LAPORAN PRAKTIKUM FITOKIMIA I
DISUSUN OLEH :
WAHYU
1043050031
ENRICO RENIBAN
10430500
ZULFIQAR SUTA NUGRAHA
1043050061
UNIVERSITAS 17 AGUSTUS 1945 JAKARTA 2013
I.
Judul
: Skrining Kayu Secang
II.
Tujuan
:
Mengidentifikasi senyawa yang terkandung dalam Kayu Secang Untuk memisahkan senyawa-senyawa kimia yang terdapat dalam simplisia berdasarkan kepolarannya III.
Monografi Umum Klasifikasi
IV.
:
:
-
Kingdom
: Plantae (tumbuhan)
-
Divisi
: Magnoliophyta
-
Subdivisi
: Angiosparmae
-
Kelas
: Magnoliopsida
-
Ordo
: Fabales
-
Family
: Caesalpiniaceae
-
Genus
: Caesalpinia
-
Spesies
: Caesalpinia sappan lignum
Pemerian
:
Tidak berbau, rasa agak kelat Makroskopik
:
Kayu berbentuk potongan-potongan atau kepingan dengan ukuran sangat bervariasi atau berupa serutan-serutan ; keras dan padat ; warna merah jingga atau kuning. V.
Kandungan
:
Asam galat, tanin, resin, resorsin, brasilin, brasilein, d-alfa phellandrene, oscimene, minyak atsiri VI.
Penggunaan Diare, disentri, batu darah (TBC), sifilis, muntah darah, malaria, tetanus
VII.
Identifikasi Kocok 100 mg serbuk kayu dengan 5 ml metanol p selama 5 menit bila perlu dipanaskan, saring, filtrat berwarna kuning kejinggaan. -
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes H2SO4 terjadi warna ungu
-
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes HCl p terjadi warna ungu
-
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes KOH 5% b/v terjadi warna ungu
-
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes NaOH 5% b/v terjadi warna ungu
-
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes (CH3COO)2Pb 5% b/v terjadi warna ungu
-
Pada 3 tetes filtrat tambahkan 1 tetes FeCl3 5% b/v terjadi warna ungu
VIII. Cara kerja
:
Bagan ekstraksi bertingkat Simplisia kering dan halus (timbang 25 g) Ekstraksi dengan heksan
Sari hekan (diuapkan)
Ampas (dikeringkan) Ekstraksi dengan kloroform
Sari kloroform (diuapkan)
Ampas (dikeringkan) Ekstraksi dengan metanol
Sari metanol
Ampas
Hidrolisa
Sari metanol (identifikasi)
+ HCl 2N + etil asetat
Sari air yang Bersifat asam
IX.
Etil asetat
Alat dan Bahan : Alat
:
Bahan :
-
Erlenmeyer
-
Kayu secang
- Mayer
-
Tabung reaksi
-
Heksan
- Dragendrof
-
Penangas air
-
Metanol
- FeCl3
-
Pipet tetes
-
Etil asetat
-
Penjepit
-
HCl 2%
-
Cawan uap
-
Etanol
-
Corong
-
Anhidrida asetat
X.
HASIL
A. Skrining heksan No Identifikasi 1 Minyak atsiri
Cara Kerja Sari heksan diuapkan kering /
Teori Bau aromatis
Pengamatan Cawan uap
Hasil +
Tetes minyak
Kertas saring
+
Tabung reaksi
-
Plat tetes
-
kental + alkohol 2
Lemak
Sari heksan diuapkan kering + KOH 10% (penyabunan)
3
Sterol dan
-Sari heksan diuapkan kering
-Sterol
triterpenoid
/kental + asam asetat + CHCl3 +
cincin hijau/biru
H2SO4 p
Terpenoid cincin hijau/merah
-Ekstrak dalam plat tetes +
-Sterol
H2SO4 p + asam asetat anhidrat
hijau/biru Terpenoid ungu,merah,coklat
4
Alkaloid
Sari heksan diuapkan kental + HCl 2N
Tabung reaksi
ambil lapisan asam. Bagi
3 tabung :
5
Kumarin
+ Mayer
putih
-
+ Dragendrof
coklat merah
-
+ Bouchardat Sari heksan diuapkan kering /
coklat Fluorosensi kuning
kental + air panas dinginkan.
