Fitorremediacion Girasol Microbiologia Final

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL – Escuela de Ingeniería Ambiental

FITORREMEDIACIÓN EN SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE INGENIERIA GEOGRAFICA AMBIENTAL Y ECOTURISMO

1. ASIGNATURA :

MICROBIOLOGÍA

2. ESCUELA :

INGENIERIA AMBIENTAL

3. PROFESOR :

MG. GISELA YUPANQUI

4. J. DE PRÁCTICA:

MG. VANIA MALLQUI

5. INFORME:

FITORREMEDIACIÓN FITORREMEDIACIÓN DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS POR CAPTACIÓN DEL GIRASOL (Helianthus annuus).

6. AULA :

MA D6-3

7. INTEGRANTES :

ABANTO TRUJILLO, BRYAN (2014100642) AYALA QUISPE, JOSSELYN (2011217119) (2011217119) BONIFACIO VARGAS, JASON (2014234195) (2014234195) MONTERO ARCE, JORDAN (2014001163) (2014001163) ROSAS DE LA CRUZ, BETSY (2014234221) (2014234221) VELARDE EYZAGUIRRE, FABIOLA (2014006692) (2014006692)

Lima, 2016 “Año de la Consolidación del Mar de Grau” MICROBIOLOGÍA - MA

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............................................................................................................................ ....................................................... 4 INTRODUCCIN ..................................................................... II.

OBJETIVOS OBJETIVOS ............................................................................................................................. ............................................................................................................................ 5

III. ANTECEDENTES ANTECEDENTES ..................................................................................................................... .................................................................................................................... 5 IV. JUSTIFICACIÓN .............................................................. ...................................................................................................................... ........................................................ 6 V.

MARCO TEÓRICO ...................................................................... .................................................................................................................. ............................................ 8 5.1.

BIORREMEDIACIÓN .......................................................... ....................................................................................................... ............................................. 8

5.1.1. 5.1.1.1.

BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS..................................................................... ............................................................................. ........ 9 FITOREMEDIACIÓN ........................................................... ............................................................................................ ................................. 9

a)

Técnicas de Fitoremediación:.................................................................. ...................................................................................... .................... 10

b)

Plantas Transgénicas y Fitorremediación:.......................................................... ................................................................... ......... 13

c)

Función de la Planta en la Fitorremediación de Hidrocarburos totales del Petróleo: 16

c.1. Plantas captadoras de Metales Pesados: Pesados: .................................................................... .................................................................... 17 c.1.1. Metales Pesados en Fitorremediación del Girasol: .................................................. 17 5.2.

CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL GIRASOL .............................................................. 19

5.3.

SUSTRATOS USADOS PARA LA FITORREMEDIACION .................................................. 20

a)

Humus: ................................................................... ........................................................................................................................ ..................................................... 21

b)

Perlita: .................................................................... ......................................................................................................................... ..................................................... 22

VI. MATERIALES Y MÉTODOS MÉTODOS ................................................................................................... .................................................................................................. 23 VII. RESULTADOS RESULTADOS ....................................................................................................................... 27 VIII. DISCUSIÓN...................................................................... DISCUSIÓN........................................................................................................................... ..................................................... 32 IX. CONCLUSIONES CONCLUSIONES ................................................................................................................... .................................................................................................................. 33 XI. BIBLIOGRAFÍA ............................................................... ..................................................................................................................... ...................................................... 34 ANEXOS ANEXOS ....................................................................................................................................... ...................................................................................................................................... 35 CRONOGRAMA DEL TRABAJO TRABAJO .................................................................................................... ................................................................................................... 37

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INDICE DE ILUSTRACIONES

Ilustración 1: TECNICAS DE FITORREMEDIACION FIT ORREMEDIACION ...................................................................... ...................................................................... 11 Ilustración 2: UBICACION DEL CONTAMINANTE EN LA FITORREMEDIACION .......................... FITORREMEDIACION .......................... 12 Ilustración 3 : GERMINACION DE GIRASOLES ............................................................................ GIRASOLES ............................................................................ 18 Ilustración 4: HUMUS ........................................................... ................................................................................................................. ...................................................... 21 Ilustración 5: PERLITA PERLITA ................................................................................................................. ................................................................................................................ 22 Ilustración 6: CUARTO DÍA DE GERMINACIÓN. ......................................................................... GERMINACIÓN. ......................................................................... 23 Ilustración 7: PESADO DE LA TIERRA CON C ON PETRÓLEO CON HUMUS. HUMUS. ........................................ ....................................... 24 Ilustración 8: PLANTAS DE GIRASOL SEMBRADAS. .......................................................... ................................................................... ......... 25

INDICE DE TABLAS

TABLA 1: MECANISMOS DE FITORREMEDIACIÓN. .................................................................... FITORREMEDIACIÓN. .................................................................... 13 TABLA 2: PLANTAS TRANSGÉNICAS PARA LA REMEDIACIÓN DE METALES.............................. METALES.............................. 15 TABLA 3: TABLA DE CONCENTRACIONES C ONCENTRACIONES Y TIPOS DE SUSTRATOS TRABAJADOS EN LAS MUESTRAS. ................................................................ ................................................................................................................................. ................................................................. 24 TABLA 4: PRIMER CONTROL DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS............................................ PLANTAS ............................................ 27 TABLA 5: PROMEDIOS DE LOS RESULTADOS ............................................................................. RESULTADOS ............................................................................. 28 TABLA 6: PRIMERO CONTROL DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS ......................................... PLANTAS ......................................... 29 TABLA 7: PROMEDIOS DE LOS RESULTADOS ............................................................................. RESULTADOS ............................................................................. 30 TABLA 8: CRECIMIENTO VEGETAL DEL GIRASOL EN SUELOS CONTAMINADOS. ...................... CONTAMINADOS. ...................... 32

INDICE DE GRÁFICAS Gráfica 1: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio del tallo. ...................... tallo. ...................... 28 Gráfica 2: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio de hojas. ..................... hojas. ..................... 29 Gráfica 3: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio del tallo. ...................... tallo. ...................... 31 Gráfica 4: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio de las hojas. ................ 31

