Introduccion y Tecnicas Histopatologicas

INTRODUCCION Y TECNICAS HISTOPATOLOGICAS. HISTOPATOLOGICAS. 1.        

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3.

Describa la secuencia de eventos que involucra la recepción y procesamiento de una biopsia hasta el momento de la generación de una lámina histológica.

Toma de muestra (Incisión parcial, excisión total, BAAF) Fijar la muestra (congelación, formalina, alcohol, acetona, etc.) Deshidratación con alcohol en graduaje creciente: (70°-90°-96°-100°). Líquido Intermediario para sacar el alcohol  XILOL PARAFINA reemplaza al xilol, penetrando los tejidos. Encastramiento para formar los bloques. Se introducen los bloques al micrótomo para formar láminas histológicas. Finalmente estas se tiñen. Explique en qué consiste el proceso de examen macroscópico y cuales son algunos referentes a tener en cuenta.

Describir en detalle el material remitido (dimensiones, lesiones, morfología, aspecto, coloración, estructuras vecinas). Importantísima en patología vascular y cardíaca. Seleccionar áreas de estudio microscópico (muestreo). Se busca la zona más dañada para poder analizar. Explique en qué consiste un sistema de archivo para el material biopsiado.

Un sistema de archivo está conformado por todos los elementos y materiales necesarios para conservar la biopsia, retirar y usar la información que s e necesite (mínimo 5 años). Todo el material que llega a Anatomía Patológica y los informes escritos correspondientes tienen que ser archivados y guardados por un tiempo prudente, a lo menos 5 años según la legislación vigente, y estar a disposición de las personas interesadas, ya sea para revisión o para investigación. 4. Enumere indicaciones para la realización de una autopsia anátomo-clínica y de una autopsia médico-legal y sus principales características.

utopsia anátomo-clínica Se realiza con autorización familiar, para:  Determinar la causa última de la muerte Establecer correlaciones clínico patológicas entre los diagnósticos clínicos, los síntomas y las lesiones encontradas. Conocer la eficacia de un  tratamiento, Estudiar y aprender más sobre el  curso natural de las enfermedades 1) Necropsia perinatal: fetos de 550 grs. a 7 días de vida. 2) Necropsia pediátrica: neonatos de más de 7 días a 15 años. 3) Necropsia de adulto: comprende el

Autopsia médico-legal     

Origen de la muerte con implicaciones penales o civiles (atropellos, riñas, etc) La solicita el fiscal, por lo que no requiere autorización familiar. Determinar causa de la muerte. ( ej :intoxicación) Determinar manera. (ej: natural, suicidio, etc.) Determinar data de muerte.

1) Pacientes fallecidos en el ingreso al hospital, recién nacidos ingresados en fase terminal. 2) Fallecidos con grandes heridas o por muertes violentas. 3) Fallecimiento de causa desconocida o

resto de los cadáveres.

5.

sospechosa. 4) Suicidios

Señale distintas metodologías aplicables al proceso de disección en una autopsia.

Técnicas de disección: a) Técnica de Virchow: disección de órganos por separado, comenzando por cavidad craneal y siguiendo por cuello, tórax y abdomen. b) Técnica de Ghon: extraer órganos en tres bloques; cuello y tórax, abdomen y retroperitoneo. c) Técnicas de Letulle: extracción en un solo bloque. 6.

Describa un microscopio electrónico, su funcionamiento, las distintas modalidades de uso y  sus principales aplicaciones.

La microscopía electrónica es una técnica que requiere instrumentos de alta complejidad y personal altamente especializado. Se utilizan la microscopía electrónica de transmisión o convencional y la de barrido. Las muestras para microscopía electrónica deben fijarse en glutaraldehído, los fragmentos deben ser pequeños y tienen que fijarse en forma de varios trocitos cuboideos de tejido de no más de 1 mm, obtenidos con bisturí. Las muestras se incluyen en resinas sintéticas y se practican cortes 10 veces más delgados que los de microscopía de luz llamados cortes ultrafinos. La tinción se realiza con sales de metales pesados como citrato de plomo, tetróxido de Osmio o acetato de uranilo, que permiten un contraste adecuado del tejido bajo el haz de electrones. Los cortes ultrafinos se montan sobre grillas de cobre, se tiñen y se observan al microscopio electrónico. Microscopía electrónica de transmisión: En esta técnica la preparación teñida es traspasada por un haz de electrones, lo cual proporciona la imagen ultrafina sobre una pantalla ad hoc. La mayor utilidad de la microscopía electrónica de transmisión es en Oncología. Es particularmente útil en el diagnóstico de neoplasias malignas, ya que permite identificar la estirpe o diferenciación de una neoplasia . Igualmente, en el diagnóstico diferencial de metástasis tumor maligno indiferenciado en ganglio linfático ( melanoma maligno, carcinoma, linfoma). Esta técnica juega un papel muy importante en el estudio de las enfermedades del riñón, en particular en glomerulopatías primarias y secundarias. Otras aplicaciones son la identificación de partículas virales intranucleares y citoplasmáticas. También en enfermedades metabólicas para estudiar el tipo de inclusiones o cuerpos de inclusión en las células afectadas. En enfermedades ampollares de la piel es el único método para diferenciar variedades de epidermólisis bulosa congénita. En ciertas enfermedades respiratorias se ha detectado un trastorno importante del transporte mucociliar. Ultraestructuralmente, se observan cilios con alteraciones en número y disposición del esqueleto ciliar microtubular y ausencia de los brazos internos de dineína y de las espículas radiales del esqueleto microtubular constituyendo el llamado síndrome de cilios inmóviles o disquinesia ciliar. Estas anomalías representan un trastorno de carácter congénito y la microscopía electrónica es el único método que permite hacer un diagnóstico preciso en estos pacientes. Microscopía electrónica de barrido: Permite el estudio de superficies celulares. La imagen se obtiene rastreando la superficie de la muestra con un haz electrónico ultrafino. Las señales generadas se recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos catódicos. Se utiliza en forma rutinaria en el estudio de enfermedades del tallo piloso. En estas condiciones hay anomalías estructurales y de superficie de los pelos, que pueden identificarse fácilmente con esta técnica. De

