IDENTIFIKASI SENYAWA GLIKOSIDA PADA EKSTRAK BIJI KLUWAK ( Pangiu m edul edul e Reinw) DARI DESA GANRA KABUPATEN SOPPENG
Oleh : AZIMA PO.71.3.251.11.1.011
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN MAKASSAR JURUSAN FARMASI 2014
i
IDENTIFIKASI SENYAWA GLIKOSIDA PADA EKSTRAK BIJI KLUWAK ( Pangiu m edul edul e Reinw) DARI DESA GANRA KABUPATEN SOPPENG
Karya Tulis Ilmiah Diajukan Untuk Memenuhi Syarat Dalam Menyelesaikan Tugas Akhir Program Pendidikan Ahli Madya Farmasi
Oleh: AZIMA PO.71.3.251.11.1.011
KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN MAKASSAR JURUSAN FARMASI 2014
ii
LEMBAR PENGESAHAN KARYA TULIS ILMIAH
IDENTIFIKASI SENYAWA GLIKOSIDA PADA EKSTRAK BIJI edul e Reinw) DARI DESA GANRA KLUWAK (Pangiu m edul
KABUPATEN SOPPENG
Oleh: AZIMA PO.71.3.251.11.1.011
Menyetujui,
iii
LEMBAR PENGESAHAN TIM PENGUJI Karya Tulis Ilmiah Telah Dipertahankan di Hadapan Tim Penguji Ujian Karya Tulis Ilmiah Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Kementerian Kementerian Kesehatan RI Makassar Pada Tanggal 10 Juni 2014
Tim Penguji
iv
KATA PENGANTAR
Puji syukur kepada Allah SWT atas berkah dan limpahan rahmat-Nya sehingga Karya Tulis Ilmiah dengan judul “ Identifikasi Senyawa Glikosida Pada Ekstrak Biji Kluwak ( Pangium Edule Reinw) Dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng” Soppeng” dapat terselesaikan sebagai salah satu syarat akademik dalam menyelesaikan tugas akhir pada Jurusan Farmasi Polite knik Kesehatan Makassar. Karya Tulis Ilmiah ini diharapkan dapat memberikan manfaat bagi pembaca khususnya mahasiswa farmasis dalam penelitian di bidang Farmakognosi/ Fitokimia. Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada Bapak Drs. H. Ismail Ibrahim, M.Kes., Apt selaku pembimbing I dan Ibu DR. Hj. Nurisyah, M.Si., Apt selaku pembimbing II atas bimbingan yang telah diberikan selama proses
penyelesaian tugas akhir ini. Pada kesempatan ini pula, penulis menyampaikan rasa terimah kasih kepada: 1.
Bapak Drs. H. Ashari Rasyid, SKM, MS, Direktur Politeknik Kesehatan Makassar yang telah memberikan kesempatan kepada saya mengikuti pendidikan di Politeknik Kesehatan Makassar.
2.
Bapak Drs. Rusli, Sp.FRS, Apt, Ketua Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Makassar atas kesempatan yang diberikan kepada saya menjadi mahasiswa Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Makassar.
3.
Tim Penguji atas saran dan masukan untuk penyempurnaan karya tulis ilmiah ini.
v
vi
4.
Ibu Ratna dan Pak Tang sebagai laboran Laboratorium Farmakognosi/ Fitokimia dan Ibu Ika, Ibu Idha, Ibu Ratna sebagai laboran Laboratorium Kimia atas bimbingannya selama proses penelitian.
5.
Bapak dan Ibu dosen Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Makassar yang telah memberikan motivasi selama mengikuti pendidikan. Serta staf tata usaha yang membantu menyelesaikan administrasi pendidikan hingga tugas akhir.
6.
Kedua orang tua (Bapak Andi Abd. Hakim AT dan Ibu Hj. Sukma) serta saudara-saudara saya atas nasihat, dukungan dan perhatiannya selama menjalani pendidikan dan menyelesaikan tugas akhir ini
7.
Anak-anak Tami n Friends (Winda, Erna, Ilha, Uchi, Indah, Hajar dan Lia) atas perhatian dan bantuannya selama penyusunan tugas akhir dan 3 tahun kebersamaan kita selama menempuh pendidikan di jurusan Farmasi.
8.
Rekan-rekan mahasiswa seangkatan
(Indication 2011), serta adik tingkat
(Generik 2012 dan Injeksi 2013)
9.
Seluruh pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu serta berbagai sumber yang digunakan sebagai pedoman dalam penyusunan tugas akhir ini . Semoga Allah SWT berkenan membalas segala kebaikan yang telah
diberikan.
Makassar, Mei 2014
Azima
ABSTRAK Azima. Identifikasi Senyawa Glikosida Pada Ekstrak Biji Kluwak ( Pangium Edule Reinw) Dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng (dibimbing oleh H. Ismail Ibrahim dan Hj. Nurisyah).
Telah dilakukan penelitian Identifikasi Senyawa Glikosida Pada Ekstrak Biji Kluwak ( Pangium Edule Reinw) Dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa glikosida yang terdapat pada ekstrak Biji Kluwak dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng. Sampel Biji Kluwak diekstraksi terlebih dahulu menggunakan metode soklet. Selanjutnya dilakukan KLT uji pendahuluan, KLT Preparatif diperoleh 4 fraksi (F1, F2, F3 dan F4) dan KLT 2 Dimensi diperoleh F1 senyawa tunggal/ murni. Hasil Spektrofotometri UV dengan panjang gelombang (λ) 204, 205 dan 207 nm dan hasil Spektrofotometri Inframerah F1 mengandung gugus OH (hidroksi), C – H alifatik, C = O ester, C = C, Benzen dan CH 2 – CH3 (metil metilen). Kata Kunci : Biji Kluwak, Soklet, KLT Uji pendahuluan, KLT Preparatif, KLT 2 Dimensi, Spektrofotometri UV dan Inframerah.
vii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................................
i
HALAMAN PRASYARAT .................................................................................
ii
LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................
iii
KATA PENGANTAR .........................................................................................
iv
ABSTRAK ........................................................................................................... vii DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii DAFTAR TABEL ................................................................................................
x
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................
xi
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xii DAFTAR SINGKATAN ..................................................................................... xiii BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................................
1
A. Latar Belakang ................................................................................
1
B. Rumusan Masalah ...........................................................................
3
C. Tujuan Penelitian ............................................................................
3
D. Manfaat Penelitian ..........................................................................
3
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .........................................................................
4
A. Uraian Tanaman Kluwak ................................................................
4
B. Glikosida ..........................................................................................
7
C. Ekstraksi ..........................................................................................
9
D. Ekstraksi dengan Metode Sokletasi ................................................ 11 E. Kromatografi Lapis Tipis ................................................................. 12 F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif ................................................ 13
viii
G. KLT 2 Dimensi ................................................................................ 15 H. Spektrofotometri .............................................................................. 15 BAB III. METODE PENELITIAN ...................................................................... 18 A. Jenis Penelitian ................................................................................ 18 B. Tempat dan Waktu Penelitian .......................................................... 18 C. Bahan dan Alat ............................................................................... 18 D. Cara Kerja ...................................................................................... 18 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 23 A. Hasil Penelitian ............................................................................... 23 B. Pembahasan ..................................................................................... 24 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 28 A. Kesimpulan ..................................................................................... 28 B. Saran................................................................................................. 28 DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 29 LAMPIRAN ......................................................................................................... 31
ix
DAFTAR TABEL
Tabel 1: Komposisi kandungan Biji Kluwak Tiap 100 gram .............................
