Manual de Control de Calidad en Microbiologia Clinica

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA EL CEPARIO Métodos de conservación de cepas bacterianas. Mantenimiento del cepario

Cepas ATCC 4. Transporte Transporte de cepas bacterianas

A. SUPER SUPERVISI VISION ON DE PERSONA PERSONAL L 1. Evaluación del personal 1. 2. 3. 4.

Prog Progra rama ma de Doce Docenc ncia ia Evalu Evaluaci ación ón del infor informe me final final Contr Control ol de calida calidad d exte externo rno.. Certificac Certificación ión del Laborato Laboratorio rio de Microb Microbiolo iología. gía.

A. PROF PROFORMAS ORMAS DE REPORTES REPORTES DEL CONTROL CONTROL DE CALIDAD CALIDAD 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Libro Libro de report reporte e de contro controll de calidad calidad de medios medios en en platos. platos. Libro Libro de report reportes es de contro controll de calidad calidad de medios medios en en tubos. tubos. Libro Libro de report reporte e de contro controll de calidad calidad de antisue antisueros ros y reactivos reactivos.. Libro Libro de reporte reporte de contr control ol de calidad calidad de de fórmulas fórmulas lácteas lácteas y mamade mamaderas. ras. Libro Libro de report reporte e de contro controll de calidad calidad de la sangr sangre e de carnero carnero.. Libro de de reporte de control control de calidad de los discos de sensibilidad a los antibióticos. antibióticos. Libro Libro de contr control ol del del cep cepari ario. o.

GLOSARIO DE TERMINOS ESTADISTICOS ESTADISTICOS H- BIBLIOGRAFIA DE REFERENCIA

ANEXO LISTADO DE COMPAÑIAS SUPLIDORAS DE PRODUCTOS MICROBIOLOGICOS.

MANUAL DE CONTROL DE 2CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGIA CLINICA

A. INT INTROD RODUCC UCCION ION El labora laborator torio io clínic clínico o de microb microbio iolog logía ía moder moderno, no, requi requiere ere para para su correcto funcionamiento de un adecuado y constante control de calidad sobre todas las etapas en el recibo, manejo y reporte de especimenes clínicos. En genera generall este este contro controll debe debe identi identific ficar ar,, monito monitorea rearr, evalua evaluarr y aproba aprobar r metodologías relativas al cuidado del paciente. En este contexto el control de calid calidad ad en Micro Microbio biolo logía gía Clínic Clínica a envuel envuelve ve el monito monitoreo reo de los medios medios de cultivos, reactivos, instrumentos, procedimientos y el personal, para asegurar una adecuada práctica en el aislamiento, identificación y caracterización de agentes etiológicos y su correspondiente prueba de susceptibilidad como una guía de la terapia. Un prog progra rama ma de cont contro roll de cali calida dad d debe debe incl inclui uirr adem además ás un Manu Manual al de Procedimientos, validación de metodologías y equipos, el desarrollo de ciclos de educación continuada, elementos de bioseguridad y una supervisión sobre los los repo report rtes es gene genera rado dos. s. En éste éste sent sentid ido o se hace hace énfa énfasi sis s en la corr correc ecta ta valo valora raci ción ón de las las prue prueba bas s de labo labora rato tori rio, o, los los agen agente tes s caus causal ales es de enfermedades, el conocimiento de la flora normal ,la taxonomía bacteriana y la interpretación correcta de las pruebas de susceptibilidad susceptibilidad a los antibióticos.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA El Aseguramiento de la Calidad, es un concepto un tanto más difícil de cuantificar que el control de calidad, ya que su foco es el impacto de las pruebas de laboratorio en el cuidado del paciente. Este control nos indica que tan bueno bueno es nuestr nuestro o trabaj trabajo o y establ establece ece mecan mecanism ismos os para para asegur asegurar ar la generación de información de utilidad clínica rápida y segura. Este concepto incluye entrenamiento y calificación del personal, evaluación de los reportes, rapidez rapidez y segurida seguridad d diagnóst diagnóstica, ica, certifica certificación ción de los laborato laboratorios, rios, controle controles s externos, etc. El Control de Calidad y el Aseguramiento de la Calidad son similares en sus propósitos, aunque su significado y su manera de funcionar sean sean dife difere rent ntes es;; sin sin emba embarg rgo, o, ambo ambos s conc concep epto tos s debe deben n desa desarr rrol olla lars rse e interactivamente interactivamente durante un programa de control de calidad. El control de calidad en el laboratorio tiene como objetivo , que el producto final del trabajo tenga un grado aceptable de seguridad , de conformidad con los limi limite tes s esta establ blec ecid idos os.. Debi Debido do a que que la mayo mayorí ría a de los los resu result ltad ados os en microbiol microbiología ogía son producto producto de interpre interpretacio taciones nes y evaluaci evaluación ón de reaccion reacciones es bioquímicas de seres vivos, donde la capacidad y experiencia del evaluador tienen un gran valor, los cálculos de coeficientes de variación y desviaciones estándares que son parte de funciones analíticas, tienen poca aplicación en el laboratorio de microbiología. Es por ello que algunos expertos consideran que el control de calidad en microbiología microbiología es mas un arte que una ciencia.