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INTRODUCCIN

El suelo es un recurso natural de enorme importancia cuya salud está ligada a la supervivencia de nuestra especie. Desafortunadamente, en las últimas década, este recurso ha sufrido una importante degradación como consecuencia de un conjunto de amenazas, pérdida de materia orgánica, impermeabilización o sellado (por la construcción de viviendas, carreteras y otras infraestructuras), compactación, disminución de la biodiversidad, salinización, inundaciones, deslizamientos de tierras, y por último, pero no menos importante, la contaminación. La contaminación como causa del gran deterioro ambiental ocasionado por el desarrollo de algunos procesos industriales, tales como la minería y la extracción, refinamiento y transporte del petróleo. Por ello es imprescindible la aplicación de técnicas que disminuyan la concentración o toxicidad de los contaminantes producidos y/o derramados en los procesos anteriormente mencionados y que al mismo tiempo sean económicamente aplicables. Una de estas técnicas es la fitorremediación, una técnica eco tecnología, basada en la capacidad de algunas plantas para tolerar, absorber, acumular y degradar compuestos contaminantes como metales pesados presentes en el suelo, lo cual tiene muchas ventajas con respecto a los métodos convencionales. En primer lugar, es una tecnología económica, de bajo costo; en segundo lugar, posee un impacto regenerativo en áreas donde se aplica; y por último, su capacidad extractiva se mantiene debido al crecimiento vegetal. Por lo expresado, la tecnología de fitorremediacin de suelos es factible , por lo que desarrollamos este trabajo de investigación utilizando la planta de girasol ( Helianthus annuus), para remediar los suelos contaminados por hidrocarburos a diferente

concentraciones de petróleo (5g/kg y 10g/kg) siendo el primero el límite máximo permisible por el Ministerio de Energía y Minas y el segundo un valor mucho más alto para estudiar la efectividad firtorremediadora del ( Helianthus annuus), utilizando sustratos y compuestos como el humus de lombriz y la perlita que ayuden al crecimiento vegetativo del girasol y por lo tanto mayor fijación de hidrocarburos por parte de esta.

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II.


OBJETIVOS Objetivo general: Analizar la capacidad fitorremediadora del girasol ( Helianthu sannuus), empleado en suelos contaminados por hidrocarburos. Objetivos específicos: 

Evaluar la cantidad de hidrocarburos absorbidos, en las distintas concentraciones

trabajadas

por

muestra,

mediante

el

girasol

(Helianthusannuus). 

Analizar los aspectos cualitativos de cada muestra, según la concentración de hidrocarburos y los diferentes sustratos empleados.



Determinar bajo que concentración y tipo sustrato se desarrolla mejor el crecimiento de la planta de girasol.

III.

ANTECEDENTES

Hans et al. (2003). La cont aminacin del suelo por metales pesados est fundamentalmente relacionada con diferentes tipos de actividades humanas. Una vez en el suelo, estos pueden quedar retenidos en él, pero también pueden ser movilizados en la solución del suelo mediante diferentes mecanismos biológicos y químicos Pagnanelli et al. (2004). Los metales pesados adicionados a los suelos se redistribuyen y reparten lentamente entre los componentes de la fase sólida. Dicha redistribución se caracteriza por una rápida retención inicial y posteriores reacciones lentas, dependiendo de las especies del metal, propiedades del suelo, nivel de introducción y tiempo.

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Burt et al. (2003). La movilidad relativa de los elementos traza en suelos es de suma importancia en cuanto a su disponibilidad y su potencial para lixiviarse de los perfiles del suelo al agua subterránea y difiere de si su origen es natural o antrópico y, dentro de este último, al tipo de fuente antrópica. Los factores que influyen en la movilización de metales pesados en el suelo son:pH, potencial redox, composición iónica de la solución del suelo, capacidad de cambio, presencia de carbonatos, materia orgánica, textura; naturaleza de la contaminación. Guitart (2005). Algunos de los compuestos insolubles son Pb (OH)2, PbCO3, PbS, PbSO4. La velocidad de oxidación depende de factores como la humedad, la temperatura, el pH, el potencial redox, la cantidad de materia orgánica o la roturación de los suelos. Mani et al. (2007). El Girasol Helianthusannuus L es una planta reconocida como fitorremediadora, porque absorbe metales pesados en grandes cantidades, por lo que se le considera como planta hiperacumuladora de Cd, Pb, Zn, y elementos radiactivos. Minam (2012). Los estándares de calidad ambiental (ECA) para proyectos de fitorremediacin son de alcance nacional y se basan en la técnica aplicada por EPA (Agencia de Protección Ambiental de los Estados Unidos) y el Instituto Alemán de Estandarización.

IV.

JUSTIFICACIÓN

Las actividades de perforación, explotación, refinación y comercialización del petróleo generan diversos tipos de residuos, los cuales se han vertido sobre los suelos durante décadas, debido a un inadecuado manejo e insuficiente sensibilización ambiental. Como consecuencia, dichos suelos han reducido considerablemente su capacidad natural para sostener a una gran variedad de organismos, restringiendo su capacidad original a tan sólo algunas bacterias oleofílicas, dejando los suelos inutilizables para cualquier tipo de actividad productiva que se quiera realizar.

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El aumento de la demanda de combustibles y la notable aparición de estaciones de servicio nuevas en el departamento de Lima, ha convertido los compuestos derivados del petróleo en sustancias de alto interés a nivel ambiental y salud pública, dado su nivel de toxicidad y persistencia en el ambiente. Los derrames accidentales que durante años han contaminado suelos y aguas con hidrocarburos, hechos recientes en el Amazonas, ahora requieren de una pronta remediación, ya que la presencia de estos no solo afectan la capa superficial del suelo y las fuentes hídricas superficiales por disposición o escorrentía, sino que también puede ser fácilmente desplazado hacia las capas freáticas, alterando las características de aguas subterráneas. En el año 2012, el Ministerio de Ambiente, en la búsqueda de soluciones que reduzcan el impacto generado al medio ambiente por vertimiento y disposición no adecuada de residuos peligrosos, por tal sentidode conformidad con lo dispuesto en la ley 28611, articulo 1, decreta aprobar los estándares de calidad ambiental (ECA) para suelos. En este sentido entonces surge la necesidad de atender a la problemática generada por la inadecuada disposición de los hidrocarburos, principalmente a nivel urbano y agrícola; y por consiguiente, el empleo de la fitorremedación como alternativa de tratamiento de suelos y aguas contaminadas con petróleo puede aportar una solución económica, eficiente y viable para reducir el aporte contaminante de estos compuestos de estos compuestos en este caso hacia las muestras con planta de girasol ( Helianthusannuus), de donde este recurso es captado para el abastecimiento gracias a la técnica de fitorremediación.

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V.


MARCO TEÓRICO

5.1.