6
Tabel 2: Indeks Polaritas Pelarut.......................................................................... 10 Tabel 3: Hasil Kromatografi Lapis Tipis ............................................................. 23 Tabel 4: Hasil Kromatografi Lapis Tipis Preparatif ............................................ 23 Tabel 5: Hasil KLT 2 Dimensi ............................................................................ 23 Tabel 6: Hasil Spektrofotometri Ultraviolet ........................................................ 24 Tabel 7: Hasil Spektrofotometri Inframerah ........................................................ 24 Tabel 8: Nilai Rf ekstrak n-butanol dengan eluen CHCl 3-MeOH-H2O ............... 32 Tabel 9: Nilai Rf ekstrak n-butanol dengan eluen EtOAc-EtOH-H 2O ................ 32
x
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran I. Skema Kerja ...................................................................................... 31 Lampiran II. Metode perhitungan nilai Rf tiap noda pada KLT .......................... 32 Lampiran III. Daftar nilai Rf dan warna noda pada KLT .................................... 33 Lampiran IV. Grafik Spektrofotometri UV .......................................................... 34 Lampiran V. Grafik Spektrofotometri Inframerah .............................................. 35 Lampiran VI. Gambar .......................................................................................... 36
xi
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1: Pengeringan Sampel Biji Kluwak ...................................................... 36 Gambar 2: Ekstraksi Metode Soklet .................................................................... 36 Gambar 3: Pengujian Busa ................................................................................... 36 Gambar 4: Ekstrak n-butanol dan sisa H 2O ......................................................... 36 Gambar 5: Pengeringan ekstrak n-butanol ........................................................... 37 Gambar 6: Penimbangan ekstrak n-butanol ......................................................... 37 Gambar 7: Ekstrak kering n-butanol .................................................................... 37 Gambar 8: Penotolan lempeng/ plat KLT ............................................................ 37 Gambar 9: Ekstrak n-Butanol dengan eluen CHCl 3-MeOH-H2O (16 : 6 : 1) ...... 38 Gambar 10: Ekstak n-Butanol dengan EtOAc-EtOH-H 2O (10 : 2 : 1) ................ 38 Gambar 11: Penotolan pada Plat Kaca KLT ........................................................ 38 Gambar 12: Hasil bercak noda pada plat kaca KLT yang tampak pada UV 254 nm ........................................................................................ 38 Gambar 13: Hasil kerok plat kaca KLT ............................................................... 39 Gambar 14: Fraksi KLT Preparatif ...................................................................... 39 Gambar 15: Fraksi satu (F1) ................................................................................ 39 Gambar 16: Proses Identifikasi Secara Spektrofotometri Inframerah ................. 40
xii
DAFTAR SINGKATAN
n-BuOH
: n-Butanol
EtOAc
: Etil Asetat
EtOH
: Etanol
KLT
: Kromatografi Lapis Tipis
Et2O
: Dietil eter
MeOH
: Metanol
CHCl3
: Kloroform
F1
: Fraksi satu
F2
: Fraksi dua
F3
: Fraksi tiga
F4
: Fraksi empat
xiii
1
BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang
Tanaman obat merupakan suatu komponen penting dalam pengobatan tradisional.Pengobatan tradisional dipilih sebagai salah satu alternatif.Secara umum kegunaan tumbuhan obat sebenarnya disebabkan oleh kandungan kimia yang dimiliki.Meskipun tidak diketahui secara rinci, tetapi pendekatan secara farmakologis menghasilkan informasi dan kegunaan tumbuhan. Menyikapi hal tersebut maka dalam upaya meningkatkan penggunaan obat tradisional di Indonesia diperlukan suatu penelitian komponen kimia dan khasiatnya, agar penggunaannya tidak berdasarkan pada pengalaman tapi didukung oleh data kimia yang cukup (Arif, Hariani: 2004). Salah satu dari sekian banyak tanaman yang tumbuh yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obat adalah Kluwak (Pangium edule Reinw). Masyarakat pada umumnya, khususnya masyarakat Desa Ganra Kabupaten Soppeng yang merupakan salah satu Desa penghasil Kluwak hanya menggunakan untuk dikonsumsi sebagai makanan. Sebagaian diantaranya masyarakat mengetahui bahwa Kluwak dapat berfungsi sebagai obat.Menurut Mangontan et al ., (1985) dalam Dian Aprianti (2011) mengatakan padabijinya sebagai antiseptik dan daunnya sebagai obat cacing. Penelitian tentang kandungan Biji Kluwak sudah pernah dilakukan oleh Pratiwi Sumiar dkk (2006) dan hasilnya menujukkan bahwa Fraksinasi ekstrak etanol Kluwak dengan etil asetat dilanjutkan dengan kromatografi 1
2
lapis tipis preparatif menghasilkan dua isolat. Satu isolat (isolat P – 1) yang bereaksi dengan pereaksi Dragendorff dan larutan kalium hidroksida menunjukkan absorbansi maksimum pada 219 dan 272 nm merupakan senyawa golongan kumarin. Isolat lain (isolat P – 2) yang bereaksi dengan larutan besi (III) klorida dan menunjukkan absorbansi maksimum pada 216 dan 269 nm diidentifikasi sebagai suatu fenolat yang spektrum inframerahnya mengungkapkan adanya gugus hidroksil, keton, karbonil, dan alkil. Beberapa literatur juga mengemukakan bahwa pada Biji Kluwak juga mengandung karbohidrat. Dimana komponen penyususn glikosida disebut
glikson (gula) yang merupakan bagian dari karbohidrat dan aglikon (bukan gula / genin). Senyawa
glikosida
memiliki
efek
yang
digunakan
untuk
mengendalikan aritmia jantung supraventikuler (atrial), dan juga mempunyai aksi diuretik yang penting untuk penyembuhkan busung air, karena memberikan efek memperbaiki peredaran darah (Wiryowidagdo, Sumali: 2008). Selain itu glikosida juga memiliki manfaat sebagai cadangan gula temporer, sebagai pengatur tekanan turgor , proses glikosidasi untuk menjaga diri terhadap pengaruh luar yang mengganggu
dan sebagai petunjuk
sistematik (Hertin, Frianka: 2010). Berdasarkan
dari
uraian
diatas,
mendorong
peneliti
untuk
mengidentifikasi senyawa Glikosida yang terdapat pada Biji Kluwak (Pangium edule Reinw ) yang berasal dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng.
