PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA CURSO BACTERIOLOGIA 001343
GUIA 2. IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS POSI TIVOS OBJETIVO GENERAL Reconocer la carac!er"!#ca carac!er"!#ca $or%ol&'#ca ( %##ol&'#ca )e lo Coco Gra$*+o#!#,o )e #n!er- en $#cro.#olo'"a/
OBJETIVOS ESPECIFICOS 1/ 2/ 3/
E!)# )#ar la carac! ac!er"!#ca $ #$+or!an!e n!e )e lo '-nero Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, Deinococcus/ Deinococcus/ Real Real# #ar ar la la )#%e )#%ere ren! n!e e +r +re. e.a a !#l !#l# #a)a a)a +ara +ara la #)e #)en! n!#% #%#c #cac# ac#&n &n )e '-ne '-nero ro ( e+e e+ec# c#ee en Staphylococcus ( Staphylococcus ( Streptococcus Streptococcus Micrococcus Micrococcus Deinococcus/ Deinococcus/ D#!#n'#r la la e e+ec#e )e )e Staphylococcus ( Streptococcus +a!&'ena )e la no +a!&'ena/
INTRODUCCIÓN Lo coco 'ra$+o#!#,o %eron )ecr#!o +or +r#$era ,e en 1565 +or el c#en!"%#co ale$n Ro.er! 7oc8 9#en reconoc#& reconoc#& 9e n 'r+o ,ar#a)o )e en%er$e)a)e en%er$e)a)e eran +ro)c#)a +ro)c#)a +or $#croor'an#$o con +a!rone )e crec#$#en!o en +are:a ca)ena o rac#$o/ Lo coco 'ra$+o#!#,o on .ac!er#a e%-r#ca con n !a$a;o en!re 0/< a 1/5 $#cra )e )#$e!ro/ Son #n$&,#le ( +oeen $e!a.ol#$o re+#ra!or#o o %er$en!a!#,o +ro)c#en)o c#)o a +ar!#r )e la 'lcoa #n +ro)cc#&n )e 'a/ E!e 'r+o )e $#croor'an#$o %or$a +ar!e )e la %lora %lora nor$al nor$al )el cer+o cer+o 8$ano 8$ano ( al$ al$en! en!ee on #no%en# #no%en#,o ,o an9e an9e o!ro o!ro on +o!enc#al$en!e +a!&'eno o+or!n#!a/ Den!ro )e lo coco 'ra$+o#!#,o e #ncl(en !re '-nero= Micrococcus '-nero= Micrococcus Staphylococcus ( Staphylococcus ( Streptococcus/ Streptococcus/ El '-ne '-nero ro Staphylococcus Staphylococcus +er!en +er!enec# ec#en! en!ee a la %a$#l#a %a$#l#a Micrococcaceae, e ence encen! n!ra ra #ncl #ncl# #)o )o en el Vol$e l$en n III III )e la e' e'n)a n)a e)#c e)#c#& #&n n )el )el Man Manal al Ber' Ber'e( e( )e Bac!er#olo'"a S#!e$!#ca S#!e$!#ca en la ecc#&n )e >Bac!er#a Gra$*+o#!#,a con .a:o +orcen!a:e )e con!en#)o en G ? C/ La e+ec#e )el '-nero Staphylococcus e o.e o.er, r,an an $#cr #croc& oc&+# +#ca ca$e $en! n!ee co$ co$o coco coco en rac#$ ac#$o o )e ,a ,a +er +ero +e) +e)en en )#+ )#+on oner ere e #n)#,#)al$ #n)#,#)al$en!e en!e en +are !-!ra)a !-!ra)a o ca)ena cor!a/ Son #n$&,#le #n$&,#le %er$en!a)ore %er$en!a)ore )e 'lcoa anaero.