LAPORAN PRAKTIKUM BFFK Uji Difusi “
”
Kelompok 3B
Oleh :
Tiara Aprilia
1111102000044
Euis Chodijah
1111102000046
Hardi Mozer
1111102000049
Laila Novilia M.
1111102000050
Ani Kurniawati
1111102000127
Rifda Nailil M.
1111102000130
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
2014
BAB I TINJAUAN PUSTAKA
1.1.
Tujuan Praktikum
Mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi difusi obat melalui kulit kulit
1.2.
Landasan teori
1.2.1. Membran Sel
Kolesterol merupakan komponen penting dari membran sel yang tertanam pada area hidrofobik pada bagian bagian ekor. Pada sebagaian sebagaian besar bakteri membran sel tidak mengandung kolesterol. Protein tersuspensi pada bagian membran sebelah dalam. Protein ini berfungsi sebagai tempat pertukaran molekul ke dalam dan keluar sel. Protein integral ini biasa disebut dengan ” gateway proteins”. proteins ”. Permukaan luar membran kaya dengan glikolipid di mana karbohidrat ini berikatan dengan protein integral dan diduga berfungsi dalam pengenalan sel.
Gambar 1: struktur membran sel Fungsi Membran Sel
1.
Kompartementalisasi Membran plasma membagi protoplasma menjadi beberapa kompartemen (ruangan). Membran sel membungkus seluruh protoplasma. Membran inti memisahkan nukleoplasma dengan dari stoplasma. Selain itu selaput plasma membagi sitoplasma menjadi beberapa kompartemen yang disebut dengan
organel. Adanya selaput ini pembatas ini sangat penting karenan memungkinkan kegiatan
setiap
kompartemen
dapat
berlangsung
tanpa
gangguan
dari
kompatemen lain namun tetap dapat bekerja sama. 2.
Barier selektif permeabel Membran sel mencegah pertukaran materi secara bebas dari satu sisi ke sisi lain pada saat bersamaan. Membran plasma harus menjamin pertukaran molekul antara bagian lur dan dalam pada saat yang tepat.
3.
Transport molekul Membran plasma mengandung mesin transpor molekul dari satu sisi ke sisi lain yang mencegah molekul dengan konsentrasi rendah masuk ke dalam sel daerah yang
memeiliki
konsentrasi
tinggi.
Mensin
ini
memungkinkan
sel
mengakumulasi molekul tertentu dalam konsentari yang lebih tinggi di bandingkan di sebelah luar. 4.
Penghantarn signal Membran plasma memainkan peran penting dalam respon sel terhadap signal. Proses itu disebut dengan penghantaran signal. Membran sel memiliki resptor yang berkombinasi dengan molekul tertentu (ligan). Setiap sel berbeda memiliki reseptor berbeda, yang mampu mengenali dan berespon terhadap ligan pada lingkungan berbeda.
5.
Interaksi interseluler Membran sel memperantarai interaksi antar sel pada organisme multiseluler. Membran sel memungkinlkan sel mengenal satu sama lain, berikatan dan saling bertukar materi dan informasi.