UN PROGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD DEBE CONTAR CON LOS SIGUIENTES ELEMENTOS MÍNIMOS: LAS PRUEBAS Y LOS PROCEDIMIENTOS. Verificación y validación del test. Manual de procedimientos. Mantenimiento de reportes y libros de registros. Evaluación del personal. Controles externos. El prog progra rama ma eval evalúa úa y docu docume ment nta a el dese desemp mpeñ eño o de todo todos s los los aspe aspect ctos os de un procedimiento. Esto incluye la calidad del espécimen, la eficiencia de los reactivos, medios e instrumentos y verifica los resultados del test por errores. El Manual de Procedimientos del laboratorio de microbiología, debe contener todos los aspectos relevantes en la operación del laboratorio y la generación de reportes que tienen que ver con la salud de los pacientes. El factor más importante en la generación de reportes microbiológicos de calidad corres correspon ponde de al person personal. al. El person personal al del labora laborator torio io de microb microbiol iologí ogía a debe debe ser ser escogido en base a sus cualidades académicas y personales. Debe poseer habilidad para para ejecut ejecutar ar prueba pruebas s comple complejas jas,, la mayorí mayoría a de las veces veces manual manuales, es, inter interés és en mantenerse al día en las ejecutorias y taxonomía bacteriana, excelente concepto de protección de grupo y de bioseguridad en general.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA El control de calidad en resumen, es un elemento vital en el laboratorio, ya que ayuda en la confiabi confiabilida lidad d de las pruebas, pruebas, su reproduc reproducibil ibilidad idad,, asegura asegura la calidad calidad de los materiales, reactivos y equipos empleados, mejora la auto confianza del personal, detecta fallas que pueden reflejarse en el informe de resultados y en general provee un entorno de excelencia en todos los aspectos del trabajo. Conoci Conociend endo o los elemen elementos tos básico básicos s que que debe debe posee poseerr un progra programa ma de contro controll de calidad moderno, los albores de un nuevo milenio nos obligan a la confección de un Manual que pueda ser una guía para el personal dedicado a la microbiología clínica en el país, una disciplina de las Ciencias del Laboratorio en constante evolución que marcha a la par del progreso de la medicina moderna. En aten atenci ción ón a los los inmi inmine nent ntes es camb cambio ios s glob global ales es que que trae traerá rán n los los años años futu futuro ros, s, presentamos a la consideración de todos los colegas el siguiente Manual de Control de Calidad en Microbiología, el cual esperamos llene las expectativas y necesidades en nuestros laboratorios. laboratorios.

A. PREP PREPARACI ARACION ON DE DE LAS LAS MUESTRAS MUESTRAS CLINICAS CRITERIOS PARA LA OBTENCION, TRANSPORTE Y RECIBO DE MUESTRAS CLINICAS: En términos de la efectividad del laboratorio de microbiología, microbiología, nada es más importante que la apropiada selección, colección y transporte de las muestras clínicas. Por ello ello todo todo el perso personal nal que tiene tiene que ver con estas estas respon responsab sabili ilidad dades, es, debe debe comprender lo determinante que es el mantenimiento de la calidad de la muestra, en la evaluaci evaluación ón e informe informe de un espécime espécimen n clínico. clínico. Es responsa responsabili bilidad dad del laborator laboratorio io provee proveerr ésta ésta inform informaci ación ón en forma forma clara clara y que sea fácilm fácilment ente e incorp incorpora orada da en la metodología de trabajo de todas las salas de atención y hospitalización , el cual debe estar siempre accesible al personal de enfermería y médicos como una referencia. Inde Indepe pend ndie ient ntem emen ente te del del hech hecho o de que que algu alguno nos s tipo tipos s de mues muestr tras as requ requie iere ren n metodolo metodologías gías de colección colección muy especial especiales, es, podemos podemos enumerar enumerar algunos algunos aspectos aspectos generales que deben ser tenidos en cuenta al coleccionar las muestras clínicas: • •

La muestra debe ser representativa del proceso infeccioso. Cuando se va a proceder a tomar un espécimen clínico, es importante evitar la contaminación con microorganismos saprofitos del área. Esta flora normal puede interferir con la interpretación del cultivo y enmascarar la presencia del verdadero agente etiológico de la enfermedad.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA •

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Seleccione el tipo anatómico correcto donde se obtendrá el espécimen, y utilice la técnica apropiada y los instrumentos o elementos adecuados para su obtención. En el caso de investigar microorganismos microorganismos anaeróbicos, la biopsia y el aspirado con aguja, son las muestras de elección. Los hisopos y sistemas tipo Culturette son los menos deseables para este fin. Nunca refrigere una muestra por anaerobios. Coleccione un apropiado volumen de muestra. Insuficiente material puede ser causa de resultados falso-negativos.

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Identifique cada muestra con el nombre del paciente, número de identificación personal ( Número de seguro social o Cédula de identidad personal ), procedencia, tipo de muestra, fecha de colección e iniciales del funcionario que tomó la muestra. Coloque la muestra en un receptáculo adecuado para su transporte con el fin de asegur asegurar ar la sobrev sobrevive ivenci ncia a del del posibl posible e agente agente infecc infeccios ioso, o, evitar evitar derram derrame e del espécimen y mantener las medidas de bioseguridad apropiadas. Ordene Ordene siempr siempre e un frotis frotis por gram gram para para los especí especíme menes nes que que proced proceden en de cavidades asépticas, y anote su interés en determinado microorganismo.