3
B. Rumusan Masalah
Berdasarkan uraian diatas, maka yang menjadi rumusan masalah dalam penelitian ini adalah Apakah ekstrak Biji Kluwak dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng mengandung senyawa glikosida? C. Tujuan Penelitian
Tujuan penelitian ini adalah untuk megetahui kandungan senyawa glikosida yang terdapat pada ekstrak Biji Kluwak dari Desa Ganra KabupatenSoppeng. D. Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini yaitu sebagai bukti ilmiah kepada masyarakat tentang kandungan glikosida Biji Kluwak dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng dan sebagai refrensi untuk penelitian selanjutnya.
25
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
A. Uraian Tanaman Kluwak 1.
2.
Sistematika Tumbuhan ( T.Gembong)
Regnum
: Plantae
Divisi
: Spermatophyta
Sub divisi
: Angiospermae
Kelas
: Dicotyledonae
Sub Kelas
: Chorypetalae-Dialypetalae
Bangsa
: Parietales/Cistales
Suku
: Flacourtiaceae
Marga
: Pangium
Jenis
: Pangium edule Reinw
Morfologi Tumbuhan ( Van Steenis C.G.G.J danT.Gembong)
Pohon, tinggi 18-40 cm. ranting muda berambut coklat rapat. Daun terkumpul pada ujung ranting, bertangkai panjang, pada pohon muda berlekuk 3, pada yang tua bulat telur lebar, dengan pangkal yang terpancung atau berbentuk jantung, meruncing; mengkilat, hijau tua dan sisi atas gundul; berambut coklat rapat dan sisi bawahnya buram; 20-60 kali 15-40 cm; tulang daun pada sisi bawah sangat menonjol. Bunga berkelamin 1, berumah 2, yang jantan dalam tandan yang berbunga sedikit, yang betina berdiri sendiri, kadang-kadang dalam tandan.Ada lagi
4
5
bunga yang bawah betina, yang atas jantan.Anak tangkai bunga dan kelopak berambut coklat. Kelopak tinggi 1-2 cm. daun mahkota 5-8, oval memanjang, hijau muda, panjang 1,5-2,5 cm, di sisi dalam pada pangkalnya dengan sisik bulat yang berambut. Benang sari 20-30, kipas pada bunga betina dengan kepala sari yang kosong atau tanpa kepala sari, tangkai sari besar.Bakal buah berambut coklat; papan biji 2.Kepala putik bertaju 2-4.Buah buni berbentuk telur ellipsoid, 10-25 cm diameter, berambut coklat rapat.Biji banyak, berusuk, keras. Di hutan, tepi sungai, juga ditanam orang; 10-1000 m. Pangi, Ind, Pakem J, Pucung, J, Ind, Picung, S. Pangium edule Reinw Catatan : seluruh pohon mengandung asam cyan yang sangat beracun dengan kadar yang tinggi. Ini biasa juga dipakai untuk alat mencegah busuk dan alat pembunuh serangga.Biji yang mengandung lemak sangat setelah pengolahan, menjadi makanan, yaitu sebagai kluwek, dage, dan sebagainya; juga dipakai untuk mengolah lemak lauk sebagai pengganti minyak kelapa.
3.
Komposisi Kimia dan Kegunaan Biji Kluwak ( Pangium edule Reinw)
Biji Kluwak mempunyai kandungan minyak/lemak yang tinggi, dua kali lipat kandungan protein maupun karbohidratnya. Lemak Biji Kluwak apabila diasamkan akan menghasilkan asam lemak siklik yang tidak jenuh yaitu asam hidnokarpat (C 16H28O2) dan asam khaulmograt (C18H32O2).
6
Daging Biji Kluwak mengandung senyawa golongan alkaloida, flavonoid, tannin dan sianida (Sulistiyani, 2005). Biji Kluwak juga mengandung tannin, yaitu senyawa polifenol atau polialkohol sehingga apabila dibiarkan diudara terbuka akan cepat berwarna coklat. Mangontan et al ., (1985) dalam Dian Aprianti (2011) menyatakan bahwa selama ini tanaman Kluwak lebih banyak digunakan sebagai obatobatan tradisional. Penggunaan tersebut antara lain: a. Daun dan Biji Kluwak setelah diseduh dapat digunakan sebagai desinfektan dan obat cacing. b. Kulit dan daun Kluwak dapat digunakan sebagai racun ikan. c. Minyak dari daging Kluwak dapat digunakan untuk membuat ekstrak yang dipakai untuk obat reumatik dan penyakit kulit. d. Daging Biji Kluwak segar yang dilarutkan dalam air dapat digunakan untuk obat pembasmi kutu.
Tabel 1: komposisi kandungan Biji Kluwak tiap 100 gram Kluwak Kandungan
Hasilnya
Air (gram)
51
Kalori (kal)
275
Protein (gram)
10
Lemak (gram)
24,0
Karbohidrat(gram)
13,5
Ca (mg)
40
P (mg)
100
Fe (mg)
2,0
7
A (SI)
0 Vitamin
BI (mg)
0,15
C (mg)
300
Bydd (gram)
80
Sumber : Poedjiadi, anna: 2007 : 462
B. Glikosida
Sejumlah tanaman yang tersebar di alam mengandung glikosida steroid dengan23 atau 24 atom karbon yang memberikan efek memperkuat pada jantung yang melemah.Didunia pengobatan modern, glikosida dari berbagai jenis digitalis digunakan untuk itu. Cerita yang menarik tentang pengobatan penyakit busung air (drpsy) pertama kali dilakukan pada tahun 1785 oleh seorang dokter dan ahli botani William Withering dengan menggunakan tanaman digitalis (D. purpurea). Tanpa diduga, diperoleh hasil bahwa penyakit busung air tersebut merupakan gejala kelainan jantung. Penyelidikan yang dilakukan kemudian membuktikan bahwa pengobatan ini juga memperoleh pembenaran secara farmakologis (Wiryowidagdo, Sumali : 2008). Glikosida merupakan senyawa yang menghasilkan satu atau lebih gula di antara hasil hidrolisisnya. Gula yang paling sering terbentuk adalah Dglukosa, walaupun ramnosa, digitoksosa, simarosa, dan gula lain juga bisa terdapat dalam komponen glikosida. Atom yang menghubungkan antara gula dan bukan gula pada glikosida bisa S, N, O, ataupun C. Glikosida kelompok thiol, disebut sebagai S – glikosida, begitu juga jika bagian nukleofiliknya
8
adalah nitrogen disebut N – glikosida. Komponen penyususn glikosida disebut sebagai glikson (gula) dan aglikon (bukan gula / genin). Di dalam tatanama glikosida, nama yang umum mempunyai suatu akhiran ’in’, dan nama ini mengindikasikan adanya sumber glikosida. Contoh glikosida adalah digitoxin dari Digitalis, salicin dari Salix, dan prunasin dari Prunus. Nama yang sitematis pada umumnya dibentuk dengan menggantikan akhiran ’ose’ dari gula pembentuk dengan ’osida’. Awalan anomerik (αdan β-) dan awalan konfigurasi (D atau L) mendahului nama gula, dan nama kimia dari aglikon mendahului nama gula. Sebagai contoh nama salicin yang sitematis adalah O-hidroksi-metilfenil β-D-Glikopiranosida. Namun demikian, glikosida yang berbentuk beta yang terdapat di dalam tanaman. Hal ini didukung kenyataan bahwa emulsin dan enzim alamiah hanya mampu menghidrolisis glikosida bentuk β. Glikosida sering diberi nama sesuai dengan bagian gula yang terdapat di dalamnya, dengan menambahkan kata ’osida’. Misalnya, glikosida yang mengandung glukosa disebut glukosida, yang mengandung arabinosa disebut arabinosida, yang mengandung asam galakturonat disebut galakturonosida, dan lain-lain. Secara kimiawi glikosida merupakan senyawa asetal dengan satu gugus hidroksi dari gula mengalami kondensasi degnan gugus hiroksi dari komponen bukan gula. Sedangkan gugus hidroksi yang kedua mengalami kondensasi di dalam molekul gula itu sendiri membentuk suatu lingkaran oksida. Jika dicermati, maka terlihat sebagai eter gula, jika dihubungkan oleh atom O antara gula dan bukan gula (Hertin,Frianka: 2010) .