#o %acl!a!#,o no %or$an e+ora ( on ca!alaa +o#!#,o@ nor$al$en!e no e! e!n n enca enca+ +l la) a)o o o !#en !#enen en na na %or$ %or$ac ac#& #&n n l#$# l#$#!a !a)a )a )e c+ c+l la/ a/ El '-ne '-nero ro Staphylococcus Staphylococcus e! con%or$a)o +or 45 e+ec#e #en)o la $ #$+or!an!e )e)e el +n!o )e ,#!a cl"n#co= S. aureus aureus S. epidermidis ( epidermidis ( S. saprophyticus/ saprophyticus/ El '-nero '-nero Streptococcus Streptococcus +er!enec#en!e a la %a$#l#a Streptococ Streptococcaceae caceae,, e! %or$a)o +or coco 'ra$+o#!#,o 9e e or'an#an en ca)ena can)o crecen en $e)#o l"9#)o/ Son #n$&,#le ca!alaa ne'a!#,o no %or$an e+ora ( al'na e+ec#e +oeen c+la/ Son $#croaero%#l#co con !en)enc#a a la re+#rac#&n anaer&.#ca/ S $e!a.ol#$o e %er$en!a!#,o )e.#)o a 9e $e!a.ol#an la 'lcoa con %or$ac#&n )e c#)o +ero #n +ro)cc#&n )e 'a/
Se cla#%#can )e acer)o a ca+ac#)a) )e +ro)c#r 8e$&l## en a'ar an're )e cor)ero a +ro+#e)a)e #n$nol&'#ca cla#%#cac#&n erol&'#ca )e Lance%#el) ( la re#!enc#a a a'en!e 9"$#co ( %"#co/ El crec#$#en!o ocrre al$en!e a !e$+era!ra )e 2< C a 4< C con n crec#$#en!o &+!#$o a 36C/ Lo e!re+!ococo colon#an lo an#$ale ,er!e.ra)o +r#nc#+al$en!e en la .oca ( el !rac!o re+#ra!or#o +er#or/ De la < e+ec#e )el '-nero Streptococcus olo ca!ro !#enen na #$+or!anc#a cl"n#ca #'n#%#ca!#,a= Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae Streptocococcus bovis ( Streptococcus pneumoniae/ a( o!ra e+ec#e )e e!re+!ococo $eno #'n#%#ca!#,o 9e e a'r+an con la )eno$#nac#&n )e Streptococcus )el 'r+o ,#r#)an/ Lo e+ec#e )el '-nero Micrococcus 9e en el +aa)o e con%n)"an con e!a%#lococo no con!#enen c#)o !e#co#co n# 'l#c#na en el +en!e #n!er+e+!")#co )el +e+!#)o'l#cano/ En el la.ora!or#o cl"n#co lo e!a%#lococo e +e)en )#!#n'#r %c#l$en!e )e lo $#crococo con .ae en re#!enc#a a la .ac#!rac#na 0/004 U la en#.#l#)a) a la %raol#)ona ( a lo e%ec!o )e la l#o!a%#na/ E!o $#croor'an#$o no %er$en!a)ore )e 'lcoa no !#enen $c8o #n!er- )e)e el +n!o )e ,#!a cl"n#co ( %or$an +ar!e )e la %lora nor$al c!nea/