GUIA PARA PARA LA COLECCIÓN DE ESPECIMENES CLINICOS ABSCESOS , FÍSTULAS y HERIDAS : •

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Limpie la superficie del absceso o herida con solución salina estéril o alcohol etílico al 70%. Si el absceso es cerrado, preferiblemente aspire con aguja la muestra de la base o de la pared de la lesión Cultive por anaerobios también. En caso de absceso abierto , fístula o herida, introduzca un hisopo profundamente dentro de la lesión, sin tocar el área superficial ya que puede introducir en la muestra bacterias que están colonizando la superficie y no están envueltas en el proceso infeccioso. No cultive lesiones secas, a menos que esté presente el exudado. De ser necesario, puede refrigerar la muestra hasta por 1 hora antes de enviar al laboratorio. No envíe solo pus, ya que ésta no es representativa de la lesión. La base y bordes activos de la lesión son mas apropiados.

HEMOCULTIVOS: •

Desinfecte el tapón de caucho del frasco de hemocultivos con alcohol etílico al 70%. No utilice solución de yodo para limpiar el caucho.



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Asépticamente desinfecte el sitio de la venopunción con alcohol etílico al 70% y luego con una preparación de yodo en círculos concéntricos hacia fuera del sitio elegido. Espere que el yodo seque y realice la punción sin palpar de nuevo. Coleccione la muestra de sangre a razón de 0.5 – 2 ml para niños y 5-10 ml para adultos en cada frasco. El volumen de sangre a cultivar es el factor más importante en la recuperación del microorganismo. Cada Cada frasco frasco debe debe ser servid servido o con una punció punción n difere diferente nte en diferentes tiempos, a menos que utilice a la vez frascos para organism organismos os aeróbico aeróbicos s y anaeróbi anaeróbicos. cos. Nunca Nunca llenar llenar todos todos los frascos con sangre provenientes de una sola punción. No tomar sangre del catéter, a menos que se esté realizando un estudio epidemiológico.

QUEMADURAS : •

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Limpiar y desbridar la superficie de la quemadura antes de proceder a coleccionar la muestra. Una pequeña cantidad de tejido puede ser apropiada para el cultivo. Si hay supuración utilice un Culturette. Solicite cultivo aerobio solamente.

1. CATETER : • •

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Limpie la piel alrededor del catéter con alcohol etílico al 70%. Asépticamente remueva remueva el catéter y corte 5 cm de la punta distal y colóquela en un tubo o envase estéril sin medio de cultivo. Transporte Transporte inmediatamente al laboratorio para prevenir la desecación. Catéteres i.v aceptables para cultivos semicuantitativos semicuantitativos son: Central, CVP, Hickman, Broviac, periférico, arterial, umbilical, hiperalimentación, hiperalimentación, Swan-Ganz.

1. LI LIQU QUID IDO O CEFAL CEFALORR ORRAQ AQUID UIDEO EO : • • • • •

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Asépticamente desinfecte desinfecte con tintura de yodo al 2%. Inserte una aguja con estilete en el inter espacio L3-L4, L4-L5 ( niños ) ó L5-S1. Mida la presión del líquido. Coleccione de 1 – 3 ml de LCR en 4 tubos estériles previamente rotulados. Ordene en los tubos: Química, celularidad, frotis, cultivo, aglutinaciones. aglutinaciones. Si no logra obtener suficiente líquido, envíe lo colectado al laboratorio de microbiología primero. Envíe inmediatamente al laboratorio. laboratorio. Nunca refrigere el líquido cefalorraquídeo.



En la requisición con los datos del paciente indique la edad y si ha habido antibioterapia previa.

6. ULCERA DE DECUBITO : • •

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Limpie la superficie con agua jabonosa y solución salina estéril. Tome una muestra de biopsia de tejido o un aspirado con jeringuilla de la lesión. Un hisopo no es la mejor escogencia para colectar la muestra, sin embargo, cuando no es posible de otra forma, presione vigorosamente el palillo en la base de la lesión para tomar la muestra.

1. OIDO : •

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La timp timpan anoc ocen ente tesi sis s está está rese reserv rvad ada a para para caso casos s comp compli lica cado dos, s, recurrentes, que no responden a la antibioterapia y otitis media crónica. El espécimen de escogencia es un aspirado del tímpano, ya que éste fluido representa el proceso infeccioso, no así la flora del canal externo del oído. El hisopo hisopo no es recome recomend ndado ado para para la colecc colección ión de muestr muestra a para para diagno diagnosti sticar car otitis otitis media, media, ya que puede puede contam contamina inarse rse con la flora flora externa. Solo en caso de ruptura del tímpano, se puede usar el hisopo para recoger el líquido. En éste caso se debe limpiar previamente con un antiséptico el canal del oído externo. Indique en la orden médica si se trata de secreción de oído interno, o externo o líquido de timpanocentesis. timpanocentesis. No refrigere la muestra. No solicite cultivo por anaerobios. Transporte la muestra rápidamente al laboratorio.