kehijauan
Tabung reaksi di UV
Bagi 2 tabung : + NH4OH 10% + Pembanding
Kesimpulan : Ekstrak kayu secang (Caesalpinia sappan lignum) positif mengandung minyak atsiri dan lemak
-
B. Skrining etil asetat No 1
Identifikasi
Teori
Pengamatan
Hasil
Biru kehijauan/hijau
Tabung reaksi
+-
Merah bata
Tabung reaksi
+-
Sterol dan
dipanaskan diuapkan -Sari etil astet diuapkan
-Sterol
Tabung reaksi
-
triterpenoid
kering
cincin hijau/biru
Plat tetes
-
Tanin
Cara Kerja Sari etil asetat + 3 tetes FeCl33
tua 2
Gula pereduksi
Sari etil asetat + 2 tetes Fehling A + 2 tetes Fehling B,
3
/kental + asam asetat +
CHCl33 + H22SO44 pp
Terpenoid cincin hijau/merah
-Ekstrak dalam plat tetes +
-Sterol
H22SO44 pp + asam asetat anhidrat
hijau/biru Terpenoid ungu,merah,coklat
4
Alkaloid
diuapkan kental + HCl Sari heksan diuapkan
2N
Tabung reaksi
ambil lapisan asam. Bagi
3 tabung :
5
Kumarin
+ Mayer
putih
-
+ Dragendrof
coklat merah
-
+ Bouchardat diuapkan kering / Sari heksan diuapkan
coklat Fluorosensi kuning
kental + air panas dinginkan.
kehijauan
Tabung reaksi
-
di UV
Bagi 2 tabung : + NH44OH 10% 6
Emodol
+ Pembanding diuapkan pekat, Sari etil astetat diuapkan
Merah
Tabung reaksi
+-
kocok Sari etil asetat + HCl pp + logam
Merah naik ke atas
Tabung reaksi
-
Mg, dinginkan + amil alkohol
(flavonoid)
dinginkan + NH44OH 25% 7
Flavonoid
Merah tetap di bawah (tanin&flavonoid) Kesimpulan : Ekstrak kayu secang (Caesalpinia sappan lignum) positif mengandung tanin C. Skrining ekstrak methanol
Kesimpulan : Ekstrak kayu secang (Caesalpinia sappan ligum) positif mengandung emodol
D. Skrining hidrolisa Sari methanol + HCl 2N sama banyak, direfluks selama 1 jam dinginkan disari dengan eter, dikocok lalu diambil lapisan atas. Hasil hidrolisa dilakukan pemeriksaan seperti yang di bawah ini No 1
Identifikasi Tanin
Cara Kerja Sari etil asetat + 3 tetes FeCl3
Teori
Pengamatan
Hasil
Biru kehijauan/hijau
Tabung reaksi
-
Merah bata
Tabung reaksi
-
Tabung reaksi
-
Plat tetes
-
tua 2
Gula pereduksi
Sari etil asetat + 2 tetes Fehling A + 2 tetes Fehling B,
3
Sterol dan
dipanaskan -Sari etil astet diuapkan
-Sterol
triterpenoid
kering
cincin hijau/biru
/kental + asam asetat +
CHCl3 + H2SO4 p
Terpenoid cincin hijau/merah
-Ekstrak dalam plat tetes +
-Sterol
H2SO4 p + asam asetat anhidrat
hijau/biru Terpenoid ungu,merah,coklat
4
Alkaloid
Sari heksan diuapkan kental + HCl 2N
Tabung reaksi
ambil lapisan asam. Bagi
3 tabung :
5
Kumarin
+ Mayer
putih
-
+ Dragendrof
coklat merah
-
+ Bouchardat Sari heksan diuapkan kering /
coklat Fluorosensi kuning
kental + air panas dinginkan.
kehijauan
Tabung reaksi
-
di UV
Bagi 2 tabung : + NH4OH 10% 6
Emodol
+ Pembanding Sari etil astetat diuapkan pekat,
Merah
Tabung reaksi
-
Sari etil asetat + HCl p + logam
Merah naik ke atas
Tabung reaksi
-
Mg, dinginkan + amil alkohol
(flavonoid)
dinginkan + NH4OH 25% kocok 7
Flavonoid
Merah tetap di bawah (tanin&flavonoid) Kesimpulan : Ekstrak kayu secang (Caesalpinia sappan ligum) negatif terhadap semua uji
Kromatografi Lapis Tipis I.
II.