PROCEDIMIENTO A SEGUIR EN EL LABORATORIO (DIA 1) Parte A. 1/ Ca)a 'r+o )e )o e!)#an!e rec#.#r n cl!#,o en $e)#o &l#)o a'ar an're con na e+ec#e )el '-nero Sthaphylococcus o Streptococcus/ E #$+or!an!e en e!e +ao o.er,ar el !#+o )e 8e$ol## )e la colon#a= al%a .e!a o 'a$$a/ 2/ Real#ar colorac#&n )e Gra$ a +ar!#r )e na colon#a a#la)a )el $e)#o )e cl!#,o ( o.er,ar la $or%olo'"a al $#croco+#o/ 3/ Se$.rar el $#croor'an#$o en la +re.a Glcoa OF cal)o con 'lcoa al 1 lle,ar a #nc.ac#&n a 36 C ( leer a la 45 8ora e'n)o )"a )e la +rac!#ca/ 4/ Real#ar la +re.a )e ca!alaa con e!e %#n #'a el #'#en!e +roce)#$#en!o= a/ o.re na l$#na l#$+#a colo9e 2 'o!a )el reac!#,o )e +er&#)o )e 8#)r&'eno al 3 ./ To$e con n +al#llo )e $a)era o +l!#co na o )o colon#a a#la)a )e la .ac!er#a +ro.le$a ( $ecle con el +er&#)o )e 8#)r&'eno/ La %or$ac#&n )e .r.:a )e a#re e con#)era)a co$o reacc#&n +o#!#,a/ En e!a +re.a )e.e !ener c#)a)o )e no arra!rar a'ar an're (a 9e +o)r"a oca#onar %alo +o#!#,o/ SI LA PRUEBA DE CATALASA ES POSITIVA SIGA CON EL PASO
en ca)ra)o o.re n rea )e 1 c$2 / El a'ar DNA !#l#a)o en el la.ora!or#o !#ene #ncor+ora)o el #n)#ca)or al )e !ol#)#na O al 0/00</ De+- )e #nc.ar el a'ar DNA a 36 C )ran!e 15*24 8ora # la .aca!er#a +ro)ce DNaa el $e)#o ,#ra )e color al a roa)o 8#)r&l## )el DNA/ Con el %#n )e ,er $ clara$en!e la ona )e 8#)r&l## )el DNA +rec#+#!ac#&n e a're'a o.re el crec#$#en!o .ac!er#ano 1 $l )e na olc#&n )e CL 1N/ La %or$ac#&n )e na ona clara alre)e)or )el $#croor'an#$o #n)#ca na 8#)r&l## +o#!#,a )el DNA/ De.#)o a la no )#+on#.#l#)a) )e +la$a no e $on!ar la +re.a )e la coa'laa/ 6/ Lo coco Gra$*+o#!#,o con +re.a )e ca!alaa ne'a!#,a %er$en!a)ore )e 'lcoa e+erar al )"a 2 )e la +rc!#ca +ara leer e!a +re.a ern con#)era)o )el '-nero Streptococcus/ Co$o e )#:o en el +ao 1 e #$+or!an!e re'#!rar el !#+o )e 8e$&l## 9e +reen!an la colon#a en el a'ar an're/ 5/ S# el $#croor'an#$o +ro.le$a e .e!a 8e$ol"!#co e )e.en real#ar la #'#en!e +re.a= ce+!#.#l#)a) a la Bac#!rac#na +re.a )e CAMP +re.a B#l#*Ecl#na ( +re.a )e crec#$#en!o en NaCl /</ Inc.ar la +re.a a 36 C )ran!e 15*24 8ora/ / S# el $#croor'an#$o +ro.le$a e al%a 8e$ol"!#co )e.e $on!ar la +re.a )e o+!o9#na e$.rar en B#l#*Ecl#na ( en NaCl /</ Inc.ar la +re.a a 36 C )ran!e 15*24 8ora/ 10/ S# el $#croor'an#$o +ro.le$a e 'a$$a 8e$ol"!#co )e.e $on!ar la +re.a )e B#l#*Ecl#na ( NaCL /</ Inc.ar la +re.a a 36 C )ran!e 15*24 8ora/
