LAPORAN PRAKTIKUM V FITOKIMIA Identifikasi Senyawa Golongan Antrakinon (Ekstrak Rheum officinale L.)
Dosen Pembimbing : 1. Drs. Herra Studiawan, M.Si, Apt 2. Dra. Rakhmawati, M.Si, Apt 3. Siti Rofida, S.Si, M.Farm, Apt
Nama
: Irsan Fahmi A
NIM
: 201210410311171
Kelompok
:1
Kelas
:A
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG 2015
A. JUDUL
Identifikasi Senyawa Golongan Antrakinon (Ekstrak Rheum officinale L.) B. TUJUAN Mahasiswa mampu melakukan identifikasi senyawa golongan antrakinon dalam tanaman. C. TINJAUAN PUSTAKA Tanaman Kelembak (Rheum officinale L.) Kingdom : Plantae (Tumbuhan) Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Ordo : Caryophyllales Famili : Polygonaceae Genus : Rheum Spesies : Rheum officinale L. Herba besar, tegak, bertahunan dengan tinggi lebih dari 2,5 m; rizoma dan akarnya tebal, bercabang, hampir berdaging, kuning muda. Daun sebagian di roset yang radikal, sebagian membentuk susunan spiral di batang tegak, helaian daun bundar, pangkal daun menjantung, cuping menjari mendalam, cuping bundar telur-lonjong atau melanset. Perbungaan malai, bebas, berambut. Bunga biseksual, daun tenda merah, kadang-kadang merah muda atau keputihputihan. Buah menyegitiga, coklat, lebih panjang dari pada mahkota bunga, bersayap 3. Kelembak mempunyai kandungan antranoid, khusunya glikosida antrakinon seperti rhein (semosida A dan B), aloe-emodin, physcion. Juga mengandung asam oksalat, tanin yaitu gallotanin, katekin dan prosianidin. Sedangkan kandungannya yang lain adalah pektin, asam fenolat (Newall et al, 1996; Bradley, 1992; Chirikdjan et al, 1983). Rheinosida bersifat sebagai pencahar (mengatasi konstipasi). Karena itu penggunaannya sebagai pencahar akan efektif sekitar 6 jam dan terkadang bisa menjadi tidak aktif dalam waktu 24 jam setelah pemakaian oral. Senyawa Antrakinon
Senyawa antrakinon adalah glikosida yang aglikonnya sekerabat dengan antrasena yang memiliki gugus karbonil pada kedua atom C yang berseberangan (atom C9 dan C10) atau hanya C9 (antron) dan C9 ada gugus hidroksil (antranol). Zat ini berkhasiat sebagai laksativum. Di alam, terdapat sekitar 40 turunan antrakuinon yang berbeda. Umumnya antrakinon ditemukan pada Lichenes dan Fungi tertentu. Glikosida antrakinon bersifat mudah terhidrolisis seperti glikosida lainnya. Glikosida ini jika terhidrolisis menghasilkan aglikon di-, tri-, atau tetrahidroksi antrakuinon atau modifikasinya sedangkan bagian gulanya tidak menentu. Contohnya jika frangulin dihidrolisis maka akan mengasilkan emodin (1,6,8-trihidroksi-3-metil antrakuinon) dan rhamnosa. Antrakuinon bebas hanya memiliki sedikit aktivitas terapeutik. Residu gula memfasilitasi absorpsi dan translokasi aglikon pada situs kerjanya Turunan antrakuinon umumnya berwarna merah oranye dan dapat dilihat langsung serta terdapat dalam bahan-bahan purgativum (laksativum atau pencahar). Turunan antrakuinon berbentuk dihidroksi fenol seperti krisofanol, berbentuk trihidroksi fenol seperti emodin, atau tetrahidroksi fenol seperti asam karminat. Seringkali terdapat gugus-gugus lain seperti metil
dalam krisofanol, hidroksimetil pada aloe-emodin, serta karboksil dalam resin dan asam karminat. Identifikasi Senyawa Antrakinon Semua antrakinon memberikan warna reaksi yang khas dengan reaksi Borntraeger jika Amonia ditambahkan: larutan berubah menjadi merah untuk antrakinon dan kuning untuk antron dan diantron. Antron adalah bentuk kurang teroksigenasi dari antrakinon, sedangkan diantron terbentuk dari 2 unit antron. Antrakinon yang mengandung gugus karboksilat (rein) dapat diekstraksi dengan penambahan basa, misalnya dengan natrium bikarbonat. Hasil reduksi antrakinon adalah antron dan antranol, terdapat bebas di alam atau sebagai glikosida. Antron bewarna kuning pucat, tidak menunjukkan fluoresensi dan tidak larut dalam alkali, sedangkan isomernya, yaitu antranol bewarna kuning kecoklatan dan dengan alkali membentuk larutan berpendar (berfluoresensi) kuat. Oksantron merupakan zat antara (intermediate) antara antrakinon dan antranol. Reaksi Borntraeger modifikasi Fairbairn, yaitu dengan menambahkan hidrogen peroksida akan menujukkan reaksi positif. D. PROSEDUR KERJA a. Reaksi Warna 1. Uji Borntrager 1) Ektrak sebanyak 0,3 gram diektraksi dengan 10 ml aquadest, saring, lalu filtrat diesktraksi dengan 5 ml toluena dalam corong pisah. 