esta forma, es posible incluso establecer un pronóstico de reversibilidad de las alteraciones utilizando esta técnica. 7.  ¿Qué cuidados deben tenerse presente al momento de procesar una biopsia ósea? 

El tejido óseo después de fijado se descalcifica en soluciones tales como: ácido fórmico, clorhídrico, nítico, resina de intercambio iónico o pila electrolítica. Biopsias óseas para el diagnóstico de enfermedades metabólicas se estudian sobre tejido NO decalcificado. 8.

Comente el proceso de biopsia rápida y su utilidad.

La biopsia rápida es la biopsia intraoperatoria, que se realiza durante la intervención quirúrgica para realizar o confirmar diagnóstico, del cual depende la continuación y tipo de intervención (bordes, muestra adecuada, neoplasia). Este tipo de biopsia no demora más de 5 minutos y determina la conducta quirúrgica. 9.

Establezca diferencias entre los tipos de biopias incisional y excisional.

Biopsia Incisional

Biopsia Excisional

Es la biopsia en la que se corta o se extirpa quirúrgicamente sólo un trozo de tejido, masa o tumor. Este tipo de biopsia se utiliza más a menudo en los tumores de tejidos blandos como el cerebro, hígado, pulmón, riñon, para distinguir patología benigna de la maligna, porque estos órganos no se pueden extirpar, o porque la lesión es muy grande o difusa.

También se llama exéresis. Una biopsia es la extirpación completa de un órgano o un tumor, generalmente sin márgenes, que se realiza normalmente en quirófano bajo anestesia general o local y con cirugía mayor o menor respectivamente. La biopsia excisional se realiza, por ejemplo en: 1. La extirpación de una adenopatía aislada 2. En los tumores de mama pequeños 3. En las lesiones cutáneas sospechosas.

10. Señale a que corresponde el “Papanicolau” y describa el proceso para toma de muestra de citología exfoliativa ginecológica.

El examen del Papanicolau es una prueba para detectar el cáncer del cuello uterino, así como la presencia de alguna enfermedad de transmisión sexual. Se conoce también cómo Citología Cervical.  Procedimiento de la toma de muestra de citología exfoliativa ginecológica Citología Exfoliativa Ginecológica  Examen que interpreta las células del cuerpo humano, ya sea que fueron desprendidas de la epidermis de los epitelios de revestimiento de estructuras orgánicas abiertas al exterior y del mesotelio que tapiza cavidades corporales cerradas. Obtención de muestra  Exfoliación forzada mediante tratamiento o raspado de la epidermis y epitelios en continuación con ella. También se puede obtener mediante los fluidos que vehiculan en forma espontanea al sarmientos descamados, o por instrumentos de exfoliación o punción que extraen componentes líquidos con células de suspensión en zonas orgánicas internas. Métodos de Obtención de la Muestra 1) Citología exfoliativa Se recoge material desprendido espontáneamente o en forma inducida de las superficies de los órganos. En la mayoría de los casos, la toma de la muestra se hace recogiendo material de un área amplia, sin visión directa de una zona sospechosa, como se aprecia en los siguientes ejemplos.

Muestra de mucosa cérvico-vaginal, por raspado con espátula de madera. Este es el examen citológico más usado. Se aplica en programas de detección de cáncer del cuello uterino, examinando mujeres asintomáticas ("examen de Papanicolaou"). Las mujeres cuyo frotis contiene células atípicas son luego sometidas a examen clínico dirigido del cuello y biopsia, para confirmar si se trata de lesiones preneoplásicas o carcinoma infiltrante.  Los siguientes son requisitos para la obtención de una muestra citológica (examen del Papanicolau) con condiciones óptimas para su evaluación: • El examen no debe realizarse durante la menstruación o antes de 3 días de finalizado el último periodo menstrual 