Parte B. En %or$a +aralela al !ra.a:o real#a)o +ara la #)en!#%#cac#&n )el $#croor'an#$o +ro.le$a en el +r#$er )"a )el la.ora!or#o ca)a 'r+o )e e!)#an!e )e.e real#ar n an!#.#o'ra$a +ara )e$o!rar la en#.#l#)a) o re#!enc#a )el $#croor'an#$o +ro.le$a a )e!er$#na)o an!#$#cro.#ano/ Con e!e %#n el e!)#an!e )e.e +re+arar na +en#&n )el $#croor'an#$o en NaCl 0/5< ( a:!ar a la ecala 0/< )e MacFarlan)/ La +en#&n .ac!er#ana +re+ara)a e )e.e e$.rar en %or$a $a#,a c.r#r !o!al$en!e el $e)#o con eco.#ll&n o.re el a'ar Meller #n!on o a'ar Meller #n!on +le$en!a)o con an're e'n ea el cao )e la .ac!er#a en e!)#o/ De+- )e la #e$.ra )el $#croor'an#$o e colocan lo en#)#co o.re la +er%#c#e )el $e)#o )e acer)o al cr#!er#o )el +ro%eor o +ro%eore ( )e+en)#en)o )e la )#+on#.#l#)a) )e lo en#)#co ( )e la .ac!er#a a e!)#ar/ Lle,ar a #nc.ac#&n a 36 C )ran!e 15*24 8ora lo an!#.#o'ra$a real#a)o/
PROCEDIMIENTO A SEGUIR EN EL LABORATORIO (DIA 2). RESULTADOS Parte A. El )"a 2 )e la +rc!#ca )e la.ora!or#o el e!)#an!e )e.e leer la +re.a real#a)a con el %#n )e #)en!#%#car el $#croor'an#$o o.:e!o )e e!)#o/ El #n%or$e )e la.ora!or#o e 8ace )e acer)o a la #n!rcc#one )a)a en el )oc$en!o >INFORME DE LABORATORIOK 9e e!a col'a)o en ne!ro correo )e '*$a#l/ El e!)#an!e e!a en la o.l#'ac#&n )e )#c!#r lo rel!a)o con lo +ro%eore )el cro/ An!e )e %#nal#ar la +rc!#ca lo +ro%eore )e.en 8acer na +e!a en co$n con el %#n )e $o!rar !o)o lo +er%#le $#cro.#ol&'#co (
.#o9"$#co encon!ra)o en lo $#croor'an#$o e!)#a)o en !o)o el 'r+o/ Parte B. El )"a 2 )e la +rc!#ca )e la.ora!or#o el e!)#an!e )e.e o.er,ar el an!#.#o'ra$a real#a)o ( )e!er$#nar con na re'la en $$ lo 8alo )e #n8#.#c#&n 9e +reen!aron la .ac!er#a en e!)#o/ Se )e.e #ncl#r en el #n%or$e )e la.ora!or#o la lec!ra )e lo 8alo )e #n8#.#c#&n e #n%or$ar )e acer)o a lo cr#!er#o )e #n!er+re!ac#&n # la .ac!er#a en e!)#o e en#.le o re#!en!e a lo an!#$#cro.#ano e,ala)o/
INSTRUCCIONES PRECISAS PARA REALIZAR LAS PRUEBAS 1.
Prueb !e G"u#$% OF( O&'!#'*Fer+e,#'). Se !#l#an !.o con cal)o con #n)#ca)or al )e .ro$o!#$ol ( 'lcoa al 1/ Con e!e %#n e !o$an )o !.o )e Glcoa OF ( e #e$.ran en +ro%n)#)a)@ #n$e)#a!a$en!e no )e lo )o !.o e c.re con +ara%#na o ace#!e $#neral e!-r#l 1*2$l ( el o!ro e )e:a !al co$o e! #n c.r#r/ De+- )e lle,ar a #nc.ac#&n )e 15*24 8ora a 36C e leen la )o +re.a/ El $#croor'an#$o e o#)a)or # el !.o no c.#er!o ca$.#a a color a$ar#llo ( el !.o c.#er!o no ca$.#a )e color/ El $#crror'an#$o e %er$en!a)or # a$.o !.o ca$.#an a color a$ar#llo/
2.
