INVESTIGACION 2014

ii

21

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTÓBAL DE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INSTITUTO DE INVESTIGACIÓN EN CIENCIAS BIOLOGICAS

PROGRAMA DE INVESTIGACIÓN EN DESARROLLO DE POTENCIALES ECONÓMICAS Y BIONEGOCIOS

SUB PROGRAMA DE RECURSOS BIOLÓGICOS Y TERAPÉUTICOS

INFORME FINAL DE INVESTIGACION

Caracterización macroscópica, microscópica y cromatográfica de plantas medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho 2013.

Responsable : Mg. Enrique Javier AGUILAR FELICES
Miembro : Mg. Marta ROMERO VIACAVA
Colaborador : Q.F. Roxana LEÓN ARONÉS

AYACUCHO – PERÚ
2014

AGRADECIMIENTOS

A la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga por el apoyo financiero e institucional

A la Facultad de Ciencias Biológicas y al Área Académica de Farmacia por permitirnos utilizar sus laboratorios.

A la egresada de la Escuela de Formación Profesional de Farmacia y Bioquímica Rosario Valdez Palomino, por su apoyo en la realización de los ensayos químicos, cromatográficos y espectrales.

INDICE

Pág.
INTRODUCCION 4
REVISION BIBLIOGRÁFICA 8
MATERIALES Y METODOS 10
RESULTADOS 12
DISCUSION 19
CONCLUSIONES 22
RECOMENDACIONES 23
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 24
ANEXOS
Anexo Nº 1 Observaciones microscópicas 27
Anexo Nº 2: Desmodium molliculum 50
Anexo Nº 2:Sanguisorbaofficinalis 51
Anexo N º 3:Erodiumcicutarium 52
Anexo Nº 4: Lupinuspaniculata 53
Anexo Nº 5:Mutisiaacuminata 54
Anexo Nº 6:Xanthium spinosum L. 55
Anexo Nº 7:Bacchaiss salicifolia 56
Anexo Nº 8:Calceolaria engleriana 57
Anexo Nº 9:Saturejabrevicalyx 58
Anexo Nº 10: Pesado y preparación de los extractos 59
Anexo Nº 11: Tamizaje Fitoquímico 60
Anexo Nº 12: Curva de Calibración Acido Tánico 63

RESUMEN

El proyecto está orientado a contribuir con la obtención de un registro de las características microscópicas, macroscópicas, cromatográficas y contenido de fenoles de las plantas medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho, con la finalidad de ser utilizados para su control de calidad, siguiendo las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se seleccionaron diez plantas medicinales, a las cuales se realizó la descripción macroscópica y microscópica de la droga seca pulverizada, el contenido de metabolitos secundarios mediante reacciones químicas de coloración y precipitación, el perfil cromatográfico por cromatografía en capa fina y el contenido de compuestos fenólicos por espectrofotometría. Para cada planta medicinal se describió el tipo de parénquima, estomas, pelos o tricomas, se evidenció la presencia de metabolitos secundarios, destacándose principalmente fenoles y taninos, flavonoides, lactonas y cumarinas; y azúcares reductores principalmente. El perfil cromatográfico permitió diferenciar cada planta medicinal resáltandose la presencia de fenoles y flavonoides. Finalmente, Baccharis salicifolia "chilca" mostró mayor contenido de fenoles. Se concluye que se registraron las diferencias botánicas, cromatográficas y el contenido de fenoles de 10 plantas medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho.
Palabras clave: Plantas medicinales, caracterización microscópica, perfil cromatográfico, contenido de fenoles.

ABSTRACT

This project was carried out with purpose to obtaining a record of both microscopic and macroscopic characteristics, finger print chromatographic and phenol contents of the medicinal plants of the most use in the city of Ayacucho, in order to be used for quality control, following the recommendations of the World Health Organization (WHO). Were selected ten medicinal plants, which were realized of both microscopic and macroscopic botanical description from the crude drug grounded, the secondary metabolites through chemical reaction such as coloration and precipitation, the finger print chromatographic through thin layer chromatographic and the phenolic compounds content by spectrophotometric assays. For each medicinal plant it was described the kind of parenchyma, stomas, hair or trichomes, it was evidenced the metabolites secondary highlighting the presence of phenols, flavonoids, lactones, coumarins and reducing sugars mainly. The finger print chromatographic allowed differentiating each of medicinal plants, observing mainly phenols and flavonoids. Finally, Baccharis salicifolia "chilca" was shown the most content of phenols. It was concluded that we registered the botanical, chromatographic and phenols contents differences between ten medicinal plants the most used in the Ayacucho city.
Key words: Medicinal plants, microscopic characterization, finger print chromatographic, phenols contents.

