Informe de Laboratorio 5 Bioquímica Nombre de la práctica: Características de los Ácidos Grasos Graso s
Estudiante: Amanda Isabel Avila Ibañez. Código: 40384150Grupo: 201103_8 Correo:
[email protected] Correo Tutor Campus: Gmail:
[email protected] [email protected] Tutor de Laboratorio: Fredy Alexander Sánchez
Universidad Nacional Abierta y a Distancia Unad, Cead Yopal Escuela de Ciencias Básicas, Tecnología e Ingeniería Tecnología en Regencia de Farmacia Yopal, Casanare- mayo 9-2018
1. PRACTICA 5: CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS 3,1 Materiales y Procedimientos Procedimientos 3,2 Solubilidad en Lípidos 3,3 Reacción con el Sudan III 3,4 Preguntas
Practica 5. CARACTERÍSTICAS DE LOS ÁCIDOS GRASOS Los lípidos (del griego lypos, grasa) son biomoléculas orgánicas formadas básicamente por C, H y O, aunque este último elemento se encuentra en proporciones mucho más bajas que los dos primeros. Además, pueden contener P, N y S. Constituyen un grupo de sustancias muy heterogéneas con características químicas diversas, pero con algunas propiedades físicas comunes, que podrían resumirse en estas dos: _ Son mayoritariamente insolubles en agua. _ Son solubles en disolventes orgánicos, tales como éter, cloroformo, alcanos (ej: hexano), benceno, acetona y alcoholes. De acuerdo a la estructura química los lípidos se clasifican en dos grupos, de acuerdo al contenido en su composición ácidos grasos (Lípidos saponificables) o no lo posean (Lípidos insaponificables). La saponificación consiste en una hidrólisis alcalina de la preparación lipídica (con KOH o NaOH). Los lípidos derivados de ácidos grasos (ácidos monocarboxílicos de cadena larga) dan lugar a sales alcalinas (jabones) y alcohol, que son fácilmente extraíbles en medio acuoso.
Tabla 1 Clasificación de lípidos.
Lípidos saponificables
Simples
Acilglicéridos Céridos
Complejos
Fosfolípidos Glucolípidos
Lípidos insaponificables
Terpenos Esteroides Prostaglandinas
MATERIALES Y PROCEDIMIENTO. Tabla 2Materiales y Materiales y reactivos. Reactivos Materiales
Cantida d
Aceite de girasol
Tubos de ensayo (140 mm*14mm)
15
Agua destilada
Gradilla
2
Hexano
Pinza para tubos
2
Acetato de etilo
Pipetas Pauster con bulbo
4
Etanol
Beaker o vasos de precipitados de 500 mL
5
NaOH
Estufa
1
KOH
Cámara de flujo laminas
1
Reactivo Sudán III
Pipetas de vidrio: 0.5 ml, 1 ml, 5 ml y 10 ml.
4
Pera de goma para pipetas
4
Vidrios reloj grandes Probeta 100 ml Balón aforado de 25 ml Agitador de vidrio Balanza analítica
SOLUBILIDAD EN LÍPIDOS Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas gotitas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, puede sepárese en reposo, por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sitúa sobre la de agua. Por el contrario, las grasas con solubles en los llamados disolventes orgánicos como el éter, benceno, xilol, cloroformo, etc.
Tabla 3 Determinación de solubilidad en lípidos.
Tub os
Cantidad
Reactivo
Procedimiento
1
con 3 ml de Aceite vegetal
4 mL de agua destilada
Preparar los tubos de ensayo.
2
con 3 ml de Aceite vegetal
4 mL de hexano
4 mL de hexano
Cada tubo 4 mL de hexano
Agite los tubos. 3 ml de Aceite vegetal deje reposar unos minutos Observar y tomar apuntes de los cambios.
+ Agite los tubos + Dejar en reposo. + Observar y tomar apuntes de los cambios.
SAPONIFICACIÓN Muchos lípidos, como por ejemplo: los ácidos grasos, reaccionan con bases fuertes, NaOH o KOH, dando sales sódicas o potásicas que reciben el nombre de jabones. Esta reacción se denomina de saponificación. Son saponificables los ácidos grasos o los lípidos que poseen ácidos grasos en su estructura.
Tabla 4 Ensayo de Saponificación.
Tub os
Cantidad
Reactivo
1
3 mL de aceite vegetal
3 mL de NaOH
2
3 mL de aceite vegetal
(1 N)
3 mL de KOH
Procedimiento
Preparar los tubos de ensayo.
