Blok Digestive Laporan Hasil Praktikum Mikrobiologi
Tes Widal
Oleh :
Putu Arthana Putra
H1A013051
Putu Pradipta Shiva Darrashcytha
H1A013052
Rohmatul Hajiriah Nurhayati
H1A013056
Wanda Rendraswara
H1A013062
I Gede Suaranta
H1A012023
Dosen Pengampu : dr. Dewi Suryani, M.Infec.Dis
Fakultas Kedokteran Universitas Mataram Nusa Tenggara Barat 2015BAB 1 PENDAHULUAN
1.1.
Latar Belakang Salah satu penyakit endemis dan masih menjadi permsalahan kesehatan di Indonesia
adalah Demam Tifoid (DT) atau Tifoid Abdominalis. Angka kejadian kasus Demam Tifoid masih tinggi di Indonesia dan membutuhkan perawatan di rumah sakit. Penyakit akibat infeksi Salmonella typhi dan paratyphi ini bisa terjadi pada siapa saja termasuk anak-anak karena penularannya melalui makanan dan minuman yang telah tercemar bakteri ini. Sanitasi lingkungan dan pengolahan sampah yang buruk juga menjadi faktor resikonya (Menkes RI, 2006, Pegues dan Miller, 2013). Pada tahun 2002, terdapat 22.000.000 kasus demam tifoid dengan 200.000 kematian di seluruh dunia. Asia Tenggara dan selatan-tengah memiliki angka insidens tertinggi yaitu >100 kasus per 100.000 populasi per tahun (Pegues dan Miller, 2013). Di Indonesia, menurut data Menkes tahun 2006, angka kesakitan akibat demam tifoid cenderung meningkat dengan rata-rata 500 per 100.000 penduduk dengan kematian 0,6 sampai 5 persen (Menkes RI, 2006). Berdasarkan data sistem rumah sakit (SIRS) tahun 2013, terjadi 9.747 kasus demam tifoid dan paratifoid pada anak balita (Datin Menkes RI, 2015). Penegakan diagnosis pada demam Tifoid dapat dilakukan dengan melakukan Tes Widal. Tes widal merupakan uji serologi, yaitu reaksi aglutinasi antara antigen dengan antibodi. Tujuan tes ini adalah untuk mengetahui adanya antibodi terhadap Salmonella typhi
dan juga titernya. Salmonella typhi telah lama diketahui memiliki 3 antigen yaitu antigen O, H dan Vi (Menkes RI, 2006). Antigen O merupakan antigen pada somatik bakteri Salmonella. Cara pembuatan antigen O yang merupukan fosfolipid protein polisakarida adalah dengan merusak antigen H dengan menambah alkohol/asam/pemanasan 100°C selama 20 menit pada kuman yang motil berusia muda maka flagel akan rusak dan tinggal badan kuman. Reaksi aglutinasi yang terjadi bila antibodi ditambah dengan anti O berupa endapan seperti pasir yang tidak hilang bila larutan dikocok. Antigen H adalah antigen termolabil yang terdapat pada flagel bakteri Salmonella. Pada kuman yang motil berusia muda, protein flagel yang labil akan menjadi stabil dengan menambahkan formalin. Reaksi aglutinasi yang terjadi bila antibodi ditambah dengan anti H adalah berupa gumpalan seperti kapas. Gumpalan mudah hilang bila larutan dikocok. Antigen Vi (Virulen) adalah antigen yang terdapat pada kapsul bakteri Salmonella dan bersifat termolabil yang berperan di dalam patogenesis penyakit tifoid (Menkes RI, 2006).
1.2.
Tujuan Praktikum Tujuan praktikum tes Widal ini adalah sebagai berikut. 1. Untuk mengetahui dasar pemilihan dan pengambilan spesimen untuk Tes widal. 2. Untuk memahami langkah-langkah tes widal. 3. Agar mampu melakukan interpretasi hasil terhadap tes widal.
1.3.
Tempat dan Waktu Praktikum Tempat
: Laboratorium Mikrobiologi FK Unram
Hari/Tanggal
: Selasa, 20 Oktober 2015
Waktu
: 14.00 – 15.00 WITA
BAB II METODE
Terdapat variasi pemeriksaan widal. Pemeriksaan widal dapat dilakukan secara konvensional (tube test) dan pemeriksaan widal secara cepat (rapid test). Dalam praktikum ini aan dilakukan pemeriksaan widal rapid test secara kualitatif maupun kuantitatif.
