LAPORAN PRAKTIKUM HEMATOLOGI IV
Disusun oleh : Diah Esti Hapsari G1C217195
PROGRAM STUDI DIPLOMA IV ANALIS KESEHATAN FAKULTAS ILMU KEPERAWATAN DAN KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SEMARANG 2018
Praktikum I
: Estimasi Trombosit dan Estimasi Leukosit
Tanggal Praktikum
: Sabtu, 3 Februari 2018
A. Dasar Teori Estimasi adalah perkiraan, penilaian atau pendapat. Estimasi adalah suatu metode dimana kita dapat memperkirakan nilai dari suatu populasi dengan menggunakan nilai dari sampel. Trombosit merupakan salah satu komponen darah yang terdapat pada tubuh manusia, yang berperan penting dalam hemostasis. Trombosit berasal dari fragmentasi sitoplasma megakariosit. Pemeriksaan hitung jumlah trombosit, sudah terdapat beberapa metode, diantaranya dengan metode langsung dan tidak langsung.Metode tidak langsung yang dapat digunakan adalah dengan cara estimasi. Menurut Barbara Brown, hitung jumlah trombosit pada preparat apusan darah tepi dengan pengecatan Giemsa, yaitu rata-rata trombosit per lapang pandang dengan perbesaran obyektif 100x dan dikalikan 20.000/mm3 . Trombosit yang dihitung bisa dalam keadaan normal, tinggi, ataupun rendah. Persyaratan dalam metode ini adalah preparat yang digunakan harus baik, agar dapat diketahui letak zona yang akan diperiksa. Zona yang sebaiknya diperiksa adalah zona V, karena pada zona ini tidak terdapat kecenderungan agregasi yang berlebih dari trombosit. Estimasi leukosit dilakukan untuk bisa menyebut kesesuaian antara hasil dari alat hematologi otomatis dan nilai estimasi dapat dihitung menggunakan rumus. Hasil maksimal atau minimal terdapat nilai kritis yang dikeluarkan oleh alat kemudian harus dikonfirmasi dengan apusan darah.
B. Tujuan Estimasi Trombosit
Untuk mengkonfirmasi hasil yang di keluarkan oleh alat dengan pemeriksaan apusan darah maupun sumsum tulang, kemudian dapat menilai preparat tersebut termasuk ke dalam trombositosis, normal atau trombositopeni. Estimasi Leukosit
Untuk mengkonfirmasi hasil yang di keluarkan oleh alat dengan pemeriksaan apusan darah maupun sumsum tulang, kemudian dapat
Praktikum I
: Estimasi Trombosit dan Estimasi Leukosit
Tanggal Praktikum
: Sabtu, 3 Februari 2018
A. Dasar Teori Estimasi adalah perkiraan, penilaian atau pendapat. Estimasi adalah suatu metode dimana kita dapat memperkirakan nilai dari suatu populasi dengan menggunakan nilai dari sampel. Trombosit merupakan salah satu komponen darah yang terdapat pada tubuh manusia, yang berperan penting dalam hemostasis. Trombosit berasal dari fragmentasi sitoplasma megakariosit. Pemeriksaan hitung jumlah trombosit, sudah terdapat beberapa metode, diantaranya dengan metode langsung dan tidak langsung.Metode tidak langsung yang dapat digunakan adalah dengan cara estimasi. Menurut Barbara Brown, hitung jumlah trombosit pada preparat apusan darah tepi dengan pengecatan Giemsa, yaitu rata-rata trombosit per lapang pandang dengan perbesaran obyektif 100x dan dikalikan 20.000/mm3 . Trombosit yang dihitung bisa dalam keadaan normal, tinggi, ataupun rendah. Persyaratan dalam metode ini adalah preparat yang digunakan harus baik, agar dapat diketahui letak zona yang akan diperiksa. Zona yang sebaiknya diperiksa adalah zona V, karena pada zona ini tidak terdapat kecenderungan agregasi yang berlebih dari trombosit. Estimasi leukosit dilakukan untuk bisa menyebut kesesuaian antara hasil dari alat hematologi otomatis dan nilai estimasi dapat dihitung menggunakan rumus. Hasil maksimal atau minimal terdapat nilai kritis yang dikeluarkan oleh alat kemudian harus dikonfirmasi dengan apusan darah.