Sifat-Sifat Membran Sel
Membran sel bersifat barier permeabel yang memungkinkan molekul yang berukuran kecil dapat keluar masuk ke dalam sel, seperti zat-zat tertentu yang terlarut dalam lemak, tidak bermuatan, molekul asam amino, asam lemak gliserol, gula sederhana dan air. Membran sel bersifat impermeabel terhadap gul (pati dan polisakarida), protein, dan zat-zat yang mudah larut terhadap pelarut organik. Oleh karena membran sel permeabel terhadap zat tertentu dan impermeabal juga terhadap beberapa zat, maka membran sel tersebut bersifat semipermeabel. Hasil pengamatan mikroskop elektron terhadap membran sel menunjukkan
bahwa memberan sel merupakan lipid bilayer. (disebut sebagai fluid-mosaic model). Molekul penyusun utama adalah fosfolipid, yang terdiri dari bagian kepala yang polar (hidrofilik) dan dua ekor nonpolar (hidrofobik). Fosfolipid ini tersusun atas bagian nonpolar membentuk daerah hidrofobik yang diapit oleh daerah kepela yang pada bagian dalam dan luar membran. Membran ini diketahui dengan menggunakan mikroskop elektron 1.2.2. Difusi
Difusi merupakan proses perpindahan atau pergerakan molekul zat atau gas dari konsentrasi tinggi ke konsentrasi rendah. Difusi melalui membran dapat berlangsung melalui tiga mekanisme, yaitu difusi sederhana ( simple difusion),d ifusi melalui saluran yang terbentuk oleh protein transmembran ( simple difusion by chanel formed ), dan difusi difasilitasi ( fasiliated difusion). Difusi sederhana melalui membrane berlangsung karena molekul -molekul yang berpindah atau bergerak melalui membran bersifat larut dalam lemak (lipid) sehingga dapat menembus lipid bilayer pada membran secara langsung. Membran sel permeabel terhadap molekul larut lemak seperti hormon steroid, vitamin A, D, E, dan K serta bahan-bahan organik yang larut dalam lemak, Selain itu, memmbran sel juga sangat permeabel terhadap molekul anorganik seperti O, CO 2, HO, dan H 2O. Beberapa molekul kecil khusus yang terlarut dalam serta ion-ion tertentu, dapat menembus membran melalui saluran atau chanel. Saluran ini terbentuk dari protein transmembran, semacam pori dengan diameter tertentu yang memungkinkan molekul dengan diameter lebih kecil dari diameter pori tersebut dapat melaluinya. Sementara itu, molekul – molekul berukuran besar seperti asam amino, glukosa, dan beberapa garam – garam mineral , tidak dapat menembus membrane secara langsung, tetapi memerlukan protein pembawa atau transporter untuk dapat menembus membrane. Difusi difasiltasi (facilitated diffusion) adalah pelaluan zat melalui rnembran plasrna yang melibatkan protein pembawa atau protein transforter. Protein transporter tergolong protein transmembran yang memliki tempat perlekatan terhadap ion atau molekul vang akan ditransfer ke dalam sel. Setiap molekul atau ion memiliki protein transforter yang khusus, misalnya untuk pelaluan suatu molekul glukosa diperlukan protein transforter yang khusus untuk mentransfer glukosa ke dalam sel. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi Difusi
Molekul bergerak terus-menerus secara acak pada tingkat yang tergantung pada massa mereka, lingkungan mereka, dan jumlah energi panas yang mereka miliki, yang pada gilirannya merupakan fungsi dari temperatur. Gerakan ini menyumbang difusi molekul melalui media apa pun di mana mereka dilokalisasi. Sebuah substansi akan cenderung bergerak ke setiap ruang yang tersedia untuk itu sampai merata di seluruh itu. Setelah zat telah menyebar sepenuhnya melalui ruang yang menghilangkan gradien konsentrasinya, molekul masih akan bergerak di sekitar ruang, tetapi tidak akan ada gerakan bersih jumlah molekul dari satu daerah ke daerah lain. Kurangnya gradien konsentrasi di mana tidak ada gerakan bersih suatu zat yang dikenal sebagai kesetimbangan dinamis. Sedangkan difusi akan maju dengan adanya gradien konsentrasi suatu zat, beberapa faktor mempengaruhi laju difusi: 1)
Tingkat gradien konsentrasi : Semakin besar perbedaan konsentrasi, semakin
cepat difusi. Semakin dekat distribusi bahan sampai ke kesetimbangan, semakin lambat laju difusi terjadi. 2)
Massa molekul menyebar : molekul yang lebih berat bergerak lebih lambat; Oleh
karena itu, mereka menyebar lebih lambat. Sebaliknya adalah benar untuk molekul yang lebih ringan. 3)
Suhu: Suhu yang lebih tinggi meningkatkan energi dan karena itu gerakan
molekul, meningkatkan laju difusi. Suhu yang lebih rendah menurunkan energi molekul, sehingga mengurangi laju difusi. 4)
Kerapatan Pelarut: Saat kerapatan pelarut yang meningkat, tingkat difusi akan
berkurang. Molekul-molekul memperlambat karena mereka memiliki waktu yang lebih sulit masuk melalui media padat. Jika media kurang padat, difusi meningkat. Karena sel-sel terutama menggunakan difusi untuk memindahkan bahan dalam sitoplasma, setiap peningkatan kepadatan sitoplasma akan menghambat pergerakan bahan. Sebuah contoh dari hal ini adalah orang yang mengalami dehidrasi. Seperti sel-sel tubuh kehilangan air, laju difusi menurun dalam sitoplasma, dan fungsi sel-sel memburuk. Neuron cenderung sangat sensitif terhadap efek ini. Dehidrasi sering menyebabkan ketidaksadaran dan mungkin koma karena penurunan laju difusi dalam sel.