1. OJOS : •

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Tome ome mues muestr tra a de cada cada ojo ojo con con dife difere rent ntes es hiso hisopo pos s prev previa iame ment nte e humede humedecid cidos os con soluci solución ón salina salina estér estéril, il, rotand rotando o el algod algodón ón por por la superficie de la conjuntiva. Esto es independiente de que solo un ojo esté infectado, ya que la muestra del ojo sano puede servir de control de la flora normal del paciente, y compararlo con el reporte del ojo infectado. Indique en la muestra , en los medios enviados y en la orden médica, si es ojo derecho o izquierdo en cada caso. Inocul Inocule e direct directame amente nte en medios medios de agar agar chocol chocolate ate,, agar agar sangre sangre,, sabouraud-dextrosa sabouraud-dextrosa agar y tioglicolato. Utilice otro hisopo para colectar muestra para frotis , el cual debe ser inmediatamente inmediatamente colocado en la placa. En el caso de raspado corneal, el método es el mismo, solo que se utiliza una lanceta o aguja estéril para realizar el raspado de la lesión y se adiciona una placa para frotis por KOH.



No utilice el término " ojo " o " ocular " para identificar la muestra. Sea más específico al describirla: Secreción conjuntival, secreción corneal, secreción acuosa o vítrea, etc.

1. HECES : •

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Coloque la muestra dentro de un envase limpio, con cierre hermético y no necesariamente estéril. No solicite frotis por gram. No cultive si la muestra es dura o bien formada. No se recomienda el uso de Culturette, salvo para infantes y pacientes con diarrea activa. Si lo utiliza, recolecte mas de 2 g de muestra. Para estudios por Rotavirus y Clostridium difficile, difficile, envíe solo muestra diarreica, y no utilice hisopo.

1. LIQUIDOS LIQUIDOS CORPORALE CORPORALES S : LIQUIDO LIQUIDO PERITONEAL, PERITONEAL, ASCITICO, ASCITICO, BILIS, BILIS, SINOVIAL, PERITONEAL, PERICARDICO, PLEURAL Y TORACICO : • • • •

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Desinfecte el área con tintura de yodo al 2%. Obtenga la muestra vía aspiración con aguja percutanea o cirugía. Transporte inmediatamente al laboratorio. Puede enviar la muestra para cultivo inoculándola en una botella para hemocultivos. hemocultivos. Anótelo en el rótulo. Siempre envíe una apropiada cantidad de líquido, dependiendo de las pruebas que requiera. Nunca envíe la muestra en hisopo.

1. LIQU LIQUID IDO O AMNI AMNIÓT ÓTIC ICO: O: •

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Coleccione por aspirado vía amniocentesis, cesárea o catéter intrauterino. La aspiración de la secreción vaginal no es aceptable debido a contaminación contaminación por la flora vaginal normal. Puede enviar en un tubo estéril o en un sistema de transporte para anaerobios.

1. SECRECI SECRECION ON DE GLAN GLANDULA DULA DE BARTH BARTHOLI OLINO NO : •

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Limpie los genitales externos con agua y jabón y descarte el exceso de secreción. Pus del absceso de la glándula puede ser colectado por palpación digital del ducto. Solicite frotis y cultivo por Gonococos. Aspire el líquido del ducto preferiblemente con aguja y jeringuilla. jeringuilla. Puede utilizar un sistema de transporte para anaerobios.



1. CE CERV RVICA ICAL L O ENDO ENDOCER CERVI VICAL CAL : •

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Visua Visualic lice e el cérvi cérvix x utiliz utilizan ando do un especu especulo lo sin lubric lubricant ante. e. Limpie Limpie el excedente de secreción. Remueva la mucosa y secreción del canal con un hisopo y descártelo. Con un nuevo hisopo estéril de alginato de calcio, dacrón o algodón no tóxico, obtenga muestra del canal endocervical. Preferiblemente inocule la muestra en un plato de Thayer-Martin y el resto envíelo al laboratorio. Con otro hisopo coleccione muestra para colocarla en una placa para frotis. Un cultivo anal puede ser colectado para acompañar la muestra cervical cuando se sospecha N.gonorrhoeae, N.gonorrhoeae, ya que el recto podría ser el único sitio positivo post-tratamiento. No refrigere la muestra. Envíe pronto al laboratorio de microbiología.

1. VAGINAL : •

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El cultivo rutinario de secreción vaginal no es apropiado debido a la presencia de alto número de microorganismos saprofitos en el área que hacen difícil la interpretación del cultivo. Descarte el exceso de secreciones externas Obtenga la secreción de la mucosa vaginal con un palillo estéril no tóxico o con una pipeta. Con otro palillo obtenga una muestra y colóquela en una placa para frotis directo. Esta placa puede servir también para confirmar vaginosis bacteriana, candidiasis vaginal o Tricomoniasis. Tricomoniasis. No solicite cultivo por anaerobios.

1. SECRE SECRECI CION ON URE URETR TRAL AL DAMAS DAMAS : • • •

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Colecte la muestra al menos 1 hora después que el paciente a orinado. Remueva el exudado del orificio uretral. Colecte la descarga de material en un hisopo no tóxico por masaje de la uretra. Si no hay hay desc descar arga ga,, lave lave la uret uretra ra exte extern rna a con con jabó jabón n Beta Betadi dine ne y enjuague con agua. Inserte un hisopo 2 a 4 cm dentro de la uretra y rote el palillo. Envíe la muestra rápidamente al laboratorio.

