MARCO TEÓRICO Caléndula Caléndula Calénd ula of offic ficina inalis lis es un una a pla planta nta mun mundia dialme lmente nte rec recon onoci ocida da por sus pro propie pieda dades des medicinales,, antiinflamatoria, cicatrizante, anticancerígena, entre otras. Propiedade medicinales Propiedadess que se las confieren los metabolitos secundarios que de ella provienen. Quercetina y kaempferol son flavonoides sintetizados por C. officinalis, y son eficaces para el tratamiento de alergias, además a sido bien estudiada su eficiencia antio!idante, antiinflamatoria y su efecto cáncer"preventivo cáncer"preven tivo #$%&%'%,())* #$%&%'%,())*+. +. Reacción de Shinoda n la reacci-n de inoda, el magnesio metálico es o!idado por el ácido clorídrico concentrado, dando como productos al idr-geno molecular, que es eliminado en forma de gas y el cloruro de magnesio, que es el que forma comple/os con los flavonoides dando coloraciones características. l magnesio divalente, act0a sobre el grupo carbonilo de dos flavonas, produciendo una coloraci-n ro/a, este aumento de intensidad es debido a que el magnesio divalente intensifica la coloraci-n por estar doblemente coordinado #12, 345%, C6%3$, ()7)+. Quercetina 'a Quercetina es una molécula que forma parte de los 8lavenoides no polares. s el flavonoide más abundante abundante y el más abitual en la dieta umana, destacando por su elevada actividad antio!idante. antio!idante. % partir de él se obtienen otros flavonoide f lavonoides, s, como la naringenina o la rutina. 'a geometría que presenta es semiempirica, lo que quiere decir que es determinada por disti di stinto ntoss fac factor tores es com como o lo loss mom moment entos os di dipol polare ares, s, los po poten tencia ciales les de io ioniz nizaci aci-n -n y su suss propiedadess espectrales. propiedade 'a geometría que presenta es semiempirica, lo que quiere decir que es determinada por distintos factores como los mome momentos ntos dipo dipolare lares, s, los poten potencial ciales es de ionizaci-n y sus propiedades espectrales #9%1:;4$, ())<+.
Reconocimiento de Flavonoides y Taninos 'os 8lavonoides son compuesto polifen-licos que se encuentran ampliamente distribuidos en plantas verdes. stos compuestos al igual que los compuestos fen-licos precipitan en presencia de cloruro férrico. sta respuesta se debe al ataque producido por el ;on cloruro al idr-geno del grupo idro!ilo provocando una ruptura de enlace y la uni-n del grupo fen-!ido al ierro #formaci-n de comple/o+. Cloruro férrico (FeCl3)
Cloruro de ierro #;;;+ como catalizador de reacciones de alquilaci-n de benceno. 'a =prueba del cloruro férrico> es una prueba colorimétrica tradicional para fenoles, que usa una disoluci-n al 7 ? de cloruro de ierro #;;;+ que a sido neutralizada con idr-!ido s-dico asta que se forme un leve precipitado de 8e@ #@6+. 'a sustancia orgánica se disuelve en agua, metanol o etanol, luego se aAade la disoluci-n neutra de cloruroB se forma un comple/o coloreado transitorio o permanente #normalmente p0rpura, verde o azul+ indica la presencia de un fenol o enol. Permite reconocer la presencia de compuestos fen-licos yo taninos, determina tanto fenoles como taninos. % ).( m' de e!tracto etan-lico agregar 7 gota de soluci-n de cloruro férrico al ).7 ?. D Eesarrollo de una coloraci-n ro/o"vino, compuestos fen-licos en general #&arrera, Parra F Cuca, ()7G+. Cromatografía en capa delgada (ccd) y revelado:
'os flavonoides aparecen como puntos oscuros contra un fondo verde fluorescente cuando se observa en luz H3 #( el cual produce una fluorescencia intensa ba/o IJ
Quercetina, miricetina y I y M"@"glic-sidosB naran/a"amarillo Naempferol, isoramnetin, y sus I y M"@"glic-sidosB amarillo"verde. 'uteolin y sus M"@"glicosidosB naran/a %pigenina y sus M"@"glicosidosB amarillo"verde
'a farmacopea europea declara el análisis de la uella dactilar de la CCE para la identificaci-n de drogas vegetales #Oyvind, ())J+. Resultados 9H:1% P1@&'9%B 'irio 9H:1% P%:14B 8lores de caléndula :1%C;4B n la práctica se realizaron dos e!tracciones para cada muestra una con acetato de etilo y &utanol. e izo una suspensi-n de e!tracto aAadiéndole 7< m' 6(@B
t@6 #MB7+. % esta disoluci-n se le ace la respectiva e!tracci-n y se obtiene fase orgánica y fase acuosa. % la fase orgánica obtenida por e!tracci-n con acetato de etilo, se le realizan I pruebas de tubo, dando como resultado lo que se muestra en la tabla 7, (,I y G.