5)
Kelarutan: Seperti telah dibahas sebelumnya, bahan nonpolar atau larut dalam-
lipid
melewati
membran
plasma
lebih
mudah
daripada
bahan
polar,
memungkinkan tingkat yang lebih cepat dari difusi. 6)
Luas permukaan dan ketebalan membran plasma : Peningkatan luas
permukaan meningkatkan laju difusi, sedangkan membran tebal mengurangi itu. 7)
Jarak tempuh : Semakin jauh bahwa zat harus melakukan perjalanan, semakin
lambat laju difusi. Hal ini memberikan pembatasan atas ukuran sel. Sel yang bulat besar akan mati karena nutrisi atau limbah tidak dapat mencapai atau meninggalkan pusat sel. Oleh karena itu, sel-sel yang baik harus dalam ukuran kecilseperti halnya dengan kebanyakan eukariota bersel tunggal. Uji Difusi In Vitro Menggunakan Sel Difusi Franz
Penelitian daya penetrasi dan pelepasan obat melalui kulit secara in vitro merupakan cara termudah dan hemat dalam mengkarakterisasi absorpsi dan penetrasii obat melalui kulit. Formulasi dan pengembangannya akan mempengaruhi pelepasan obat yang optimal dan deposisi obat menuju lapisan kulit yang diinginkan ( stratum corneum, epidermis, atau dermis). Langkah pertama pada penghantaran obat adalah pelepasan obat dari pembawanya. Kecepatan pelepasan obat ditentukan oleh aktivitas termodinamik yang terkait formulasi. Hal tersebut dapat diperlihatkan dengan menggunakan suatu sistem difusi sel yang umumnya digunakan pada penelitian daya penetrasi obat secara in vivo. Kecepatan pelepasan obat yang kecil berhubungan dengan rendahnya bioavaibilitas dari formula yang digunakan. Studi penetrasi kulit secara in vitro berhubungan dengan mengukur kecepatan dari jumlah komponen yang menembus kulit dan jumlah komponen yang tertahan pada kulit. Salah satu cara untuk mengukur jumlah obat yang terpenetrasi melalui kulit yaitu dengan menggunakan sel difusi franz. Sel difusi franz adalah suatu sel difusi tipe vertikaluntuk mengetahui penetrasi zat secara in vitro. Sel difusi mempunyai komponen berupa kompatemen donor, kompartemen reseptor, tempat pengambilan sampel, cincin O, dan water jacket. Kompartemen donor berisi zat yang akan diuji penetrasinya. Kompartemen reseptor berisi cairan berupa air atau dapar fosfat Ph 7,4 yang mengandung albumin. Fungsi albumin yaituuntuk meningkatkan kelarutan zat yang sukar larut dalam cairan kompartemen reseptor yang digunakan. Tempat