2) Ektraksi di lakukan sebanyak dua kali. Kemudian fase toluena dikumpulkan dan dibagi menjadi 2 bagian, disebut sebagai larutan VA dan VB 3) Larutan VA sebagai blangko, larutan VB ditambah amonia pekat 1 ml dan di kocok. 4) Timbulnya warna merah menunjukkan adanya senyawa antrakinon. 2. Uji modifikasi Borntrager 1) Ekstrak sebanyak 0,3 gram ditambah dengan 5 ml KOH 0,5N dan 1 ml H 2O2 encer. 2) Dipanaskan selama 5 menit dan disaring, filtrat ditambah asam asetat glasial, kemudian diektraksi dengan 5 ml toluena. 3) Fase toluena diambil dan dibagi menjadi dua sebagai larutan VIA dan VIB. 4) Larutan VIA sebagai blangko, larutan VIB ditambah amonia pekat 1 ml. Timbulnya warna merah atau merah muda pada lapisan alkalis menunjukkan adanya antrakinon. b. Kromatografi lapis Tipis 1. Sampel ditotolkan pada fase diam. Uji kromatografi lapis tipis ini menggunakan ; Fase diam : Kiesel Gel 254 Fase Gerak : Toluena-Etil asetet-Asam asetat glasial (75:24:1) Penampak noda : Larutan KOH 10% dalam metanol. 2. Timbulnya noda berwarna kuning, kuning cokelat, merah ungu atau hijau ungu menunjukkan adanya senyawa antrakinon E. HASIL Perhitungan Rf KLT 1 - 2,9 cm : 8 cm = 0,3625 - 3,8 cm : 8 cm = 0,475 - 5,6 cm : 8 cm = 0,7
Gambar hasil praktikum
F.
PEMBAHASAN Identifikasi senyawa golongan antrakuinon pada Rheum palmatum adalah dengan cara pengujian reaksi warna uji Borntrager dan uji modifikasi Borntrager serta KLT. 1. Uji Borntrager Ekstrak sebanyak 0,3 gram diekstraksi dengan 10 ml aquadest, saring, lalu filtrat diekstraksi dengan 5 ml toluena dalam corong pisah. Ekstraksi dengan aqudest dilakukan untuk menghilangkan senyawa-senyawa lain yang bersifat polar karena keberadaan senyawa tersebut dapat mengganggun proses ekstraksi antrakuinon. Setelah itu baru dilakukan ekstraksi dengan toluena untuk mengekstraksi antrakuinon
Ekstraksi dilakukan sebanyak dua kali. Kemudian fase toluena dikumpulkan dan dibagi menjadi dua bagian, disebut sebagai larutan VA dan VB. Larutan VA sebagai blanko, larutan VB ditambah amonia pekat 1 ml dan dikocok. Larutan VB menunjukkan perubahan warna menjadi merah yang menandakan adanya senyawa golongan antrakuinon. Hal ini terjadi karena gugus phenol yang ada pada antrakuinon jika bereaksi dengan ammonia akan membentuk komplek phenate yang berwarna merah. 2. Uji Modifikasi Borntrager Ekstrak sebanyak 0,3 gram ditambah dengan 5 ml KOH 0,5 N dan 1 ml H 2O2 encer. Penambahan KOH bertujuan untuk menghidrolisis glikosida antron dan antranol serta membentuk garam kalium dengan aglikon sedangkan penambahan H2O2 digunakan untuk mempercepat oksidasi antron/antranol menjadi antrakuinon. Dipanaskan selama 5 menit dan disaring, filtrat ditambah asam asetat glasial, kemudian diekstraksi dengan 5 ml toluena. Pemanasan bertujuan untuk menaikkan suhu larutan karena antrakuinon larut dalam pelarut organik yang panas. Asam asetat glasial digunakan untuk menetralkan larutan yang ada. Fase toluena diambil dan dibagi menjadi dua sebagai larutan VIA dan VIB. Larutan VIA sebagai blanko, larutan VIB ditambah amonia pekat 1 ml. Larutan VIB menunjukkan perubahan warna menjadi merah yang menandakan adanya senyawa golongan antrakuinon. Hal ini terjadi karena gugus phenol yang ada pada antrakuinon jika bereaksi dengan ammonia akan membentuk komplek phenate yang berwarna merah. 