PRACTICA 1 Carbohidratos

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA Nª 1 PRUEBAS CUALITATIVAS PARA CARBOHIDRATOS

OBJETIVOS.   

Reconocer la presencia de carbohidratos en una muestra problema mediante la prueba de molish. Diferenciar carbohidratos reductores de no reductores por su comportamiento frente al reactivo de Benedict. Realizar ensayos cualitativos para el reconocimiento de carbohidratos específicos.

FUNDAMENTOS TEÓRICOS. ácido sulfúr sulfúrico ico concen concentra trado do hidrol hidroliza iza los enlac enlaces es glico glicosíd sídico icoss para para dar PRUE PRUEBA BA DE MOLI MOLISH SH: El ácido monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados. Estos productos se combinan con !naftol sulfonato" sulfonato" originando un comple#o púrpura. Esta Esta reacci$n es general para los carbohidratos carbohidratos pero algunos otros compuestos orgánicos dan tambi%n furfural con ácido sulfúrico concentrado.

PRUEBA DE BENEDICT: Es una modificaci$n de la prueba prueba de felhing" felhing" introducida por Benedict. En ella se se usa únicamente una soluci$n" lo cual lo hace mucho más simple con la venta#a adicional de que el reactivo es más estable que el de felhing. Esta prueba solo la dan los azucares reductores . reactivo de Barfoed Barfoed es d%bilmen d%bilmente te ácido ácido y solamente solamente puede puede ser reducido reducido por PRUEBA DE BARFOED: reactivo monosacáridos. &i se de#a hervir por largo tiempo e'iste la posibilidad de hidrolizar los disacáridos dando así reacciones falsamente positivas. El precipitado de o'ido cuproso es menos denso que en los m%todos  previos y se recomienda recomienda de#ar el tubo en reposo hasta que que el precipitado sedimente. sedimente.

PRUEBA PRUEBA BIAL BIAL PARA PENTOSAS. PENTOSAS. (uando se calientan las pentosas en ácido clorhídrico concentrado se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones f)rricos para dar un color verde azuloso.

PRUEBA DE SELLIWANOFF. *as cetosas deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados del furfur furfural al que se conden condensan san con resorc resorcino inoll para para forma formarr un comple comple#o #o rosado rosado++ por por lo tanto tanto debe debe evita evitarse rse un calentamiento prolongado de la muestra que se está estudiando.

PRUEBA PARA SACAROSA. *a sacarosa es el único disacárido común no reductor y por lo tanto no reduce las soluciones alcalinas de cobre. Esta es hidrolizada en soluci$n ácida y luego se ensayan la glucosa y la fructosa resultante .

PRUEBA PARA POLISACÁRIDOS. *os polisacáridos contienen s$lo un grupo reductor por varios cientos o más residu residuos" os" así que en la prácti práctica" ca" no son reductor reductores. es. *a hidr$ hidr$lis lisis is ácida ácida libera libera los los monos monosacá acárid ridos os constituyentes constituyentes que luego son ensayados.

MATERIALES Y RECTIVOS

Estufa o calentador -ipetas de  y de /0ml. Bea2ers de /00 y 300ml. /0 tubos de ensayo. -inza para tubos de ensayo 4radilla 4otero -apel tornasol &oluciones de6 glucosa" galactosa" ribosa" arabinosa" &acarosa" lactosa" fructosa" almid$n" leche 8traer de la casa9 *eche 8traer9

Reactivo de ,olish 1cido sulfúrico concentrado Reactivo de Benedict Reactivo de Barfoed. Reactivo de Bial. 1lcohol 1milico. Reactivo de &elli5anoff. 1cido clorhídrico concentrado. 7idr$'ido de sodio /,. &olucion de yodo.

PROCEDIMIENTO

Prue! "e M#$%&': 1gregue  gotas del reactivo de ,olish a / ml de una muestra que contenga carbohidratos 8*eche9. 1:ada cuidadosamente por las paredes del tubo /ml de ácido sulfúrico concentrado" hasta que se formen dos capas. ;bserve cualquier cambio de color en la interfase de los dos líquidos .

Prue! "e Be(e"%)*:
Prue! "e B!r+#e" : min y de#e reposar. *a formaci$n de un precipitado de color ro#o ladrillo indica la  presencia de monosacáridos.

Prue! B%!$ :
Prue! "e S!$$%,!(#++-  Tome  = tubos de ensayo+ adicione al primero 0.ml de soluci$n de fructosa" al segundo 0.ml de soluci$n de arabinosa y al tercero 0.ml de soluci$n de glucosa. 1dicione /ml del reactivo de &elli5anoff a cada tubo. (aliente durante / min en un ba:o de agua hirviendo" la aparici$n de un color ro#o o rosado es prueba positiva para cetosas.

Prue! !r! &!)!r#&! : 1 >. ml de una soluci$n de sacarosa agregue = gotas de ácido clorhídrico concentrado" caliente durante  minutos en un ba:o de agua hirviendo" enfri% y agregue 7idr$'ido de &odio /, hasta que la soluci$n sea neutra o ligeramente alcalina 8prueba con papel tornasol9" divida la soluci$n hidrolizada en dos  porciones y realice por separado las pruebas de Benedict y &elli5anoff. /.

Prue! !r! #$%&!)/r%"#&- (oloque /ml de soluci$n de almid$n" a:ada / gotas de soluci$n de yodo. ;bserve la producci$n de un color azul. (aliente el tubo ?@u% observaA De#e enfriar y observe nuevamente" ?@u% ocurreA E'plique sus observaciones.

CUESTIONARIO /. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas para carbohidratos. >. E'plique los resultados de cada una de las pruebas realizadasA >. E'plique estructuralmente" por que la maltosa es un azúcar reductor y por que el almid$n no lo sus observaciones =. (onsulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo de los carbohidratos. 3. -or qu% la celulosa a pesar de estar formada por mol%culas de glucosa es insoluble en agua. . ?por que la sacarosa es un azúcar no reductorA. (onsulte las posibles estructuras de las muestras  problemas. . (onsulte el fundamento de otras t%cnicas usadas para la determinaci$n de la glucosa en el laboratorio.

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