1. SECRE SECRECI CION ON PROST PROSTA ATICA TICA:: MANUAL DE CONTROL DE10CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA • • • • •

Colecte la muestra al menos 1 hora después que el paciente a orinado. Limpie el meato urinario con jabón antiséptico y agua. Proceda a masajear la próstata a través del recto. Coleccione el fluido en un hisopo estéril y no tóxico o en un tubo estéril. Tambié ambién n es muy útil útil para para recup recupera erarr gonoc gonococo ocos s el cultiv cultivo o de orina orina después del masaje prostático.

1. SECRECI SECRECION ON URETRA URETRAL L VARONES ARONES : •

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Cole Colect cte e la mues muestr tra a al meno menos s 1 hora hora desp despué ués s que que el paci pacien ente te ha orinado. Inserte un hisopo urogenital 2-4 cm dentro del lumen de la uretra. Rote el hisopo.. Preferiblemente Preferiblemente inocule directamente en un medio de Thayer-Martin. Utilice otro hisopo para tomar muestra para el frotis directo. La placa debe ser hecha en el sitio. No refrigere la muestra. Envíe rápidamente al laboratorio. Solicite antígenos por Chlamydia y cultivo por Mycoplasma. No solicite cultivo por anaerobios.

1. NASAL : •

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Insert Inserte e un hisopo hisopo humede humedecid cido o con soluci solución ón salina salina estéri estérill +/- 2 cm dentro de la fosa nasal. Rote el hisopo contra la mucosa nasal. Colóquelo en un medio de transporte. Envíe al laboratorio El cultivo de la fosa nasal anterior, solo está reservado para la detección de portadores de Staphy Staphyloc lococc occus us aureus aureus y/o Estrep Estreptoc tococo ocos s betahemolíticos betahemolíticos o en caso de lesión. No refrigere la muestra. El cultivo nasal no predice el agente etiológico de infecciones en oído medio o el tracto respiratorio inferior. No cultive por anaerobios.

1. NASO NASOF FARIN ARINGE GEO: O: •

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La muestra debe ser tomada evitando la contaminación con la flora nasal u oral. Lent Lentam amen ente te inse insert rte e un hiso hisopo po de algi algina nato to de calc calcio io dent dentro ro de la nasofaringe posterior, vía fosas nasales. Puede usar un especulo nasal. Rote lentamente el hisopo para absorber secreción. Inocule en medios de agar sangre y agar chocolate en el sitio o envíe al laboratorio.

MANUAL DE CONTROL DE11 CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA


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La muestr muestra a nasofa nasofarín rínge gea a es muy útil útil para para detect detectar ar portad portadore ores s de Meningococos Meningococos o en caso de sospecha de tos ferina. El cultivo rutinario de la nasofaringe no es recomendado.

1. FARINGE : •

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Utiliz Utilizan ando do un depres depresor or lingua linguall presio presione ne la lengua lengua hacia hacia abajo abajo para para observar los pilares de la faringe y el área tonsilar para localizar el área de inflamación y exudado. Utilizando un hisopo de alginato de calcio o de Dacrón, rote el mismo sobre el área de exudado, las tonsilas y faringe posterior. No toque el resto del área de la cavidad oral o los dientes. Envíe al laboratorio. Si el transporte demora, refrigere el Culturette hasta por 1 hora. No solicite frotis directo de faringe. Indique si requiere cultivo o prueba directa de detección de antígenos. Indique si hay sospecha de otro patógeno diferente a Estreptococos betahemolíticos betahemolíticos ( Ejemplo N. Gonorrhoeae ). El cultivo cultivo de faringe faringe está contraindica contraindicado do en paciente pacientes s con epiglotis epiglotis inflamada.

1. ESPU ESPUT TO POR EXP EXPEC ECT TORACI ORACION ON : •

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El esputo podría no ser la muestra apropiada para determinar el agente etiológico de neumonía bacteriana. La sangre, el lavado bronquial o el aspirado transtraqueal son mas seguros. Es reco recome mend ndab able le que que la mues muestr tra a sea sea toma tomada da en la maña mañana na al levantarse. Haga Haga que que el paci pacien ente te se enju enjuag ague ue la boca boca con con agua agua ante antes s de expectorar, expectorar, para remover la flora superficial oral. Si el paciente tiene dentadura postiza, se la debe quitar. Instru Instruya ya al pacien paciente te para para que tosa con fuerza fuerza y profun profundo, do, tal que obte obteng nga a un espu esputo to que que prov proven enga ga del del trac tracto to resp respir irat ator orio io infe inferi rior or.. Explíquele que es el esputo. Depositar Depositarlo lo directame directamente nte en un envase envase estéril. estéril. No colecte colecte saliva saliva ni fluido post-nasal. Ordene un frotis por gram para confirmar la validez del esputo.

Para pacientes pediátricos que no pueden producir la muestra apropiada, un terapista respiratorio puede colectar la muestra por succión. Si la muestra no puede ser llevada al laboratorio, puede refrigerarse. Indique en la orden médica los microorganismos microorganismos de interés, ya sea por bacterias, hongos o micobacterias, cada una con un formulario diferente. Para el diagnóstico de la tuberculosis colecte 2 muestras en días consecutivos.