B. Tujuan Estimasi Trombosit
Untuk mengkonfirmasi hasil yang di keluarkan oleh alat dengan pemeriksaan apusan darah maupun sumsum tulang, kemudian dapat menilai preparat tersebut termasuk ke dalam trombositosis, normal atau trombositopeni. Estimasi Leukosit
Untuk mengkonfirmasi hasil yang di keluarkan oleh alat dengan pemeriksaan apusan darah maupun sumsum tulang, kemudian dapat
menilai preparat tersebut termasuk ke dalam leukopenia, normal atau leukositosis.
C. Alat dan Bahan
Oil Imersi
Mikroskop
Preparat CML dan ALL
Tissue
Counter cell
D. Cara Kerja Estimasi Trombosit 1. Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan. 2. Letakkan preparat pada meja objek 3. Pengamatan dilakukan dari perbesaran 10X untuk mencari lapang pandang. 4. Setelah menemukan lapang pandang putar lensa ke perbesaran 100X, kemudian diteteskan oil imersi dan diamati. 5. Untuk bisa dilakukan pengamatan dan penghitungan pastikan berada pada zona baca 4-5 pada preparat apusan darah 6. Dihitung estimasi leukosit sebanyak 10 lapang pandang. 7. Rumus Estimasi Estimasi Trombosit: rata-rata 10 lapang pandang (100X) X 20.000
Estimasi Leukosit
1. 2. 3. 4.
Siapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Letakkan preparat pada meja objek. Dilakukan pengamatan pada perbesaran objektif 10X Untuk bisa dilakukan pengamatan dan penghitungan pastikan berada pada zona baca 4-5 pada preparat apusan darah 5. Dihitung estimasi leukosit sebanyak 10 lapang pandang. 6. Rumus estimasi
Estimasi leukosit: rata-rata rata-ra ta sel 10 LP/30 X11.000
E. Nilai Normal Estimasi Trombosit Nilai normal trombosit : 150.000- 400.000 cell/mm 3 - Normal : ditemukan 8-20 sel per lapang pandang - Trombositopenia : < 150.000sel/mm3ditemukan < 8 sel per LP - Trombositosis : >400.000sel/mm3ditemukan > 20 sel per LP Estimasi Leukosit Nilai normal leukosit : 4.000-11.000 cell/mm3 - Normal : ditemukan 20-30 sel per lapang pandang - Leukopenia : <4.000sel/mm3ditemukan <20 sel per LP - Leukositosis : >11.000sel/mm3ditemukan >30 sel per LP - Hiperlekositosis : >100.000 sel/mm3 - Nilai kritis : <2000sel/mm3 atau > 50.000 sel/mm 3 F. Hasil Pengamatan Preparat ALL (Acute Lymphoblastic Leukemia) Estimasi Trombosit LP1: 6 LP6: 7 LP2: 2 LP7: 4 LP3: 7 LP8: 3 LP4: 2 LP9: 4 LP5: 5 LP10: 6 jumlah 10 lapang pandang 46 sel Rata- rata 10 lapang pandang 4,6 Perhitungan E T : 46/10 X 20.000 : 92.000 = Trombositopenia
Estimasi Leukosit : Leukositosis
Preparat CML (Cronic Myeloblastic Leukemia) Estimasi Trombosit : Trombositosis Estimasi Leukosit
: Hiperlekositosis
G. Pembahasan Penghitungan estimasi trombosit maupun lekosit bertujian untuk mengkonfirmasi hasil yang di keluarkan oleh alat otomatis, maka dibuat preparat apusan darah kemudian dapat menilai untuk trombosit (trombositopenia, normal, trombositosis) sedangkan leukosit (leukopenia, normal, leukositosis atau hiperleukositosis). Pembacaan estimasi yang ideal dilakukan pada zona 4-5 karena pada zona ini eritrosit tidak roulux atau terpisah. Estimasi leukosit dilakukan pengamatan pada perbesaran objektif 10X dan dilakukan sebanyak 10 lapang pandang. Estimasi trombosit dilakukan pengamatan pada perbesaran 100X karena sel trombosit memiliki sifat spesifik dan menggunakan perbesaran 100X untuk penegasan identifikasi.