9
Secara uji kimia dan uji aktivitas hayati obat kardioaktif tergantung pada aktivitas hayati, reaksi rantai samping glikosida dan sifat – sifat rantai samping butenolida. Pada daerah ultraviolet, rantai samping butenolida menunjukkanλ maks 217 nm dan jika menggunakan zat murni, misalnya hasil pengerokan lapis tipis yang telah dielusi, cara ini merupakan cara yang cepat. Tetapi uji spektroskopi ini tidak dapat digunakan untuk membedakan glikosida dan aglikonnya (Wiryowidagdo, Sumali : 2008).. Berdasarkan dari sudut pandang farmakologi, senyawa glikosida memiliki efek yang digunakan untuk mengendalikan aritmia jantung supraventikuler (atrial), dan juga mempunyai aksi diuretik yang penting untuk penyembuhkan busung air, karena memberikan efek memperbaiki peredaran darah (Wiryowidagdo, Sumali : 2008). Selain itu, glikosida juga memiliki manfaat sebagai cadangan gula temporer, sebagai pengatur tekanan turgor , proses
glikosidasi untuk menjaga diri terhadap pengaruh luar yang
mengganggu dan sebagai petunjuk sistematik (Hertin, Frianka: 2010). C. Ekstraksi
Pengetahuan tentang kandungan komponen tumbuhan berkembang sangat
pesat
karena
berkembangnya
metode
ekstraksi,
isolasi,
dan
karakterisasinya.Hal ini mendorong berkembangnya suatu bidang baru yang disebut
kemotaksonomi
(chemotaxonomy)
atau
sistematik
kimia
(chemosystematic) yang mengarah ke pembagian kandungan tumbuhan berdasarkan taksa tumbuhan (plant taxa). Dengan demikian kandungan
10
tumbuhan dianggap sebagai tanda bagi evolusi dan klasifikasi tumbuhan (Wiryowidagdo, Sumali: 2008). Ekstraksi adalah proses penarikan komponen/ zat suatu simplisia dengan menggunakan pelarut tertentu. Pemikiran metode ekstraksi senyawa bukan atom dipergunakan oleh beberapa faktor, yaitu sifat jaringan tanaman, sifat kandungan zat aktif serta kelarutan dalam pelarut yang digunakan.Prinsip ekstraksi adalah melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non polar dalam pelarut non polar. Secara umum ekstraksi dilakukan secara berturut – turut mulai dengan pelarut non polar (n – heksan), lalu pelarut yang kepolarannya menengah (diklor metan atau etil asetat) kemudian pelarut yang bersifat polar (metanol atau etanol) (Harborne.I.B, 1996). Tabel 2 : Indeks Polaritas Pelarut Pelarut
Indeks Polaritas (P)
Heksan (C6H14)
0
Toluene (C3H8)
2,4
Dietileter (C4H10O)
2,8
Diklorometan (CH2Cl2)
3,1
Butanol (C4H9OH)
3,9
Kloroform (CHCl3)
4,1
Etil asetat (C2H5COOCH3)
4,4
Aseton (CH3COCH3)
5,1
Metanol (CH3OH)
5,1
Etanol (C2H5OH)
5,2
Air (H2O)
9,0
Sumber : Fessenden et al: 1997
11
Ekstraksi digolongkan kedalam dua bagian besar berdasarkan bentuk fase yang diekstraksi cair – cair dan ekstraksi cair padat, ekstraksi cair padat terdiri dari beberapa cara yaitu maserasi, perkolasi, refluks dan sokhletasi. D. Ekstraksi dengan Metode Sokletasi
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah sokletasi.Metode sokletasi ini dipilih karena pelarut yang digunakan lebih sedikit (efesiensi bahan) dan larutan sari yang dialirkan melalui sifon tetap tinggal dalam labu, sehingga pelarut yang digunakan untuk mengekstrak sampel selalu baru dan meningkatkan laju ekstraksi serta waktu yang digunakan lebih cepat. Adapun prinsip sokletasi ini adalah penyaringan yang berulang – ulang sehingga hasil yang didapat sempurna dan pelarut yang digunakan relatif sedikit.Bila penyaringan ini telah selesai, maka pelarutnya diuapkan kembali dan sisanya adalah zat yang tersari.Metode sokletasi menggunakan suatu pelarut yang mudah menguap dan dapat melarutkan senyawa organik yang terdapat pada bahan tersebut.Metode sokletasi merupakan penggabungan antara metoda maserasi dan perkolasi. Ekstraksi komponen kimia Biji Kluwak dengan cara Biji Kluwak yang telah kering ditimbang, dimasukkan kedalam selongsong dan ditambah dengan etanol dipasangkan pada labu alas bulat yang telah berisi cairan penyari sebanyak ¾ dari labu alas bulat kemudian dipasangkan pada kondensor setelah itu diberikan vaselin dan Bunsen dinyalakan bersamaan dengan air yang masuk melalui pipa masuk dan keluar melalui pipa keluar. Proses ini berlangsung secara berkesinambungan hingga diperoleh ekstrak cair (Ziska, dkk: 2012).