INTRODUCCION
Desde tiempos inmemoriales en la ciudad de Ayacucho, el uso de las plantas medicinales ha sido uno de los principales recursos para aliviar las dolencias y curar las enfermedades de los pobladores, lo que sin lugar a dudas mantiene su vigencia en los tiempos modernos, con notable incremento en su empleo.
Uno de los problemas para el uso masivo de las plantas medicinales es garantizar la identidad y veracidad del material vegetal, algo que se puede hacer fácilmente cuando está fresco, como es comercializado tradicionalmente en nuestro país. Sin embargo, para su comercialización e internacionalización, en la mayoría de los países del mundo, las plantas medicinales son desecadas, para garantizar su estabilidad físico – química, reducir el volumen por la pérdida de humedad; y de esa manera son comercializadas.
Surge entonces la preocupación de cómo garantizar la identidad de una planta medicinal al estado físico de un polvo seco. La Organización Mundial de la Salud y muchos países desarrollados y en vías de desarrollo como el nuestro, han emprendido la tarea de desarrollar metodología para poder estudiar las drogas vegetales al estado de polvo seco.
Una de las formas iniciales es hacer un reconocimiento macroscópico y microscópico del material vegetal, para hallar algunas características botánicas representativas de cada una de las especies. Esto evolucionó con la aparición de los ensayos químicos para la identificación de metabolitos secundarios representativos y mas recurrentes, afinándose aún más con la aparición de la cromatografía en capa fina, que permitió la determinación del perfil cromatográfico, llamado huella digital o "finger print" que es característico para cada especie vegetal. Finalmente, con el avance tecnológico se puede cuantificar metabolitos secundarios más importantes como son los fenoles como un dato de referencia para evaluar la calidad de la droga vegetal en polvo.
Las especies medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho que se identificaron y a las que se realizó la caracterización fueron:Lupinus paniculata "qera", Baccharis
salicifolia "chilca", Calceolaria engleriana "wawillay", Satureja brevicalyx "wayra muña", Psittacanthus cuneifolius "tullma", Desmodium molliculum "manayupa", Erodium cicutarium "auqa auqa", Sanguisorba officinalis "pimpinela", Mutisia viciaefolia "chinchilcoma", Xanthium spinosum "amor seco".
Por lo tanto, los siguientes objetivos planteados en el presente trabajo de investigación fueron:
Objetivo General:
Determinar las características microscópicas, macroscópicas y cromatográficas de las plantas medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho.
Objetivos Específicos:
Describir las características microscópicas y macroscópicas de las plantas medicinales que permiten su identificación al estado fresco y desecado.
Establecer el perfil cromatográfico de las plantas medicinales que permitan definir su huella digital.
Identificar y cuantificar los metabolitos secundarios más relevantes de las plantas medicinales.

REVISION BIBLIOGRÁFICA

Las plantas medicinales y sus preparaciones han sido ampliamente utilizadas por miles de años en muchas regiones del mundo y está atrayendo cada vez mayor atención en todo el mundo. Pero determinar su calidad es el obstáculo para su internacionalización y modernización. Las plantas medicinales utilizadas solas o combinadas con otras plantas, contienen muchos metabolitos secundarios que representan su efecto terapéutico. Además los constituyentes químicos presentes podrían ser diversos debido a varios factores, como la época y lugar de recolección, el procesamiento y otros factores, factores que pueden influir en su eficacia terapéutica. (Zhang y col., 2011)
La Organización Mundial de la Salud (2011), también se ha preocupado en este asunto elaborando un documento oficial titulado "Métodos de Control de Calidad de Plantas Medicinales", que incluye procedimientos que deben de ser aplicados para determinar la calidad de una planta medicinal entre los cuales se encuentran el examen microscópico, macroscópico y la cromatografía en capa fina.
Gattuso y Gattuso (2000), elaboraron un "Manual de Procedimientos para el Análisis de Drogas en Polvo", donde describen las observaciones que se deben de realizar a las plantas medicinales cuando se encuentran en polvo, como una forma de identificarla.
El Perú puede recuperar su posición de exportador si desarrolla cultivos organizados de plantas medicinales, aromáticas y colorantes: si efectúa el control de calidad para apreciar la concentración de principios activos y mejor aún si en vez de ser exportador de materias primas lo es de productos elaborados. (Lock de Ugaz,1994).
Elof y col. (2011), mencionan que la cromatografía en capa fina es un método simple pero efectivo para el control de calidad de una planta medicinal. Para eso analizaron extractos de las plantas medicinales, con el propósito de hallar la huella digital química de 17 plantas.
Braz y col. (2012), realizaron el control de calidad y el perfil en cromatografía en capa fina de 10 plantas medicinales comúnmente comercializadas en los mercados brasileños. Concluyeron según los resultados obtenidos, sugirieron con las pruebas realizadas que contribuyeron significativamente a desarrollar un protocolo de control de calidad y que esas pruebas son útiles en detectar fraudes y adulterantes, hechos que son muy frecuentes en la comercialización de plantas medicinales, las cuales podrían consistir en la falsificación o adulteración. Hacen énfasis en la mención de los materiales y equipos utilizados para su reproducibilidad en otros laboratorios.
American Herbal Pharmacopeia (2011), publicó un volumen sobre caracterización microscópica de plantas medicinales que son comercializadas en Estados Unidos. Describe los procedimientos para la preparación de la muestra, los colorantes y reactivos a utilizar, las partes botánicas más relevantes que pueden servir para la identificación de una planta medicinal. Asimismo, hacen una descripción detallada de 132 plantas medicinales que son ampliamente utilizadas en dicho país.
Xanthium spinosum L. "amor seco" es una planta anual, perteneciente a la familia de las compuestas (Asteráceas), caracterizada por presentar una altura de hasta 60 cm, provista de un tallo erecto con espinas trifurcadas de color amarillo. Las hojas son alternas, lanceoladas, con peciolos cortos, ápice agudo y márgenes enteros o provistos de un par de lóbulos en la base. Los capítulos florales son unisexuados, presentándose los masculinos en forma de espigas terminales, y los femeninos por un involucro cerrado, ovoideo, cubierto de espinas en forma de gancho con dos picos superiores, por donde asoman los estilos de sus dos únicas flores. Florece desde principios de verano hasta principios de otoño. Es originaria de las zonas cálido-templadas de Sudamérica, estando muy difundida en Europa, creciendo entre los 1800 y 3200 m. s. n. m., especialmente en los suelos, baldíos, potreros, a la vera de caminos, terrenos cultivados, setos y arcenes (Gutierrez, y Col. 2011).
Entre las innumerables especies vegetales que producimos de forma silvestre con ancestral aplicación medicinal es la Satureja brevicalix Epl."waira muña", los usos populares se deben a sus efectos: analgésico, antiinflamatorio, antimicrobiano y para afecciones gastrointestinales. Las sustancias químicas que caracterizan su actividad biológica son principalmente sustancias de naturaleza fenólica. (Arias y Col.2012).
Las informaciones etnofarmacológicas, han propuesto diversas especies vegetales con propiedades antimicrobianas, antiinflamatorias y antioxidantes, como la Satureja brevicalyx, que por las serranías del Perú son usadas para tratar problemas de gastritis y otras afecciones gastrointestinales. (Carhuapoma y Col. 2007).
Taxonomía
Según el sistema de clasificación de (Cronquist, 1981), la especie se ubica en la siguiente categoría taxonómica:
División : Magnoliophyta
Clase : Magnoliopsida
Sub - clase : Asteridae
Orden : Limiales
Familia : Lamiaceae
Género : Satureja
Especie : Satureja brevicalyx Epling