H. Kesimpulan Estimasi trombosit Preparat ALL (Acute Lymphoblastic Leukemia) adalah trombositopenia.
Estimasi leukosit Preparat ALL (Acute Lymphoblastic Leukemia) adalah leukositosis. Estimasi trombosit Preparat CML (Cronic Myeloblastic Leukemia) adalah trombositosis. Estimasi leukosit Preparat CML (Cronic Myeloblastic Leukemia) adalah hiperleukositosis.
Praktimum II dan CML
:Pengamatan Preparat Thalasemia, AML, CLL, ALL
Tanggal Praktikum : Sabtu, 10 Februari 2018
A. Dasar teori Thalasemia adalah penyakit kelainan darah yang diakibatkan oleh faktor genetika dan menyebabkan protein yang ada di dalam sel darah merah (hemoglobin) tidak berfungsi secara normal. Terdapat 2 jenis thalasemia yang terjadi, yaitu alfa dan beta, dimana kedua jenis ini memiliki kaitan gen yang menentukan kadar keparahan dari penyakit yang diturunkan ini. Thalasemia beta merupakan jenis yang lebih sering terjadi. Thalasemia terkadang dapat mengganggu aktivitas yang dijalani penderita dikarenakan kadar oksigen yang lemah dalam tubuh. Leukemia adalah penyakit kanker darah yang merupakan penyakit dalam klasifikasi kanker (neoplasma) pada darah atau sumsum tulang yang ditandai oleh perbanyakan secara tak normal atau transformasi maligna dari selsel pembentuk darah di sumsum tulang dan jaringan limfoid, umumnya terjadi pada sel darah putih (leukosit). Jenis kanker leukosit diantaranya Acute Lymphocytic Leukemia (ALL), Acute Myelogenous Leukemia (AML), Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL), dan Chronic Myelogenous Leukemia (CML).
B. Alat dan Bahan
Mikroskop
Oil imersi
Tissue Bahan : Preparat AML,CML, ALL, CLL
C. Cara kerja 1. Disiapkan semua alat dan bahan yang akan digunakan 2. Letakkan sediaan preparat pada meja objek 3. Atur lensa dari perbesaran kecil objektif 10X untuk mencari lapang pandang 4. Beri 1 tetes oil imersi, dilakukan pengamatan dengan perbesaran objektif 100X 5. Pengamatan preparat dengan seksama untuk melihat kelainan morfologi sel
D. Pengamatan Preparat Pengamatan Preparat Thalasemia a. Tujuan - Untuk menegetahui kelainan morfologi sel eritrosit - Untuk mengetahui kelainan warna sel eritrosit - Untuk mengetahui kelainan ukuran sel eritrosit b. Hasil pengamatan
c. Kesimpulan Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dapat ditemukan kelainan eritrosit dalam bentuk sel target, akantosit, sel sabit, bur cell, sferosit dll.