12
E. Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi adalah metode yang dapat digunakan untuk memisahkan dua atau lebih senyawa dalam suatu campuran. Kromatografi dapat diklasifikasikan berdasarkan cara pemisahannya, yaitu adsorpsi, partisi, pertukaran ion, dan penetrasi pori (Christian: 2004). Kromatografi lapis tipis (KLT) termasuk dalam kromatografi adsorpsi. Senyawa yang dipisahkan akan terjerap dalam fase diam berupa padatan atau ikut mengalir bersama fase gerak yang berwujud cair. Fase diam pada KLT umumnya disangga oleh pelat alumunium atau plastik. Hampir semua bahan yang dapat digunakan sebagai fase diam dalam kromatografi kolom dapat digunakan sebagai fase diam pada KLT (Christian : 2004). Kromatografi Lapis Tipis (KLT) merupakan salah satu analisis kualitatif dari suatu sampel yang ingin dideteksi dengan memisahkan komponen-komponen
sampel
berdasarkan
perbedaan
kepolaran.Adapun
prinsip kerjanya yaitu memisahkan sampel berdasarkan perbedaan kepolaran antara sampel dengan pelarut yang digunakan. Teknik ini biasanya menggunakan fase diam dari bentuk plat silika dan fase geraknya disesuaikan dengan jenis sampel yang ingin dipisahkan. Larutan atau campuran larutan yang digunakan dinamakan eluen. Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan, atau kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas).Fase gerak mengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalam
13
campuran.Komponen-komponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda.campuran pelarut pengembang dan fasa diamnya dapat berupa serbuk halus yang berfungsi sebagai permukaan penyerap (kromatografi cair-padat) atau berfungsi sebagai penyangga untuk lapisan zat cair (kromatografi caircair). Fasa diam pada KLT sering disebut penyerap walaupun berfungsi sebagai penyangga untuk zat cair di dalam sistem kromatografi caircair.Hampir segala macam serbuk dapat dipakai sebagai penyerap pada KLT, contohnya silika gel (asam silikat), alumina (aluminium oksida), kiselgur (tanah diatomae) dan selulosa. Silika gel merupakan penyerap paling banyak dipakai dalam KLT (Christian: 2004). F. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
KLT Preparatif dapat digunkaan untuk memisahkan bahan dalam jumlah gram, namun sebagian besar pemakaian hanya dalam jumlah milligram (Kristanti, 2008).Seperti halnya KLT secara umum, KLT Preparatif juga melibatkan fase diam dan fase gerak. Dimana fase diamnya adalah sebuah plat dengan ukuran ketebalan bervariasi. Untuk jumlah sampel 10-100 mg, dapat dipisahkan dengan mengunakan KLT Preparatif dengan adsorben silika gel atau aluminium oksida, dengan ukuran 20x20 cm dan tebal 1 mm, jika tebalnya di dua kalikan, maka banyaknya sampel yang dapat dipisahkan bertambah 50%, seperti halnya KLT biasa, adsorben yang paling umum digunakan pada KLT Preparatif adalah silika gel (Kristanti: 2008). Sebelum ditotolkan pada plat KLT Preparatif, sampel dilarutkan terlebih dahulu dalam sedikit pelarut. Pelarut yang baik adalah pelarut yang
14
mudah menguap, misalnya n-heksana, diklorometana atu etil asetat. Karena jika pelarut yang digunakan tidak mudah menguap, maka akan terjadi pelebaran pita. Konsentrasi sampel juga sebaiknya hanya 5-10%. Sampel yang ditotolkan harus berbentuk pita yang sesempit mungkin karena baik tidaknya pemisahan juga bergantung pada lebarnya pita (Kristanti: 2008). Setelah plat KLT Preparatif dielusi, pita yang kedudukannya telah diketahui dikerok dari plat. Selanjutnya senyawa harus diekstraksi dari adsorben dengan pelarut yang sesuai (5 ml pelarut untuk 1 gram adsorben).Diupayakan untuk menggunakan pelarut yang paling nonpolar yang mungkin.Harus diperhatikan bahwa makin lama senyawa kontak dengan adsorben, maka makin besar kemungkinan senyawa tersebut mengalami peruraian.Selanjutnya ekstrak yang diperoleh disaring menggunakan corong berkaca masir atau menggunakan membran. Kelebihan dari penggunaan KLT Preparatif adalah biaya yang digunakan
murah
dan
memakai
peralatan
paling
dasar.
Sementara
kekurangannya antara lain : adanya kemungkinan senyawa yang diambil dari plat adalah senyawa beracun, waktu yang diperlukan dalam proses pemisahan cukup panjang ,adanya pencemar setelah proses ekstraksi senyawa dari adsorben dan biasanya rendemen yang diperoleh berkurang dari 40%-50% dari bahan awal (Kristanti: 2008). G. KLT 2 Dimensi
KLT 2 arah atau 2 dimensi ini bertujuan untuk meningkatkan resolusi sampel ketika komponen – komponen solut mempunyai karakteristik kimia
15
hampir sama, karenanya nilai R f juga hampir sama, sebagaimana dalam asam – asam amino. Selain itu, 2 sistem fase gerak yang sangat berbeda dapat digunakan
secara
berurutan
pada
suatu
campuran
tertentu
sehingga
memungkinkan untuk melakukan pemisahan analit yang mempunyai tingkat polaritas yang hampir sama. KLT dua dimensi dilakukan dengan melakukan penotolan sampel disalah satu sudut lapisan lempeng tipis dan mengembangkannya sebagaimana biasa dengan eluen pertama. Lempeng kromatografi selanjutnya dipindahkan dari chamber pengembangan dan eluen dibiarkan menguap dari lempeng. Selanjutnya, lempeng dimasukkan dalam chamber yang menggunakan eluen kedua
sehingga
pengembangan
yang
pertama.
Suksesnya
pemisahan
tergantung pada kemampuan untuk memodifikasi selektifitas eluen kedua dibandingkan dengan selektifitas eluen pertama (Rahman, Abdul: 1985). H. Spektrofotometri
Spektrofotometri merupakan suatu metode analisa yang didasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan berwarna pada panjang gelombang spesifik dengan mengguankan monokromator prisma atau
kisi
difraksi
dengan
detector
Fototube.
Dalam
analisis
cara
spektrofotometri terdapat tiga daerah panjang gelombang elektromagnetik yang digunakan, yaitu daerah UV (200 – 380 nm), daerah Visible (380 – 700 nm), daerah Inframerah (700 – 3000 nm). Prinsip kerja spektrofotometri berdasarkan hokum Lambert-Beer, bila cahaya monokromatik (I0),melalui suatu media (larutan), maka sebagian
16
cahaya tersebut diserap (Ia), sebagian dipantulkan (I r ), dan sebagian lagi dipancarkan (It). Transmitans adalah perbandingan intensitas cahaya yang di transmisikan ketika melewati sampel (It) dengan intensitas cahaya mula-mula sebelum melewati sampel (Io). Persyaratan hokum Lambert-Beer antara lain : Radiasi yang digunakan harus monokromatik, rnergi radiasi yang di absorpsi oleh sampel tidak menimbulkan reaksi kimia, sampel (larutan) yang mengabsorpsi harus homogeny, tidak terjadi flouresensi atau phosphoresensi, dan indeks refraksi tidak berpengaruh terhadap konsentrasi, jadi larutan harus pekat (tidak encer). Aspek – aspek praktis spektrofotometri UV/ Visible yang perlu diperhatikan (G. Watson, David : 2010) : 1. Perhatian harus diberikan untuk tidak menyentuh permukaan optik sel sampel dengan jari – jari karena dapat menyebabkan absorbans yang besar. Permukaan optik sel tertentu dapat dibersihkan dengan tisu. 2. Presisi panjang jalur sel tersebut penting. Toleransi untuk sel – sel yang bermutu baik lebih kurang 0,01 mm untuk panjang jalur. Untuk akurasi kuantitatif maksimum, sel yang sama harus digunakan untuk pengukuran baku dan sampel. Sel tersebut harus selalu menghadap kearah yang sama didalam suatu penahan sel untuk memastikan bahwa semua efek optik sel yang identik dengan pengukuran blangko dan sampel. 3. Air destilasi adalah pelarut yang ideal, tetapi tidak cocok untuk banyak senyawa organik. Metanol dan etanol adalah pelarut yang ideal yang
17
cocok pada urutan berikutnya tetapi tidak dapat digunakan dibawak panjang gelombang 210 nm. 4. Pelarut yang digunakan untuk melarutkan sampel, konsentrasi, pH, dan suhu dapat dapat memengaruhi posisi dan intensitas pita serapan molekul. Faktor – faktor ini harus dikendalikan sedapat mugkin. Pemuaian pelarut organik akibat suhu dapat menyebabkan perubahan dalam pembacaan, seperti yang dapat terjadi pada penguapan maka sel sampel harus tertutup, terutama jika yang digunakan adalah pelarut organic. 5. Idealnya absorbans yang diukur harus berada dalam rentang 0,4 – 1,0 untuk mencegah berada diluar rentang linear instrument. 6. Penghamburan menimbulkan peningkatan absorbans yang nyata dan disebabkan oleh partikel yang tersuspensi didalam larutan. Larutan sampel harus bebas dari partikelnya.
BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian observasi laboraturium yang bertujuan untuk mengidentifikasi senyawa glikosida pada ekstrak Biji Kluwak. B. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian telah dilaksanakan di Laboraturium Farmakognosi Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Makassar pada bulan April 2014. C. Alat dan Bahan
1. Alat yang digunakan : Seperangkat Alat Soklet, Botol Semprot, Chamber, Kertas Saring, Batang Pengaduk, Timbangan Analitik, Rotavapor, Pinset, Pensil, Waterbath, Corong Pisah, Oven Dan Beker, Lempeng Silika Gel F 254, Lempeng Kaca, Pipet Tetes, Vial, Spektrofotometer UV/ Vis Dan Inframer ah. 2. Bahan yang digunakan: Aluminium foil, aquadest, asam sulfat (H 2SO4) 10%, etil astat, metanol, etanol, n – Butanol, dietil eter n-heksan dan Biji Kluwak ( Pangium edule Reinw). D. Cara Kerja
1. Pengambilan sampel Sampel berupa Biji Kluwak ( Pangium edule Reinw) yang cukup tua tapi belum masak diambil di Desa Ganra Kabupaten Soppeng.
18
19
2. Pengolahan sampel Biji Kluwak ( Pangium edule Reinw) diambil, dicuci hingga bersih, dipotong kecil – kecil kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 40º 50º selama 4 hari. 3. Ekstraksi Sampel a. Ekstraksi Biji Kluwak dengan pelarut metanol (MeOH) Sampel yang telah kering diekstraksi menggunakan pelarut metanol 300 ml dengan metode sokletasi.Ditimbang sampel 100 gram, dimasukkan kedalam klonsom, dipasang alat kondensor dan labu alas bulat yang telah diisi dengan metanol 300 ml, dipanaskna diatas waterbath
dengan
suhu
pemanasan
sedang.Proses
ekstraksi
berlangsung sampai 20 siklus.Selanjutnya diangkat dan dikeluarkan dari labu alas bulat, ekstrak metanol diuapkan dengan rotavafor hingga kental. Ekstrak metanol Biji Kluwak yang diperoleh selanjutnya diupkan diatas waterbath hingga kering. b. Ekstraksi sampel dengan pelarut dietil eter (Et 2O) Ekstrak
kering
yang
diperoleh
dari
proses
ekstraksi
sebelumnya, disuspensikan dengan H 2O 50 ml, dimasukkan kedalam corong pisah, ditambahkan pelarut eter dan ekstraksi dilakukan sebanyak 3 kali masing – masing 10 ml.
20
c. Ekstraksi sampel dengan pelarut n-Butanol. Fase air selanjutnya diekstraksi dengan pelarut n-butanol. Proses ekstraksi ini dilakukan sebanyak 3 kali masing – masing 10 ml. Ekstrak
n-butanol
selanjutnya
diuapkan
hingga
kering
diatas
waterbath. 4. Identifikasi senyawa Glikosida secara KLT Ekstrak n-butanol diidentifikasi kandungan senyawa glikosidanya dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dengan langkah – langkah sebagai berikut: a. Pengaktifan lempeng Kromatografi Lapis Tipis Lempeng silika gel F254 diaktifkan dengan cara dipanaskan dalam oven pada suhu 50º - 60º selama 30 menit, lalu dikeluarkan dan siap digunakan. b. Pembuatan Cairan Pengelusi Cairan pengelusi yang digunakan untuk mengidentifikasi senyawa glikosida pada sampel yaitu: etil asetat: etanol : air dengan perbandingan 10 ml : 2 ml : 1 ml dimasukkan kedalam chamber. c. Penjenuhan Eluen Kertas saring dipotong memanjang dimasukkan dari dasar chamber yang berisi cairan pengelusi hingga menjulur keluar kemudian ditutup.Eluen atau cairan pengelusi yang telah dimasukkan kedalam chamber dikatakan jenuh bila seluruh bagian kertas saring menjulur keluar telah terbasahi.
21
d. Penotolan sampel pada lempeng KLT Dibuat garis lurus pada lempeng KLT 1 cm (dari batas bawah) dan 0,5 cm (dari batas atas). Ekstrak n-butanol dilarutkan dengan eluen kemudian ditotolkan pada batas bawah lempeng, dilakukan elusi sampai batas atas telah ditentukan. 5. Fraksinasi ekstrak n-butanol menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif Fraksinasi dilakukan untuk mendapatkan isolat (ekstrak) murni glikosida dari ekstrak n-butanol Biji Kluwak. Sampel ditimbang 1 gram, dilarutkan dengan eluen (etil asetat :etanol : air), ditotolkan pada lempeng kaca, dimasukkan kedalam chamber, dielusi selama beberapa menit hingga terjadi penyerapan pada eluen sampai batas atas lempeng, diangkat dan untuk mendeteksi bercak pada lempeng dilakukan dengan menggunakan lampu UV pada panjang gelombang 254 nm, bercak ditandai dengan menggunakan pensil, selanjutnya dikerok masing – masing bercak dan ditampung kedalam vial. Setiap bercak ditampung dalam bentuk fraksi – fraksi.Selanjutnya setiap fraksi diidentifikasi dengan Kromatografi Lapis Tipis 2 dimensi. untuk menetukan fraksi yang memberikan efek noda tunggal (senyawa murni).