Tujuan: •
Pemisahan senyawa dari suatu kelompok senyawa
•
Identifikasi zat yang terkandung dalam senyawa
•
Mencari eluen yang cocok
•
Identifikasi senyawa
Teori: Kromatografi lapis-tipis merupakan salah satu kromatografi yang berdasarkan adsorpsi,
tahapan analisis dengan kromatografi lapis tipis sama seperti pada kromatografi kertas. Kelebihan kromatografi laspis tipis dibandingkan dengan kromatografi kertas adalah waktu elusi yang relative lebih pendek dan dapat digunakan untuk analisis kuantitatif. Deteksi noda pada kromatografi lapis tipis tekadang lebih mudah dari pada kromatografi kertas karena noda tidak berwarna atau tidak berpendar jika dikenai sinar UV(ultraviolet) dan dapat ditampakkan dengan cara papan pengembang uap iod akan bereaksi dengan komponen. Komponen sample baik secara kimia atau berdasarkan kelarutan membentuk warna-warna tertentu. Kelebihan kromatografi tipis yang lain adalah pemakaian pelarut dan cuplikan yang jumlahnya sedikit, kemungkinan penotolan cuplikan berganda dan tersedianya berbagai metode seperti KCP, KCC dan kromatografi ekslusi. Kromatografi lapis tipis menunjukkan berbagai gerakan pelarut, pelarut mengalir keatas melalui lapisan, menguap dari lapisan sebelah bawah garis pelarut dan terserap oleh lapisan disebelah atas garis depan. Sampel yang biasanya berupa campuran senyawa organic diteteskan didekat salah satu lempengan dalam bentuk larutan dengan jumlah kecil, biasanya beberapa mikroliter berisi sejumlah microgram senyawa. Sebuah suntikan hipodemik atau sebuah pipet gelas kecil dapat digunakan. Noda sample dikeringkan kemudian sisi lempengan tersebut dicelupkan kedalam fase bergerak yang sesuai. Pelarut organic naik disepanjang lapisan tipis zat padat diatas lempengan dan bersamaan dengan pergerakan pelarut tersebut zat terlarut sample dibawa dengan laju yang tergantung pada kelarutan zat terlarut tersebut dalam fasa bergerak dan interaksinya dengan zat padat. Setelah garis depan pelarut bergerak sekitar 10cm, lempengan dikeringkan dan noda-noda zat terlarutnya diperiksa seperti pada kromatografi kertas. Pemisahan dapat dikerok dari lempengan dengan menggunakan spatula. Zat terlarutnya akan terelusi dari bahan padat bersama-sama pelarutnya dan konsentrasi dari larutan ditentukan dengan suatu teknik seperti spektrofotometri. Sifat umum dari penyerap-penyerap untuk kromatografi lapis tipis adalah mirip dengan sifatsifat penyerap untuk kromatografi kolom. Dua sifat yang penting untuk penyerap adalah besar partikel dan homogenitasnya karena adhesi terhadap penyokong sangat bergantung kepada mereka. Contoh penyerap yang digunakan untuk pemisahan-pemisahan dalam kromatografi lapis tipis ialah misalkan silica atau alumina. Silica gel kebanyakan digunakan dengan diberi pengkilat (binder) yang dimaksud untuk memberikan kekuatan pada lapisan dan menambah adhesi pada gelas penyokong. Pengikat yang digunakan kebanyakan adalah kalsium sulfat, tetapi biasanya dalam perdagangan silica gel telah diberi pengikat. Silica ini digunakan untuk memisahkan asam
amino, alkaloid, gula, asam, lemak, lipida, minyak essensial, anion dan kation organic, sterol dan terpenoid. Selain silica ada juga penyerap lainnya seperti alumina, bubuk selulosa, pati, dan sphadex. Harga Rf merupakan parameter karakteristik kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis. Harga ini merupakan ukuran kecepatan migrasi suatu senyawa pada kromatogram dan pada kondisi konstan merupakan besaran karakteristik dan reprodusibel. Harga Rf didefinisikan sebagai perbandingan antara jarak senyawa dari titik awal dan jarak tepi muka pelarut dari titik awal. Rf = jarak titik tengah noda dari titik awal / jarak tepi muka pelarut dari titik awal. Ada beberapa factor yang menentukan harga Rf yaitu pelarut, suhu, ukuran dari bejana, kertas dan sifat dari campuran. Yang menyebabkab warna dari senyawa-senyawa pada kromatografi lapistipis adalah perbedaan tingkat kepolaran warna dari senyawa-senyawa yang sejauh mana tingkat kepolaran itu mempengaruhi perbedaan atau pemisahan yang ditandai dengan tebentuknya spotspot senyawa dalam kromatografi lapis-tipis itu tergantung dari migrasi pelarut (fase mobil/fase gerak) terhadap fasa diamnya, yaitu kromatografi lapis-tipis tersebut. III.