Pengamatan preparat AML (Acute Myeloid Leukimia )
a. Tujuan - Untuk mengetahui sel – sel yang dominan myeloid dalam preparat - Untuk menegakkan diagnosis dan skrining penyakit b. Hasil pengamatan
c. Kesimpulan Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dapat ditemukan sel dominan yaitu sel blast dalam preparat. Pengamatam CML (Cronic Myeloblastic Leukemia)
a. Tujuan - Untuk mengetahui tahapan maturasi sel leukosit bergranula - Untuk menegakkan diagnosis dan skrining penyakit b. Hasil pengamatan
c. Kesimpulan Berdasarkan pengamatan yang telah dilakukan dapat ditemukan semua tahapan maturasi sel leukosit seri granulosit. Pengamatan ALL (Acute Limphoblastic Leukemia) a. Tujuan - Untuk mengetahui sel-sel dominan lymphoblast pada preparat - Untuk menegakkan diagnosisi dan skrining penyakit b. Hasil pengamatan
c. Kesimpulan Berdasarkan pengamat yang telah dilakukan dapat ditemukan sel dominan lymphoblast pada preparat. Pengamatan CLL (Cronic Limphositic Leukemia)
a. Tujuan - Untuk mengetahui sel- sel dominan limphosit pada preparat - Untuk menegakkan diagnosis dan skrining penyakit b. Hasil pengamatan
c. Kesimpulan Berdasar pengamat yang telah dilakukan dapat ditemukan sel dominan lonfosit dan terdapat smuge cell. E. Pembahasan Jenis kanker leukemia diantaranya: 1) Acute Lymphocytic dapat menghambat fungsi limfosit sehingga Leukemia (ALL) pengidapnya berpotensi mengalami infeksi serius. Kanker darah ini umumnya diidap oleh anak-anak, tapi bisa juga menyerang dewasa. 2) Acute Myelogenous Leukemia (AML) Ini adalah jenis kanker darah yang umumnya menyerang dewasa. Tetapi AML juga dapat diidap oleh anakanak serta remaja. Kanker ini akan membentuk sel-sel mieloid yang tidak sempurna dan dapat menyumbat pembuluh darah. 3) Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) jenis kanker darah ini hanya dialami oleh orang dewasa. CLL umumnya baru terdeteksi pada stadium lanjut karena pasien cenderung tidak merasakan gejala-gejalanya untuk waktu yang lama. 4) Chronic myelogenous leukemia (CML) jenis kanker darah ini kebanyakan diderita oleh orang-orang dengan usia di atas 20 tahun. CML memiliki dua tahap. Pada tahap pertama, sel-sel abnormal akan berkembang secara perlahan-lahan. Ketika memasuki tahap kedua, jumlah sel-sel abnormal akan bertambah dengan pesat sehingga akan menurun secara drastis. F. Kesimpulan Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan praktikan dapat mengetahui dan membedakan kelainan morfologi sel dan jenis-jenis sel jajaran granulosit.
Pembuatan Preparat Sumsum Tulang Tanggal Praktikum: Sabtu, 24 Februari 2018
A. Dasar teori Sumsum tulang merupkan tempat produksi sel-sel darah. Pemeriksaan sumsum tulang merupakan pemeriksaan khusus atas dasar indikasi, sebab membutuhkan tindakan khusus. Terdapat penyakit penyakit sumsum tulang yaitu leukemia, anemia aplastic. Perubahan dalam sumsum tulang dilihat dari estimsi jumlah leukosit abnormal hipoatau hiper dan terdapat sel-sel abnormal dalam sel darah tepi. Keterangan tentang hematopoesis yang berlangsung dalam sumsum tulang, sejumlah kecil sumsum di ambil dengan memakai jarum khusus yang dibuat dengan maksud tersebut.Pada orang dewasa punksi sumsum sering dilakukan pada corpus sterni setinggi sela iga ketiga. Tempat lain ialah os ileum sedikit dibawah crista iliaca atau salah satu processus spinosus vertebrae lumbalis. Pada anak kurang dari 2 tahun, punksi dapat dilakukan juga pada ujung kranial dan sebelah medial os tibia. Menurut keadaan klinik, tempat lain-lain pun dapat dipakai untuk punksi. Pemeriksaan sumsum tulang selain untuk pemeriksaan hematologi juga pemeriksaan mikrobiologi (infiltrasi), imunologi (sel tiping), sitogenik,transplantasi stem cell, pemeriksaan sel LE dll. B. Tujuan - Untuk mengetahui cara pembuatan apusan sumsum tulang - Untuk dapaat membedakan metode pembuatan apusan sumsum tulang sesuai dengan penilaian pemeriksaan C. Alat dan Bahan