1. ES ESPU PUT TO IND INDUC UCID IDO O: 1.

Haga que el paciente se enjuague la boca con agua.

MANUAL DE CONTROL DE12CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Con ayuda de un nebulizador, haga que el paciente inhale aerosoles de una solución salina estéril al 3-10%. 3. Colecte el esputo inducido en un envase estéril. 2.

1. AS ASPI PIRA RADO DO TRA TRAQU QUEA EAL L: 1. Colecte Colecte el espéc espécimen imen a travé través s de una una traqueoto traqueotomía mía o tubo tubo endotraqueal. 2. Con cuidad cuidado o pase el el catéter catéter de polyetile polyetileno no a través través del sitio sitio dentro dentro de la tráquea. 3. Aspire Aspire el materia materiall de la tráquea tráquea utiliza utilizando ndo una una jeringuil jeringuilla la o un succionador intermitente. 4. Remueva Remueva el el catéter catéter y descart descarte e la jeringui jeringuilla. lla. 5. Enví Envíe e al al lab labor orat ator orio io.. 6. No ref refri rige gere re la la mues muestr tra. a.

1. AS ASPI PIRAD RADO O TRAN TRANST STRAQ RAQUEA UEAL L:

1. Utilice Utilice este método método cuando cuando su resultado resultado puede puede influir influir grandem grandemente ente en la terapia, cuando los procedimientos no invasivos no han sido productivos, cuando la infección no está siendo controlada, cuando se sospeche infección por anaerobios o cuando el paciente está comatoso. 2. Anestesie Anestesie la la piel del del sitio de de la colecció colección n y prepare prepare aséptica asépticamente mente el el área. 3. Inserte Inserte una aguja aguja calibr calibre e 14 a través través de la membra membrana na cricotiro cricotiroidea idea.. 4. Pase un un catéter catéter de polyetile polyetileno no calibre calibre 16 a través través de la aguja aguja hacia hacia la tráquea inferior. Remueva la aguja. 5. Aspire Aspire la secreci secreción ón con una una jeringui jeringuilla lla de 20 ml ml o un succionad succionador or.. 6. Si la secreci secreción ón es escasa, escasa, inyect inyecte e lentament lentamente e de 2 a 4 ml de solución solución salina estéril para inducir la tos, lo que usualmente produce un adecuado espécimen. 7. Envíe el el envase envase colector colector con con el tubo incrust incrustado ado al labora laboratorio torio prontamente. 8. Evite la entrada entrada de aire aire al al envase envase colec colector tor.. 9. No ref refri rige gere re la la mues muestr tra. a.

1. MUE MUEST STRA RA POR POR BRONC BRONCOS OSCO COPIA PIA : 1. Colect Colecte e el espécim espécimen en vía bronc broncosc oscopi opio. o. 2. El cepill cepillado ado bronq bronquia uiall es prefer preferido ido al lavado, lavado, ya que el lavado lavado es más diluido. 3. Anestesie Anestesie el el área con con Lidocaina Lidocaina tópica tópica al 2% 2% preferible preferiblement mente. e. 4. Haga que el pacie paciente nte inhale inhale por por la boca boca y exhale exhale por por la nariz. nariz. 5. Lubrique Lubrique ambas ambas fosas fosas nasales nasales con con Xylocain Xylocaina a en jalea. jalea. 6. El paci pacien ente te pudi pudier era a nece necesi sita tarr Deme Demero roll intr intrav aven enos oso o para para tole tolera rarr el broncoscopio.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 7. Lubrique Lubrique el bronc broncoscop oscopio io con Xylocai Xylocaina na al 2% en jalea, jalea, evitan evitando do tocar tocar la punta distal. 8. Introduzc Introduzca a el broncosco broncoscopio pio intranas intranasalme almente. nte. 9. PARA LAV LAVADO BRON BRONQUI QUIAL AL 10. Sujete una trampa trampa de Lukens al broncoscopio. 11. Introduzca 10 ml de solución solución salina no bacteriostática bacteriostática a través del canal abierto. 12. Succione el el material desde desde afuera. afuera. 13. Selle el tubo de de la trampa y envíe al laboratorio. laboratorio. 14. PARA CEPILLADO CEPILLADO BRONQUIAL 15. Utilice un broncoscopio broncoscopio de doble doble lumen. 16. Inserte la brocha citológica citológica dentro del canal abierto del broncoscopio broncoscopio y avance. 17. Empuje la brocha fuera de de su protector y realice el cepillado. cepillado. 18. 18. Jale Jale la brocha brocha hacia hacia dentro dentro de su protec protector tor y remuev remueva a la unidad unidad de brocha completa. 19. Coloque Coloque la brocha brocha dentro dentro del tubo de transporte transporte contenien conteniendo do solución salina o 20. Ringer’s Ringer’s lactato. lactato. 21. Recuerde que la brocha brocha se seca al aire rápidamente, rápidamente, lo cual es negativo para el cultivo 22. Envíe al laboratorio laboratorio inmediatamente. inmediatamente. 23. Si desea estudio por micobacterias, micobacterias, puede colocar la brocha dentro dentro de un tubo conteniendo 10 ml de caldo de Middlebrook 7H9. LAVADO BRONQUI BRO NQUIO-ALVEO O-ALVEOLAR LAR ( BAL ) : 24. PARA LAVADO 25. Sujete una trampa de espécimen espécimen de 70 ml al broncoscopio. broncoscopio. 26. Introduzc Introduzca a 100 ml de salina salina no bacteriostá bacteriostática tica a través través del canal canal en pociones de 20 ml. 27. Después de la tercera o cuarta cuarta inyección de salina, reemplace reemplace la trampa de 70 ml por una de 40 ml.. 28. 28. Envíe Envíe las trampa trampas s al laborat laboratori orio o ó 10 ml de líquido líquido de cada cada una en tubos estériles.