• Cuarenta y ocho horas previas al examen la paciente no debe haberse realizado duchas vaginales,

tenido relaciones sexuales o usado tampones, jabones, cremas vaginales, o medicamentos vía vaginal. Para la toma de la muestra se debe seguir una serie de procedimientos los cuales son: a) Rotulación de la lámina  Previo a la toma de la muestra, la laminilla de vidrio (portaobjetos) debe ser rotulada colocando cinta adhesiva con el nombre completo de la paciente, en la superficie inferior de la laminilla. b) Visualización del cuello uterino  La zona de transformación (unión del exo y endocervix o unión escamo columnar) es donde más frecuentemente se origina el cáncer de cuello uterino por lo cual debe ser el sitio de toma de la muestra. La zona de transformación puede ser fácilmente visualizada o encontrarse muy alta y no visualizarse, esto varía no solo de persona a persona sino que incluso en la misma persona a través del tiempo por cambios hormonales que incluyen embarazo, menopausia, etc. c) Recolección de la muestra  Existe una variedad de instrumentos para obtener muestra celular del exocervix, zona de transformación y endocervix que incluyen cepillos endocervicales, espátulas de madera y plásticas. d) Realización del extendido  La muestra obtenida del cuello uterino debe extenderse en la laminilla, no frotarla, debe fijarse inmediatamente con spray fijador, de preferencia especial para citología, para evitar el secado al aire que provoca distorsión celular y altera la evaluación de las células. e) Envío a Laboratorios de Citología  Las laminillas una vez fijadas deben ser colocadas en cajas especiales, de plástico, madera o cartón, junto con sus respectivas boletas y ser enviadas a los laboratorios de citología. 11. Defina punción aspirativa. Señale en qué consisten los procedimientos de PAAF y BAAF.

Citología por aspiración con aguja fina: Se introduce en la lesión una aguja más fina que las empleadas para biopsia. El corte por el filo de la aguja y la aspiración por la presión negativa que se produce dentro de ella desprenden un líquido sanguinolento que contiene grupos de células; con este líquido se prepara el frotis. Se pueden distinguir dos tipos de muestras por punción aspirativa con aguja fina: a) Punción directa de lesiones superficiales palpables.

Generalmente la practica un médico en el consultorio con una aguja fina corriente. Se usa frecuentemente en casos de quistes y nódulos mamarios o tiroideos, para el diagnóstico diferencial entre lesión benigna y cáncer. Otro ejemplo es la punción de ganglios linfáticos superficiales (linfoadenopatías), como parte del diagnóstico diferencial entre inflamación, hiperplasia, linfoma o metástasis. b) Punción de lesiones profundas no palpables, dirigida por imágenes.

Es realizada por médico radiólogo en paciente hospitalizado, utilizando agujas finas largas, de diseños especiales. La punción se practica bajo control de imágenes ecográficas o de tomografía

computada. Se emplea en masas hepáticas, pancreáticas, pulmonares, mediastínicas o retroperitoneales, para el diagnóstico diferencial entre lesiones benignas y malignas. BAAF (BIOPSIA ASPIRACIÓN CON AGUJA FINA)  Es un procedimiento médico muy útil para el diagnóstico preciso de lesiones y enfermedades, en casi todos los tejidos y órganos del cuerpo. Su realización es sencilla, rápida y de bajo costo. Se practica en el consultorio. La molestia es mínima y no requiere hospitalización. La muestra se analiza bajo el microscopio, obteniéndose un diagnóstico seguro en la mayoría de los casos. Cuando el resultado no es concluyente, nos permite gran aproximación y orientación para otros análisis o procedimientos especializados. La BAAF está indicada ante todo tipo de lesión, masa anormal, abultamiento o tumor, tanto de la piel u otros tejidos superficiales y profundos del cuerpo, o bien de órganos como la glándula mamaria, tiroides, ganglios linfáticos, etc. 

No dejemos pasar desapercibido todo quiste, nódulo o “bolita” en la glándula mamaria, o cualquier

otro tipo de lesión en el cuerpo. Su valoración hasta el diagnóstico seguro es el camino correcto. El diagnóstico oportuno es el mejor aliado para el tratamiento de enfermedades como el cáncer y otras. Antes que las complicaciones o la gravedad se presenten, es momento de actuar. Lo mismo para hombres y mujeres, a todas las edades y en cualquier sitio del cuerpo. Permita que los avances actuales de la ciencia médica trabajen a su favor. Le ofrecemos su resultado en 24 horas y en caso de urgencia, usted lo tendrá el mismo día. PAAF - Punción Aspiración con Aguja Fina Nombres alternativos: Punción aspiración con aguja fina Definición: Técnica diagnóstica y en ocasiones terapéutica que consiste en la punción y posterior aspiración de un determinado tejido mediante el uso de una aguja larga y fina para su análisis posterior. Cómo se realiza el estudio: El estudio se realiza en diferentes unidades del centro médico u hospital por personal cualificado generalmente de forma ambulatoria. El paciente debe desnudar la zona a estudio y permanecer tumbado sobre una camilla durante el procedimiento. El médico procede a la desinfección de la zona sobre la cual se realizará la punción. Se administrará un sedante (en algunos casos) y un anestésico local (las lesiones muy superficiales no requieren del uso de anestesia) y posteriormente insertará una aguja larga y fina en el interior del tejido que desee estudiar o tratar. La aguja permanecerá conectada a una jeringuilla o a un sistema de aspirado mientras se realiza la aspiración de una pequeña cantidad de tejido para su análisis posterior. En ocasiones puede ser necesario el uso de técnicas de imagen (como radiografía, ecografía, tomografía o resonancia entre otras) para guiar a la aguja hacia el punto exacto que el médico desea analizar. El estudio suele durar 20-30 minutos. Preparación para el estudio: La PAAF no requiere de preparación previa por parte del paciente salvo evitar la ingesta de líquidos y sólidos entre 6-8 horas previas a la realización del estudio. Algunos fármacos deberán ser retirados antes del estudio. Qué se siente durante y después del estudio. La PAAF es una prueba molesta pero generalmente tolerable gracias al uso de anestésicos locales. El paciente puede sentir un dolor en forma de pinchazo y quemazón al inyectar el anestésico. Puede sentir un dolor sordo, agudo y pasajero en el momento de la aspiración del tejido. Tras el estudio puede presentar molestia o dolor en la zona de la punción que cede generalmente con analgésicos habituales. Debe guardar reposo en las horas o días siguientes al procedimiento. 