Re%'%,e#' " N$-$b'$#'/ Se !#l#an )#co )e < $#cro'ra$o concen!rac#&n 9e rel!a er !#l +ara #)en!#%#car S. saprophyticus (a 9e e el n#co 9e +reen!a re#!enc#a/ Para e$.rar la .ac!er#a e necear#o +re+arar na +en#&n )e la $#$a a na !r.#)e 0/< )e la ecala Mac*Farlan) OJO e!a +en#&n !a$.#-n #r,e +ara el an!#.#o'ra$a/ De+- )e +re+ara)a la +en#&n e #e$.ra con n 8#o+o )e al'o)&n o.re na ca:a )e a'ar an're ( e coloca n )#co )e no,o.#oc#na o.re la +er%#c#e )e la ca:a (a e$.ra)a/ De+- )e lle,ar a #nc.ac#&n )e 15 24 8ora a 36C e lee la ona )e #n8#.#c#&n/ S# la ona )e #n8#.#c#&n e $enor o #'al a 1 $$ e con#)era 9e la .ac!er#a e re#!en!e a la No,o.#oc#na/
.
Prueb !e #$/u"% e ,ub$/ acer na +en#&n )e ,ar#a colon#a o.!en#)a )e n cl!#,o )e 15 24 8ora )e #nc.ac#&n a 36 C en 0/< $l )e +la$a 8$ano o )e cone:o c#!ra!a)o %reco/ De+- )e #nc.ar a 36 C )ran!e 4 8ora o.er,ar la %or$ac#&n )e co'lo/ S# no 8a( co'lo #nc.ar )e ne,o a 36C en!re 5 1 8ora o.er,an)o el +la$a ca)a )o 8ora/ S# el !#e$+o )e #nc.ac#&n e +rolon'a +or $a )e 15 8ora )e.e !enere en cen!a 9e la %or$ac#&n )e e!a%#lo9#naa +or al'na ce+a )e S. aureus +e)e l#ar el coa'lo ( 'enerar %alo ne'a!#,o/
0.
Prueb !e %u%#e,'b'"'!! " b#',r#'/ De.e !#l#are n #n&clo concen!ra)o +ro )e $#croor'an#$o (a ea en $e)#o &l#)o o l"9#)o/ De+- )e e$.rar en n a'ar an're $a#,a$en!e la colon#a en n rea )e a+ro#$a)a$en!e )e 4 c$ 4 c$ e coloca en !o)a el rea cen!ral el )#co )e .ac#!rac#na )#co )#%erenc#al )e 0/04 U/ De+- )e #nc.ar aer&.#ca$en!e a 36C )ran!e 15 24 8ora e $#)e el )#$e!ro )e #n8#.#c#&n )el crec#$#en!o alre)e)or )el )#co )e .ac#!rac#na/ Cal9#er rea )e #n8#.#c#&n #n)#ca la en#.#l#)a) )el $#croor'an#$o/ Lo Streptococcus .e!a 8e$ol"!#co )el 'r+o A o Streptococcus pyogenes on en#.le a la .ac#!rac#na lo en!erococo .e!a 8e$ol"!#co ( lo e!re+!ococo .e!a8e$ol"!#co )el 'r+o B on re#!en!e a la .ac#!rac#na/
.
Prueb !e re%'%,e#' " ,r'+e,$r'+*%u"3+e,$&4$" (S5T)6 Se !#l#an )#co con 1/2< $#cro'ra$o )e !r#$e!ro+#n ( 23/6< $#cro'ra$o )e l%a$e!oaole/ Lo e!re+!ococo )el 'r+o A ( B on re#!en!e al ST/
7.
Prueb !e CAMP6 E na +re.a !#l#a)a en la #)en!#%#cac#&n +ren!#,a )e Streptococcus .e!a 8e$ol"!#co )el 'r+o B/ Lo e!re+!ococo )el 'r+o B +ro)cen na !anc#a lla$a)a %ac!or CAMP 9e #n!en#%#ca la 8e$&l## +ro)c#)a +or lo Staphylococcus aureus +ro)c!ore )e .e!a l##na en a'ar an're )e cor)ero o .e( )e%#.r#na)a/ Para real#arla e #e$.ra +er+en)#clar$en!e en a'ar an're #n !ocare la .ac!er#a +ro.le$a )e Streptococcus .e!a 8e$ol"!#co con re+ec!o a la ce+a )e Staphylococcus aureus subesp. aureus ATCC <35 o CMDM 050. De+- )e #noclar la )o .ac!er#a e #nc.a a 36C )ran!e 15*24 8ora/ La
+re.a e +o#!#,a # e %or$a na ona en %or$a )e %lec8a en la ona )e n#&n )e la 8e$&l## )e lo )o $#croor'an#$o/
8.