COMENTARIO : El mayo mayorr prob proble lema ma con con el lava lavado do bron bronqu quia ial, l, es la inhibición de las bacterias por la solución anestésica. El cepillado bronquial solamente obtiene 0.001 ml de muestra, por lo que que la broc brocha ha debe debe ser ser rápi rápida dame ment nte e colo coloca cada da en el líqu líquid ido o de transporte para evitar la desecación. La mues muestr tra a cole colect ctad ada a vía vía bron bronco cosc scop opio io pued puede e ser ser fáci fácilm lmen ente te contam contamina inada da con la flora flora oral. oral. Esto Esto puede puede reduci reducirse rse utiliz utilizan ando do un broncoscopio de triple lumen. El lavado bronquioalveolar es preferido especialmente cuando el cultivo de esputo no ha sido satisfactorio. El análisis análisis cuantitativo cuantitativo de la muestra muestra por lavado lavado broncoal broncoalveol veolar ar,, es clínicamente más relevante que el análisis de la muestra de esputo.



1. ORINA ORINA POR VACIADO ACIADO DIRECT DIRECTO O: 1. Se recomien recomienda da recoger recoger la primer primera a orina de de la mañana mañana al desperta despertar. r. 2. Lave los los genitales genitales con con jabón jabón y abundante abundante agua. agua. Secar Secar con un un paño limpio limpio.. 3. Dejar Dejar escapar escapar la primera primera porción porción de orina orina y a continua continuación ción recoge recogerr la muestra muestra directamente en un envase estéril. 4. Enviar Enviar inmediata inmediatamente mente al labora laboratori torio. o. Si no se puede, puede, refrigerar refrigerar la orina orina hasta por 2 horas. 5. No utili utilizar zar orin orina a de recep receptác táculo ulos. s. 6. NO util utiliza izarr orina orina de de pool pool de 24 horas horas . 7. No solic solicita itarr cultiv cultivo o por anaer anaerobi obios. os. 8. El frotis frotis directo directo por Gram de orina orina de mujeres mujeres recolecta recolectadas das por vaciado vaciado directo directo,, no es del todo confiable, ya puede estar contaminado por microorganismos de la flora normal vaginal.

1. ORI ORINA NA POR CA CATET TETERI ERIZAC ZACION ION : 1. Limpie Limpie la porció porción n del cateter cateter donde donde se va a tomar tomar la muestra muestra de orina orina con alcohol etílico al 70 %. 2. Inserte Inserte la aguja aguja dentro dentro del cateter cateter y colecte colecte la orina dentro dentro de la jeringu jeringuilla illa.. 3. Transfie Transfiera ra la la orina orina a un envase envase estér estéril. il. 4. Enviar Enviar inmediata inmediatament mente e al laboratorio laboratorio.. En caso contrario contrario refrigera refrigerarr la orina. 5. La colecció colección n de la orina por por cateteriza cateterización ción uretral uretral tiene tiene algún algún riesgo riesgo de forzar hacia la vejiga, parte de la flora normal uretral durante la inserción del catéter. catéter. 6. Nunca Nunca recoja recoja orina de la la bolsa bolsa del del catéter catéter.. 7. No descone desconecte cte el catéter catéter de su su bolsa bolsa durante durante la colecció colección n de la muestra. muestra. 8. Paci Pacien ente te con con caté catéte terr por por 48h 48h – 72h 72h pued pueden en ser ser colo coloni niza zado dos s con con múlt múltip iple les s cepas bacterianas. 9. Indique Indique en la orden orden médic médica a si la orina orina ha sido colecta colectada da por catéte catéter. r.

1. ORINA ORINA POR POR ASPI ASPIRAC RACION ION SUPRA SUPRAPUBI PUBICA CA : •

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Mediante técnicas asépticas descontamine descontamine y anestesie el área de la punción. Introduzca la aguja calibre 22 dentro de la vejiga entre el pubis y el ombligo. Aspire alrededor de 20 ml de la vejiga y transfiera la orina asépticamente a un envase estéril o tape la aguja y envíe la jeringuilla.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA • •

•

•

Enviar inmediatamente al laboratorio, o refrigerar. Esta técnica evita la contaminación de la orina por microorganismos de la uretra o perianales. Es útil cuando se sospecha infección por anaerobios, anaerobios, en pacientes pediátricos si hay problema en la colección de la orina, pacientes con trauma en la médula espinal y en general en aquellos en que el método del vaciado directo o cateterización no ha sido posible. Indique en la orden médica cuando la orina ha sido colectada por punción suprapúbica.