Cada tubo Agregar manteca en un tubo de ensayo.
Agregar 3 mL solución de NaOH (1 N). Agitar.
3 ml de la solución de NaOH (1 N).
Baño de agua hirviente por
+
10 minutos.
Baño de agua hirviente por
Dejar enfriar. Observar y tomar apuntes de los cambios.
10 minutos. Observar y tomar apuntes de los cambios.
Si posible repetir el mismo procedimiento con KOH
REACCIÓN CON EL SUDÁN III El Sudán III es un colorante que se utiliza para detectar específicamente las grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de color rojo, cuando se disuelve tiñe las grasas de color rojo anaranjado.
Tabla 5 Tinción: Reacción con el Sudán III.
Tub os
Cantidad
1
con 3 ml de Aceite vegetal
Sudan III
Preparar los tubos de ensayo.
2
con 3 mL de Aceite vegetal
Tinta roja
Agregar 3mL de aceite vegetal.
Reactivo
Procedimiento
Cada tubo 3 ml de Aceite vegetal
Agregar 8 gotas de Sudan III
8 gotas de Sudan III
Observar y tomar apuntes de los cambios.
Observar y tomar apuntes de los cambios.
1.1 PREGUNTAS:
¿Qué son los jabones? R/ Son sustancias solidas, en polvo o liquida elaborado con la finalidad de limpiar la superficie de algún material sucio, y que se fabrica haciendo cocer hasta fundirse una mescla de grasas vegetales o animales y aceites.
Los jabones son lípidos saponificables por lo cual pueden realizar el proceso de saponificación. Son la sal de un ácido graso. ¿Cómo se pueden obtener los jabones? Se puede obtener jabon basada en la reacción de saponificación, que consiste en hacer reaccionar una grasa, ya sea sebo o aceite, con una base fuerte, ordinariamente hidróxido de sodio (NaOH), también llamada sosa caustica. Mediante el proceso de saponificación, siendo una hidrólisis de un ácido graso que tiene lugar en medio alcalino y se realiza con NaOH o con KOH ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa? Porque la glicerina no es liposoluble Porque en la saponificación, se utilizan grasas y estas están compuestas por ácidos grasos y glicerina. Como resultado se obtiene una fase semisólida que es la sal de sodio de los ácidos grasos (el jabón ), por lo tanto, en la fase acuosa quedara el alcohol (glicerina) como subproducto de la elaboración del jabón puesto que es parcialmente soluble en agua, por lo que no hay razón para que no esté presente en esta forma. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas? La enzima lipasa gástrica, en el estomago La enzima lipasa bucal, en la boca La enzima lipasa pancreática, en el intestino delgado Indica lo que ocurre con las mezcla aceite – sudan III y aceite-tinta y explica a qué se debe la diferencia entre ambos resultados. Cuando se mescla el aceite con el sudan III, todo el aceite se tiñe de rojo puesto que es un colorante lipofilico ósea que es soluble en grasas y debido a esa afinidad se utiliza para revelar la presencia de grasa. Pero la tinta roja no es soluble en grasas, por esa razón, el aceite no se tiñe de rojo con la tinta china roja puesto que no se mesclan, y la tinta se deposita en el fondo ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo? ¿Y con la de los otros compuestos empleados? ¿A qué se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones? Al pasar unos minutos de reposo, esa emulsión desaparece por la reagrupación de las gotitas de grasas en una capa, que por ser menos densa, se sitúa sobre el agua, de mayor densidad. Aparece una disolución homogénea, puesto que el aceite se disuelve en el benceno, sustancia