BIORREMEDIACIÓN

El término biorremediación fue acuñado a principios de la década de los 80. Los científicos observaron que era posible aplicar estrategias de remediación que fuesen biológicas, basadas en la capacidad de los microorganismos de realizar procesos degradativos. Las primeras observaciones de biorremediación fueron con el petróleo, después de algunos órganos clorados y organofosforados; se advirtió que los microorganismos no sólo eran patógenos, sino que además eran capaces de absorber compuestos orgánicos, algunos naturales, otros sintéticos, y degradarlos, lo que constituye el objetivo de la biorremediación. La biorremediación surge como una rama de la biotecnología que busca resolver los problemas de contaminación mediante el diseño de microorganismos capaces de degradar compuestos que provocan desequilibrios en el medio ambiente. Es similar a la biotecnología, en general sus técnicas son específicas para casos particulares, porque dependen directamente de las condiciones del ecosistema a recuperar. A veces, biorremediar un ambiente contaminado puede requerir la elaboración de un microorganismo genéticamente modificado que sea eficiente sólo para ese caso. Un evento más sencillo de biorremediación puede ser el del petróleo. Los derrames de crudo provocan un desequilibrio al aumentar la cantidad de carbono, lo que descompensa los niveles de nitrógeno y fosfato, en esas condiciones metabólicamente no se puede consumir el carbono. La biorremediación de petróleo consiste en verter los mismos nutrientes que están descompensados, fosfato, nitrógeno y dejar que los microorganismos que ya están presentes Tanto el tratamiento de residuos como la biorremediación usan microorganismos, pero lo distintivo de la biorremediación es la aplicación de una tecnología a posteriori, una vez que se ha producido el daño ecológico. 1

1

Biorremediacion de suelos- Burland y Edwards, 1998

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5.1.1. BIORREMEDIACIÓN DE SUELOS Los mecanismos que rigen la evolución de los plaguicidas en el suelo son diversos. Descomposición química, que tiene lugar por procesos de oxidación, reducción, hidroxilación, dealquilación, rotura de anillos, hidrólisis e hidratación. Descomposición fotoquímica, que se produce por efecto del espectro de luz ultravioleta de la luz solar. Las fuentes de luz y su intensidad regulan el grado de descomposición de un compuesto. Descomposición microbiana, la acción de los microorganismos del suelo sobre los plaguicidas es probablemente el mecanismo de descomposición más importante. Los microorganismos del suelo, bacterias, algas y hongos, obtienen alimento y energía para su crecimiento por descomposición de estos compuestos orgánicos sobre todo cuando carecen de otras fuentes. Descomposición por las plantas y organismos, como consecuencia de los procesos metabólicos que tienen lugar en las plantas. 2

5.1.1.1. FITOREMEDIACIÓN La fitorremediación aprovecha la capacidad de ciertas plantas para absorber, acumular, metabolizar, volatilizar o estabilizar contaminantes presentes en el suelo, aire, agua o sedimentos como: metales pesados, metales radioactivos, compuestos orgánicos y compuestos derivados del petróleo. Estas fitotecnologías ofrecen numerosas ventajas en relación con los métodos fisicoquímicos que se usan en la actualidad, por ejemplo, su amplia aplicabilidad y bajo costo. En esta revisión se presenta un panorama de las diversas técnicas fitocorrectivas empleadas para restaurar suelos y efluentes contaminados; así como del potencial que ofrece el uso de plantas transgénicas.

2

Biorremediacion de suelos – Prince et al., 1999- Burland y Edwards, 1998

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La fitorremediación es una tecnología verde emergente para la remediación de suelos, sedimentos, agua superficial y subterránea, que se basa en el uso de la vegetación como principal agente descontaminador para eliminar (fitoextracción, fitodegradación o fitovolatilización) o inmovilizar (fitoestabilización) contaminantes peligrosos para el medio ambiente. La técnica es aplicable por contaminación de metales pesados, compuestos orgánicos y radionucleidos. 3 Esta definición afecta a todas las plantas que, con procesos químicos, biológicos y físicos ayudan a la biorrecuperación de sustratos contaminados. Se pueden distinguir dos tipos diferentes de “fitorremediacin”: “in planta” y “ex planta”, según se r ealice la

degradación del contaminante dentro de la propia planta o fuera de ella. En el primer caso (in planta), la planta absorbe el contaminante y lo incluye dentro de ella, mientras que cuando es “ex planta”, dicha degradacin se realiza en la zona de la rizosfera, debido

a los exudados radicales y a la mayor actividad que existe en la zona. 4

a) Técnicas de Fitoremediación: Las plantas y sus organismos de la rizosfera pueden ser usados para fitorremediación en diferentes maneras, como se ve en la figura 1, donde se muestran las tecnologías usadas para la remediación de agua, suelos o aire contaminados. Estos pueden ser utilizados como filtros en humedales construidos o en una instalación hidropónica, esta última llamada Rizo filtración. Los arboles pueden ser usados como barrera hidráulica para crear un flujo de agua hacia arriba en la zona de la raíz, previniendo que la contaminación se filtre hacia abajo o para evitar que una columna de agua subterránea contaminada se extienda horizontalmente.

3

Fitorremediacion- Urzelai, 2001, Alkorta, 2000 Ministerio Español de medio ambiente, 2004 – 2007

4

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El termino fitoestabilización denota el uso de plantas para estabilizar los contaminante en el suelo, o bien simplemente por prevención de la erosión, la lixiviación, escorrentía, o mediante la conversión de los contaminantes a formas menos biodisponibles. 5Las plantas también pueden utilizarse para extraer los contaminantes y acumularlos en sus tejidos, seguido por la cosecha del material vegetal (por encima del suelo). Esta tecnología se denomina fitoextracción. El material vegetal puede ser utilizado posteriormente para fines no alimentarios (por ejemplo, madera, cartón) o incineración, seguido por la disposición en un relleno sanitario o, en el caso de los metales preciosos, el reciclaje de los elementos acumulados. Este último se denomina fitominería. Ilustración 1: TECNICAS DE FITORREMEDIACION

FUENTE: Fitorremediacion en hidrocarburos. Joner et al., 2001

Las plantas pueden facilitar la biodegradación de contaminantes orgánicos por los microorganismos en su rizosfera. Esto se llama fitoestimulación o rizodegradación. Las plantas también pueden degradar los contaminantes orgánicos directamente a través de sus propias actividades enzimáticas, en un proceso llamado fitodegradación. Después de la absorción en el tejido de la planta, ciertos contaminantes pueden dejar la planta en forma volátil, lo que se llama fitovolatilización.