Riesgos del estudio: Hematoma en la zona de la punción, Sangrado del tejido donde se ha realizado la punción, Infección superficial de la zona de la punción, Infección del tejido donde se ha realizado la punción, Punción no deseada de un tejido u órgano Contraindicaciones del estudio: El paciente debe consultar con su médico antes de realizar el estudio en caso de: Alergia a los fármacos utilizados durante el estudio (sedantes, anestésicos), Alteraciones de la coagulación, Toma de algún tipo de medicación, especialmente anticoagulantes o aspirina El paciente deberá consultar de forma urgente con su médico si horas o días después del estudio presentara fiebre alta o escalofríos, dolor severo en la zona de la punción, presencia de sangre en heces o en orina o dificultad para respirar. Razones por las que se realiza el estudio: La PAAF es una técnica diagnóstica y terapéutica ampliamente conocida y utilizada en el campo de la Medicina. Al ser un procedimiento invasivo, se realiza únicamente en pacientes seleccionados en los que es necesario analizar en un laboratorio o bajo el microscopio una pequeña muestra de tejido para llegar al diagnóstico de la enfermedad o alteración que presenta el paciente. Permite conocer si una determinada alteración de un tejido es de tipo inflamatorio, infeccioso, tumoral o canceroso, entre otras. En ocasiones puede tener utilidad terapéutica, por ejemplo cuando se punciona y aspira un quiste o un absceso. 12. Describa brevemente elementos considerados al momento de estudiar un frotis cervical (cuello uterino). 13. Señale el concepto que Ud. asocial a química. a. Histoquimica especial: Es la ciencia que combina la histología con la bioquímica, además esta técnica identifica sustancias químicas y determina su significación en tejidos y células, esta técnica identifica una enzima a través de cromógenos que se transforman en sustancias insolubles opacas o coloreadas visibles al microscopio. b. Inmunohistoquimica: Tecnica para visulalizar la reacción de antígeno anticuerpo a través de la adicion entre una enzima, un sustrato y el cronomero. c. Inmunofluorescencia: técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula. Puede ser directa o indirecta. 14. Mencione distintas tinciones (al menos 4) de histoquimica especial, indicando su aplicación . 1. Van Gieson Es una técnica para la coloración de fibras colágenas y elásticas. El colágeno parece que capta un colorante ácido. Tiñe el colágeno de rojo, núcleos y fibras elásticas de negro y citoplasma de amarillo. Corresponde a la mezcla de ácido pícrico-fucsina ácida y hematoxilina férrica de Weigert. 2. Acido periódico de Shiff (Pas)  Se utiliza para aquellas células que secretan mucosustancias negra o mucus, reaccionan con hidrato de carbono. La técnica de Schiff, es una reacción colorimétrica que se usa comúnmente en citoquímica. Utiliza PAS, ácido peryódico de Schiff, o leucofucsina, un colorante incoloro pero que se torna rojo estable al contacto con los grupos aldehídos. La técnica de PAS se utiliza en los preparados para microscopia óptica, permite la tinción de componentes celulares que contienen hidratos de carbono, por ejemplo algunas membranas celulares, células caliciformes en la mucosa del intestino, fibras reticulares que están rodeados por hidratos de carbono, etc. Entonces en esta técnica, el ácido peryodico oxida a los grupos oxidrilos (OH) de dos carbonos cercanos, formando de esta manera

