundas ó de embolia pulmonar -Episodios Transitorios de Isquemia -Trombosis venosas recurrentes profundas ó de embolia pulmonar -Infarto del miocardio -Injertos arteriales -Prótesis valvulares cardiacas e injertos

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TNI o INR 2.0- 2.5 2.0- 3.0 2.0 -3.0 2.0 -3.0 3.0 -4.5 3.0 -4.5 3.0 -4.5 3.0 -4.5

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Si se prolonga la TNI ó INR, ( > 5.0 },es probable que ocurran hemorragias espontáneas. Cuando el paciente informa alguna hemorragia, la TNI ó INR debe determinarse de inmediato. También debe efectuarse un seguimiento cuidadoso de la TNI ó INR en los pacientes que se encuentran recibiendo otros medicamentos, particularmente aquellos que se sabe aumentan 6 disminuyen el efecto de los anticoagulantes, como se muestra en la tabla de abajo. Los anticoagulantes orales pueden lesionar al feto. Deben interrumpirse al primer signo de embarazo y sustituirse por heparina. A diferencia diferencia de la terapéutica anticoagulant anticoagulante e por vía oral, la anticoagulaci anticoagulación ón con heparina, heparina, sin embargo, no está bien estandarizada.

INCREMENTAN SU EFECTO CIRCUNSTANCIAS CLÍNICAS Tras rastorno rnos hepá epáticos Desnutrición Desnutrición Este Esteat atorr orrea ea Diarrea Carc Carcin inom oma a en Vísc Víscer eras as fieb fiebre re e Infe Infecc cció ión n Insuf suficiencia card ardíaca Insuficiencia renal Tirotoxicosi Tirotoxicosiss Radioterapia Radioterapia Alcoho Alcoholis lismo mo

MEDICAMENTOS Acido aceti etilsali alicílico Alopurinol Alopurinol Ampic Ampicililin ina a Esteroides anabólicos Aspir spiriina Clor Cloram amfe feni nico coll Clofibrato ato Medicamentos citotóxicos Neomicina Neomicina Fenilbutazo Fenilbutazona na Sulfon Sulfonami amidas das Antidepresivos tricíclicos DISMINUYEN SU EFECTO

Antiácidos Barbitúricos Colestiramina Corticosteroides Diuréticos Estrógenos Anticonceptivos orales Fenitoína Rifampicina

2.2 Cálculos. El TNI ó INR ( por sus siglas en inglés Internacional Normalizad Ratio ) se calcula por medio del Índice Internacional de Sensibilidad IIS y el Índice de Protrombina de la siguiente manera: ISI

Índice de TP = Tasa Normalizada Internacional o INR = (Índice de TP)

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Para cada lote de reactivo de tromboplastina, se determina su valor de IIS mediante su calibración relativa a un Preparado de Referencia Internacional, y se suministra en el cuadro de valores de INR del reactivo. ACTIVIDADES. Efectuar el cálculo del INR a partir de las determinaciones del TP realizadas a las muestras problema.

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HEMOSTASIA: PRACTICA NO. 13 MEDICIÓN DEL SISTEMA INTRÍNSECO TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA ( TTPa ) 1.

INTRODUCCIÓN

Esta prueba mide la actividad procoagulante intrínseca del plasma. Esta prueba es sensible a todos los factores factores que intervienen intervienen en el sistema sistema intrínseco, y no mide la actividad de los factores VIl y XIII.

2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA. 2.1 Principio. La tromboplastina parcial es un sustituto del factor plaque tario 3 ( fosfolípidos de cerebro de conejo). La activación por contacto se estandariza añadiendo un activador como caolín, celita ó ácido elágico al reactivo. 2.2 Metodología Metodología : Preparación Preparación de las Muestras. Muestras. En un tubo limpio, conteniendo una parte de sol. Anticoagulante , añadir 9 partes de sangre recién obtenida. Mezclar con suavidad. Conservar el tubo en refrigerador ó en hielo picado. Ante Antess de real realiz izar ar la prue prueba ba,, cent centri rifu fuga garr y sepa separa rarr el plas plasma ma.. Las Las prue prueba bass debe deben n complementarse dentro de las 4 horas siguientes a la obtención de la muestra. 3.LISTA DE REQUERIMIENTOS. 3.1 Reacti Reactivos vos NUM NOMBRE DEL REACTIVO 1 Reactivo de Tromboplastina Parcial* 2 Cloruro de calcio

CONC 0.025 M

CANTIDAD 200μl 10 ml

*Fosfolípidos de cerebro de conejo adicionado de partículas de sílice micronizada que actúan como activador ( superficie de contacto) y tampón ácido.


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3.3 Material de Laboratorio CANTIDAD DESCRIPCIÓN 1 Micropipeta con punta desechable 1 Tubos de recogi ogida al vacío cío con citrato ato de sodio al 3.2% ó 3.8%. 1 Gradilla. 3 Tubos de ensayo de 12 X 75 1 Gancho de alambre me metálico,

3. PROC PROCED EDIM IMIE IENT NTO O 3.1TÉCNICA. ( método manual) . 3.1.1. 3.1.1. Calentar Calentar previamente previamente a 37°C un volumen suficient suficiente e de solución de cloruro de Calcio 0.025M. 3.1.2. 3.1.2. Identificar Identificar un tubo de ensayo para cada muestra muestra a analizar ( pacientes pacientes y controles). Se aconseja hacer las pruebas por duplicado. 3.1.3 Dispensar Dispensar 0.1 ml ml de plasma plasma a su tubo tubo correspondient correspondiente. e. Añadir Añadir 0.1 ml del reactivo reactivo de tromboplastina parcial a cada tubo. 3.1.4. 3.1.4. Incubar a 37°C durante durante 5 minutos minutos exactos ( tiempo de activació activación). n). 3.1.5. 3.1.5. Inmediatamen Inmediatamente te añadir 0.1 ml de solución de Ca 0.025M. 0.025M. Simultáneament Simultáneamente e poner el cronómetro en marcha y determinar la formación del coágulo. 3.1.6. 3.1.6. Anotar el tiempo tiempo en segundos, transcurridos transcurridos hasta hasta la formación del coágulo. coágulo. ACTIVIDADES - Efectuar la prueba de TTPa en el plasma problema y anotar el resultado en segundos. - Realizar Realizar un esquema ( dibujado) de la vía de la reacción de la coagulación coagulación de TTPa en la que se agrega reactivo de tromboplastina parcial, sustituto de factor plaquetario 3. - Explicar, Explicar, en base al esquema, un TPT prolongado, para deficienci deficiencias as de qué factores factores es más sensible y para cuáles es menos sensible. - Anexar esquemas esquemas en donde se conjunten conjunten las posibles interpretacio interpretaciones nes de los tiempo tiempo de TP y TTPa realizados a un mismo paciente.

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Manual de Practicas de Hemostasia Completo

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