Sinonimia vulgar :"urqumuña", "wayra muña", "sacha muña", "muña", "incamuña", "sallqa muña" "cjunumuña", "cjuña", "konocc" y "orégano de los incas" (Chumacero y Col. 2003)
Descripción botánica.
Es de porte arbustivo perennifolio, erguido de 1.0-1.5m de altura, aromática y pubescente. Hojas muy pequeñas, espatuladas, sésiles, verticiladas y opuestas, de margen entero. Flores blancas, solitarias, axilares, tetrámeras, bilabiadas; cáliz gamosépalo; corola gamopétala; androceo con estambres didínamos; gineceo con ovario súpero, estilo apical y estigma simple. Florece en primavera y verano (Brako y Col. 1993)
Los resultados han demostrado el potencial neuroprotector del extracto hidroalcohólico de la wayra muña proveniente del Departamento de Ayacucho, tanto en situación de hiperoxia como en hipoxia. Las perspectivas de su aplicación y manejo dependerán de mayores estudios a nivel bioquímico y farmacológico. (Arias y Col. 2012).
2.1 Tamizaje Fitoquímico.
Es la aplicación de técnicas de tamizaje al material vegetal fresco, seco o en forma de extracto blando o seco. En este caso se emplea un esquema general que utiliza la extracción sucesiva con solventes de polaridad creciente.(Miranda y Cuellar,2000).
Jeruto y Col. (2011), identificaron los componentes fitoquímicos de diez plantas medicinales utilizados por la etnia Nandi del distrito del Sur de Nandi (Kenia), realizando ensayos en las hojas y raíces de cada una de las especies Asparagus racemosus, Clutia abbysinica, Clerodendrum myricoides, Ehretia cymosia, Leucas calostachys, Toddalia asiatica, Rubia cordifolia, Spermacoce princeae, Carrisa edulisy Ajuga remota. Los ensayos fueron para identificar los metabolitos secundarios más resaltantes fueron alcaloides, saponinas, antraquinonas, flavonoides, fenoles, terpenoides y glicósidos. Asimismo, evaluaron el rendimiento que se obtenían con cloroformo, metanol y agua respectivamente.
Sunil y Col. (2012), investigaron los componentes químicos de las hojas de Ficus racemosa, para el cual realizaron extractos con etanol, metanol, acetato de etilo, acetona y n – hexano; reportando la presencia de fenoles, flavonoides, quinonas, saponinas, cardenólidos, esteroides, triterpenos y taninos en varios de los extractos. La cromatografía en capa fina fue realizada sobre placas de silicagel G 254 y fueron revelados con vapores de yodo. Los extractos con acetato de etilo y acetona mostraron mayor número de manchas, que fueron evidenciados por los Rf reportados.
Fingerprint de una planta medicinal.
Por definición un Fingerprint o huella digital de una planta medicinal, es en la práctica, un modelo o registro cromatográfico de algunos componentes químicos comunes con propiedades farmacológicas activas o con características químicas definidas. Específicamente, la huella digital de una planta medicinal se refiere al perfil el cual puede ilustrar las propiedades específicas de un analito, que incluye materia prima, fracciones, productos semiprocesados y terminados después de una apropiado procesamiento, y ser obtenido por ciertas técnicas de análisis.(WorldHealtOrganization 1998).
La investigación de la huella digital de una planta medicinal es realmente una investigación interdisciplinaria, el cual estábasado en la composición química. Necesita el aporte de la medicina herbal, técnicas de separación, técnicas analíticas y la bioinformática para proveer una plataforma para el control de calidad de las plantas medicinales tradicionales. (Cala y Col. 2007)
La huella digital es globalmente aceptada como un modelo de evaluación de calidad de las plantas medicinales. Debido a las diferentes condiciones y tradiciones nacionales, las ideas y métodos para obtener las huellas digitales son diversas. (Zhang y col., 2011).
Cromatografía en capa fina
La cromatografía en capa fina es el método más común para obtener la huella digital para el análisis de una planta medicinal, debido a su simplicidad, rapidez y costo. Una gran ventaja de la cromatografía en capa fina es que provee imágenes visibles y fluorescentes, el cual es uno más de los parámetros visuales de los cromatogramas y se puede obtener diferentes niveles de perfiles. (Waksmundzka – Hajnos, 2008) (Zhang y col., 2011).
Un rasgo característico de la cromatografía es la presencia de dos fases; dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de él (fase móvil). La clave de la separación en cromatografía es que la velocidad con la que se mueve cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de distribución). En general, los componentes más afines a la fase estacionaria avanzan lentamente (más retenidos) mientras que los más afines a la fase móvil (menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio cromatográfico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla , logrando así su separacióny mediante el uso de un detector, su caracterización química. (Wagner y Bladt 1996).