Pemeriksaan widal secara cepat (rapid test) Secara Kualitatif 1. Teteskan serum pasien 0,02 cc pada objek glass (sebanyak 4 buah) 2. Teteskan 4 antigen sebanyak satu tetes pada masing-masing weil 3. Dicampur dengan tusuk gigi sampai homogeny kemudian digoyang selama 2 menit 100 rpm apabila memakai alat regulator, selama 3-5 menit apabila manual 4. Diamati hasilnya:
Positif (+)
: adanya aglutinasi
Negative (-)
: tidak ada aglutinasi (homogeny)
5. Apabila hasil ini positif dilanjutan pemeriksaan secara kuantitatif
Secara kuantitatif 1. Dilakukan penipisan serum pasien dari 0,02 cc 0,01 cc 0,005 cc 0,0025 cc 2. Ditambah satu tetes antifen (positif tes kualitatif) pada masing-masing objek glass 3. Dicampur dengan tusuk gigi samai homogeny kemudian digoyang selama 2 menit apabila memakai alat regulator, selama 5 menit apabila manual
4. Diamati adanya aglutinasi (+), titer ditulis pada hasil adalah penipisan terakhir yang masih menunjukkan adanya aglutinasi (+) 5. Jenis-jenis titer, sbb:
1:80
1:160 : serum 0,01 cc (10 µl)
1:320 : serum 0,005 cc (5 µl)
1:640 : serum 0,0025 cc (2,5 µl)
: serum 0,02 cc (20 µl)
BAB III HASIL DAN PEMBAHASAN
3.1 Hasil Praktikum Tabel 1. Hasil pemeriksaan kualitatif Uji Widal KELOMPOK
O
H
AH
BH
1
-
+
+
+
2
+
+
+
-
3
+
+
+
-
4
-
-
+
-
Interpretasi Hasil :
Positif (+) : Bila terjadi aglutinasi Negatif (⎼) : Bila tidak terjadi aglutinasi
Hasil Pengamatan :
Antigen Salmonella thypii O Antigen Salmonella thypii H
: Negatif (-), tidak terjadi aglutinasi : Negatif (-), tidak terjadi aglutinasi
Antigen Salmonella parathypii AH Antigen Salmonellapara thypii BH
: Positif (+), terjadi aglutinasi : Negatif (-), tidak terjadi aglutinasi
Karena didapatkan hasil yang positif makan kami melanjutkan pemeriksaan secara kuantitatif.
Tabel 2. Hasil pemeriksaan kuantitatif Uji Widal KELOMPO
1/80
1/160
1/320
1/640
Hasil Akhir
1
+
+
-
-
1/160
2
+
+
+
-
1/320
3
+
+
-
-
1/160
4
+
+
+
+
1/640
K
Interpretasi Hasil :
Positif (+) : Bila terjadi aglutinasi
Negatif (⎼) : Bila tidak terjadi aglutinasi
Hasil Pengamatan : Dari pemeriksaan yang kami lakukan, kami mendapatkan adanya aglutinasi dari titer serum 20 µl hingga titer serum 2,5 µl 3.2 Pembahasan Hasil pemeriksaan yang kami lakukan menunjukkan bahwa setelah titer serum yang masing-masing terdiri atas 2,5 µl, 5 µl, 10 µl, 20 µl di tetesi dengan reagen Salmonella typhii, terbentuk gumpalan pada semua titer serum karena tejadi reaksi antara antigen dengan antibodi. Hal tersebut dapat dinyatakan sebagai hasil positif karena setelah ditetesi dengan
reagen terbentuk gumpalan atau aglutinasi dari reaksi tersebut, hal ini dapat berarti bahwa serum tersebut terinfeksi oleh bakteri Salmonella typhii. Namun hasil yang sesungguhnya dari laboratorium didapatkan hasil positif (antigen yang dapat dideteksi) hanya sampai titer 10 µl (1/160). Disini kami akan sedikit membahas mengenai faktor yang dapat mempengaruhi mengapa hasil pada setiap kelompok dapat berbeda dan mengapa pada kelompok kami bisa didapatkan hasil positif pada semua titer yang kami gunakan (tes kuantitatif).
Mengapa tes kualitatif setiap kelompok bisa berbeda? Ini bisa terkait dengan terjadinya positif palsu maupun negative palsu, beberapa hal yang dapat menyebabkan hal tersebut adalah sebagai berikut : Penyebab positif palsu
Penyebab negative palsu
o Sebelumnya telah diimunisasi dengan o Tidak adekuatnya inoculum antigen antigen salmonella
bakteri
o Rekasi silang dengan salmonella non o Status sebagai karier typhoidal
o Kesulitan teknik maupun kesalahan
o Variablitas dan kurangnya standarisasi dari preparat antigen o Infeksi
dengan
dalam melakukan test ini o Penggunaan antibiotic sebelumnya
malaria
dan o Variabilitas sediaan antigen di pasaran
enterobacteriae o Penyakit lain seperti dengue
Mengapa tes kuantitatif setiap kelompok bisa berbeda beda?