Objek glass
Sarung tangan (Handscon)
Cawan petri
Tabung vakum EDTA
Rak tabung
Pipet disposable
Tissue
Bahan : punksi Sumsum Tulang dengan antikoagulan EDTA
D. Cara kerja Preparat Sepread 1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, disiapkan 3 objek glass 2. Letakkan objek glass pada cawan petri dengan posisi miri ng 3. Sampel sumsum tulang dihomogenkan terlebih dahulu sebelum pembuatan preparat 4. Setelah dihomogenkan diambil sampel dengan menggunakan pipet, diteteskan pada objek glass yang sudah dimiringkan, biarkan darah mengalir 5. Darah yang mengalir diratakan dengan menggunakan pemalit agar terlihat fragmen-fragmen sumsum tulang. Satu tetes sumsum tulang dapat dibuat beberapa preparat. 6. Tarik fragmen sumsum tulang dengan menggunakan pemalit secara horizontal 7. Buat apusan dengan cara mendorong pemalit seperti membuat apusan darah biasa 8. Apusan sumsumtulng yang ideal memiliki ekor bergerigi dengan fragmen berada dipangkal 9. Tunggu hingga benar-benar kering 10. Lakukan fiksasi dan pewarnaan Preparat Squash
1. Disiapkan Alat dan bahan yang akan digunakan 2. Letakkan objek glasss pada cawan petri dengan posisi dimir ingkan 3. Sampel sumsusm tulang dihomogenkan, kemudian diambil menggunakan pipet dan diteteskan pada objek glass 4. Sumsum tulang yang mengalir diratakan menggunakan pemalit agar telihat fragmen-fragmen sumsum tulang 5. Tarik fragmen sumsum tulang dengan menggunakan pemalit secara horizontal 6. Fragmen yang terdapat diujung pemalit diletakkan di tengah objek glass 7. Tempelkan pemalit dan tunggu sumsum tulang menyebar, kemudian dorong kedepan sambil ditekan dengan tujuan fragmen sumsum tulang pecah
8. Setelah didorong ke depan kemudian dorong atau digesek kesamping secara cepat. 9. Tunggu hingga benar-benar kering 10. Lakukan fiksasi dan pewarnaan E. Penilaian selularitas - Normoselullar
- Hiperselullar
- Hiposelullar
: Perbandingan volume sel lemak dengan sel hemopoetik sama besar dan sama banyak/besar. Yang artinya aktivitas produksi sel hemopoetik dengan sel semak seimbang. : Perbandingan volume sel hemopoetik lebih banyak dibandingkan volume sel lemak. Yang artinya aktivitas produksi sel hemopoetik yang tinggi. : Perbandingan volume sel hemopoetik lebih sedikit dibandingkan volume sel lemak. Yang artinya aktivitas produksi sel hemopoetik yang rendah.
F. Hasil Pembuatan Preparat
G. Pembahasan Pembuatan apusan sumsum tulang bertujuan salah satunya untuk menilai selularitas fragmen sumsum tulang. Pembuatan sumsum tulang ada 2 macam preparat spread dan squash. Preparat spread untuk menilai selularitas, menghitung jenis sel darah, hitung megakariosit, identifikasi
sel dan estimasi trombosit. Preparat squash untuk menilai estimasi selularitas dan estimasi jenis sel. Preparat tersebut memiliki zona sebaran sel yang berbeda untuk preparat spread zona sebaran sel disebut trail dan untuk preparat squash zona sebaran sel disebut core. Menilai selularitas dengan cara membandingkan antara volume sel lemak dengan volume sel hemopoetik. Apusan sumsum tulang diharapkan membentuk ekor yang bergerigi dengan fragmen berada dipangkal. Pada saat mengambil fragmen harus dengan mantap untuk mengambilnya, jika tidak fragmen tidak dapat terambil begitupun pada saat membuat apusan. Pada preparat squash pemuatanya harus benar-benar dengn menekan agar fragmen hancur. H. Kesimpulan Berdasarkan praktikum pembuatan apusan sumsum tulang praktikan dapan mengetahui cara pembuatan preparat apusan squash dan spread. Praktikan dapat mengetahui kegunaan penilaian pemeriksaan masingmasing preparat.