El fenómeno de migración de los componentes de una mezcla a lo largo de la fase estacionaria, impulsados por la fase móvil, recibe el nombre de elución. La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaría , mientras que la móvil atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se distribuyan de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; por el contrario
los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente. (Ávila y col 2001).
Maobe y Col. (2012), estudiaron ocho plantas medicinales seleccionadas para el tratamiento de la diabetes, malaria y neumonía en la localidad de Kisii (Kenya), resaltando su contenido de fenoles y flavonoides. Las plantas medicinales fueron Carissa spinarum, Urtica dioica, Warburgia ugandensis, Sennadi dymobotrya, Physalis Peruviana, Bidens pilosa, Leonotis nepetifoliay, Toddalia asiatica. Realizaron una extracción de la muestra desecada y pulverizada con hexano, diclorometano, acetato de etilo y etanol. Cada uno de los extractos fueron evaluados en un ensayo de cromatografía en capa fina y hallaron la huella digital para cada uno de los extractos, reportando desde una mancha hasta nueve manchas en cada cromatograma, comparándolas con estándares de flavonoides y ácidos fenólicos conocidos.
Himanshu y Pradeep (2012), estudiaron la actividad antimicrobiana de extractos del botón floral del clavo de olor, las semillas de la Datura, corteza de la canela y las hojas de albahaca que fueron sembradas en placas de cromatografía en capa fina y desarrollada en diferentes sistemas de solventes, después fueron colocados sobre placas de agar en las cuales previamente se habían sembrado Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia. Se comparó los halos de inhibición de cada uno de los componentes separados por el cromatograma. Concluyeron que con las hojas de albahaca tuvieron una mejor actividad antimicrobiana.
Hye y Col. (2010), realizaron la identificación de marcadores de plantas medicinales en cromatografía en capa fina de la raíz de Angelica gigas, fruto de Evodia rutaecarpa y del fruto de Schisandra chinensis. Utilizaron como sistema de solventes mezclas en diferentes proporciones de hexano: acetato de etilo: metanol (3:2:1), diclorometano: metanol: ácido fórmico (40, 1.5, 2) y tolueno: acetato de etilo: ácido fórmico (7,3, 0.5) y como revelador luz ultravioleta a 254 nm y 365 nm. En cada uno de las especies identificaron cumarina, alcaloides y lignanos como marcadores representativos de las especies.
Compuestos fenólicos en las plantas.
Los fenoles son metabolitos secundarios ampliamente distribuidos en el reino vegetal. Se localizan en todas las partes de las plantas y su concentración es variable a lo largo del ciclo vegetativo. Estos compuestos participan de diversas funciones, tales como la asimilación de nutrientes, la síntesis proteica, la actividad enzimática, la fotosíntesis, la formación de componentes estructurales y la defensa ante los factores adversos del ambiente.
Los fenoles están asociados al color, las características sensoriales (sabor, astringencia, dureza), las características nutritivas y las propiedades antioxidantes de los alimentos de origen vegetal. La característica antioxidante de los fenoles se debe a la reactividad del grupo fenol (Robbins, 2003).
Seobtuvieron los extractos metanólicos de la Malva sylvestris y el Chenopodium murale y junto a los extractos ya obtenidos de flor de manita (Chiranthodendron pentadactylon), berros (Nasturtium officinale), hierba del venado (Damianaturnera diffusa willd), dracocephalum y taxodio se determinó el contenido de fenoles y flavonoides totales, en equivalentes de ácido gálico (GA) y catequina respectivamente, utilizando técnicas espectrofotométricas. Los resultados mostraron una gran cantidad de compuestos fenólicos y flavonoides en la mayoría de los extractos, los cuales pueden estar estrechamente relacionados con las propiedades farmacológicas y medicinales de las plantas cuyos extractos fueron analizados. (Gracia, 2006). Estructura de los Compuestos fenólicos.
El término fenoles comprende aproximadamente 8000 compuestos que aparecen en la naturaleza. Todos ellos poseen una estructura común: un anillo fenol- un anillo aromático que lleva al menos un sustituyente hidroxilo.(Proestos y Col ,2005)