Terutama pada kelompok kami, didapatkan hasil positif pada semua reagen yang kami coba hal ini bisa dipengaruhi oleh : 1. Takaran serum yang digunakan kurang tepat, karena pada awal percobaan beberapa kali kami mengalami masalah dengan alat pipet ukur pada kelompok kami 2. Takaran reagen yang tidak sama banyak, pada saat penetesan reagen kemungkinan reagen diteteskan terlalu banyak dan tidak merata 3. Waktu melihat reaksi aglutinasi yang terlalu lama, dari awal meneteskan reagen ke serum, mencampur sampai homogeny, dan menggoyangkan seharusnya dilakukan dengan cepat dan dihitung 3-5 menit langsung, namun kelompok kami baru mulai waktu pada saat menggoyangkannya saja 4. Pencahayaan yang kurang sehingga mengganggu dalam melakukan interpretasi, di meja kelompok kami tidak terdapat lampu tambahan untuk melihat hasil sehingga akhirnya kami berinisiatif menggunakan lampu pada telepon genggam kami masingmasing 5. Kemampuan praktisi dalam melakukan interpretasi yang kurang, karena kami baru pertama kali melakukan percobaan dan belum mempunyai banyak pengalaman kami masih agak ragu terhadap interpretasi hasil tersebut 6. Proses pencampuran yang tidak sampai homogen, karena dibutuhkan waktu yang cukup cepat kemungkinan saat pencampuran antara reagen dan serum tidak tercampur homogen 7. Cara penggunaan tusuk gigi yang salah dalam pencampuran (misalnya 1 sisi tusuk gigi itu digunakan untuk semua sampel sehingga takaran serum dan reagennya tidak tepat lagi)
BAB IV PENUTUP
KESIMPULAN Salah satu penyakit endemis dan masih menjadi permsalahan kesehatan di Indonesia adalah Demam Tifoid (DT). Penyakit akibat infeksi Salmonella typhi dan paratyphi ini bisa terjadi pada siapa saja termasuk anak-anak karena penularannya melalui makanan dan minuman yang telah tercemar bakteri ini. Sanitasi lingkungan dan pengolahan sampah yang buruk juga menjadi faktor resikonya. Pemeriksaan widal merupakan salah satu pemeriksaan penunjang untuk mendeteksi demam tifoid. Tes widal dapat dilakukan secara konvensional (tube test) dan pemeriksaan widal secara cepat (rapid test). Hasil pemeriksaan yang kami lakukan menunjukkan bahwa setelah titer serum (masing-masing terdiri atas 2,5 µl, 5 µl, 10 µl, 20 µl) di tetesi dengan reagen Salmonella typhii, terbentuk gumpalan pada semua titer serum karena tejadi reaksi antara antigen dengan antibodi. Hal tersebut dapat dinyatakan sebagai hasil positif karena setelah ditetesi dengan reagen terbentuk gumpalan atau aglutinasi dari reaksi tersebut, hal ini dapat berarti bahwa serum tersebut terinfeksi oleh bakteri Salmonella typhii. Namun hasil yang sesungguhnya dari laboratorium didapatkan hasil positif (antigen yang dapat dideteksi) hanya sampai titer 10 µl (1/160). LAMPIRAN
PEMBAGIAN TUGAS
Pendahuluan
Metode Hasil dan Pembahasan Penutup Editor
: I Gede Suaranta
: Wanda Rendraswara : Putu Arthana P., Putu Pradipta Shiva D., Rohmatul Hajiriah N. : Wanda Rendraswara : Wanda Rendraswara
DAFTAR PUSTAKA
Datin Menkes RI. 2015. InfoDatin: Situasi Kesehatan Anak Balita di Indonesia. Diperoleh tanggal
23
Oktober
2015,
dari
http://www.depkes.go.id/resources/download/pusdatin/infodatin/infodatin-anakbalita.pdf. Menteri Kesehatan RI. 2006. KMK RI Nomor 364 Tentang Pedoman Penendalian Demam Tifoid.
Diperoleh
tanggal
23
Oktober
2015,
http://peraturan.bkpm.go.id/jdih/lampiran/KEPMENKES_364_2006.pdf.
dari
Pegues, David A, dan Samuel I. Miller. 2013. Salmonelosis. Dalam: (eds) alih bahasa; Brahm U. Pendit, dkk. (eds) Harrison: Gastroenteropatologi & Hepatologi. Jakarta: EGC. Tim Mikrobiologi FK UNRAM. 2015. Panduan Praktikum Mikrobiologi : Tes Widal. Mataram; FK UNRAM