Pengecatan Sitokimia dan Praktikum II
:Pemeriksaan Preparat Sumsum Tulang
Tanggal Praktikum : Sabtu, 3 Maret 2018
A. Dasar teori
Pewarnaan sediaan hapus darah tepi menggunakan metode Giemsa atau Wright belum memuaskan untuk membedakan seri leukosit untuk menunjang diagnosis leukemia dan kelainan leukosit, oleh sebab itu diperlukan pewarnaan sitokimia lainnya. Dalam bahasan kali ini membahas mengenai pewarnaan (pulasan) peroksidase, Sudan Black, Periodic Acid Schiff (PAS), Pewarnaan Lephen,Pewarnaan Fe, dan Leukocyte Alkaline Phosphatase (LAP). Pewarnaan sitokimia adalah pewarnaan sediaan hapus darah t epi untuk membedakan seri leukosit untuk menunjang diagnosis leukemia dan kelainan leukosit. B. Macam Pengecatan Sitokimia 1. Pengecatan Giemsa
a. Tujuan - Untuk mengetahui berbagai macam sel yang terdapat pada preparat sumsum tulang. - Untuk membedakan sel terutama dalam jajaran granula b.Prinsip Pada pengecatan giemsa dilakukan pengelompokan eosin (merah) dan methylene blue (biru). Pengelompokan yang bersifat asam yang akan mengikat zat warna dasar azure methylene blue seperti asam nukleat, protein dari inti sel dan sitoplasma. Pengelompokan
yang bersifat basa dari molekul Hb yang akan mengikat zat warna yang bersifat asam (eosin).
c. Alat, Bahan dan Reagen
Pipet disposible
Tissue
Giemsa pekat
Rak pengecatan
Buffer
Nampan
-Buffer A : KH2PO4
Botol tempat cat
-Buffer B: Na2HPO4.2H2O
Mikroskop
Oil imersi
Methanol
d. Cara Kerja
Cara Kerja Pembuatan Giemsa 1. Siapkan campuran Buffer A+B (1:1) 2. Tambahkan
Giemsa
pekat
kedalam
buffer,
dengan
perbandinagan giemsa pelat 1 bagian : 7 bagian buffer.
Cara Kerja Pengecatan 1. Preparat yang sudah kering di fiksasi dengan methanol 5-10 menit. 2. Digenangi dengan larutan giemsa yang sudah dibuat selama 20-30 menit. 3. Sisa cat dibuang, cuci dengan air mengalir hingga benar-benar bersih 4. Keringkan diudara dan preparat siap diamati
e. Hasil Pengecatan
f. Hasil Pengamatan Preparat
g. Pembahasan Pengecatan preparat sumsum tulang dengan pewarnaan giemsa dengn prinsip asam basa maka dihasilkan warna ungu untuk bagian yang bersifat asam seperti inti sel dan warna merah muda untuk bagian basa seperti sitoplasma. Pada pewarnaan ini untuk menilai selulatitas fragmen sumsum tulang dan dapat mengetahui sel-sel yang dominan, karena pada pewarnaan ini sangat jelas untuk membedakan sel bergranula maupun tidak. Pewarnaan ini sama seperti pewarnaan giemsa biasa.
