UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS FACULTAD DE MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES BOGOTÁ, COLOMBIA INFORME NÚM. 3 BIOQUÍMICA IDENTIFICACION DE LIPIDOS Hé!"# N$"%&' M"#()" M(*+ -/01002//1 D)$(% F(%$4( G5(6# 7 /0102/813 N$"%&' N#)*" 7 /0102/039 H:$%!") S)!"' - /0902/03
RESUMEN; Los Los lípi lípidos dos son biom biomol olécu écula lass const constit itui uida dass mayo mayorme rment ntee po porr carbo carbono no e hidr hidroge ogeno no,, caracterizadas principalmente por su insolubilidad en agua debido a su naturaleza no polar. Estas sustancias sustancias fueron sometidas sometidas a diferentes diferentes pruebas que permitieron su identificación identificación y categorización de manera cualitativas. Se realizaron la prueba de Salo!si y la prueba de Lieberm Lieberman"# an"#urch urchard ard y se observó observó adem$s adem$s la solubi solubilid lidad ad de los lípido lípidoss en diferen diferentes tes solventes org$nicos %acetona, alcohol, cloroformo, éter& y agua destilada. PALABRAS CLAVE Lípidos, solubilidad, colesterol, $cido sulf'rico, cloroformo, acetona
ABSTRACT; Lipids are biomolecules consisting mainly of carbon and hydrogen, mainly characterized by their insolubility in !ater due to their non"polar nature. (hese substances !ere sub)ected to different tests that allo!ed their qualitative identification and categorization. (he Salo!si test and the Lieberman"#urchard test !ere performed and the solubility of the lipids in different organic solvents %acetone, alcohol, chloroform, ether& and distilled !ater !ere also observed.
1itrógeno %1&. Son hidrófobos %insolubles en agua yen otros disolventes polares&, sin embargo, son solubles en solventes apolares comoacetona, éter, benceno, etc.2*3(4(31 #ad56 7l 5889 : La ba)a solubilidad de los lípidos se debe a que su estructura química es fundamentalmente hidrocarbonada %alif$tica, alicíclica o arom$tica&, con gran cantidad de enlaces *"+ y *"*. ;n compuesto anfip$tico contiene regiones polares y regiones no polares. *uando una molécula de dicho compuesto es mezclada con agua, un solvente polar, la región hidrofílica interact'a favorablemente con el solvente y tiende a disolverse en el agua. 0or otro lado las regiones apolares se disuelven f$cilmente en disolventes de polaridad parecida. 2*3(4(31 1el<= 7p =8"=6 7l 5889 :. Los lípidos desempe>an cuatro tipos de funciones biológicas gracias a su variada química?
F5)$>) ?( #('(#6; Son la principal reserva energética del organismo. ;n gramo de grasa produce 5@A ilocalorías en las reacciones metabólicas de o-idación, mientras que proteínas y gl'cidos sólo producen A@B ilocaloríaCgr. F5)$>) ('!#5!5#%? /orman las bicapas lipídicas de las membranas. Decubren órganos y le dan consistencia, o protegen mec$nicamente como el te)ido adiposo de pies y manos. F5)$>) @$"!%$?"#? En este papel los lípidos favorecen o facilitan las reacciones químicas que se producen en los seres vivos. *umplen esta función las vitaminas lipídicas, las hormonas esteroideas y las prostaglandinas. F5)$>) !#)'4"#!?"#? El transporte de lípidos desde el intestino hasta su lugar de destino se realiza mediante su emulsión gracias a los $cidos biliares y a los proteo lípidos. [ CITATION Uni18 \l 9226 ]
Los lípidos pueden clasificarse de acuerdo a su estructura química en? lípidos simples, comple)os o compuestos y derivados. Los lípidos simples poseen $cidos y alcoholes grasos en su estructura que pueden ser separados a través de la reacción de hidrólisis. En este grupo se encuentran los glicéridos, %mono, di y triglicéridos& ceras y esteres de esteroides. 2 *3(4(31 +ar5 7l 5889 : Los lípidos comple)os son sustancias que a través de la hidrólisis se transforman en otros compuestos adem$s de alcoholes y $cidos grasos. En este grupo est$n los glicerofosfolípidos %fosfoglicéridos o fosfolípidos&, gliceroglicolípidos
%glicolípidos& y los esfingolípidos %esfingomielinas, glicoesfingolípidos y gangliósidos&. Fentro de los lípidos derivados est$n incluidos los lípidos obtenidos por hidrólisis de lípidos comple)os y derivados y otros compuestos de estructura variada %alcoholes grasos, $cidos grasos, vitaminas liposolubles, esteroides e hidrocarburos%4.*. #arroeta, B556& Los compuestos lipídicos que se determinaron en la pr$ctica fueron?