pengambilan sampel adalah tempat pada sel difusi franz untuk mengambil cairan dari kompartemen reseptor dengan volume tertentu. Water jacket berfungsi untuk menjaga temperatur tetap konstan selama sel difusi dioperasikan. Diantara kompartemen donor dan kompartemen reseptor diletakkan membran yang digunakan untuk sel difusi franz. Cincin O menjaga posisi membran supaya tidak berubah. Membran bisa berupa membran sintesis, membran kulit manusia, atau membran kulit hewan. Membran kulit hewan yang digunakan telah dihilangkan bulu dan lapisan lemak subkutannya. Cair di kompartemen reseptor perlu diaduk secara optimal dan efisien untuk menjamin cairan dalam kompartemen reseptor homogen. Volume kompartemen reseptor sebesar 2-10 ml dan luas yang terpapar membran sebesar 0,2-2 cm2. Dimensi sel difusi harus diukur secara akurat karena terkait dengan perhitungan kadar zat. Kondisi di kompartemen reseptor yang ideal harus harus bisa untuk memfasilitasi penetrasi zat seperti pada keadaan in vivo. Konsentrasi zat di kompartemen reseptor seharusnya tidak melebihi 10% konsentrasi zat untuk mencapai kejenuhan. Konsentrasi zat di kompartemen reseptor yang tinggi dapat menyebabkan penurunan laju penetrasi zat. Cara melakukan uji penetrasi dengan sel difusi franz adalah sejumlah tertentu zat diaplikasikan pada membran dan dibiarkan berpenetrasi secara difusi pasif melalui membran. Untuk mengetahui jumlah zat yang berpentrasi dan laju penetrasi zat dilakukan sampling cairan di kompartemen reseptor selama waktu tertentu sampai keadaan mencapai keadaan tunak. Cairan dari kompartemen reseptor yang diambil digantikan dengan cairan awal sesuai volume yang diambil. Hal ini bertujuan untuk menjaga volume dalam cairan reseptor tetap konstan dan untuk menjaga supaya cairan di kompartemen reseptor tetap dalam keadaan tunak.
Gambar 1 : sel difusi Franz Diakses dari permeGear Inc. www. Permegear.com
Jumlah kumulatif zat yang berpentrasi melalui membran adalah:
=
−1 . + =1 .
Keterangan : Q
= Jumlah kumulatif zat pe luas difusi (µg/cm2)
Cn
= konsentrasi zat (µg/ml)
=1 =1
= jumlah konsentrasi zat (µg/ml)pada sampling pertama (menit ke-30 hingga sebelum menit ke-11)
V
= Volume sel difusi Franz (ml)
S
= Volume sampling (ml)
A
= Luas membran (cm2)
Pada keadaan tunak, dapat dihitung fluks zat yang berpenetrasi melalui membran dengan rumus
J=
Ket: (J) laju penetrasi/fluks µg cm-2 jam -1; (Q) Jumlah kumulatif zat yang berpentrasi melalui membran µg cm-2; (t) waktu dalam jam Kurva Difusi
Kurva difusi menggambarkan hubungan antara konsentrasi obat yang berdifusi (µg/ml) dengan waktu (menit). Kurva difusi biasanya digambarkan dengan bentuk kurva yang menanjak.
Berikut adalah kurva kadar plasma-waktu untuk suatu obat yang diberikan dalam dosis oral tunggal. Fase absorpsi dan eliminasi obat dari kurva dapat ditunjukkan.