Estructura básica de los flavonoides.

MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar y Fecha de Ejecución
El presente trabajo de investigación se desarrolló durante los meses de julio a setiembre del 2013 en los Laboratorios de Botánica y Farmacognosia de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de San Cristóbal de Huamanga, ubicado en la Ciudad Universitaria a 2761 msnm.
3.2. Muestra:
Las muestras fueron adquiridas en el mercado "Nery García" de la ciudad de Ayacucho y en el distrito de Quinua. El tipo de muestreo fue por conveniencia, colectándose aproximadamente 1 kg de cada una de las especies en estado fresco y de buena conservación.
3.3. Diseño Metodológico para la recolección de datos
Caracterización microscópica.
Se realizaron los cortes microscópicos de las diferentes partes de la planta, las que fueron observadas en el microscopio y fotografiadas; Para el análisis de estas drogas en polvo se utilizó la metodología propuesta por Gattuso y Gattuso (2000).
3.3.2. Tamizaje fitoquímico.
Para el tamizaje fitoquímico se utilizó el procedimiento descrito por Miranda y Cuellar (2002), que mediante reacciones de coloración y precipitación permitieron identificar los metabolitos secundarios presentes en los extractos.
Cromatografía en capa fina.
De cada una de las muestras se pesó1 g y se realizó una extracción con 10 ml de metanol, se llevó a baño maría por 10 minutos y luego se filtró, del filtrado se colocaron 20 uL en una placa cromatográfica de 20 x 20 cm conteniendo silicagel G 254. Se realizaron sembrados utilizando un equipo CAMAG con fines analíticos. Se utilizaron como patrones de referencia: ácido clorogénico, ácido ferúlico, ácido cafeíco, quercetina y rutina. Para el desarrollo se utilizaron los siguientes sistemas de solventes: Butanol: ácido acético glacial: agua (4:1:5); Para el revelado se utilizó una lámpara CAMAG de luz UV a 254 nm y 366 nm, cloruro férrico al 10%, revelador, vainillina sulfúrica. (Waksmundzka – Hajnos, 2008) (Wagner y Bladt, 1996).
Cuantificación de Fenoles: Se realizó la determinación colorimétrica de fenoles solubles en material vegetal mediante el reactivo de Folin- Ciucalteu.(Miranda,2000)

Análisis de datos
Los resultados del análisis microscópico: Descripción de las características anatómicas de las especies objeto de estudio, adjuntando las fotografías correspondientes.
Los resultados del tamizaje fitoquímico serán reportados en tablas de doble entrada, indicando los resultados cualitativos de la presencia o ausencia de los metabolitos secundarios.
Los resultados de los cromatogramas se reportan como número de manchas y el color de la fluorescencia a luz UV a 254 nm y 356 nm.
Los resultados de la cuantificación de fenoles totales serán reportados en porcentaje de ácido tánico.

RESULTADOS

TABLA Nº 1. Características microscópicas de plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho. Ayacucho - 2013.

FAMILIA
ESPECIE Y NOMBRE
VULGAR
PARENQUIMA
PELOS O TRICOMAS
CRISTALES
TIPOS DE ESTOMAS
TEJIDO CONDUCTOR
Papilionaceae
Lupinus paniculata
"qera"
Fotosintético con dos hileras de parénquima empaalizada en ambas caras del foliolo
Filamentosas unicelulares bastante grandes en hojas y tallos
No se observó
Anomocitico
Vasos del xilema
espiralados
Asteraceae
Baccharis salicifolia
"chilca"
No se observó
No se observó
No se observó
Anomocitico
Vasos del xilema
espiralados
Scrophulariacae
Calceolaria engleriana
"wawillay"
Fotosintético en empalizada y esponjoso
Unicelular en tallo ramas y papilonadas en las hojas
No se observó
Anisocitico
Tejido vascular con paredes lignificadas
Lamiacae
Satureja brevicalyx
"wayra muña"
Papilosas en hojas y en tallos filamentosas pluricelulares
No se observó
Anisocitico
Vasos del xilema espiralados
Loranthaceae

tullma

Papilionaceae

Desmodium molliculum
""manayupa"
Fotosintético en empalizada y esponjoso ,
Unicelulares
No se observó
Paraciticos
No se observó
Geraniaceae

Erodium cicutarium
"auqa auqa"
Glandulares y simples
unicelulares
Drusas
Anisocitico
Vasos del xilema espiralados
Rosaceae
S. officinalis
Empalizada en dos filas
Tricomas unicelular y pluricelular
No reporta
Anisocítico
No reporta
Asteraceae
Mutisia acuminata
"chinchilcoma"
Peltados
No se observó
Anomocitico

Asteraceae
Xanthium spinosum
"amor seco"
Dos hileras de Fotosintético en empalizada y esponjoso
Unicelulares y pluricelulares
No se observó
Anisocitico
No se observó

TABLA Nº 2. Screening Fitoquímico.