h.Kesimpulan Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan praktikan dapat
mengetahui
cara
pengecatan
dan
didapatkan
hasil
pengamatan yaitu hiperselularitas fragmen sumsum tulang, sel yang dominan adalah sel plasma dan terdapat megakariosit. 2. Pengecatan Sudan Black B / SBB (Menurut lison)
a. Tujuan Untuk mengetahui jajaran sel granulosit / granulapoetik b.Prinsip Sudan Black B dalam ethanol akan mencat phospholipid yang terdapat dalam lekosit berwarna coklat kehitaman. c. Alat dan Bahan
Pipet disposable
Nampan
Cawan petri
Botol cat
Rak pengecatan
Gelas ukur
Tissue
Mikroskop
Sarung tangan
Oil imersi
d.Reagen Larutan A:
- Penol
: 12 gr
- Ethanol 70%
: 25 ml
Larutan B:
- Na2HPO4.2H2O
: 0,225 gr
- Aquadest
: 75 ml
Laruran C:
- Sudan Black B
: 0,45 gr
- Ethanol 70%
: 150 ml
e. Cara Kerja Larutan Kerja
1. Campurkan larutan A+B (1:1) > (5ml : 5ml) 2. Tambahahkan larutan C, 3bagian (15 ml) 3. Campuran ini harus netral atau sedikkit alkalis
Cara kerja Pengecatan
1. Preparat yang sudah kering di fiksasi dengan uap formalin dalam staning jar selama 5-10 menit. 2. Cuci dengan aquadest, kemudian dikeringkan. 3. Ambil 2 pasang cawan petri, kemudian preaparat diletakkan dalam cawan petri, dengan meja rata 4. Genangi dengan larutan kerja dengan pipet (jangan sampai bleber) dalam cawan petri tertutup selama 30 menit. 5. Buang sisa cat, rendam dengan alcohol 70% selama 2 menit sambil digoyang-goyang.
6. Cuci dengan air mengalir, lakukan counter stain dengan safranin 1% selama 10-30 detik. 7. Cuci dengan air mengalir, keringkan preparat siap diperiksa.
f. Interpretasi hasil - Seri granulosit
: blast positif setempat, makin tua makin
banyak. - Seri monosit
: seperti seri granulosit, tetapi dengan
granula yang lebih besar sehingga sangat sulit di bedakan dengan promielosit. - Seri limposit
: negative
- Seri eritrosit
: negative
- Seri plasma
: negative
g.Hasil Pewarnaan
h.Hasil Pemeriksaan
i. Pembahasan
j. Kesimpulan
3. Pengecatan Lepehne
a. Tujuan Tujuan pewarnaan lepehne yaitu, untuk melihat sel dari jajaran eritrosit. b.Prinsip Prinsip pengecatan ini dilakukan secara bertingkat, dengan 2 kali pewarnaan, pewarnaan ini mengecat bagian dari sitoplasma dari sel jajaran seri eritrosit tua maupun muda. Pewarnaan 1 akan memberi warna pada sitoplasma, menghasilkan warna hijau pada sitoplasma.
Pewarnaan 2 menggunakan cat giemsa akan menghasilkan inti yang berwarna ungu kebiruan dan akan mengecat sel-sel bergranula.
c. Alat dan Bahan
Pipet disposable
Mikroskop
Cawan petri
Oil imersi
Sarung tangan (handscond)
Gelas ukur
Nampan
Tissue
Botol cat
d. Reagen Reagen lepehne yang trdiri dari
Larutan benzidine 0,6% dalam ethanol 96% sebanyak 2 ml
0,5 ml perhidrol 30% dalam 4,5 ml ethanol 70%
Methanol
Giemsa (larutan kerja)
e. Cara Kerja 1. Preparat yang sudah kering difiksasi dengan methanol selama 5-10 menit. 2. Rendam dengan reagen lepehne selama 10 menit 3. Cuci dan keringkan 4. Rendam dengan cat giemsa (lar. kerja) 15-20 menit 5. Cuci dan keringkan, preparat siap diperiksa. f. Interprestasi Lepehne akan memberikan warna hijau terang pada sitoplasma seri eritrosit.