FOSFOLÍPIDOS; Son los componentes principales de las membranas biológicas. Su característica com'n es que contienen un resto de $cido fosfórico esterificado con el grupo Sn" *"6 del glicerol. Febido a la presencia del residuo fosfatidato, a p+ neutro los fosfolípidos tienen una carga negativa. COLESTEROL; Es un alcohol que se clasifica como esteroide, grupo que se encuentra formado por compuestos caracterizados por poseer una estructura molecular formada por cuatro ciclos que se encuentran condensados. El colesterol es una molécula de lípido que se encuentra en los te)idos y en el plasma sanguíneo del cuerpo, tanto de seres vertebrados como invertebrados. Las concentraciones m$s altas de esta molécula se encuentran en órganos como el hígado, cerebro, gl$ndulas adrenales, medula espinal, la piel, etc.
S(4#$>) ?( %+4$?"' Los lípidos generalmente se encuentran enlazados a proteínas y polisac$ridos de los te)idos, formando comple)os con diferentes grados de estabilidad, por lo que para poder romper estos comple)os se requiere el empleo de condiciones de e-tracción capaces de desnaturalizar o separar las proteínas o los carbohidratos asociados con ellos. El etanol, por e)emplo, desnaturaliza proteínas y separa los comple)os de lipoproteínas. 0ara realizar la e-tracción total de los lípidos, es com'n el empleo de metanol al 5=G, etanol al 5=G o de mezclas metanol? cloroformo %6?B& o etanol? éter %8?B&. Es conveniente adaptar las condiciones de e-tracción tanto al tipo de te)ido empleado, así como a la cantidad y naturaleza del lípido deseado. La separación de los lípidos basada en sus diferencias de solubilidad, son desafortunadamente casi siempre, parcialmente satisfactoria, debido a que la solubilidad de los constituyentes de las mezclas de lípidos son bastantes diferentes a las de los lípidos puros. %#uitrago, 8
. MATERIALES Y REACTIVOS; .0 MATERIALES A< mL de 4ceite de oliva A< mL de aceite de hígado bacalao *erebro +uevo B Embudo B Erlenmeyer de B<< mL con tapón de caucho B probeta de =< mL B gradilla H tubos de ensayo B #eaer de 8<< mL 0ipeta de B mL 0ipeta de <.= mL Esp$tula Iortero con pistilo 4gitador Iechero Iallas de asbesto 4ro con nuez #alanza 0laca de vidrio de 8< cm - 8< cm o c$psula de porcelana Jidrio de relo) 0apel de filtro #isturí Kasa eso 0lancha de calentamiento
. REACTIVOS B< mL de *loroformo 8 mL de Mcido acético glacial 8 mL 4nhídrido acético A mL de Mcido sulf'rico = mL de 4cetona <,= mL +idró-ido de Sodio A
AISLAMIENTO DE COLESTEROL Se pesaron 6 g de cerebro y B< g de yeso. Se mezclaron en un mortero macer$ndolos hasta que se obtuvo una masa, la masa resultante fue depositada en una placa de vidrio y se sometió a calentamiento colocando la placa sobre una plancha de calentamiento hasta que la masa se secó completamente, se de)ó enfriar la masa y se procedió a realizar un raspado de la misma para triturarla en un mortero, finalizado el proceso de triturado se dispuso el polvo en un Erlenmeyer, se agregaron B< mL de cloroformo, se agito tapando la boca del Erlenmeyer durante = minutos para posteriormente realizar un proceso de filtrado mediante una gasa.
*on el filtrado %e-tracto de colesterol& se realizaron tres pruebas?