5

Biorremediacion-(Pilon-Smits, E., 2005)

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En la Figura 2 se muestran los posibles destinos de un contaminante durante la fitorremediación, donde se muestra que el contaminante puede ser estabilizado o degradado en la rizosfera, secuestrado o degradado dentro los tejidos de la planta o volatilizado.6 Ilustración 2: UBICACION DEL CONTAMINANTE EN LA FITORREMEDIACION

FUENTE: Fitorremediacion en hidrocarburos. Joner et al., 2001

6

Biorremediacion-(Pilon-Smits, E., 2005)

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TABLA 1: MECANISMOS DE FITORREMEDIACIÓN. PROCESO

MECANISMO

CONTAMINANTES

Fitoestabilización

Complejación

Orgánicos e inorgánicos

fitoextracción

Hiperacumulación

Inorgánicos

Fitovolatilización Fitoinmovilización

Volatilización a través de las hojas Acumulación en la rizosfera

Orgánicos e inorgánicos Orgánicos e inorgánicos

Uso de plantas y Fitodegradación

microorganismos asociados

Orgánicos

para degradar contaminantes Uso de raíces para

Rizofiltración

absorber y absorber

Orgánicos e inorgánicos

contaminantes del agua FUENTE:(Ghosh y Singh, 2005)

En la fitodegradación las plantas y los microorganismos asociados a ellas degradan los contaminantes orgánicos en productos inofensivos, o bien, mineralizarlos hasta CO2 y H2O. En este proceso los contaminantes son metabolizados dentro de los tejidos vegetales y las plantas producen enzimas como la dehalogenasa y la oxigenasa, que ayudan a catalizar la degradación La fitodegradación se ha empleado para la remoción de explosivos como el TNT, hidrocarburos halogenados, Bisfenol A, PAHs y pesticidas organoclorados y organofosforados.7

b) Plantas Transgénicas y Fitorremediación: Los organismos genéticamente modificados (OGM), comúnmente conocidos como transgénicos, juegan un papel importante en diversos ámbitos de la vida actual. Las plantas transgénicas se han diseñado para producir una gran variedad de productos. 7

Hannink et al., 2001; Chaudhry et al., 2002; Denys et al., 2006; Zhang et al., 2007

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Una prueba de ello son las plantas comestibles utilizadas como vehículos de reparto de medicamentos en lugares donde los fármacos son demasiados costosos o no están disponibles. Por ejemplo, las papas con vacuna antidiarreica o los plátanos y alfalfa con vacuna del cólera. Otro uso importante de las plantas GM es para la prevención y remoción de la contaminación medioambiental. Prevención de la contaminación. Las plantas GM empleadas con este propósito reducen significativamente la cantidad de agroquímicos necesarios para los cultivos.8 Un ejemplo de estas plantas es el maíz Bt. La denominación Bt deriva de Bacillus thuringiensis, una bacteria que habita en el suelo y cuyas esporas contienen proteínas

tóxicas para ciertos insectos, como el gusano barrenador ( Diatraea saccharalis). El maíz Bt se produce al insertar a la planta, el gen cry extraído de la bacteria Bt. Este gen codifica para la síntesis de proteínas Cry, las cuales se activan en el sistema digestivo del insecto alterando su equilibrio osmótico y provocando su parálisis, por lo que el insecto deja de alimentarse y muere a los pocos días Remoción de la contaminación. Las plantas GM diseñadas para este fin, son capaces de metabolizar compuestos orgánicos (Tabla 4) o bien de acumular mayor cantidad de contaminantes inorgánicos Generalmente, la fitorremediación es una función conjunta entre la planta y los microorganismos de la rizósfera. Algunas especies de bacterias degradan, de manera selectiva, ciertos compuestos que son tóxicos para las plantas. Los productos metabólicos del proceso microbiano son asimilados y convertidos, por las especies vegetales, en compuestos menos tóxicos. Por lo tanto, las modificaciones genéticas de los microorganismos presentes en la rizósfera representan una posibilidad en el mejoramiento de las técnicas fitocorrectivas, además, la introducción de microorganismos GM asegura que los cambios se limiten a los consorcios bacterianos presentes en la raíz y que estos no se encuentren en el suelo circundante

8

Plantas transgénicas (Montagu, 2005, Vain, 2006)

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La fitoextracción es una solución para la remoción de contaminantes que no pueden ser degradados. Se deben considerar dos factores importantes para que una planta sea un buen fitoextractor: su biomasa y su eficiencia de bioconcentración. A pesar de que existen plantas hiperacumuladoras que son buenas candidatas para la fitorremediación, muchas de ellas poseen poca biomasa, por lo que el uso de la ingeniería genética permite transferir y sobreexpresar los genes de bacterias, levaduras o animales que promueven la hiperacumulación en ciertas plantas que tienen una gran biomasa. Se han caracterizado y funcionalizado, a nivel molecular, un gran número de sistemas de descontaminación de elementos traza en levaduras y bacterias. La introducción de tales genes en las plantas ha cosechado resultados prometedores. 9 TABLA 2: PLANTAS TRANSGÉNICAS PARA LA REMEDIACIÓN DE METALES. GEN CUPI

FUENTE

PLANTA MDIFICADA

Levadura de metaloteína

EFECTO Elevada eficiencia de

Nicotiana tabacum

extracción de Cu Mayor capacidad de

GshI, gshII y APSI

Escherichia coli y Brassica juncea Arabidopsis thaliana

remoción de Zn y Cd del suelo Incremento de la

SAT

Thlaspi goesingense

Arabidopsis thaliana

TaPCSI

Triticum aestivum

Nicotiana tabacum

ASTL



tolerancia al Ni Mayor tolerancia al Pb y Cd Incremento de la tolerancia al Cd Mayor acumulación

APS


Brassica juncea

NtCBP4

Nicotiana tabacum

Nicotiana tabacum

de Se Mayor tolerancia al Pb

FUENTE: Agroecosistemas tropicales y subtropicales14 (2011): 597- 612

9

Rugh et al., 1998; Kramer y Chardonnens, 2001

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c) Función de la Planta en la Fitorremediación de Hidrocarburos totales del Petróleo: Diversos estudios han demostrado que la degradación de los HTP y sus componentes (hidrocarburos alifáticos, policíclicos, fenólicos y otros) es más rápida en suelos donde existe vegetación creciendo activamente, que en suelos donde sólo existen microorganismos o suelos estériles además, se ha observado que la toxicidad remanente de los suelos recuperados por fitorremediación es menor que la de aquéllos recuperados por otros tratamientos.10 Este sinergismo puede explicarse si se considera que la planta posee un papel activo en la transformación de las fracciones que componen a los HTP, así como en el fomento de los microorganismos que los degradan. Diversos autores han propuesto algunas hipótesis que podrían explicar por qué la presencia de la planta aumenta la degradación de HTP en el suelo por ejemplo: La rizosfera crea un mejoramiento de las propiedades físicas y químicas de los suelos contaminados mediante la aireación e introducción de nutrimentos por la penetración radicular, lo que fomenta la riqueza y diversidad microbiológica del suelo, en consecuencia, existen más microorganismos y mayor degradación de HTP. A esta hiptesis se le conoce como “efecto rizosfera”