grupos aldehídos compuestos por carbono, oxigeno y hidrogeno. así la leucofucsina puede reaccionar con estos y dejar una tinción rojiza. 3. Alcian Blue Reacciona con el acido cialico que son secretores celulares en procesos patológicos, ejemplo las células carcinomatosas. 4. Tincion Gram La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Utilización del lugol y de la safranina. 15. Describa la técnica de inmunohistoquimica, indicando algunas de sus principales usos. Es la técnica de la patología molecular, no es técnica de rutina, histoquímica ni nada. Solo sirve para detectar proteínas, mediante el Complejo enzima-sustrato-cromógeno. Se basa en el hecho de que todas la proteínas tienen antígenos, que selectivamente son identificados por los a nticuerpos que se adhieren a un colorante (cromógeno) mediante una enzima o sustrato (fosfatasa alcalina o diamino bencidina (DAD). 16. Señale distintas modalidades para la técnica de inmunofluorescencia, indicando en que consisten. En las técnicas de inmunofluorescencia se utilizan como marcadores compuestos de fluoresceína que bajo luz ultravioleta emiten luz de longitud de onda visible, que depende de la naturaleza del compuesto. El isotiocianato de fluoresceína emite luz verde amarillenta intensa. Estas técnicas necesitan muestras en fresco y congeladas, sin fijación convencional, pues los antígenos están presentes en superficies celulares o son muy lábiles a la fijación en formalina. La inmunofluorescencia directa  Es decir con anticuerpos conjugados con fluoresceína, se aplica corrientemente en el diagnóstico de las enfermedades cutáneas en donde tiene indicación y utilidad muy precisas como en enfermedades ampollares, vasculitis y mesenquimopatías. Esta técnica pese a ser muy sensible, presenta inconvenientes como la falta de permanencia de la fluorescencia, requiere de microscopía especializada y el detalle morfológico es pobre. Para documentar cada caso, es necesario fotografiar la reacción. Inmuno Fluorescencia directa Es la incubación del tejido con un periodo corto de tiempo con el anticuerpo correspondiente marcado con fluoresceína o ficoeritrina Inmuno fluorecencia Indirecta Se utiliza para estudiar la presencia de anticuerpo o antígeno tisular por medio de conjugación de anticuerpo no marcado y anticuerpo marcado con fluoresceína. 17. Describa la técnica de citometría de flujo, indicando brevemente en que consite y cuáles son sus aplicaciones.

Citometria y citofluorometria: Esta tecnica requieren de analizadores de imágenes basados en parametros morfometricos objetivos. - La citometria puede separase en citometria estatica (microscopia digital) para el analisis de imágenes y en la microfluorimetria de flujo (citometria de flujo). Aspectos básicos de citometria de flujo: - Analisis rapido de celulas y particulas biologicas en suspension dentro de un sistema de flujo laminar sobre el que incide un haz de luz, proporcionan datos sobre sus caracteristicas fisicoquimicas. - Citometro de flujo se compone de un sistema de inyeccion y manejo de la muestra, detector fisico y optico de parametros citologicos a medir y sistema digitalizado para el proceso de los datos. - Metodo de tincion se usa fluorocromos. Aplicaciones: 

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Analisis fenotipicos de celulas sanguineas. Identificacion de antigenos intracelulares. Cuantificacion de adn y determinacion de ciclo celular Determinacion de la viabilidad y grado de activacion de celulas en cultivo. Analisis de raticulacion circulantes en sangre. Deteccion de anticuerpos en suero. Cuantificacion de potencial y membrana. Medida del calcio intracelular. pH intracelular.

18. Señale usos y una breve descripción para las técnicas de patología molecular  19. Señale distintos elementos necesarios de considerar al momento de una buena descripción macroscopica.

I. DESCRIPCIÓN MACROSCÓPICA. (1) Generalidades de descripción macroscópica: EN TIEMPO REAL. Exacta. Concisa. Completa. Interpretativa (no sólamente descriptiva).     

Brinda INFORMACIÓN ÚTIL a: -Patólogo -Clínico COMPLEMENTO de histopatología   

Momento preciso para pensar prospectivamente:  ¿Cómo disecar?, ¿Qué describir? (y qué ignorar), ¿Qué fotografiar?, ¿Qué muestrear?, ¿Serán necesarios estudios especiales?, NO es un requisito administrativo o técnico. NO es un ensayo literario. NO es exclusiva de patología posmortem Los doce puntos básicos de la descripción macroscópica: - Localización - Forma - Tamaño - Márgenes - Aspecto - Consistencia - Color - Cambios asociados - Extensión o metástasis (importancia del sistema TNM) - Ganglios linfáticos - Órgano residual - Bordes quirúrgicos  20. Señale distintos elementos necesarios de considerar al momento de una buena descripción microscopica.

Términos microscópicos descriptivos usados con frecuencia: a. Interfase de la lesión con el tejido normal: encapsulado, circunscrito, expansivo, infiltrante.

b. Celularidad (alta, baja) e índice mitósico. c. Polaridad d. Patrones arquitectónicos: Alveolar (en nidos), Basaloide, Bifásico, Cribiforme, Cohesivodiscohesivo, Coloide (mucinoso), etc. e. Diferenciación: bien, moderadamente o poco diferenciado, indiferenciado f. Necrosis: coagulativa, fibrinoide, grasa, geográfica g. Estroma: abundante, escaso, mixoide, fibroso (esclerótico), desmoplásico, hialino h. Citoplasma y membrana: anfófilo, espumoso, queratinizado, oncocítico (oxifílico), mucinoso, en anillo de sello, plasmocitoide, cilios, puentes intercelulares i. Núcleo: Eucromático, hipercromático, 'en rueda de carreta'. moldeado, 'en sal y pimienta', pleomorfo, vesiculoso, nucléolo prominente LESION Y MUERTE CELULAR   21. Identifique las estructuras celulares sensibles al daño por parte de una noxa.