22
6. KLT 2 Dimensi Pada pengidentifikasian KLT 2 Dimensi, dibuat dua eluen dengan perbandingan yang berbeda yaitu (Etil asetat : Etanol : Air) dengan perbandingan eluen pertama (15 ml : 2 ml : 1 ml) dan eluen kedua (8 ml : 2 ml : 1 ml). Selanjutnya fraksi yang telah diperoleh masing – masing ditotolkan pada sudut lempeng yang telah digaris, kemudian dimasukkan kedalam chamber yang berisi eluen pertama setelah dielusi sampai batas atas, selanjutnya dipindahkan ke chamber yang berisi eluen kedua dengan posisi yang dibalik. 7. Penentuan kandungan glikosida dalam ekstrak n-butanol Biji Kluwak menggunakan spektrofotomtri UV-Vis dan Inframerah. Fraksi senyawa murni dilanjutkan dengan identifikasi pada spektrofotometri UV/ Vis dan Inframerah.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Hasil Penelitian
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, maka diperoleh hasil sebagai berikut: Tabel 3 : Hasil Kromatografi Lapis Tipis
Jumlah noda UV H2SO4 1 1
Ekstrak n-butanol
4
4
Eluen CHCl3-MeOH-H2O (16 : 6 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (10 : 2 : 1)
Ket: Hasil KLT menunjukkan bahwa eluen EtOAc-EtOH-H 2O(10 : 2 : 1) dapat memisahkan noda dengan baik
Tabel 4 : Hasil Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Ekstrak n-butanol
Jumlah noda UV 4
Tabel 5 : Hasil KLT 2 Dimensi
Fraksi F1 F2 F3 F4
Jumlah noda UV 1 1 2 2 2 2 3 3
H2SO4 1 1 2 2 2 2 3 3
Eluen EtOAc-EtOH-H2O (15 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (8 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (15 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (8 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (15 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (8 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (15 : 2 : 1) EtOAc-EtOH-H2O (8 : 2 : 1)
Ket: Hasil KLT 2 Dimensi menunjukkan bahwa F1 adalah senyawa tunggal/ murni
23
24
Tabel 6: Hasil identifikasi senyawa glikosida secara Spektrofotometri Ultraviolet
No. 1. 2. 3. 4.
Fraksi (F) F1 F2 F3 F4
Peaks (nm) 0 207 205 204
Tabel 7: Hasil identifikasi senyawa glikosida secara Spektrofotometri Inframerah
No. 1. 2. 3. 4. 5. 6.
Bilangan gelombang (cm- ) Peak Pada Pustaka 3448,72 3570 - 3200 2926,01 2924 1745,58 1757 1649,58 1680 - 1600 1575,64 1587 1462,04 1471
Gugus Fungsi OH (hidroksi) C – H alifatik C = O ester C=C Benzen CH 2 – CH3(metil metilen)
Ket: Hasil Spektrofotometri Inframerah Fraksi Satu (F1)
B. Pembahasan
Telah dilakukan penelitianIdentifikasi Senyawa Glikosida Pada Ekstrak Biji Kluwak ( Pangium eduleReinw ) Dari Desa Ganra Kabupaten Soppeng. Senyawa glikosida dapat diidentifikasi setelah dilakukan proses ekstraksi. Metode ekstraksi yang digunakan adalah metode sokletasi,metode soklet memungkinkan terjadinya ekstraksi berkesinambungan, sehingga senyawa glikosida dapat larut sempurna, disamping itu metode ini adalah tergolong cara dingin agar senyawa glikosida yang terkandung pada Biji Kluwak tidak rusak.
Sebelum diekstraksi dengan pelarut metanol, terlebih dahulu diekstraksi dengan pelarut n-heksan selama 30 menit, ini bertujuan untuk memisahkan kandungan minyak dari sampel karena Biji Kluwak banyak mengandunglemak.
25
Selanjutnya,sampel diekstraksi dengan pelarut metanol dan diperoleh ekstrak kering 6,65 gram. Kemudian ekstrak ini diekstraksi kembali dengan pelarut dietil eter dan H2O, sisa H2O kemudian diekstraksi dengan pelarut n butanol, ini dilakukan karena senyawa glikosida bersifat polar.
Pada pemisahan sisa H2O dari pelarut dietil eter yang selanjutnya diekstraksi dengan pelarut n-butanol terdapat busa, ini merupakan salah satu cara mengidentifikasi adanya kandungan senyawa glikosida pada Biji Kluwak.
Kemudian, ekstrak n-butanoldikeringkan diatas waterbath dan didapati ekstrak kering sebanyak 2,25 gram, selanjutnya dilakukan KLT uji pendahuluan untuk mengetahui eluen yang cocok dilakukan untuk KLT Preparatif.
Pada KLT uji pendahuluan dengan komposisi berbagai eluen, didapati nilai Rf 0,56 pada eluen Kloroform : metanol : air (16 : 6 : 1) dan Rf 0,91, Rf 0,76, Rf 0,52, dan Rf 0.37 pada eluen Etil asetat : etanol : air (10 : 2 : 1). Berdasarkan dari hasil diatas maka dapat disimpulkan bahwa eluen yang dapat digunakan untuk KLT Preparatif yaitu eluen Etil asetat : etanol : air (10 : 2 : 1).
Pada KLT preparatif diperoleh 4 fraksi masing – masing F1, F2, F3 dan F4 selanjutnya dari fraksi – fraksi tersebut dilakukan KLT dua dimensi untuk mengetahui dari keempat fraksi tersebut yang mana merupakan senyawa murni dan hasil dari KLT dua dimensi yang dilakukan dengan modifikasi eluen menunjukkan bahwa pada fraksi satu (F1) merupakan senyawa tunggal atau
26
murni, dan dapat disimpulkan bahwa hasil dari KLT dua dimensi dapat dilanjutkan dengan analisis spektrofotometri UV/ Vis dan Inframerah.
Data spektrum senyawa hasil isolasi menggunakan Spektrofotometri Ultraviolet menunjukkan adanya serapan pada panjang gelombang (λ) masing – masing pada fraksi F2, F3 dan F4 yaitu 207, 205 dan 204 nm, hasil ini mengidentifikasi bahwa pada F2, F3 dan F4 terdapat suatu senyawa glikosida yang sama jika dilakukan pengidentifikasian lebih lanjut, namun pada fraksi satu (F1) yang diidentifikasi tidak nampak pada spektrofotometri ultraviolet, namun karena pada KLT dua dimensi menunjukkan bahwa pada F1 merupakan senyawa tunggal atau senyawa murni maka dilakukan analisa lanjutan pada Spektrofotometri Inframerah.
Data
spektrum
memperlihatkan
pada
hasil bilangan
analisa
spektrofotometri
gelombang
v
max
inframerah
3448,72
cm -1
mengidentifikasi adanya gugus Hidroksil (OH), pada bilangan gelombang v max 2926,01 cm -1 merupakan serapan C-H alifatik, pada bilangan gelombang v max 1745,58 cm -1 mengidentifikasi ( C = O) merupakan ester, pada bilangan gelombang v max 1649,58 (C = C) merupakan senyawa karbonil, pada bilangan gelombang v max 1575,64 mengidentifikasi adanya benzen dan pada pada bilangan gelombang v max 1462,04 mengidentifikasi CH 2 – CH3 (metilmetilen). Gambar spektrofotometri inframerah mengidentifikasi bahwa hasil isolasi mengandung gugus Hidroksil (OH), C-H alifatik,ester, senyawa karbonil, benzen dan metil-metilen.