La comunicación directa planta-bacteria contribuye a un aumento en la degradación del contaminante, al crear una zona favorable para el fomento selectivo de los genotipos microbianos degradadores de HTP del suelo De manera indirecta, se promueve el cometabolismo de los contaminantes y se inducen vías catabólicas microbianas por compuestos de origen vegetal Degradación ex e in planta: se establece la hipótesis que la extracción de agua hacia la parte aérea y la reversión del gradiente hidráulico pueden favorecer la degradación o inmovilización del contaminante (en especial, los menos hidrofóbicos) en las raíces y la parte aérea, por medio de enzimas vegetales.

10

Fitorremediacionen hidrocarburos.Joner et al., 2001

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Los tres mecanismos propuestos no son excluyentes y la fitorremediación puede ser el resultado de la combinación de ellos, en proporciones hasta ahora no descritas 11 c.1. Plantas captadoras de Metales Pesados: Uno de los problemas más señalados por la sociedad a nivel mundial y que ocupa un lugar prominente en los programas sociales y políticos es destacar la progresiva degradación de los recursos naturales causada por la diversidad de contaminantes tóxicos orgánicos e inorgánicos, en la atmósfera, agua, suelo y subsuelo, procedentes de diversas actividades naturales y antropogénicas, generando un irremediable deterioro en el ambiente. En las últimas décadas el acelerado desarrollo industrial y crecimiento de las poblaciones, han generado serios problemas de contaminación por metales pesados, provocando un incremento de su concentración en el ambiente y su migración a suelos no contaminados, que deterioran la calidad del suelo, del aire y del agua. El suelo se puede degradar por sustancias nocivas que se almacenan e incluso influyen negativamente en su comportamiento como es la disminución del rendimiento de los cultivos con posibles cambios en la composición de sus tejidos con riesgo para la salud de los consumidores al ingresar determinados elementos a la cadena trófica. La contaminación por metales pesados han sido asociado a actividades industriales o mineras, fundiciones, o suelos naturalmente ricos en metales debido a afloramientos minerales además de refinerías, aguas residuales, procesos nucleares y manufacturas de gran variedad de productos como baterías, componentes eléctricos, aleaciones de metales, plaguicidas y fertilizantes.12 c.1.1. Metales Pesados en Fitorremediación del Girasol: Desde el punto de vista biológico, se han planteado posibles soluciones a la contaminación del ambiente, es el caso de la fitorremediación, la biorremediación bacteriana y la ingeniería genética. La fitorremediación es la captación de metales contaminantes por las raíces de las plantas y su acumulación en tallos y hojas, Las plantas seleccionadas se pueden utilizar para extraer los metales de suelo, de agua y de 11

Fitorremediacion en hidrocarburos.Joner et al., 2001 Plantas transgenicas Raskin, 1996; Saleh-Lakha y Glick, 2005

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sedimentos, incluyendo el retiro de elementos radiactivos, y la mineralización posible de los compuestos orgánicos tóxicos. Hay

diversas

técnicas

del

fitotoremediación

tales

como

fitodegradacion,

fitovolatilización, rizodegradación, fitoestabilización, rizofiltración y fitoextracción El éxito de la fitorremediación depende de identificar las especies vegetales que toleren el estrés, que acumulen los metales pesados y produzcan cantidades grandes de biomasa. En general las plantas que acumulan más de 1000 mg/kg del Pb, se llaman los hiperacumuladoras.13 Ilustración 3 : GERMINACION DE GIRASOLES

FUENTE: Capacidad remediadora de la raíz de girasol PDF

El “girasol” es reportado por su capacidad de acumular metales y responder con una alta

biomasa radicular no obstante una baja tolerancia al cromo comparado con otras plantas acumuladoras. Se relaciona al plomo con la actividad de la proteasa en cotiledones de girasol, concluyendo como un agente tóxico que inhibe la actividad de éstos. El girasol tiene la capacidad de acumular altas concentraciones de uranio y cadmio en sus tejidos (principalmente tallo y raíz) con una razonable tolerancia, es por esta

13

Plantas transgenicas Raskin, 1996; Saleh-Lakha y Glick, 2005

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razón que el girasol se emplea en los procesos de fitorremediación acumulando y reciclando dichos metales excesivos de los suelos y promoviendo la limpieza ambiental. Con los antecedentes expuestos y con la intención de estudiar Helianthus annuu L como planta potencial para fitoacumular plomo en sus tejidos y así dar una solución biológica a la gran problemática ambiental de los suelos contaminados, el objetivo del presente trabajo fue demostrar la capacidad remediadora de las raíces de Helianthus annus “girasol”.

5.2.

CARACTERÍSTICAS GENERALES DEL GIRASOL

El girasol es una planta muy popular en nuestra cultura de cultivo. Además de este nombre que hemos elegido para referirnos a él en este artículo, también cuenta con otros muchos que no vamos a tener en cuenta ahora pero que es bueno conocer por si en alguno de los casos (por ejemplo que vayas a una tienda a por semillas) te la nombran y no sabes de qué te están hablando o cómo hacer para identificarla. Si atendemos a su nombre científico debemos decir que está denominado a partir de “helianthus annuus” aunque de la misma manera que en lo dicho anteriormente, en este

texto lo vamos a denominar como girasol a secas para que todos sepamos qué es lo que es y a qué nos estamos refiriendo con ello. Como en cualquier otro artículo que hayamos redactado aquí sobre plantas, es interesante que empecemos por saber cuáles son las características principales que definen al girasol y que hacen que lo conozcamos tal y como le vemos hoy en día. En primer lugar debemos decir que el girasol es una planta herbácea que pertenece a la familia de las asteráceas y que podemos encontrarla hoy en día, en muchas partes del mundo. Esta planta en sí es anual y tiene varias proporciones diferentes y a menudo, se dispone de gran tamaño hasta el punto de que puede alcanzar los 3 metros de altura en muchos de los casos. Su tallo es grueso, está erguido y a menudo se define bien macizo

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o


Hábitat de la planta de girasol:

El girasol es una planta original de América del Norte y que después fue llevada a terrenos como el de México y Perú. El interés que ha despertado en muchas ocasiones el girasol es debido al fruto de su pipa que se ha exportado a muchas partes del mundo con la idea de dar a conocer qué era lo comestible de esta planta. No obstante, la buena distribución ha hecho que sus semillas puedan ser plantadas en distintas partes del mundo y hoy en día podemos encontrar plantaciones de girasol por muchas partes que en un principio, ni siquiera hubiésemos pensado que iban a poder llegar hasta aquí.