orgánica y apolar al igual que el aceite. Por la solubilidad de las grasas, insoluble en agua y por lo tanto no se mescla con ella, y soluble en disolventes apolares como él. ¿Qué ocurre con la emulsión cuando se le añade detergente? Se habrá conseguido mezclar dos sustancias inmiscibles en una emulsión Al añadir el detergente y agitar se forman esferitas de aceite. Las esferitas no se unen unas a otras, sino que permanecen separadas gracias al emulgente que las rodea, quedando repartidas en el agua de manera prácticamente homogénea. La forma esférica se debe a que el extremo hidrófilo de la molécula de detergente está cargado negativamente. Las cargas del mismo signo se repelen y para estar lo más lejos posible unas de otras se colocan dando lugar a una esfera. Materiales y Métodos Los principales materiales que se utilizaran en las realizaciones de las prácticas son Tubos de ensayo de 140mm*14mm, Gradilla, Pinza para tubos, Pipetas Pauster con bulbo, Beaker o vasos de precipitados de 500ml, Estufa, Cámara de Flujo Laminas, Pipetas de vidrio de 0,5ml, 1ml,5ml y 10ml, pera de gomas para pipetas Algunos reactivos son Reactivo de Ninhidrina, Hopkins-Cole, Millon, Biuret, Xantoproteica, Sakaguchi, Bradford, Seliwanof, Lugol, Fehling, Benedict, Barfoed, entre otros Algunas precauciones que se deben tener con estos reactivos son: Almacenamiento, Guarde en un envase cerrado herméticamente, almacene en un área fresca, seca y bien ventilada. Proteja contra los danos físicos. Aísle de las sustancias incompatibles. Los recipientes de este material pueden ser peligrosos al vaciarse puesto que retienen residuos del producto (polvo, sólidos); observe todas las advertencias y precauciones listada para el producto. Desecho, Lo que no pueda salvarse para recuperar o reciclar debe manejarse en una instalación de eliminación de residuos, aprobada y apropiada. El procesamiento, utilización o contaminación de estos productos puede cambiar las opciones de administración de residuos. Las regulaciones de eliminación local o estatal pueden diferir de las regulaciones de eliminaciones federales. Deseche el envase y el contenido no usado con los requerimientos federales, estables y locales.
Plan de trabajo
El Tutor encargado de la práctica de laboratorio de bioquímica es el Profesor Fredy Alexander Sánchez. La práctica se realizara el domingo 12 de mayo en Acacías (Meta), en el Laboratorio de la UNAD. Se debe tener en cuenta en concepto de bioseguridad, que es el conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores, estudiantes y docentes que se encuentren en los laboratorios. “Todos los residuos y sus fluidos corporales independientemente de su procedencia o motivo
por el cual haya ingresado deberán ser considerados como potencialmente infectantes, por lo tanto se debe tener las precauciones evitar accidentes”.
Estas son algunas normas principales 1. Maneje todo material como potencialmente infectante. 2. Cualquier accidente por pequeño que sea, debe comunicarse al docente responsable de la práctica o al laboratorista. 3. Todo el personal que desarrolle su labor en ambientes que tengan contacto, tanto directo como indirecto, con la sangre u otros fluidos biológicos de otras personas infectadas o en los cuáles se desconoce si están enfermas o portadoras de algún microorganismos que puede ser prevenible por vacunación, deberá vacunarse. 4. El equipo de protección personal será usado en los laboratorios donde se lleven a cabo trabajos de experimentación, será para estudiantes, docentes y laboratoristas. 5. Ninguna persona podrá permanecer en el laboratorio si le falta alguno de los implementos antes descritos y no se admitirá a nadie que llegue extraoficialmente de visita, sin previa autorización del docente o laboratorista. 6. Antes de iniciar la tarea diaria asegúrese que la piel de sus manos no presente cortes o lesiones, si es así, cubra la herida de manera conveniente antes de colocarse los guantes. 7. Usar guantes de látex de buena calidad para todo manejo de material biológico o donde exista el riesgo de exposición de fluidos corporales. 8. Usar guantes de nitrilo de buena calidad para el manejo de sustancias químicas. 9. Cambiar los guantes cada vez que hayan sido contaminados, lavarse las manos y ponerse guantes limpios. 10. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas por riesgo de contaminación.
11. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes puestos. 12. Todos los procedimientos deberán ser realizados de manera tal que sea nula la creación de gotas, salpicaduras, etc. 13. Bajo ninguna circunstancia se pipeteará sustancia alguna con la boca, para ello se usarán pipeteadores o dispositivos de pipeteado. 14. Las superficies del área de trabajo deberán ser descontaminadas al iniciar y al terminar las actividades. Usando para tal efecto una solución de hipoclorito de sodio en concentración adecuada. 15. Lavar las manos con jabón (líquido o sólido suspendido) y agua inmediatamente después que el trabajo haya sido terminado. 16. No guarde alimentos, en las neveras ni en los equipos de refrigeración de sustancias contaminantes o químicos. 17. Una vez usados los guantes deberán ser colocados dentro del recipiente adecuado (Bolsa color rojo, debidamente rotulado). 18. El desecho de los fluidos orgánicos puede efectuarse por los lavados habituales una vez que estos hayan sido convenientemente descontaminados. 19. En caso de ruptura de material de vidrio contaminado con cultivos microbianos, sangre u otro líquido corporal, los vidrios deben recogerse con escoba, recogedor y guantes de goma, nunca con las manos. 20. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deberá ser restringido a su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes deberán ser descartados en un recipiente resistente (guardián). Se deberán evitar los intentos de reintroducir las agujas descartadas en capuchones o de romperlas o doblarlas ya que esta conducta produce aumento de la posibilidad de accidentes por pinchazos o salpicaduras. No usar tijeras con puntas muy agudas. Por ningún concepto las agujas volverán a taparse. El conjunto aguja-jeringa deberá ser descartado en el recipiente destinado a tal fin. 21. Todas las sustancias, equipos, materiales, etc., deberán ser manejados con el máximo cuidado, atendiendo a las indicaciones de los manuales de uso o de seguridad, según sea el caso. 22. Queda prohibido arrojar desechos de sustancias al drenaje o por cualquier otro medio, sin autorización del responsable. 23. En cada laboratorio deberá existir, de manera clara, visible y legible, la información acerca de los teléfonos de emergencia a los cuales llamar en caso de requerido. 24. Por seguridad no se bebe colocar ningún tipo de objeto sobre los equipos. 25. Los equipos y aparatos nunca deben colocarse en zonas de paso, en particular en los pasillos del laboratorio. 26. Todos los aparatos con toma eléctrica deberán cumplir con las normativas correspondientes. Nunca deberán utilizarse en zonas mal aisladas y expuestas a la humedad. 27. Las fuentes de calor (calentadores, termo bloques, etc.), sobre todo si alcanzan temperaturas elevadas, deberán de estar señalizadas para evitar quemaduras accidentales.
28. Al conectar o desconectar cualquier equipo eléctrico las manos deben estar completamente secas, los cables de los equipos deben estar en óptimas condiciones de no ser así o lo utilice e infórmelo inmediatamente al laboratorista. 29. Deberá limpiarse cualquier aparato o instrumento de cualquier laboratorio que vaya a ser sometido a reparación. 30. Usar solo el equipo asignado por el docente a cargo de la práctica en el laboratorio. 31. El uso de lentes de contacto y zapatos abiertos. (tipo sandalia) está prohibido en los laboratorios. Es indispensable presentarse al desarrollo del componente práctico, con la vestimenta apropiada y cómoda, que facilite la movilidad para la actividad que se desarrolla en los laboratorios. Debe cubrir áreas considerables de la piel con pantalones (jeans), blusas con mangas, la bata y guantes. Use calzado cerrado que cubra completamente el pie. El alumno debe portar en todo momento Bata blanca de Laboratorio. Nunca ingerir alimentos, beber o masticar chicle dentro del laboratorio, igualmente evitar tocar partes del rostro y llevar las manos a la boca o introducir lapiceros u otros en boca nariz y oídos. Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, igualmente al entrar a las instalaciones del laboratorio se recomienda que se haga cuando esté presente el docente encargado de la práctica, así como no ausentarse antes de terminar la práctica. El área del laboratorio es exclusivamente para realizar el trabajo de la práctica; cualquier tipo de acción social como cortejar, charlas ajenas a la práctica e igual que las bromas pueden causar pérdida de tiempo y posibles incidentes de alta gravedad. Describir los principales equipos, instrumentos y reactivos indicando las precauciones a tener, así como describiendo la información relávate que permita el buen desarrollo de la práctica. Debe tener en cuenta para el desarrollo de la práctica 1. Es indispensable presentar el acta de matrícula y/o Carnet vigente para el ingreso al laboratorio. 2. Usar siempre blusa blanca, limpia y en buen estado. El uso de la bata es obligatorio al ingresar a cualquier laboratorio. 2. Queda prohibido a los estudiantes, profesores y personal administrativo fumar, consumir alimentos o ingerir bebidas de todo tipo en los laboratorios en donde se realicen experimentos.