ESPECIES VEGETALES
Ensayos

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10
Baljet
++
++
+++
++
++++
+++
+
++
+++
++
Shinoda
+++
++++
++
++++
++
++
-
-
++++
-
Mayer
++
+++
+
+++
++
-
+
++
++
++
Benedict
++
++++
-
++
+++
++
++
+
++
++
Lieberman
++
+
+
++
++
-
-
-
-
+
Kedde
++
++
+++
+++
++++
++
+++
++
+++
++
Cloruro férrico
++
+++
+++
++++
++++
++
++
++++
++++
++
Espuma
-
+++
-
-
+++
+++
++++
-
++
-
Ninhidrina
++
-
-
+++
-
-
-
-
-
-
Catequinas
-
++++
++
+++
++++
++
++
++
++
-
Resinas
-
++++
++
-
++++
-
-
-
-
-
++++ : Abundante
+++ : Bastante
++ : Poco
+ : Traza
- : Ausente
Donde:
Lupinus paniculata"qera"
Baccharis salicifolia "chilca"
Calceolarea engleriana "wawillay"
Satureja brevicalyx "Wayra muña"
Psittacanthus cuneifolius "tullma"
Desmodium molliculum"manayupa"
Erodium cicutarium "auqa auqa"
Sanguisorba officinalis "pimpinela"
Mutisia acuminata "chinchilcoma"
Xanthium spinosum"amor seco"

FIGURA N°1. Perfil cromatográfico de plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho revelado con luz ultravioleta a 254 nm . Ayacucho – 2013.

FIGURA N°2. Perfil cromatográfico de plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho revelado con luz ultravioleta a 366 nm. Ayacucho – 2013.

Ru = Rutina, ACl = ácido clorogénico, ACa = ácido cafeíco, Qu = quercetina, 1 = L. paniculata, 2 = B. salicifolia, 3 = C. engleriana, 4 = S. brevicalix, 5 = P. cuneifolius, 6 = D. molliculum, 7 = E. cicutarium, 8 = S. officinalis, 9 = M.acuminata, 10 = X. spinosum

FIGURA N°3. Perfil cromatográfico de plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho revelado con FeCl3 al 10%. Ayacucho – 2013.

Ru = Rutina, ACl = ácido clorogénico, ACa = ácido cafeíco, Qu = quercetina, 1 = L. paniculata, 2 = B. salicifolia, 3 = C. engleriana, 4 = S. brevicalix, 5 = P. cuneifolius, 6 = D. molliculum, 7 = E. cicutarium, 8 = S. officinalis, 9 = M.acuminata, 10 = X. spinosum

TABLA Nº 3. Cromatografía en capa fina.
Número de manchas, según revelador

PLANTA MEDICINAL

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10
Luz UV 254 nm

3

3

2

2

3

3

4

3

11

2
Luz UV 366 nm

6

3

4

3

2

4

3

3

5

4
Cloruro Férrico

2

3

4

2

3

6

4

2

4

-

Donde:
Xanthium spinosum "amor seco"

TABLA Nº 4. Cuantificación de fenoles.

PLANTA MEDICINAL

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

A

1.155

2,046

1,352

0,703

1,169

0,193

1,081

0,860

1,315

0,455

B

1.154

2,043

1,350

0,700

1,166

0,191

1,071

0,860

1,317

0,462

C

1.155

2,041

1,348

0,696

1,164

0,190

1,077

0,859

1,316

0,460

PLANTA MEDICINAL

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10
Ẋ
12.660
21,600
14,625
8,082
12.777
2.968
11.869
9.692
14.283
5.661

RSD %

0.046

0,119

0,137

0.441

0.197

0.515

0.426

0.060

0.070

0.637

Donde:
Xanthium spinosum"amor seco"