5.3.

SUSTRATOS USADOS PARA LA FITORREMEDIACION

Las propiedades físicas del suelo se ven muy afectadas por la contaminación con hidrocarburos; la aglutinación de partículas del suelo genera estructuras más gruesas que cubren la superficie de las partículas y el espacio poroso afectando su aireación, adicionalmente la película que cubre las partículas es hidrófoba y disminuye la retención de agua. Por otro lado el contenido de materia orgánica del suelo se incrementa notablemente, así como la acidificación y la saturación de bases y la capacidad de intercambio catiónico. Todos estos factores acarrean una disminución de la fertilidad del suelo14. En la actualidad existen técnicas ex situ e in situ para la remediación de suelos contaminados con hidrocarburos pero presentan altos costos. Para la remoción o degradación de los derivados del petróleo se han usado varios tipos de tecnologías entre las que se encuentran las físicas, químicas y fisicoquímicas15. Algunos hidrocarburos utilizados para la fitorremediacion son tales como:

14

Hidrocarburos- Clemens y col. 2002 Sangabriel et al., 2006-Pérez et al., 2002

15

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a) Humus: El humus es un abono orgánico, pero no cualquiera: emerge naturalmente en cualquier tipo de tierra en su estado natural, pero en cantidades muy pequeñas y extremadamente nutritivas. En un bosque, por ejemplo, la cantidad de humus en la tierra es de un 5%, mientras en la arena de playa llega apenas a 1%. Se diferencia de la composta y del abono orgánico porque está en un proceso de descomposición más avanzado debido a la acción de hongos y bacterias: es de color negruzco, por la gran cantidad de carbono que tiene. Mientras se descompone, el humus aporta nitrógeno, fósforo, potasio y magnesio a la tierra y las plantas. Es, pongámoslo así, el proceso de descomposición orgánico más nutritivo para la tierra. Una de las maneras más sencillas de conseguir un humus para aplicarlo a tu tierra es a partir de lombrices, que puedes recolectar de tu propio jardín. El excremento de estas y las bacterias generarán un proceso de descomposición orgánico que acelerará la formación de humus para tus plantas. El humus tiene diferentes beneficios uno es que ayuda tanto a la retención de agua como a la filtración de la misma, según las necesidades del suelo y da una acertada consistencia a los suelos según su tipo. En suelos arenosos compacta, mientras que en arcillosos tiene un efecto de dispersión, Facilita la toma de nutrientes por la rizósfera, Regula la nutrición vegetal, Aporta productos nitrogenados al suelo degradado, Hace la tierra más fértil y Mejora la asimilación de abonos minerales. Ilustración 4: HUMUS

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b) Perlita: La Perlita es una roca volcánica, este vidrio volcánico o perlita se forma cuando la lava se enfría rápidamente y debido a este rápido enfriamiento el agua se queda atrapada dentro de la roca y la lava se transforma en una estructura vidriosa. La Perlita contiene entre un 2% y un 5% de agua y es una roca de silicato, lo cual implica que contiene un alto porcentaje de silicio. Tiene un proceso algo más complicado pero no es el sitio para explicarlo, solo comentaros un poco el origen. Ilustración 5: PERLITA

El proceso de expansión también produce una de las características más distintivas de la perlita: su color blanco. Mientras que el color de la roca en estado natural puede situarse entre un gris claro transparente y un negro brillante, el color de la perlita expandida se sitúa entre un blanco nieve y un blanco grisáceo. Es ligera, fácil de manejar y se mezcla bien con otros ingredientes, como, la turba, la fibra de coco, el humus de lombriz y la vermiculita, para semilleros y cultivo en macetas.16

16

Hidrocarburos- Clemens y col. 2002

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MATERIALES Y MÉTODOS

VI.

MATERIALES: Se utilizaron los siguientes materiales:

1. 12 maceteros 2. 6 kilos de tierra preparada 3. 400 g de Humus de lombriz 4. 400 g de Perlita 5. Semillas de girasol 6. Balanza METODOLOGÍA: Germinación de semillas: se remojaron las semillas durante una hora para poder retirar con mayor facilidad la cascara ya que estas al ser muy duras retrasan el proceso de germinación. Luego se las coloco en algodón con agua durante una semana hasta que empezaron a salir los brotes como se puede observar en la ilustración N° 1.

Ilustración 6: CUARTO DÍA DE GERMINACIÓN.

Determinación de la Concentración: se trabajaron con 6 muestras cada una con una repetición , 3 muestras a una concentración de 5 gramos de petróleo por 1 kilogramo de tierra (5g/kg) y las 3 restantes a 10 gramos de petróleo por 1 kilogramo de tierra (10g/kg) como se muestra en la tabla 1. Se tomaron estos valores teniendo en cuenta que el valor máximo permitido de hidrocarburos totales de petróleo es de 5 g/kg establecido por el Ministerio de Energía y Minas, es por ello que se trabajo con el máximo permitido y un valor mucho más alto para analizar la eficacia de la capacidad fitorremediadora de la planta de girasol ( Helianthus annuus). Procedimiento: Se peso el petróleo y la tierra para preparar las muestras, para la concentración de (5 g/kg) se mezclo 6 kilogramos de tierra con 30 gramos de petróleo; y para trabajar la segunda concentración de (10g/kg) se mezclo 60 gramos de petróleo con 6 kilogramos de tierra. MICROBIOLOGÍA - MA

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Determinación de sustratos: se trabajaron las muestras con diferentes mezclas de sustratos utilizados normalmente para el sembrío de plantas, se trabajo tierra con humus de lombriz, tierra con perlita y también

tierra

sola

para

ambas

concentraciones de petróleo con la finalidad de determinar el sustrato de mayor eficacia para el crecimiento de los girasoles como se Ilustración 7: PESADO DE LA TIERRA CON PETRÓLEO CON HUMUS.

muestra en la tabla 1.