R($>) D( S$; En un tubo de ensayo se agregaron B mL del e-tracto del colesterol y B mL de $cido sulf'rico concentrado, se observó un color ro)o que evidenciaba la presencia de colesterol. R($>) D( S%"6'; En un tubo de ensayo se agregaron B mL de e-tracto de colesterol y B mLde $cido sulf'rico concentrado, se mezcló y de)o en reposo hasta que se separó en dos capas. La capa superior tomo una coloración ro)a y la inferior de ro)o amarillento con fluorescencia verde. En un tubo de ensayo se agregaron 8 mL del e-tracto de colesterol, se a>adieron <.= mL de anhídrido acético y <.B mL de $cido sulf'rico. Se mezcló y se obtuvo inicialmente una coloración ro)a, luego violeta, azul y por 'ltimo verde. Reacción De Liebermann–Burchard:
8. RESULTADOS; 8.0 P#5(@ ?( '"%5@$%$?? A($!( ?( "%$6 I;ES(D4 DES;L(4F 4gua destilada 3nsoluble 4cetona Soluble 4lcohol 3nsoluble *loroformo Soluble Nter Soluble Tabla 1. Fuente: Autores
A($!( ?( +?" ?( @%" I;ES(D4
DES;L(4F
4gua destilada
3nsoluble
4cetona
Soluble
4lcohol
3nsoluble
*loroformo
Soluble
Nter
Soluble
Tabla 2. Fuente: Autores
8. A$'%:$()!" ?( "'"%+4$?"' Se observaron peque>as partículas suspendidas en la solución final, lo cual indica la presencia y precipitación de un tipo de fosfolípidos, las lecitinas, lo cual se puede observar en la siguiente imagen.
Imagen 3 Fuente: Autores
8.3 A$'%:$()!" ?( "%('!(#"% Deacción Schiff Salvosy Lieberman" #urchard
DES;L(4F 0ositivo 0ositivo Iedianamente positivo
9. ANALISIS DE RESULTADOS 9.0 P#5(@ ?( '"%5@$%$??;
Los resultados fueron los mismos en cuanto a solubilidad tanto en el aceite de oliva como en el aceite de bacalao esto se debe a la estructura molecular de los lípidos presentes en estas sustancias. Seg'n %Oacson, 8<<6& cuando dos clases de líquidos se mezclan perfectamente al ponerlos en contacto, es porque las moléculas que integran al otro son susceptibles a ligarse con las del otro y viceversa. Esto tiene que ver específicamente con la polaridad de las moléculas, el agua y el alcohol poseen estructuras polares y el aceite tanto de oliva como de hígado de bacalao tienen estructuras apolares que impiden la mezcla con estas dos sustancias.
9. A$'%:$()!" ?( "'"%+4$?"' Se logró e-traer lecitina, el cual es un tipo de lípido saponificable, la cual se observa como partículas de color blanco suspendidas en una solución transparente. Esto se consiguió gracias a la capacidad del alcohol de romper los enlaces covalentes de lípidos para su posterior separación a través de un filtro y el uso de acetona para la identificación. 9.3 A$'%:$()!" ?( "%('!(#"% Seg'n Ioreno y Kómez %8<
separan en dos capas, la de cloroformo de color ro)o y la de $cido color verde. El color ro)o resulta de la formación de dobles enlaces adicionales o bien a partir de la condensación de 8 moléculas de colesterol para formar bioesteroides. ;n resultado similar se obtiene en la reacción de Schiff. En cuanto a la reacción de Liebermann P#urchard el colesterol reacciona con anhídrido acético y $cido sulf'rico concentrado. Se produce una pérdida de agua y una protonización del colesterol. Se constituyen en medio anhidro polímeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado. %;10, 8
1. CONCLUSIONES Q La solubilidad de los lípidos depende de si la estructura de la sustancia con la que se quiere mezclar, es polar o apolar. Q Sustancias como el alcohol permiten romper los enlaces covalentes presentes en algunos lípidos permitiendo e-traer una sustancia de interés Q Los lípidos tienen varias funciones, una las m$s importantes es la de componente principal de la membrana celular, y esto debido a sus diversas propiedades como el ser hidrofóbico . BIBLIOGRAFÍA; "
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