27
Berdasarkan data spektrum serapan inframerah pada Fraksi satu (F1) menunjukkan bahwa senyawa pada F1 tersebut dapat menyerap radiasi UV – Vis, sehingga unuk pemastian perlu dilakukan pengkajian ulang. Demikian pula pada F2, F3, dan F4 perlu dilakukan pengkajian ulang karena berdasarkan hasil spektrum UV – Vis perbedaan panjang gelombang pada fraksi tersebut hampir sama menunjukkan adanya suatu senyawa yang sama pada fraksi tersebut dan dugaan ini juga diperkuat pada hasil KLT 2 Dimensi dimana pada masing – masing fraksi F2, F3 dan F4 bukan merupakan senyawa tunggal/ murni.
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, maka diperoleh hasil isolasi senyawa kimia terhadap Biji Kluwak sebanyak 4 Fraksi, Fraksi 1 merupakan senyawa murni, berdasarkan hasil identifikasi Spektrofotometri UV dan Spektrofotometri Inframerah menggambarkanadanyagugus OH (hidroksil), C – H alifatik, C = O ester, C = C, Benzen dan CH2 – CH3(metil metilen).Sehingga dapat dinyatakan bahwa senyawa tersebut merupakan senyawa glikosida. B. Saran
Ditinjau dari hasil yang diperoleh maka peneliti mengharapkan dimasa yang akan datang dapat dilakukan penelitian lanjutan karena adanya suatu senyawa yang sama pada F2, F3 dan F4 dan penelitian lanjutan terhadap fraksi tersebut melalui elusidasi spektro lanjutan.
28
DAFTAR PUSTAKA
Aprianti, Dian, 2011, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Biji Picung (Pangium edule Reinw) dan Pengaruhnya Terhadap Stabilitas Fisiko Kimia, Mikrobiologi dan Sensori Ikan Kembung (Rastrelliger neglectus), [Skripsi], Jakarta: Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Astuty, Widya, 2012, Kromatografi Lapis Tipis, (https://www.google.com) , diakses tanggal 6 Januari 2014. Eskaria Chandra, 2008, Ekstraksi Lemak Kasar Menggunakan Soxhlet Extractor, (http://eskariachandra.wordpress.com) diakses tanggal 14 Januari 2014. Frianka, Hertyn, 2010, Pengertian Glikosida Dan Manfaatnya (http://hertynfrianka.blogspot.com) diakses tanggal 06 Januari 2014 . Harborne, J.B., 1996 , Metode Fitokimia,Terbitan Kedua, ITB, Bandung, halm1-7. Ibrahim, Ismail, 2009, Identifikasi Komponen Kimia Ekstrak Daun Keluwek (Pangium Edule Reinw) Dari Lajoa Kabupaten Soppeng, Poltekkes Makassar : Makassar. Kristianti, 2008, Kromatografi Lapis Tipis,(http://mypharmacyworld.blogspot.com) diakses tanggal 21 Januari 2014. Pratinida, Intan, 2008, Pemisahan Dan Pencirian Senyawa Aktif Daun Kepayang Dan Pengaruhnya Pada Mortalitas Ulat Kubis Instar III , [Skripsi], Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor. Rahman, Abdul, 1985, Kromatografi Untuk Analisis Obat, Ghalia Indonesia : Bandung, Halm 49 – 51. Stahl, Egon, 1985, Analisis Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, ITB : Bandung. Sudjadi dkk, 2008, Analisis Kuantitatif Obat, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Sudjadi, 1983, Penetuan Struktur Senyawa Organik, Ghalia Indonesia: Bandung. Sumiar, Pratiwi dkk, 2006, Telaah Fitokimia Kluwak (Pangium edule Reinw), [Skripsi], Fakultas Farmasi, Institut Teknologi Bandung:Bandung.
29
30
Watson, David G., 2010, Analisi Farmasi, Edisi 2, EGC : Jakarta, Halm 106 – 112. Wiryowidagdo, sumali., 2008, Kimia dan Farmakologi Bahan Alam, Edisi 2, EGC : Jakarta. Halm 28 – 34. Ziska, dkk, 2012, Laporan Farmakognos II , Poltekkes Makassar : Makassar, Halm 3 – 4.
LampiranI: Skema Kerja
Sampel Biji Kluwak Ekstraksi MeOH
Ekstrak MeOH biji Kluwak
Ampas
Disuspensi dengan H2O Diekstraksi dengan Et2O
Fase H2O
Ekstrak Et2O
Ekstraksi n-BuOH/ H2O
Fase H2O
Ekstrak n-BuOH Fraksinasi
KLT 2 Dimensi Sen awa Murni
Spektrofotometri UV/ Vis dan Inframerah
31
32
Lampiran II:Metode Perhitungan Nilai Rf tiap noda pada KLT
1
2
a b
3
R f =
=
Catatan : Nilai “b” berbeda untuk setiap noda.
32
33
Lampiran III . Daftar nilai R f dan warna noda KLT
Ekstrak n-butanol Tabel 8: Nilai Rf ekstrak n-butanol dengan eluen CHCl3-MeOH-H2O (16 : 6 : 1)
Nilai R f Eluen CHCl3-MeOH-H2O (16 : 6 : 1)
UV
Warna Noda
0.56
hijau
H2SO4 10 % 0.56
Wrana Noda Ungu
Tabel 9: Nilai Rf ekstrak n-butanol dengan eluen EtOAc-EtOH-H2O (10 : 2 : 1)
Nilai R f Eluen UV EtOAc-EtOH-H2O (10 : 2 : 1)
0.91 0,76 0,52 0,37
Warna Noda
H2SO4 10 %
Warna Noda
0.91 0,76 0,52 0,37
Ungu Coklat muda Coklat muda Coklat muda
33
34
Lampiran IV : Hasil Spektrum UV-Vis
34
35
Lampiran V: Hasil Spektrofotometri Inframerah
35
36
Lampiran IV. Gambar
A. Proses Ekstraksi
Gambar 1:Pengeringan Sampel Biji Kluwak
Gambar 2:Ekstraksi Metode Soklet
B. Pengujian Busa dan pemisahan ekstrak n-butanol dengan sisa H 2O
Gambar 3:Pengujian Busa
Gambar 4: Ekstrak n-butanol dan sisa H2O
36
37
C. Pengeringan ekstrak
Gambar 5: Pengeringan ekstrak n butanol
Gambar 6:Penimbangan ekstrak n butanol
D. Kromatografi Lapis Tipis
Gambar 7: Ekstrak kering n-butanol
Gambar 8:Penotolan lempeng/ plat KLT
38
Gambar 9: Ekstrak n-Butanol dengan eluen CHCl3-MeOH-H2O (16 : 6 : 1)
E.
Gambar
10:Ekstak n-Butanol denganEtOAc-EtOH-H2O
(10 : 2 : 1)
KLT Preparatif
Gambar11:Penotolan pada Plat Kaca KLT
Gambar 12:Hasil bercak noda pada plat kaca KLT yang tampak pada UV 254 nm
39
Gambar 13:Hasil kerok plat kaca KLT
F.
Gambar 14:Fraksi KLT Preparatif
KLT 2 Dimensi
Gambar 15:Fraksi satu (F1)