TABLA 3: TABLA DE CONCENTRACIONES Y TIPOS DE SUSTRATOS TRABAJADOS EN LAS MUESTRAS. Concentraciones (g/kg)

5g/kg

Tipos de Sustratos Tierra sola

1000g

Tierra con humus de

900g(Tierra)

lombriz

(Humus)

Tierra con perlita

10g/kg

900g(Tierra)

1000g

Tierra con humus de

900g(Tierra)

lombriz

(Humus)

Total de muestras

muestras 2

+

100g

+

100g

(Perlita)

Tierra sola

Tierra con perlita

N° de

Cantidades (g)

900g(Tierra) (Perlita)

2

2 2

+

100g

+

100g

2

2 12

Fuente: Elaboración propia.

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Sembrío de las plantas: Se procedió a sembrar las plantas de girasol ( Helianthus annuus) ya con las muestras preparadas a las concentraciones de 5 y 10 (g/kg) y con las diferentes mezclas de sustratos. Ilustración 8: PLANTAS DE GIRASOL SEMBRADAS.

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DIAGRAMA DE FLUJO DE LA METODOLOGÍA Fitorremediación de suelos contaminados con hidrocarburos mediante la captación del girasol (Helianthus annuus).

Germinación

Concentración de petróleo

5g/kg

10g/kg

Tipos de sustratos utilizados para cada concentración Terra con humus de lombris

Tierra sola

Terra con perlita

Análisis

Análisis cualitativo

Control del crecimiento de tallos y hojas

Análisis cuantitativo

Medición de Hidrocarburos en laboratorio

Fuente: Elaboración propia.

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VII.


RESULTADOS

A continuacion se presenta Los resultados obtenidos con concentracion de 5g/kg de petroleo (tabla 4). TABLA 4: PRIMER CONTROL DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS

TALLO

1er Tallo 16 cm

HOJAS

3cm 3,5cm

TALLO

HOJAS

TALLO

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NUMERO 2 tallos

2cm 1,5cm 3cm 3cm 2,5cm 2cm

2 hojas (1) 6 hojas (2)

TIERRA CON PETRÓLEO MAS HUMUS 1er Tallo 2do Tallo 3er Tallo 12,5 cm 8 cm 8,6 cm 3cm 2,5 cm 1,5 cm 2 cm

3 cm 2,5 cm 2 cm 2,5 cm

2,5 cm 2,8 cm

TIERRA CON PETRÓLEO MAS CON PERLITA 1er Tallo 2do Tallo 3er Tallo 16 cm

HOJAS

TIERRA CON PETRÓLEO 2do Tallo 10 cm

1,5 cm 2 cm 1,5 cm

3.5 cm

2,5 cm

NUMERO 3 Tallos 4 hojas (1) 4 hojas (2) 2 hojas (3)

NUMERO 3 Tallos 3 hojas (1)

27



TABLA 5: PROMEDIOS DE LOS RESULTADOS

2

Tamaño promedio del tallo 13

3

9,7

10 hojas

2,5

3

7,3

3 hojas

1,7

Número de tallos

Muestras

tierra con petróleo tierra con petróleo mas humus Tierra con petróleo mas perlita Fuente: Elaboracion propia

Numero de hojas

Tamaño de hojas

8 hojas

2,8

En la tabla 5 se aprecia que el tratamiento de tierra con petróleo obtuvo una mayor altura de planta (13cm) en comparación con los demás tratamientos, tal como se muestra en el grafico 1. Con un promedio de tamaño de hojas de 2,8 cm, siendo el de mayor promedio como se muestra en el grafico 2.

Gráfica 1: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio del tallo.

TAMAÑO PROMEDIO DEL TALLO 14 12 10 8 6 4 2 0 tierra con petróleo

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tierra con petróleo mas humus

Tierra con petróleo mas perlita

tamaño de promedio del tallo

28



Gráfica 2: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio de hojas.

TAMAÑO DE HOJAS 3 2.5 2 1.5 tamaño de hojas

1 0.5 0 tierra con petróleo

tierra con petróleo mas humus


Analizar los aspectos cualitativos de cada muestra según la concentración de hidrocarburos

Resultados: Muestras con concentracion de (10g/kg) TABLA 6: PRIMERO CONTROL DEL CRECIMIENTO DE LAS PLANTAS

TALLO

HOJAS

TALLO

HOJAS

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1er Tallo

TIERRA CON PETRÓLEO 2do Tallo

3ro Tallo

NUMERO

15,5 cm

11,5 cm

13,5 cm

5 tallos

3 cm 3 cm 3 cm 3,5 cm 3 cm 8 hojas (1) 4 cm 3 cm |1,5 cm 6 hojas (2) 2,5 cm 3,5 cm 1,5 cm 2 hojas (3) 3 cm 1 cm 0,8 cm 1,2 cm 0,5 cm TIERRA CON PETRÓLEO MAS HUMUS 1er Tallo 2do Tallo NUMERO 8,3 cm

3,5 cm

2 Tallos

3 cm 2,5 cm 3,3 cm 3,5 cm 1,5 cm 1 cm

3 cm 3 cm 1,5 cm 4 cm 2 cm


29



TIERRA CON PETRÓLEO MAS CON PERLITA TALLO

1er Tallo

2do Tallo

NUMERO

8 cm

5 cm

2 Tallos

3,3 cm 3 cm


1,5 cm HOJAS 2 cm 1,5 cm Fuente: Elaboracion propia

TABLA 7: PROMEDIOS DE LOS RESULTADOS Muestras

3

Tamaño promedio del tallo 13.5

2

6

11 hojas

2.6

2

6.5

5 hojas

2.41

Número de tallos

tierra con petróleo tierra con petróleo mas humus Tierra con petróleo mas perlita Fuente: Elaboracion propia

Numero de hojas

Tamaño de hojas

16 hojas

2.5

En la tabla N° 7 se puede observar que la planta de girasol ( Helianthus annuus) tuvo un mayor crecimiento en la muestra que contenía tierra con petróleo, con una altura promedio del tallo de (13.5 cm), un promedio de tamaño de hojas de (2.5 cm) y un mayor número de hojas a diferencia de las demás muestras. También podemos observar que la tierra con petróleo más perlita tuvo mejores resultados que la muestra de tierra con petróleo más humus como se puede observar en grafico N° 3 y 4.

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Gráfica 3: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio del tallo.

TAMAÑO PROMEDIO DEL TALLO 16 14 12 10 8 Tamaño promedio del tallo

6 4 2 0 Tierra con petróleoTierra con petróleo Tierra con petróleo mas humus mas perlita

Gráfica 4: Diagrama de barras representativo del tamaño promedio de las hojas.

TAMAÑO DE HOJAS 2.65 2.6 2.55 2.5 2.45

tamaño de hojas

2.4 2.35 2.3 Tierra con petróleo

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Tierra con petróleo mas humus


31


VIII.