difusi
BAB II METODOLOGI
2.1. Alat dan Bahan
2.1.1. Alat dan Bahan Pembuatan Membran Difusi Alat :
Bahan :
-
Kertas whatman no.1
-
Propilenglikol 10 ml
-
Beaker glass
-
Asam oleat 15 ml
-
Batang pengaduk
-
Asam stearat 5 ml
-
Kertas saring
-
Minyak kelapa 15 ml
-
Hotplate
-
Paraffin 10 ml
-
Cawan penguap
-
Kolesterol 5 ml
-
Pinset
-
Timbangan analitik
-
Lilin putih 15 ml
2.1.2. Alat dan Bahan Pembuatan Sediaan Gel Alat:
Bahan :
-
Beaker glass
-
Parasetamol
-
Batang pengaduk
-
Karbopol
-
Kaca arloji
-
HPMC
-
Pot plastik
-
Trietanolamin
-
Hot plate
-
Propilenglikol
-
Timbangan analitik
-
Etanol
-
Aquadest
Bahan (%)
Formula C
B
1
1
Karbopol
0,6
0,6
HPMC
1,2
-
-
-
Parasetamol
Na CMC
Trietanolamin
q.s
q.s
Propilenglikol
10
10
Etanol
10
10
Ad 100
Ad 100
Aquadest
2.1.3. Alat dan Bahan Uji Difusi Alat :
Bahan :
-
Sel difusi Franz
-
Sediaan gel (dua formulasi uji)
-
Membran difusi
-
Aquadest
-
Pompa peristaltik
-
Cairan dapar fosfat
-
Batang pengaduk
-
Gelas piala
-
Penangas air
-
Penampung reseptor
-
Selang diameter 4 mm
2.2. ProsedurKerja
2.2.1. Prosedur Kerja Pembuatan Membran Difusi -
Kertas whatman no.1 dipotong dengan diameter 1,5 cm
-
Potongan kertas ditimbang
-
Dibuat larutan spangler yang dimodifikasi dengan cara melebur seluruh bahan di atas ke dalam sebuah beaker glass
-
Diaduk hingga homogen
-
Dimasukkan kertas whatman no.1 yang telah dipotong dengan luas tertentu ke dalam cairan spangler selama 15 menit
-
Diangkat dan segera keringkan dengan kertas saring
-
Ditimbang kertas whatman yang telah dikeringkan
-
Ditentukan jumlah cairan yang terserap
-
Dihitung prosentase impregnasi
2.2.2. Prosedur Kerja Pembuatan Sediaan Gel Pembuatan sediaan gel formula B :
-
Semua bahan ditimbang
-
Karbopol didispersikan dalam aquadest (suhu 70 0C) dalam lumpang atau beaker glass, digerus atau diaduk hingga terbentuk dispersi yang homogen. Karbopol didiamkan selama 1 jam.
-
TEA ditambahkan hingga terbentuk massa gel yang mengembang dan transparan.
-
Ke dalam basis ditambahkan propilenglikol, etanol, dan parasetamol yang sudah dilarutkan dalam aquadest.
-
Gel yang sudah homogen disimpan dalam wadah tertutup.
Pembuatan sediaan gel formula C : -
Semua bahan ditimbang.
-
Karbopol atau HPMC didispersikan dalam aquadest (suhu 70 0C) secara terpisah hingga gelling agent terdispersi seluruhnya, untuk karbopol didiamkan selama 1 jam.
-
Untuk karbopol, TEA ditambahkan hingga terbentuk massa gel yang mengembang dan transparan.
-
Karbopol dan HPMC dicampurkan hingga homogen kemudian ditambahkan propilenglikol, etanol, dan parasetamol yang sudah dilarutkan dalam aquadest.
-
Gel yang sudah homogen disimpan dalam wadah tertutup.
2.2.3. Prosedur Kerja Uji Difusi -
Dua formula uji ditimbang masing-masing 1 gram, kemudian diratakan di atas membran dengan diameter 1,5 cm.
-
Suhu sistem diatur 37± 0,5 0C dengan cairan sirkulasi aquabidestilata sebanyak 70 ml.
-
Pompa peristaltik menghisap cairan reseptor dari gelas kimia kemudian dipompa ke sel fusi melewati penghilang gelembung.
-
Kemudian cairan dialirkan kembali kereseptor
-
Cuplikan diambil dari cairan reseptor sebanyak 1 ml dan encerkan dengan cairan dapar 5 ml (duplo) pada menit ke-5, 30, 60, 90, dan 190.
-
Dilakukan pengujian spektrofotometri pada gelombang maksimum parasetamol (243 nm) untuk mengetahui absorbansinya.