Las alteraciones celulares pueden comprometer compartimentos u organelos. Son 4 sistemas intracelulares particularmente vulnerables a la acción de un agente injuriante: - Membrana celular: mantiene la homeostasis iónica y osmótica de las células y sus organelos. - Mitocondria: respiración aeróbica que afecta la fosforilación oxidativa y la producción de ATP. - Ribosomas, Retículo Endoplásmico y Lisosomas: síntesis y almacenamiento de proteínas (enzimáticas y estructurales). - Núcleo: preservación del material genético de la célula.  22. Mencione las etapas de la teoría del daño celular de Majno y explique su relación con necrofanerosis e irreversibilidad.

Las etapas de daño celular son: 1) Noxa en célula normal 2) Tumefacción: incapacidad celular de conservar la homeostasis de iones y líquidos. Es un estado totalmente reversible si se quita la noxa oportunamente. El sodio y el calcio entran al interior de la célula, saliendo el potasio, mientras que el agua entra en la célula y diluye el citoplasma. El patógeno debe tener capacidad de dañar la barrera de la membrana plasmática que controla el transporte del agua y los electrolitos en la superficie celular. 3) Deplección del glucógeno 4) Cambios en la membrana y en los organelos 5) Necrosis La necrosis y la irreversibilidad se dan cuando el estado de tumefacción ya no logra ser revertido por una noxa que ha dañado estructural y funcionalmente la célula. Se considera que una célula entra en estado de necrosis cuando la muerte celular es patológica reconocible por los signos morfológicos de la necrofanerosis. Estos son: en el citoplasma, hipereosinofilia y pérdida de la estructura normal; en el núcleo, picnosis, cariolisis o cariorrexis.  23. Describa los principales elementos asociados a necrofanerosis tanto a nivel de citoplasma como núcleo.

Los elementos asociados a necrofanerosis en el citoplasma, son: hipereosinofilia y pérdida de la estructura normal; en el núcleo, picnosis, cariolisis o cariorrexis. La picnosis es la retracción del

núcleo con condensación de la cromatina; la cariolisis, la disolución del núcleo; la cariorrexis, la fragmentación del núcleo en trozos con cromatina condensada. Las alteraciones del citoplasma y núcleo son coexistentes. La picnosis, cariolisis y cariorrexis no constituyen etapas de la alteración nuclear; representan, aparentemente, formas distintas de reacción.

 24. Defina: a. Punto de no retorno: El término de necrosis comprende la muerte celular y el

proceso que le sigue, es decir, la necrobiosis, necrofanerosis y necrolisis. Los autores angloamericanos lo usan de manera algo diferente: el momento en que ocurre daño celular irreversible lo llaman "punto sin retorno" ("point of no return"), a la muerte celular que se produce en ese momento, la llaman simplemente "muerte celular", y denominan "necrosis" el proceso que sigue a la muerte celular refiriéndose en particular a la necrofanerosis. b.

Necrobiosis: proceso celular que media entre el momento en que la célula muere y

el momento en que se presenta la necrofanerosis. Durante este periodo la célula no muestra alteraciones a la microscopía corriente; con este método de examen la necrobiosis dura 6 a 8 horas. Con el microscopio de fase contrastada pueden verse algunas alteraciones nucleares a las 2 horas de ocurrida la muerte celular y a las 4 horas: núcleo granular y núcleo con halo brillante, respectivamente. Con el microscopio electrónico se encuentran las primeras alteraciones consideradas irreversibles entre 1 y 2 horas después de iniciada una isquemia experimental en el epitelio hepático y tubular renal y de 20 a 60 minutos en las fibras miocárdicas, esto es muy poco antes del momento en que parece ocurrir la muerte celular (60 minutos en los epitelios indicados, 30 minutos en fibras miocárdicas). El concepto de necrobiosis, sin embargo, nació del estudio con microscopía de luz. c.

Estrés celular: Modalidad de estímulo que requiere necesariamente adaptación

celular para su sobrevida. d.  Adaptación celular: serie de cambios celulares que afectan al crecimiento y a la

diferenciación celular y se manifiestan en forma de atrofia, hipertrofia, hiperplasia y metaplasia. En algunos casos puede evolucionar a displasia y neoplasia.  25. Mencione los mecanismos que posee la célula para enfrentar un estimulo o daño celular.

La célula ante un estímulo o daño celular, puede experimentar adaptación celular, en la cual puede variar el tamaño celular mediante los mecanismos de h ipertrofia o atrofia, ó, aumentar el número de células (hiperplasia) o transformación de las células (metaplasia, displasia, neoplasia, etc); o lesión celular, la cual puede ser reversible o irreversible.  26. Clasifique daño celular.