DISCUSION

Lupinus paniculata "qera" , es una especie medicinal utilizada tradicionalmente como antiinflamatoria para diversas afecciones corporales, se caracteriza por su flores de color morado en panícula; microcópicamente se caracteriza por un tejido protector con presencia de células epidérmicas y estomas, con la presencia de pelos o tricomas, presenta parénquima fotosintético, al realizar un corte transversal al tallo, se observa una peridermis, tejido mecánico y tejidos conductores. Las hojas pulverizadas, presentan restos de fibras, tejido conductor y granos de polen. El screening fitoquímico reporta la presencia de cumarinas y/o lactonas, flavonoides, alcaloides, azúcares reductores, fenoles y aminoácidos libres. La cromatografía en capa en fina revelado con luz ultravioleta a 254 nm muestra la presencia de tres manchas y a 366 nm seis manchas; y con cloruro férrico dos manchas.
Baccharis salicifolia "chilca", arbusto perteneciente a la familia asteraceae, cuya característica es tener el follaje pegajoso, con pequeñas flores blanquecinas, especie medicinal utilizada tradicionalmente como antiinflamatoria, al realizar las observaciones al microscopio se evidencia un tejido protector con células epidérmicas y estomas; céluas parenquimáticas y tejidos conductores. El screening fitoquímico reporta la presencia de azúcares reductores y gran cantidad de fenoles y flavonoides. La cromatografía en capa en fina revelado con luz ultravioleta a 254 nm muestra la presencia de tres manchas y a 366 nm tres manchas; y con cloruro férrico dos manchas.
Calceolaria engleriana "wawillay",especie medicinal perteneciente a la familia scrophulareaceae, con flores habitualmente amarillas; microscópicamente se caracteriza al observar la nervadura central de la hoja fresca una epidermis con pelos o tricomas. El tamizaje fitoquímico reporta la presencia de reporta la presencia de cumarinas y/o lactonas, flavonoides, alcaloides, azúcares reductores, fenoles y aminoácidos libres. La cromatografía en capa en fina revelado con luz ultravioleta a 254 nm muestra la presencia de dos manchas y a 366 nm cuatro manchas; y con cloruro férrico cuatro manchas.
Satureja brevicalyx "waira muña", planta medicinal ampliamente utilizada en las afecciones gastrointestinales, con florecillas axilares de color blanco. Al microscopio podemos observar la nervadura central de la hoja fresca conteniendo : Epidermis haz y del envés, parénquima fotosintético en empalizada y esponjoso y haces vasculares en el tejido protector: Células epidérmicas y estomas, al realizar un corte transversal del tallo se evidencia la epidermis con pelos o tricomas, tejidos de sostén, haces vasculares, tejidos parenquimáticos medulares, al realizar observaciones microscópicas de muestras secas se evidencian los pelos o tricomas y tejidos conductores del xilema . El Screening Fitoquímico reporta la presencia de cumarinas y/o lactonas, flavonoides, alcaloides, azúcares reductores, fenoles y aminoácidos libres.
Mutisia acuminata "chinchilcoma", planta medicinal perteneciente a la familia asteraceae, al observar al microscopio la nervadura central de la hoja fresca se puede ver la epidermis haz y del envés, parénquima fotosintético en empalizada y esponjoso y haces vasculares, al realizar un corte transversal del tallo se evidencian los tejidos de sostén, haces vasculares, tejidos parenquimáticos medulares; Peridermis: (tejido protector secundario)Tejidos de sostén, haces vasculares, tejidos parenquimáticos medulares; tejido protector: Células epidérmicas y estomas, en las observaciones microscópicas de muestras secas se evidencian los pelos o tricomas. El Screening Fitoquímico reporta presencia de cumarinas y/o lactonas, alcaloides, azúcares reductores y principalmente fenoles y flavonoides en abundancia.
La utilización de la cromatografía en capa fina es un procedimiento descrito por
Lock de Ugaz (1994), utilizando como solventes Butanol - Ácido acético glacial-agua; Las proporciones utilizadas permiten separar a los ácidos fenólicos de otros compuestos, principalmente los flavonoides que también son solubles en acetato de etilo y metanol. Las fracciones obtenidas fueron diferenciadas por las prueba de cloruro férrico al 10%, que produce un color verde azulado característico de los ácidos fenólicos.
Al observar los cromatogramas obtenidos de los componentes a 254 nm la Mutisia viciaefolia "chinchilcoma" es la que mayor cantidad de metabolitos secundarios presenta y a la longitud de onda de 366 nm, el cromatograma de Lupinus paniculata "qera" seguida de la Mutisia viciaefolia "chinchilcoma".
Los compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de Folin- Ciocalteu, a PH básico dando lugar a una coloración azul susceptible de una determinación espectrofotométrica a 760 nm.
El método colorimétrico permite el análisis de compuestos orgánicos que presenten anillos aromáticos hidroxilados. Muchos compuestos reductores también son reactivos, por lo que se debe tener en cuenta siempre la posible presencia de substancias interferentes.
Al realizar la lectura de las absorbancias, el extracto de Baccharis salicifolia "chilca" presenta una absorbancia más alta con respecto a las otras muestras la cual muestra una estrecha relación con el contenido de flavonoides y fenoles realizados en el Screening Fitoquímico, y por qué esta especie es muy utilizada de manera tradicional como antiinflamatoria.

CONCLUSIONES

Se describieron las características macroscópicas y microscópicas de las plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho, al estado fresco y desecado .

Se estableció el perfil cromatográfico de las plantas de mayor uso en la ciudad de Ayacucho.

Se pudo identificar y cuantificar los metabolitos secundarios de las plantas medicinales de mayor uso en la ciudad de Ayacucho.

RECOMENDACIONES

Proseguir con el estudio de más especies medicinales y así poder contar con una base de datos que sirva para investigaciones posteriores; cuantificando cada uno de los componentes por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC).

Realizar la formulación de los metabolitos secundarios en presentaciones farmacéuticas sólidas (cápsulas, cremas) para su empleo con un valor agregado.

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ANEXOS

ANEXO Nº 01
Características microscópicas de plantas medicinales más utilizadas en la ciudad de Ayacucho. Ayacucho - 2013.
Observaciones microscópicas en fresco
Familia: Papilionaceae
Especie: Lupinus paniculata "qera"

Tejido protector: Células epidérmicas y estomas

Epidermis con pelos o tricomas

Epidermis con pelos o tricomas

Parénquima fotosintético

Corte transversal del tallo: Peridermis,
tejido mecánico, tejidos conductores

Corte transversal del tallo: Peridermis,
tejido mecánico, tejidos conductores
( haces vasculares )

Observaciones microscópicas de muestras secas (en polvo).

Fibras y granos de polen

Fibras , tejido conductor

Observaciones microscópicas de muestras secas (en polvo). Familia: Asteraceae
Especie: Baccharis salicifolia "chilca"


Células parenquimaticas y conductores (xilema)

Familia: Scrophulariaceae
Especie: Calceolaria engleriana "wawillay"

Nervadura central de la hoja: Epidermis con pelos o tricomas,
Tejidos parenquimáticos, tejidos conductores, parénquima fotosintético en empalizada

Corte transversal de la hoja: El haz con parénquima fotosintético
en empalizada y el envés con parénquima esponjoso.