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1.
Hasil
3.1.1. Hasil praktikum kelas AC : No.
Waktu (menit)
Absorbansi
1
5
0,083
2
30
0,088
3
60
0,122
4*
60
0,134
5*
90
0,114
6
90
0,117
7
120
0,115
*konsentrasi yang tidak dimasukan ke grafik karena diukur duplo 0.14 0.12 0.1 i s n a b r o s b a
0.08 0.06 0.04 0.02 0 5
30
60
90
waktu
3.1.2. Hasil praktikum kelas BD : No.
Waktu (menit)
Absorbansi
120
1*
5
0,006
2
5
0,010
3*
30
0,008
4
30
0,015
5
60
0,037
6*
60
0,019
7*
90
0,041
8
90
0,061
9
120
0,066
*konsentrasi yang tidak dimasukan ke grafik karena diukur duplo 0.07 0.06 0.05 i s d n a b r o s b a
0.04 0.03 0.02 0.01 0 5
30
60
90
120
waktu
3.2.
Pembahasan
Pada praktikum kali ini, kami melakukan uji difusi obat untuk mengetahui seberapa banyak obat menembus membran tiap waktu. Difusi pasif merupakan suatu proses perpindahan masa dari tempat yang berkonsentrasi tinggi ke tampat yang berkonsentrasi rendah. Prinsip absorsi obat melalui kulit adalah difusi pasif dimana proses tersebut dimulai dari suatu substansi yang bergerak dari daerah suatu sistem ke daerah lain dan terjadi
penurunan kadar gradien diikuti bergeraknya molekul (Anief, 1997). Difusi pasif merupakan bagian terbesar dari proses transmembran bagi umumnya obat. Tenaga pendorong untuk difusi pasif adalah perbedaan konsentrasi obat pada kedua sisi membran sel. Membran padat digunakan sebagai model pendekatan membran biologis. Membrane padat juga digunakan sebagai model untuk mempelajari kompleks interaksi antara zat aktif dan bahan tambahan serta proses pelepasan dan kelarutan. Uji difusi secara transdermal menggunakan kertas whatman sebagai membran/kulit, cairan spangler sebagai cairan yang dioleskan di atas membran/kulit (spangler dibuat dengan komposisi asam oleat, asam stearat, minyak kelapa, paraffin, lesitin, cera alba). Komposisi cairan spangler banyak mengandung lipid karena stratum korneum yang terdiri dari kurang lebih 40% protein (pada umumnya keratin) dan 40% air dengan lemak berupa trigliserida, asam lemak bebas, kolesterol dan fosfat lemak. Gel juga dibuat dengan formulasi yang berbeda-beda untuk mengetahui seberapa besar kemampuan obat menembus membran.
Bahan (%)
Formula C
B
1
1
Karbopol
0,6
0,6
HPMC
1,2
-
-
-
Trietanolamin
q.s
q.s
Propilen Glikol
10
10
Etanol
10
10
Ad 100
Ad 100
Parasetamol
Na CMC
Aquadest
Pada praktikum ini kami membandingkan formula C dengan formula B. Kandungan air tinggi di dalam basis gel dapat menyebabkan terjadinya hidrasi pada stratum korneum yang memudahkan penetrasi obat melalui kulit. Gel juga terdiri dari bahan pembantu yang berfungsi untuk meningkatkan penetrasi zat ke dalam kulit. Metode yang digunakan adalah metode flow-through dengan menggunakan alat sel difusi Franz. Membran yang telah dioleskan dengan gel diletakan menghadap ke atas agar mekanisme difusi terjadi melewati membran dan membran tiruan yang berfungsi sebagai sawar yang memisahkan sediaan dengan cairan di sekitarnya. Alat tersebut dilengkapi oleh pompa peristaltik yang berfungsi untuk menghisap cairan reseptor dari gelas kimia kemudian