-

los

Factores genéticos: metabolicos,

Signos de la necrofanerosis. A la izquierda, célula normal; a la derecha, cariorrexis (arriba), picnosis nuclear (al medio) y cariólisis (abajo). Hipereosinofilia representada por mayor densidad de puntos.

distintos tipos de agente de

errores congenistos y anomalías citogenéticas y

-

malformaciones teratológicas. Agentes nutricionales y metabólicos: manifestaciones de acumulación o depresión intra o extracelular de proteínas, lípidos y carbohidratos. Hipoxia: inadecuada oxigenación sanguinea, déficit de perfusión sanguínea. Agentes físicos: temperatura, radiaciones, electricidad, traumatismos. Agentes químicos: fármacos y hormonas. Agentes biológicos: MO por estimulación de respuesta inflamatoria del huésped, toxinas, alteración de membrana ante interacciones inmunológicas, alteración del genoma y proliferación celular. Reacciones inmunológicas: alergias, infecciones intercurrentes, etc.

 27. Explique los mecanismos para el desarrollo del daño celular por hipoxia.

El daño celular por hipoxia (injuria de reperfusión) involucra 4 mecanismos: 1) Disminución de fosfatos de alta energía: ocasionada por desbalance reposición-consumo de ATP, asociado a la disminución del flujo tisular de electrones mitocondriales con disminución del PO2 tisular. 2) Producción de radicales libres: porducidos por neutrófilos y mastocitos activos, muy tóxicos, produciendo disfunción de los organelos (por 3 mecanismos: peroxidación de mb lipídicas, desnaturalización de enzimas y disfunción de organelos). 3) Inadecuada reperfusión: (Síndrome de no reflujo) el tejido isquémico no logra recuperar los niveles de flujo pre-isquemia, este fenómeno puede ser causado por una trombosis microvascular, daño endotelial o tapones leucocitarios, ó, plaquetarios, 4) Sobrecarga de calcio: Secundaria a la recaptacion por el deterioro del RE, este aumento activa la fosfolipasa y otras enzimas degradantes, que contribuyen al daño celular.  28. Describa los elementos diferenciadores entre una lesión reversible e irreversible.

Lesión reversible: la hipoxia afecta la respiración aerobica, comprometiendo la fosforilación oxidativa mitocondrial disminuyendo o paralizando la producción de ATP, alterando funcionalmente la célula. Lesión irreversible: el daño es funcional y estructural (mitocondrias y membranas), de gran magnitud y definitvo, la mitocondria se vacuoliza, hay daño a nivel membranal, los lisosomas aumentan de volumen y se incorpora intracelular de calcio a la celula.  29. Explique el mecanismo de daño celular asociado a los radicales libres y lesiones clínicas en las cuales estos se generan.

A nivel mitocondrial en la lesión por el insulto isquémico predomina la reducción univalente del oxígeno produciendo el radical superóxido, que en presencia de hidrógeno (acumulado por la acidosis de la isquemia), facilita la producción de peróxido de hidrógeno cuya reacción con el superóxido produce radical hidróxido, altamente reactivo y tóxico. El superóxido con el óxido nítrico forma peroxinitrato de oxígeno el cual se descompone en dos radicales: el óxido nítrico y el radical hidroxilo. Los peroxinitratos pueden producir ácido peróxico reaccionando de una manera similar a los radicales oh. Los protones de hidrógeno reaccionan durante varias de estas reacciones radical-radicales resultando en acidosis tisular y aumentando la producción de co2. Estos radicales pueden causar injuria celular, peroxidación de las membranas lipídicas y degradación de los ácidos nucléicos.

Finalmente el proceso de la injuria post-reperfusión se ve agravado por la participación que en ella tienen los neutrófilos por una parte y la inducción en la producción de óxido nítrico por la otra. La adhesión endotelioneutrófilo que sigue a la reperfusión está fuertemente implicada Existen dos líneas principales de defensa antioxidante intracelular, siendo la primera un grupo de enzimas antioxidantes (tres superóxido dismutasas (sod)) que convierten el superóxido a peróxido de hidrógeno, que finalmente es convertido en agua y oxígeno por las peroxidasas. Las sod, son metaloproteínas con una forma citoplasmática y otra extracelular, siendo la principal de ellas la glutation peroxidasa. La segunda línea es a través de la intercepción por antioxidantes no enzimáticos, los cuales pueden ser solubles en agua o en grasa. Un número de proteínas extracelulares, incluyendo la albúmina, lactoferrina, transferrina, haptoglobinas y ceruloplasmina tienen propiedades antioxidantes. 30. Mencione y describa los distintos tipos de necrosis: a. Coagulación: La zona necrótica, cuando ya hay necrofanerosis, aparece tumefacta,