g.Hasil pengecatan
h.Hasil pemeriksaan
i. Pembahasan
j. Kesimpulan
4. Pengecata n Fe / PERL’S Stain
a. Tujuan Pengecatan fe bertujuan untuk mengetahui simpanan besi si dalam sumsum tulang. b.Prinsip Ion ferri dalam hemosiderin mengubah Ferrocyanida yang berwarna kuning dan mudah larut dalam larutan asam menjadi suatu endapan (presipitat) Ferri Ferrocyanida yang berwarna biru (reaksi peri). c. Alat dan Bahan
Staning jar
Sarung tangan (handscond)
Tissue
Pipet
Mikroskop
Gelas ukur
Oil imersi
Botol reagen
Nampan
d. Reagen
HCl 1 N
K Ferrocyanida 4%
Methanol
HCl 20%
e. Cara Kerja 1. Preparat yang sudah kering difiksasi dengan methanol 5-10 menit 2. Tuangkan ½ bagian HCl 1 N kedalam staining jar dan masukkan kedalam water bath 56oC selama 10 menit.
3. Tambahkan ½ bagian K Ferrocyanida 4% ke dalam staining jar 4. Masukkan preparat yang sudah di fiksasi hingga terendam semua 5. Biarkan selama 10-20 menit dalam water bath 56 oC 6. Bilas dengan air mengalir ½ - 1 menit 7. Lakukan counter stain dengan safranin 1% 10-30 detik 8. Cuci dengan air mengalir dan keringkan
f. Interpretasi Kandungan Fe di daalam fragmen sumsum tulang dan sekitarnya akan berwarna biru, banyak sedikitnya kandungan Fe ter gantung dari warna biru yang dihasilkan.
g.Penilaian penyimpanan besi - 0
: Tidak ada besi/ negatif
- 1+
: Partikel besi terlihat kecil dengn objektif 100x
- 2+
: Partikel besi terlihat kecil dengan perbesaran kecil 10x
- 3+
: Partikel besi kecil kecil dalam jumlah banyak
- 4+
: Partikel besi lebih besar sampai membentuk agregat
- 5+
: Agregat bergerombol dari besi
- 6+
: Agregat bergerombol besar menutupi gambaran selularitas
h.Hasil pengecatan
i. Hasil pemeriksaan
j. Pembahasan
k.Kesimpulan
5. Pengecatan PAS (Periodic Acid Schiff)
a. Tujuan Pengecatan PAS bertujuan untuk mewarnain untuk mengetahui sel dari jajaran seri limphosit. b.Prinsip Pengecatan PAS berguna untuk mengenali sel sel jajaran limposit yang mengandung glicogen. Reaksi yang terjadi adalah oksidasi glicogen oleh asam periodat (Periodic Acid) menjadi aldehida, dan bereaksi dengan reagent schiff yang menyusun warna merah. c. Alat dan Bahan
Pipet
Oil imersi
Cawan petri
Sarung tangan (handscond)
Mikroskop
Tissue
Nampan Botol reagen
d. Reagen
Kristal formalin
Larutan Periodic Acid
Lrutan schiff
Larutan Hematoxylin
e. Cara kerja 1. Preparat di fiksasi dengan uap formalin 10 menit 2. Rendam dengan Periodic Acid selama 30 menit 3. Buang cat, kemudian cuci dengan air mengalir selama 10 menit, bilas dengan aquadest 4. Rendam dengan larutan Schiff selama 30 menit
5. Buang cat, cuci dengan air mengalir sampai benar-benar bersih selama 15 menit 6. Rendam dengan Hematoxylin selama 10 menit 7. Buang cat, cuci dengan air mengalir selama 10 menit 8. Preparat dikeringkan kemudian preparat siap pemeriksaan
f. Interpretasi Pada penderita dengan B-lymphoblastic leukemia, terlihat granulasi merah tua kasar pada sitoplasma limfoblas
g. Hasil Pengecatan
h. Hasil pemeriksaan