dipompa ke sel difusi melewati penghilang gelembung sehingga aliran terjadi secara hidrodinamis. Alat juga dilengkapi dengan tempat khusus yang berfungsi untuk meletakkan membran dan mengalirkan hasil cuplikan sampel. Pada praktikum ini pertama-tama dilakukan pembuatan lemak sebagai simulasi membran, pembuatan gel parasetamol, serta penyiapan alat yang digunakan. Pada pembuatan sediaan gel, awalnya bahan-bahan yang diperlukan untuk pembuatan sediaan gel formula B ditimbang, yang mencakup parasetamol 1 mg, karbopol 0,6 mg, trietanolamin q.s, propillenglikol 10 mg, etanol 10 mg, dan aquadest ad. Setelah bahan-bahan tersebut ditimbang, karbopol didespersikan dalam aquadest (suhu 70 oC) di dalam lumpang atau beaker glass, digerus hingga terbentuk dispersi yang homogen, lalu didiamkan selama 1 jam. Setelah itu, untuk karbopol, TEA ditambahkan hingga terbentuk massa gel yang mengembang dan transparan. Ke dalam basis ditambahkan propilenglikol, etanol, dan parasetamol yang sudah dilarutkan dalam aquadest. Gel yang sudah homogen kemudian disimpan dalam wadah tertutup. Selain sediaan gel formula B terdapat sediaan gel formula C yang telah dibuat oleh kelas A/C. Perbedaannya adalah pada sediaan gel formula C ditambahkan HPMC. Selanjutnya pada proses pembuatan membrane difusi, membran yang digunakan adalah kertas whatman no. 1 yang diimpregnasi dengan cairan spangler yang telah dimodifikasi. Komposisi cairan spangler antara lain adalah propilenglikol, asam oleat, asam stearat, minyak kelapa, parafin, kolesterol, dan lilin putih. Bahan untuk cairan spangler dilebur dan diaduk sampai rata. Kertas whatman no. 1 dimasukkan dengan luas tertentu selama 15 menit lalu diangkat dan segera dikeringkan dengan kertas saring dan jumlah cairan yang terserap ditentukan. Bobot membrane sebelum dan sesudah impregnasi ditimbang untuk mendapatkan kondisi yang sama pada setiap membran (0,347gram). Setelah semua komponen tersedia, alat di- setting untuk mendapatkan simulasi kondisi difusi pada tubuh. Membran dipasang sebagai simulasi kulit yang telah diolesi gel parasetamol, cairan dapar fosfat di dalam alat siap menampung obat yang terdifusi sebagaimana plasma darah, juga tersedia tempat khusus untuk pengambilan cuplikan pada waktu-waktu tertentu. Pada menit ke-5, 30, 60, dan 90, masing-masing cuplikan diujikan pada spektrofotometer. Cara pengambilan cuplikan adalah dapar fosfat di ambil melalui ruang khusus untuk pengambilan cuplikan sebanyak 1 ml lalu diencerkan kembali dengan penambahan 5 ml dapar fosfat agar dapat dideteksi oleh spektrofotometer UV-Vis. Setiap
sampel cairan pada interval waktu tertentu yang daimbil dari kompartemen reseptor harus selalu digantikan dengan cairan yang sama sejumlah volume yang terambil. Hasil dari serapan ditunjukan dalam kurva A dan kurva B (absorbansi berbanding dengan waktu). Factor-faktor
yang
mempengaruhi
kecepatan
difusi
antara
lain
adalah
(1)
Ukuranpartikel. Semakin kecil ukuran partikel, semakin cepat pula partikel itu akan bergerak sehingga kecepatan difusi semakin tinggi. (2) Ketebalan membran. Semakin tebal membran, maka semakin lambat kecepatan difusi. (3) Luas suatu area. Semakin besar luas area, semakin cepat kecepatandifusinya. (4) Jarak. Semakin besar jarak antara 2 konsentrasi, semakin lambat kecepatan difusinya. (5). Suhu. Semakin tinggi suhu, partikel mendapatkan energi untuk bergerak dengan lebih cepat. Maka, semakin cepat pula kecepatan difusinya. Pada praktikum ini diketahui pada kedua percobaan, luas area, ketebalan membran, jarak, suhu, serta ukuran partikelnya dikondisikan hampir serupa. Namun perbedaan hanya terdapat pada faktor formulasi yang pada kurva menunjukan hasil yang sangat berbeda pada absorbansi yang menunjukan kadarnya pada waktu-waktu pengujian tertent u.