Prueb !e B'"'%*E%#u"'6 E na +re.a +ren!#,a +ara la #)en!#%#cac#&n )e lo Streptococcus )el 'r+o D/ E na +re.a $( e+ec"%#ca 9e e !#l#a en !.o o en +laca ( e co$+le$en!a con la +re.a )e !oleranc#a al NaCl /</ El $e)#o B#l#* Ecl#na e #nocla con na colon#a )e cl!#,o +ro )el e!re+!ococo +ro.le$a ( e lle,a a #nc.ac#&n a 36C en a!$&%era )el < )e CO2 )ran!e 15*24 8ora/ S# 8a( n ,#ra:e )el $e)#o )e claro a ocro ca# ne'ro la +re.a e +o#!#,a/ E +o#!#,a +ara e!re+!ococo )el 'r+o D/
9.
Prueb !e ,$"er#' NCL 7.:. E!a +re.a e !#l +ara )#%erenc#ar S!re+!ococc 'r+o D En!erococc )e lo S!re+!ococc 'r+o D no En!erococc/ El $e)#o a #noclar con!#ene cal)o BI con NaCl en na +ro+orc#&n )e /< / Para real#ar la +re.a e #noclan )o o !re colon#a )el $#croor'an#$o a e!)#ar e #nc.a a 36C )ran!e 24 * 45 8ora en a!$&%era aer&.#ca o con < )e CO2/ S# lo e!re+!ococo crecen en!r.#an)o el $e)#o la +re.a e con#)era +o#!#,a ( con%#r$a 9e el e!re+!ococo e )el 'r+o D en!erococo/ S# no crece no en!r.#a$#en!o )el $e)#o la +re.a e ne'a!#,a/ Lo cl!#,o ne'a!#,o )e.en #nc.are 8a!a 62 8ora ( # no 8a( crec#$#en!o )e+- )e 45 62 8ora la +re.a e ne'a!#,a/
;.
Prueb !e " $,$
PRELABORATORIO DE PRACTICA DE IDENTIFICACION DE COCOS GRAM POSITIVOS 1/
In,e!#'ar el %n)a$en!o )e ca)a no )e lo $e)#o )e cl!#,o )ecr#!o en la +rc!#ca/
2
In,e!#'ar el %n)a$en!o )e ca)a na )e la +re.a )e #)en!#%#cac#&n )ecr#!a en la '"a/
3/
Ela.orar n e9e$a )e #)en!#%#cac#&n +ara la e+ec#e cl"n#ca$en!e $ #$+or!an!e )e lo '-nero Staphylococcus ( Streptococcus/ En el e9e$a e )e.e #ncl#r colorac#&n )e Gra$ +re.a )e ca!alaa !#+o )e 8e$ol## ( !o)a la +re.a !#l#a)a en el la.ora!or#o/
4/
In,e!#'ar cale e!re+!ococo ( e!a%#lococo on con#)era)o %lora nor$al ( en 9e l'are )el cer+o e encen!ran/
In,e!#'ar la +a!olo'"a $ #$+or!an!e +ro)c#)a +or e!re+!ococo ( e!a%#lococo/ In)#ca la e+ec#e #n,olcra)a en ca)a cao/
La ,er#&n %#nal )e e!e )oc$en!o e )e.e al !ra.a:o )e lo Dr/ Al.a Al#c#a Tre+alac#o ( Fre)( O$ar Ga$.oa/