Alat dan bahan : Alat:
IV.
Bahan:
-
Tabung reaksi
- Ekstrak heksan kayu secang
-
Chamber
- Ekstrak etil asetat kayu secang
-
Pipa kapiler
- Ekstrak metanol kayu secang
-
Pipet tetes
- Ekstrak hidrolisa kayu secang
-
Kompor listrik
-
Panci
-
Beaker glass
-
Silica (KLT)
Prosedur Kerja 1. Menyiapkan alat dan bahan 2. Membuat eluen hexan:etil asetat dengan perbandingan 7:3 dan butanol:etil asetat:aquadest dengan perbandingan 4:1:5 (masing-masing eluen dibuat 100 ml),eluen dikocok selama 1 jam 3. Menandai dengan pensil batas bawah 1 cm dan batas atas 0,5 cm dan membagi dalam 4 untuk masing-masing ekstrak pada lempeng KLT 4. Menotolkan masing-masing ekstrak dengan menggunakan pipa kapiler 5. Mengisi chamber dengan masing-masing eluen, kemudian menjenuhkan eluen dengan cara menambahkan kertas saring ke dalam chamber sampai terbasahi semua kertas saringnya 6. Memasukkan lempeng KLT ke dalam chamber dan menunggu sampai batas tanda atas 7. Mengamati noda yang terbentuk secara visual di bawah sinar UV 8. Menghitung Rf
V.
Perhitungan Rf
a.
Eluen
heksan : etil asetat (7 : 3) Jarak spot yang bergerak (cm)
Jarak yang ditempuh
Rf
HRf
eluen (cm)
Ekstrak heksan
4,3
5
86%
Ekstrak etil asetat
4,7
5
94%
Ekstrak metanol
4
5
80%
Ekstrak hidrolisa
-
-
-
-
Rf
HRf
b. Eluen butanol : etil asetat : aquadest (4 : 1 : 5)
Jarak spot yang bergerak (cm)
Jarak yang ditempuh eluen (cm)
Ekstrak heksan
5,1
5,5
92,7%
Ekstrak etil asetat
5,1
5,5
92,7%
Ekstrak metanol
5
5,5
90,91%
Ekstrak hidrolisa
5
5,5
90,91%
PEMBAHASAN Penapisan fitokimia dilakukan terhadap keempat jenis ekstrak yang telah diperoleh yaitu ekstrrak n-heksan, etil asetat, metanol dan hidrolisa. Hal ini dilakukan guna mengetahui kandungan
metabolit sekunder yang terdapat di dalam masing-masing ekstrak tersebut. Penapisan yang dilakukan menggunakan pereaksi kimia dimana digunakan standar pembanding positif. Berdasarkan pengamatan diketahui ekstrak n-heksan mengandung minyak atsiri dan lemak. Ekstrak etil asetat terhadap zat uji. Pada pengujian KLT dilakukan dengan mengelusi lempeng menggunakan dua macam eluen, yaitu eluen heksan : etil asetat (7:3) dan eluen butanol : asam asetat : air dimana bercak terpisah dengan baik. Hasil yang didapat dari KLT dengan menggunakan eluen heksan : etil asetat adalah terbentuk tiga spot berasal dari ekstrak heksan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol dan Rf yang terbentuk yaitu : ekstrak heksan= 0,86 ; ekstrak etil asetat=0,94 ; dan ekstrak metanol= 0,80. Hasil yang didapat dari KLT dengan menggunakan eluen butanol : asam asetat : air adalah terbentuk empat spot berasal dari ekstrak hexan, ekstrak etil asetat, ekstrak metanol, dan ekstrak hidrolisa dan Rf yang terbentuk yaitu ekstrak hexan = 0,927 ; ekstrak etil asetat = 0,927 ; ekstrak metanol = 0,9091 ; dan ekstrak hidrolisa = 0,9091. Kandungan senyawa yang terdapat pada kayu secang berdasarkan literatur adalah asam galat, tanin, resin, resorsin, brasilin, brasitein, felandren, ascimene, dan minyak atsiri. KESIMPULAN Berdasarkan data hasil pengujian identifikasi kandungan Caesalpinia sappan diperoleh golongan senyawa minyak atsiri, lemak, tanin, gula pereduksi, dan emodol. DAFTAR PUSTAKA Wulandari, Intan. 2011. Teknologi Ekstraksi Dengan Metode Maserasi Dalam Etanol 70% pada Daun Kumis Kucing (Orthosiphon stamineus). buku panduan praktikum fitokimia I