DISCUSIÓN

En nuestros resultados determinamos

que

la capacidad fitorremediadora y el

desarrollo vegetal de la planta de girasol ( Helianthus annuus) en suelos contaminados con hidrocarburos tuvo mejores resultados en el sustrato de tierra sola con petróleo en una concentración de 10 g/kg de petróleo con una altura promedio de (13.5 cm), sin embargo, el crecimiento del girasol en tierra con petróleo mas humus tuvo mejores resultados con una concentración de 5g/kg de petróleo con una altura promedio de (9.7 cm). Estos datos nos indican que los sustratos de tierra con petróleo y tierra con petróleo mas humus son los más adecuados para el crecimiento de la planta de girasol en el proceso de fitorremediación de esta. Comparando los resultados con él con el trabajo de

investigación

FITORREMEDIACIÓN

DE

SUELOS

CONTAMINADOS

POR

HIDROCARBUROS DE PETRÓLEO (Buendía Ríos H., Cruz Reyes F.) 17 Las plantas que tuvieron un mejor crecimiento fueron las que se desarrollaron en un sustrato de tierra contaminada con petróleo más aserrín de bolania y humus como se puede observar en tabla N° 8. TABLA 8: CRECIMIENTO VEGETAL DEL GIRASOL EN SUELOS CONTAMINADOS. Tratamiento Suelos contaminados por hidrocarburos Suelos contaminados por hidrocarburos + Aserrín de bolaina Suelos contaminados por hidrocarburos + Humus de lombriz Suelos contaminados por hidrocarburos + Aserrín de bolaina + Humus de lombriz Suelos contaminados por hidrocarburos + Perlita Suelos contaminados por hidrocarburos + humus de lombriz + Perlita Fuente: Buendía Ríos H., Cruz Reyes F. UNALM

Altura promedio (cm) 4.67 18.33 14.67 23.33 16.67 22.67

17

Buendía Ríos H., Cruz Reyes F. Fitorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos de petróleo. UNALM Lima 2014.

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IX.


CONCLUSIONES

En lo referente a la altura de la planta de girasol Helianthus annuus, el tratamiento de tierra con petróleo fue el que obtuvo mayor altura en comparación con los demás tratamientos, para ambas concentraciones de petróleo. El mayor promedio de tamaño de hojas se obtuvo en la maseta de tierra con petróleo de 5g/kg de concentración, con un promedio de 2,8 cm tal como se muestra en el grafico 1. Sin embargo el mayor número de hojas se obtuvo en la maseta de tierra con petróleo de 10g/kg de concentración con 16 hojas.

X.

RECOMENDACIONES



De acuerdo a otros estudios que pudimos observar, se recomienda el empleo del cultivo de girasol ( Heliantuus annuus) como fitorremediador de suelos contaminados por hidrocarburos con presencia de plomo.



Se recomienda además, el uso del humus de lombriz como acondicionador para suelos contaminados por hidrocarburos con presencia de Pb, por ser una tecnología de bajo costo y fácil manejo.



Antes de llevar a cabo una fitorremediación de un suelo es necesario conocer las características físicas y químicas del mismo, así como el origen del contaminante para poder seleccionar especies que se adapten a las condiciones del suelo a utilizar.



Llevar a cabo otra fitorremediación hasta que los valores de Pb entren en los límites máximos permisibles y tomar acciones preventivas sobre el suelo para evitar su dispersión eólica a otras áreas.



Es sumamente necesario mantener un constante regado a cada muestra en todo el proceso de tratamiento, para así evitar complicaciones futuras en el análisis de suelos en laboratorio.

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XI.


BIBLIOGRAFÍA 1. Buendía Ríos H., Cruz Reyes F. Fitorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos de petróleo. UNALM Lima 2014. 2. BURST et.al ,2003. Molecular Plant – Microbe interactions. UK. 3. ESPINOZA, 1999. Boletin Nº 04.Refinería la Pampilla. Callao. Peru. 4. GUERRERO, J. 2001. El Compost un abono orgánico compuesto para mejorar y dar vida a nuestros suelos. Taller de conservación de suelos y agricultura sostenible. UNALM. Lima. 5. GUITART 2005. Factors influencing hydrocarbons degradation in three freshwater lakes. Microbial Ecology, 11: 127-237. 6. HANS et.al D. 2003. The Physiology and Biochemistry of Prokaryotes. Oxford University Press, Oxford, 10 7. Hannink et al., 2001; Chaudhry et al., 2002; Fitorremediación de plantas transgénicas que expresan una nitrorreductasa bacteriana. Naturaleza Biotecnología. 8. Hidrocarburos- Clemens y col. 2002 9. INSTITUTO NACIONAL DE ECOLOGIA, 2003. Ambiente y Desarrollo. Lima, Perú. 10. Kramer, U., Chardonnens, A. 2001.El uso de plantas transgénicas en la biorremediación de suelos contaminados con hidrocarburos.Appl. 11. MANI et.a (2007). Leguminosae Helianthus annuus,. In Estructure of economic plants. MacMillan, New York, USA, pp. 309-338. 12. Ministerio del Ambiente (MINAM), 2012. Decreto Supremo N’ 001 -2012MINAM. Lima, Perú. 13. Ministerio Español de medio ambiente, 2004 – 2007 14. Montagu, M.V. 2005.Hitos tecnológicos de la ciencia de las plantas a la biotecnología agrícola. Tendencias Plant Sci. 15. Pilon-Smith, E. A., Pilón, M. 2002.Fitorremediación de metales utilizando plantas transgénicas.Críticas en Ciencias de las Plantas. 16. Sangabriel et al., 2006-Pérez et al., 2002 17. Viñas, M. 2005.Biorremediación de suelos contaminados con hidrocarburos: caracterización, microbiología, química y ecotoxicológica. Facultad de biología. Universidad de Barcelona.

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ANEXOS

TIERRA CON PETRÓLEO (1)

TIERRA CON PETRÓLEO (2)

TIERRA CON HUMUS (1)

TIERRA CON HUMUS (2)

TIERRA CON PERLITA(1)

TIERRA CON PERLITA(2)

CON CONCENTRACION DE 5G/KG DE PETROLEO TIERRA CON PETROLEO TIERRA CON HUMUS

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TIERRA CON PERLITA

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CRONOGRAMA DEL TRABAJO (Mes de noviembre – diciembre)

ACTIVIDAD

MES DE NOVIEMBRE

MES DE DICIEMBRE

DÍAS

DÍAS 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Germinación Preparación de sustrato Plantación Crecimiento de las plantas Primer control Segundo control Análisis de laboratorio

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Fitorremediacion Girasol Microbiologia Final

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