amarillenta; en los infartos, carece de la estructura normal. Si la necrosis es extensa, aunque no corresponda a un infarto, puede haber destrucción de la trama fibrilar, como sucede en las necrosis masivas del hígado. Al microscopio, las células comprometidas presentan los signos típicos de la necrofanerosis. En general, se reconoce la estructura del órgano por las siluetas de las células y fibras. Se habla de una necrosis estructurada. b. Colicuación: se presenta casi exclusivamente en el sistema nervioso central, con mayor frecuencia en infartos cerebrales, en que es más manifiesta en la substancia blanca; puede ocurrir también en el páncreas como componente de pancreatitis necróticas. Está condicionada en particular por características del tejido comprometido. No se trata de una forma esencialmente diferente de la necrosis de coagulación, se trata, en particular, de una necrosis con rápida e intensa necrolisis producida por una intensa actividad enzimática. Ello se manifiesta macroscópicamente en la transformación de la zona comprometida en una cavidad, en cuyos bordes se aprecia al microscopio una intensa actividad macrofágica. En el cerebro las zonas de cavitación comienzan a producirse en la tercera semana de evolución de un infarto; los macrófagos, que corresponden a la microglía, aparecen a los cuatro días de evolución. Ellos contienen material graso producto de la desintegración de la mielina, en forma de gotitas y gránulos, por lo que esos macrófagos reciben el nombre de "corpúsculos gránuloadiposos"; suelen contener además, hemosiderina, producto de la degradación de la hemoglobina fagocitada. c. Fibrinoide: se da cuando hay acumulo perivascular de una proteína patológica, conocida como amiloide. d.  Adiponecrosis: - Traumática: no es habitual, se produce por un traumatismo que sobrepasa las capacidades de adaptación celular - Una serie de acontecimientos fisiológicos o patológicos generan unos cambios bioquímicos en la célula y ésta "decide" su propia muerte, de una forma ordenada, disgregándose en pequeñas vesículas que serán fagocitadas por los macrofagos y sin mayor repercusión para el tejido en cuestión (podríamos denominarla suicidio. 31. Describa el proceso de gangrena estableciendo sus distintos tipos.

La gangrena no es una forma especial de necrosis, es una forma particular de evolución de una necrosis, la cual está condicionada por ciertos gérmenes. Estos gérmenes actúan sobre las proteínas, especialmente sobre la hemoglobina, y los productos de descomposición dan la coloración negruzca característica de la gangrena. Patogenéticamente hay dos formas distintas de gangrena: la isquémica y la infecciosa. a. Gangrena isquémica Se produce en la piel y tejidos blandos subyacentes, con mayor frecuencia en las extremidades inferiores debido a obstrucción arterioesclerótica. La necrosis se produce por la isquemia y sobre el tejido necrótico actúan secundariamente los gérmenes saprófitos de la piel. Según cuáles sean las condiciones del tejido comprometido, se produce una gangrena isquémica seca o húmeda. b. Gangrena seca. En esta forma la evaporación del agua produce rápidamente una desecación de la piel comprometida, que se transforma en una lámina acartonada, pardo negruzca, seca. El territorio comprometido queda bien demarcado, los gérmenes no penetran en la profundidad, no se produce intoxicación del organismo. c. Gangrena húmeda. Especialmente cuando hay edema o la piel está húmeda, los gérmenes penetran en los tejidos subyacentes, donde proliferan y dan origen a un estado tóxico; el territorio comprometido, pardo verduzco, no queda bien delimitado. d. Gangrena infecciosa En esta forma la necrosis y la gangrena son producidas por gérmenes; gérmenes anaeróbicos que actúan sobre tejidos ya desvitalizados generalmente por una inflamación. Esta forma de gangrena se observa en las vísceras, en que el territorio comprometido aparece reblandecido, friable, en forma de colgajos, a veces con burbujas de gas producido por los gérmenes. La gangrena infecciosa es altamente tóxica, se la encuentra como complicación de bronconeumonías o pneumonías, apendicitis, colecistitis, metritis y otras inflamaciones.

32. Defina y describa el proceso de apoptosis y que relación existe con el proceso de necrosis.

Es una forma de muerte celular caracterizada por hipereosinofilia y retracción citoplasmáticas con fragmentación nuclear (cariorrexis) desencadenada por señales celulares controladas genéticamente. Estas señales pueden originarse en la célula misma o de la interacción con otras células. La apoptosis tiene un significado biológico muy importante, que es opuesto al de la mitosis en la regulación del volumen tisular. La apoptosis contribuye a dar la forma a los órganos durante la morfogénesis y elimina células inmunológicamente autorreactivas, las células infectadas y las genéticamente dañadas, cuya existencia es potencialmente dañina para el huésped. La apoptosis no presenta las fases de necrobiosis, necrofanerosis y necrolisis. Los signos morfológicos de la apoptosis son muy semejantes a los de la necrofanerosis. En la apoptosis las alteraciones nucleares representan los cambios más significativos e importantes de la célula muerta y los organelos permanecen inalterados incluso hasta la fase en que aparecen los cuerpos apoptóticos. En la apoptosis destacan las alteraciones morofológicas del núcleo frente a las del citoplasma, a la inversa de lo que ocurre en la necrosis en general. A diferencia de la apoptosis, la necrosis es una forma de muerte celular que resulta de un proceso pasivo, accidental y que es consecuencia de la destrucción progresiva de la estructura con alteración definitiva de la función normal en un daño irreversible;

este daño está desencadenado por cambios ambientales como la isquemia, temperaturas extremas y traumatismos mecánicos.