3. El estudiante que se presente en estado de embriaguez o bajo la influencia de sustancias psicoactivas en algún laboratorio, será sancionado conforme a los estatutos y reglamentos de la Universidad. 4. Se prohíbe portar armas de cualquier clase en los laboratorios. 5. Está prohibido practicar cualquier tipo de juegos de azar en los laboratorios. 6. Está prohibido correr al interior del laboratorio con el fin de evitar posibles accidentes. 7. No se permite el ingreso de estudiantes a cualquiera de los laboratorios sin el uniforme correspondiente al programa exceptuando los estudiantes de otras escuelas. 8. Habrá un horario estricto de entrada a las prácticas, un horario de descanso y un horario de salida o terminación de prácticas. 9. Ningún estudiante podrá permanecer en los laboratorios fuera del tiempo establecido por su horario de clases, salvo en los casos en que el profesor responsable o el laboratorista lo autorice. 10. Se harán responsables de la pérdida de elementos y equipos de los laboratorios a los estudiantes que se encuentren al momento de la práctica. 11. Las personas a quienes se sorprenda haciendo mal uso de equipos, materiales, instalaciones o de las señalizaciones ubicadas para protección civil, propias en los laboratorios serán sancionadas conforme al reglamento de la Universidad, según la gravedad de la falta cometida. 12. Los docentes, estudiantes, empleados y demás miembros del personal de los laboratorios, velarán por la protección del patrimonio de este. 13. Por respeto a sí mismos y a sus compañeros, así como a la comunidad Universitaria, las parejas deben conservar una compostura decorosa y digna en los laboratorios. 14. Los estudiantes están obligados a guardar el mayor respeto, basado en la mutua tolerancia, la cortesía y el espíritu de colaboración en los Laboratorios. Se considera como falta cualquier actitud des obligante de un estudiante hacia sus compañeros y como sumamente grave cualquier forma de agresión verbal o física hacia sus compañeros, docentes o trabajadores. 15. Está prohibido para estudiantes, docentes y personal administrativo el mal uso de los extintores. En caso de ser sorprendido, la persona será sancionada según los reglamentos de la Universidad. 16. La presencia de personas extrañas que atenten contra el normal funcionamiento de la Universidad serán considerados infractores, por esta razón, se pondrán en disposición de las autoridades judiciales.
NOMENCLATURA Tabla 6Aminoácidos proteicos con nomenclatura clásica sistema de tres letras y sistema de una sola letra, impuesto en genética molecular. Nomenclatura
Una letra
Tres letras
Nombre
A
Ala
Alanina
G
Gly
Glicina
I
Ile
Isoleucina Ae
L
Leu
Leucina
V
Val
Valina
F
Phe
Fenilalanina Ae
W
Trp
Triptófano Ae
C
Cys
Cisteina
M
Met
Metionina
N
Asn
Asparagina
Q
Gln
Glutamina
S
Ser
Serina
T
Thr
Treonina Ae
Y
Tyr
Tirosina
Polar aromático y sin carga
R
Arg
Arginina
Polar con carga positiva
Clasificación
Apolares alifáticos
Ae
Ae
Apolares aromáticos
Apolares con azufre
Polares alifáticos y sin carga
H
His
Histidina Ae
Lys
Lisina
D
Asp
Ac. Aspártico o Aspartato
E
Glu
Ac. Glutamico o Glutamato
P
Pro
Prolina
K Polar con carga negativa Iminoacido
Ae = Aminoácido esencial
REFERENCIAS Tomado de: Manual de Prácticas de Laboratorio de bioquímica, Universidad Nacional Autónoma de México Reactivosmeyer.com.mx http://reactivosmeyer.com.mx/pdf/reactivos/hds_1790.pdf Quimicaweb.net FDS Ficha de Datos de Seguridad Quantyka.com.mx http://www.quantyka.com.mx/catalogo/HDSM/R/251820.htm
ANEXO REACTIVO DE BIURET Uso de la sustancia o preparado: Para usos de laboratorio, análisis, investigación y química fina. Nocivo para los organismos acuáticos
Indicaciones generales: En caso de pérdida del conocimiento nunca dar a beber ni provocar el vómito.
Inhalación: Trasladar a la persona al aire libre. En caso de que persista el malestar, pedir atención médica. Contacto con la piel: Lavar abundantemente con agua. Quitarse las ropas contaminadas. Ojos: Lavar con agua abundante manteniendo los párpados abiertos. En caso de irritación, pedir atención médica. Ingestión: Beber agua abundante. Provocar el vómito. Pedir atención médica. No inhalar los vapores. Precauciones para la protección del medio ambiente: Prevenir la contaminación del suelo, aguas y desagües. Métodos de recogida/limpieza: Recoger con materiales absorbentes (Absorbente General Quantyka, Kieselguhr, etc.) o en su defecto arena o tierra secas y depositar en contenedores para residuos para su posterior eliminación de acuerdo con las normativas vigentes. Limpiar los restos con agua abundante.