Corte transversal del tallo: Epidermis con pelos o tricomas,
tejidos de sostén, tejidos conductores, xilema y floema

Tejido de sostén: Fibras (filamentos)

Corte transversal en el peciolo de la hoja.


Pelos o tricomas unicelulares

Vascularización foliar: Se observa tejidos
vasculares con paredes lignificadas.

Familia: Lamiaceae
Especie: Satureja brevicalyx "wayra muña"

Nervadura central de la hoja: Epidermis haz y del envés, parénquima fotosintético en empalizada y esponjoso y haces vasculares


Corte transversal del tallo: Epidermis con pelos o tricomas,
tejidos de sostén, haces vasculares, tejidos parenquimaticos medulares


Pelos o tricomas

Tejidos conductores del xilema

Fibras, estomas, pelos o tricomas

Tejidos conductores del xilema

Granos de polen

Familia: Geraniaceae
Especie: Erodium cicutarium "auqa auqa"

Inclusión celular: Cristales generalmente de oxalato
de calcio, forma de drusas.

Tejidos fotosintéticos en la hoja: Parénquima empalizada
y esponjoso

Pelos o tricomas glandulares


Corte transversal en el tallo: Tejidos: protector,
parenquimático fotosintético, mecánicos, conductores
(haces vaculares) y parenquimático.


Tejido conductor: Xilema de forma espiralada

Tejido conductor: Xilema de forma espiralada

Grano de polen

Célula pilífera: Pelo o tricoma unicelular

Familia: Papilionaceae
Especie: Desmodium molliculum "manayupa"

Corte tranversal de la hoja: Epidermis del haz y del envés, parénquima fotosintético en empalizada y esponjoso.

Pelo o tricoma unicelular

Células parenquimáticas

Nervadura Central de la hoja: Epidermis con pelos o tricomas unicelulares. Haces vasculares

Corte transversal del tallo: Epidermis, parénquima fotosintético, tejido mecánico,haces vasculares


Tejido protector: Células epidérmicas, estomas.

Células parenquimáticas con paredes lignificadas

Pelo o tricoma unicelulares


Tejido parenquimático. Constituido por células pequeñas de bordes irregulares, con paredes gruesas.

Pelos o tricomas. Simples o unicelulares.

Tejido protector. Constituido por células epidérmicas.

Área del mesófilo de una hoja, que es limitada por nervaciones.

Familia: Asteraceae
Especie: Muticia acuminata "chinchilcoma"

Nervadura central de la hoja: Epidermis haz y del envés,
parénquima fotosintético en empalizada y esponjoso y haces vasculares

Corte transversal del tallo: Tejidos de sostén,
haces vasculares, tejidos parenquimaticos medulares

Corte transversal del tallo: Peridermis (tejido protector secundario) Tejidos de sostén, haces vasculares, tejidos parenquimaticos medulares



Pelos o tricomas


Células parenquimáticas con paredes lignificadas

Pelos o tricomas

Familia: Asteraceae
Especie: Xanthium spinosum "amor seco"

Tejidos fotosintéticos en la hoja: Parénquima empalizada
constituido por dos hileras de células y parénquima esponjoso

Célula pilífera: Pelo o tricoma unicelular

Nervadura central de la hoja: Células parenquimaticas y
haces vasculares.

Corte transversal en el tallo. Tejidos: protector, parenquimático fotosintético, mecánicos, conductores (haces vasculares) y medulares

Tejido protector: Células epidérmicas, estomas, pelo o tioma.


Pelos o tricomas uniceluar y pluricelular

Células oclusivas: Par de células epidérmicas
especializadas que rodean al poro u ostiolo y
constituyen un estoma.

Epidermis: Con células epidérmicas de bordes irregulares característico de plantas Dicotiledóneas.

Tejidos: Epidérmico con pelo o tracoma y tejidos
parenquimático fotosintético en empalizada.

Pelos o tricomas unicelulares

ANEXO Nº 02

Desmodium molliculum
"manayupa"
FAMILIA: Papilionaceae

ANEXO Nº 03

Sanguisorba officinalis
"pimpinela"
FAMILIA: Rosaceae

ANEXO Nº 04

Erodium cicutarium
"auja auja"
FAMILIA: Geraniaceae

ANEXO Nº 05

Lupinus paniculata
"qera"
FAMILIA: Papilionaceae

ANEXO Nº 06

Mutisia acuminata
"chinchilcoma"
FAMILIA: Asteraceae

ANEXO Nº 07

Xanthium spinosum l.
"amor seco"
FAMILIA: Asteraceae

ANEXO Nº 08

Baccharis salicifolia
"chilca"
FAMILIA: Asteraceae

ANEXO Nº 09

Calceolaria engleriana
"wawillay"
FAMILIA: Scrophulariace

ANEXO Nº 10

Satureja brevicalyx
"wayra muña"
FAMILIA: Lamiaceae

ANEXO Nº 11

PESADO Y PREPARACION DE LOS EXTRACTOS

ANEXO Nº 12

FOTOGRAFIAS DE RESULTADOS DEL TAMIZAJE FITOQUIMICO

Baccharis salicifolia "chilca" Calceolarea engleriana "wawillay"

Satureja brevicalyx "Wayra muña" Psittacanthus cuneifolius "tullma"

Xanthium spinosum"amor seco" Lupinus paniculata"qera"




ANEXO Nº 13

Curva de calibración del Ácido Tànico

INVESTIGACION 2014

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