3. Kromatografi Lapis Tipis Diambil sedikit ekstrak Rheum officinale kemudian dilarutkan dalam ethanol sebanyak 0,5 ml. Fungsi penambahan ethanol adalah untuk melarutkan ekstrak sehingga ekstrak yang digunakan berupa cairan bukan padatan. Untuk identifikasi kali ini eluen yang digunakan adalah toluena-etil asetat-asam asetat glasial dengan perbandingan 75:24:1. Eluen yang sudah jadi dimasukkan ke dalam chamber sebagai fase gerak dan kertas saring dimasukkan hal ini bertujuan untuk mengetahui apakah chamber pada kondisi jenuh oleh eluen atau tidak dengan cara melihat naiknya cairan pada kertas saring hingga terbasahi seluruhnya. Sambil menunggu kertas saring terbasahi, disiapkan lempeng KLT dengan panjang x lebar = 2 x 10 cm dengan bagian bawah lempeng diberi garis 1,5 cm dari bawah lempeng dan bagian atas atas diberi garis dengan jarak 0,5 cm dari atas lempeng. Kemudian, disiapkan pipa kapiler untuk menotolkan ekstrak pada lempeng KLT dengan cara pipa kapiler dimasukkan dalam ekstrak yang sudah dibuat tadi dan secara otomatis ekstrak tersebut masuk dalam pipa kapiler setelah itu langsung ditotolkan pada lempeng KLTnya. Setelah kertas saring sudah terbasahi, kertas saring diangkat kembali dari wadah dan dimasukkanlah lempeng KLT. Setelah lempeng KLT terbasahi sampai batas atasnya kemudian diangkat dan dikeringkan sebentar kemudian diamati pada sinar UV 365 nm dan 254 nm, lalu disemprot dengan penampak noda larutan KOH 10% dalam metanol untuk memperjelas noda yang tampak. Berdasarkan hasil percobaan didapatkan nilai Rf masing-masing noda pada plat KLT Rheum officinale sebesar 0,3625; 0,475; 0,7. Saat disinari UV 365 nm dan 254 nm, warna noda tampak fluorescent kuning, kuning coklat, merah ungu atau hijau ungu. Semua aglikon menunjukkan fluorescent pada 254 nm dan umumnya kuning atau fluorescent orange-coklat pada UV 365 nm (Wagner dan Bladt, 1996). Setelah itu, disemprot dengan penampak noda larutan KOH 10% dalam metanol untuk memperjelas noda yang tampak. Warna noda setelah penyemprotan adalah ungu kehitaman.
G. KESIMPULAN.
Berdasarkan hasil percobaan yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa pada Rheum officinale terdapat kandungan senyawa golongan antrakuinon. Hal ini dibuktikan dengan tampaknya noda fluorescent pada lempeng KLT berwarna merah ungu setelah disemprot penampak noda. Selain itu, ekstrak Rheum officinale juga positif pada uji warna Borntrager dan uji modifikasi Borntrager karena menghasilkan warna merah. Rf yang didapat dari masing-masing noda adalah 0,3625; 0,475; 0,7. H. DAFTAR PUSTAKA Rheum Palmatum. Dari : http://www.proseanet.org/prohati4/browser.php?docsid=466. Diakses tanggal 9 April 2015. Magrina, Angri. 2014. Pembuatan Ekstrak Kering Ramuan Anti Hiperlipidemia dari Infusa Campuran Akar Kelembak, Daun Jati Belanda, Daun Kemuning, Herba Meniran, Rimpang Kunyit dan Rimpang Temulawak dengan Pengering Laktosa (Skripsi). Dari : http://etd.repository.ugm.ac.id/index.php? mod=penelitian_detail&sub=PenelitianDetail&act=view&typ=html&buku_id=69884&is_loca l=1. Diakses tanggal 9 April 2015. Anonim. Glikosida Antrakinon. Dari : https://www.academia.edu/8480370/Apa_Itu_Glikosida_Antrakuinon. Diakses tanggal 9 April 2015 Sarmoko. Glikosida Antrakinon. Dari : https://moko31.wordpress.com/2010/02/07/glikosidaantrakinon/. Diakses tanggal 9 April 2015 Drew, Anna. Glikosida Antracene. Dari : http://curriculum.toxicology.wikispaces.net/file/view/P3+L1213+Glycosides+anthracenes.ppt. Diakses tanggal 11 April 2015. Drugs Containing Anthraquinone Glycosides. Dari : https://uqu.edu.sa/files2/tiny_mce/plugins/filemanager/files/4290562/drugs%20cont %20anthraquinones%20glycosides.pdf. Diakses tanggal 11 April 2015.
Malang, 11 April 2015 Praktikan
Irsan Fahmi A . 201210410311171