Pada dasarnya kedua kurva telah sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa hubungan antara konsentrasi obat yang berdifusi (µg/ml) dengan waktu (menit), kurva difusi biasanya digambarkan dengan bentuk kurva yang menanjak. Pada kurva A maupun kurva B diawali dengan bentuk menanjak, tahapan difusi dalam tubuh adalah tahapan dimana terjadinya absorpsi. Namun pada kurva A selanjutnya menunjukan keadaan mendatar lalu menurun, hal ini diasumsikan sebagai fase distribusi dan eliminasi. Pada kurva A di menit ke-
60 diperkirakan semua obat telah melewati membran atau membran telah jenuh sehingga tidak ada obat yang berdifusi lagi, namun tahapan pengujian terus-menerus dilakukan dengan cara diambil cuplikan lalu dimasukan kembali pengganti cairan yang diambil maka dari itu semakin lama obat yang ada mengalami keadaan terencerkan dan menunjukan kondisi fase eliminasi pada tubuh. Sedangkan pada kurva B pada waktu terakhir pengujian kurva masih terus naik yang menunjukan bahwa masih ada obat yang terus berdifusi melalui membran tersebut.
BAB IV KESIMPULAN
4.1.
Kesimpulan
Metode yang digunakan untuk menentukan uji difusi adalah metode flow trough dengan alat sel difusi Franz.
Membran difusi yang digunakan adalah kertas whatman no.1 yang diimpregnasi dengan cairan spangler yang telah dimodifikasi.
Sediaan yang digunakan adalah sediaan pearasetamol yang diformulasi dalam 2 formula yang berbeda.
Kedua kurva yang dihasilkan sesuai dengan kurva difusi yang seharusnya, namun pada kurva A diantara waktu pengujian diasumsikan obat telah melewati membran seluruhnya sehingga dihasilkan kurva yang mendatar dan menurun setelah fase menanjak.
Fase menanjak pada kurva merupakan gambaran fase absorpsi, sedangkan fase mendatar dan menurun merupakan gambaran fase distribusi dan eliminasi.
DAFTAR PUSTAKA
Lanimarta, Yurika. 2012. Skripsi : Pembuatan dan uji penetrasi nanopartikel kurkumindendrimer poliamidoamin (PAMAM) Generasi 4 dalam sediaan gel dengan menggunakan sel difusi Franz. Universitas Indonesia. Simon, Patricia. 2012. Skripsi : Formulasi dan uji penetrasi mikroemulsi matrium diklofenak dengan metode sel difusi franz dan metode tape stripping. Universitas Indonesia Shargel, leon.,Susanna, Andrew., 2012. Biofarmasetika dan Farmakokinetika terapan. Surabaya: Airlangga University Press. Witt, Krista & Bucks, Daniel. 2003. Studying in Vitro: Skin penetration and drug release to optimize Dermatological Formulation. www.permegear.com permeGear Inc. Diakses tanggal 11/10/2014 jam 19.16 WIB
LAMPIRAN
Penimbangan bahan
Pemanasan aquadest
Pendispersian karbopol
Penambahan TEA
Penambahan etanol
Penambahan propilenglikol
Penambahan larutan parasetamol
Hasil gel parasetamol
Spangler beku
Pemanasan cairan spangler
Perendaman kertas whatman dalam cairan spangler
Berat kertas setelah perendaman
Alat uji difusi flow through
Uji lamda maksimum parasetamol
Pengambilan cuplikan
Uji absorbansi dengan spektrofotometri