7
*Prueba con 8eClI. s positiva si se da una coloraci-n marr-n, verde o azul. *Prueba de inoda #9g R 6Cl+. s positiva si se da una coloraci-n naran/a, ro/a o violeta *Prueba para leucoantocianidinas. s positiva si se da un color naran/a, ro/o o violeta.
CROMATOFRAFÍA EN CAPA DELGADA (CCD) Con los e!tractos obtenidos de las dos fases orgánicas #con acetato de etilo y n"butanol+ de las dos muestras #patr-n y problema+, se desarroll- una cromatografía en capa delgada /unto con una muestra patr-n de Quercetina. Fase móvlB acetato de etilo" ácido acético" ácido f-rmico" agua #7))B77B77B(M+ A!e"te #evelado#$ 4P #reactivo de productos naturales+ una soluci-n de P5 G))) #polietilenglicol+. e debe asper/ar con el reactivo de 4P y en seguida con la soluci-n de P5 G)))% Eespués de desarrollar la placa y antes de usar los agentes reveladores se lleva a la cámara de rayos H3 a IJ< nm. e marcan las pocas mancas observadas, como lo muestra la 8ig. 7.
Muestra de cálculo para hallar el Rf d 1 2,4 = =0,61 Rf ( d 1 )= 3,9
3,9
1f #d7+ S ),J7 1f #dI+ S ),TM 1f #dG+ S ),TM
1f #d(7+ S ),G7 1f #d((+ S ),GT 1f #d(I+ S ),*( 1f #dI7+ S ),
1f #dG7+ S ),I7 1f #dG(+ S ),GJ 1f #dGI+ S ),
A"&lss ' Co"luso"es n comparaci-n con los resultados de Caléndula el cual era nuestro patr-n, casi todos los resultados para Lirio spp. #muestra problema+ tienen un resultado positivo, los flavonoides con compuestos que están ampliamente distribuidos en la naturaleza, por lo que es era probable encontrarlos en la muestraU como confirmaci-n de los resultados se tienen las placas cromatográficas, las que nos muestran primero, la diferencia de 1f entre los e!tractos de la misma planta pero obtenidas con diferente solvente, evidencia de la diferencia de polaridad entre los compuestos obtenidos, ya que éstos solventes usados para e!tracci-n presentan diferentes polaridadesU segundo en comparaci-n con el patr-n de la cromatografía en ccs, todas las siembras muestran una manca con un 1f muy cercano al que se muestra con la Quercitina #d(I, dG<, dII con d< correspondiente a Quercetina+ de esta manera podemos concluir que el Lirio spp., contiene flavonoides de diferentes polaridades, comprobándose esto con los ensayos colorimétricos de identificaci-n y con la CCE en comparaci-n con un patr-n.
lo!#a+,a
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1HV$ 12, . 5., %rturo, 3. C., F 5%@4%, C. #()7)+. dentificación preliminar de los meta!olitos secundarios de los e"tractos acuosos y etanólicos del fruto y ho#as de Morinda citrifolia L. $noni% y cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales. @btenido de ttpBrevistas.concytec.gob.pepdfscientiav(n(a)(v(n(.pdf 9.c %le/andro 9artinez. W8'%34@;EW. 8acultad de Quimica 8armaceutica. 9edellin. @btenido el 7* de 4oviembre de XttpBfarmacia.udea.edu.coYffflavonoides())7.pdf Z. Oyvind 9. %ndersen, 9arkam Nennet 1. 8'%3@4@;E,Cemistry, &iocemistry and %plications. :aylorF8rancis C1C. ())J. p. 7I. $%&%'%, 9. %. #())*+. &'(L)(C*+ ,& L( -R,)CC*+ ,& M&T(/LTS (+TC(+C&R01&+S ( -(RTR ,& C2L)L(S &+ S)-&+S*+ ,& Caléndula officinalis. @btenido de ttpB[[[.bdigital.unal.edu.coJ