TRANSPORTE DE LA MUESTRA

1. La mayoría mayoría de las las especies especies bacter bacterianas ianas son son vulnerab vulnerables les a demora demoras s en su procesamiento, procesamiento, cambios de temperatura, humedad, etc. Durante el transporte las bacterias de rápido crecimiento, pueden crecer sobre los patógenos más fastidiosos y de crecimiento lento o con requerimientos especiales, especiales, por lo que es vital en el éxito del cultivo que la muestra sea transportada y procesada con la celeridad necesaria. 1. Todas las muestras muestras deben deben ser ser enviadas enviadas inmediatamente inmediatamente al laboratorio laboratorio después de colectadas. Se debe instruir al personal médico, de enfermería y mensajeros en la importancia de un transporte expedito de las muestras clínicas. 2. En los casos casos en que el transporte transporte o el procesa procesamien miento to pudieran pudieran demorar demorar,, se establecen a continuación las condiciones de temperatura para algunos tipos de muestras:

•

MANTENIMIENTO A 4 °C : Tejido de autopsia, lavado bronquial, catéter i.v , Biopsia de pulmón , líquido pericardico, esputo, orina., quemaduras, oído externo.

•

MANTENIMIENTO A TEMPERATURA AMBIENTE : Muestras de LCR, Líquido sinovial,, abdominal y amniótico, bilis, Cul-de-Sac, aspirado de pulmón, lesión, placenta, nasal, aspirado transtraqueal, transtraqueal, orina suprapúbica, raspado corneal, sangre, humor vítreo, médula ósea, cérvix, conjuntiva, genitales, heces, nasofaríngeo, tracto respiratorio superior., heridas, cultivos por anaerobios, ocular, genital, oído interno.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 1. En general general no guard guarde e una muestra muestra por por mas de 24h bajo bajo ninguna ninguna condi condición ción.. Sin embargo, los virus permanecen permanecen estables por 2 a 3 días en medios de transporte apropiados. 2. El tran transp spor orte te ópti óptimo mo de la mues muestr tra a depe depend nde e en gran gran part parte e del del volu volume men n obte obteni nido do.. Mien Mientr tras as meno menorr sea sea su volu volume men, n, con con mayo mayorr rapi rapide dez z debe debe transportarse.

3. Micr Micro oorg organis anismo moss sen sensitiv itivo os a las las cond condic icio ion nes amb ambien ientale taless, como como N. recomie iend ndaa sembr sembrar ar meningitidis , N. gonorr gonorrhoe hoeae ae y H. influe influenza nzaee se recom directamente en platos en el sitio de colección de la muestra.

4. Si se anticipa anticipa que que habrá habrá demora demora en el envío envío de la muest muestra ra o si el cultivo cultivo ha de de ser enviado a otro laboratorio, se recomienda utilizar medios de transporte adecuados como Stuart, Amies o Cary-Blair. No enviar hisopos. Tenga en cuenta que los medios de transporte están formulados para mantener la viabil viabilida idad d de los microo microorga rganis nismo mos, s, sin embarg embargo, o, alguno algunos s podría podrían n no sobrevivir en un medio pobre en elementos nutricionales específicos. 5. Siempre Siempre que sea sea posible, posible, las muestras muestras deben deben ser ser enviadas enviadas directamen directamente te y en forma inmediata al laboratorio de microbiología, sin utilizar las áreas de recibo central u otros departamentos departamentos del laboratorio.



1. CRIT CRITERI ERIOS OS DE RECHA RECHAZO ZO DE MUEST MUESTRAS RAS CLIN CLINICAS ICAS :

El personal del laboratorio debe tener siempre presente que los especímenes clínicos que son enviados para su evaluación, representan elementos de suma importancia en la detección, evaluación y control de enfermedades potencialmente peligrosas que aquejan al paciente y que la rapidez y eficiencia con que se logre obtener información de utili utilida dad d clínic clínica a de las misma mismas, s, tendrá tendrá reperc repercusi usione ones s direct directas as en la salud salud del paciente, el manejo racional y adecuado de los recursos del laboratorio, la seguridad del resto de los pacientes y el personal que allí labora, el control de los antibióticos, el tiempo tiempo de hospital hospitalizaci ización, ón, disminución disminución de costos costos de operacio operaciones nes y en general la credibilidad del laboratorio y el hospital en general. Por todo lo anterior las muestras que son recibidas por el laboratorio, deben ser apropiad apropiadamen amente te colectada colectadas, s, transpor transportada tadas s y procesad procesadas. as. Estas Estas muestras muestras deben deben representar la causa probable de infección, de lo contrario el procesamiento y reporte de muestras muestras no adecuada adecuadas s puede puede proveer proveer informac información ión equivoca equivocada, da, lo cual puede llevar a un mal diagnóstico y por consiguiente fallas en el tratamiento que pueden poner en peligro la vida del paciente. Consecuentemente, el laboratorio debe poner en ejecución una política estricta de aceptabilidad aceptabilidad y rechazo de muestras clínicas.

Causales de rechazo de muestras clínicas : a. b. c. d.

Muestras Muestras no rotula rotuladas das o sin sin identi identificac ficación. ión. Discrepa Discrepancia ncia en en la identific identificación ación del del paciente paciente y la muestra muestra.. Envase Envase inapro inapropiad piado o o medio medio de de transport transporte e inadecu inadecuado. ado. Demora Demora prolong prolongada ada en enviar enviar la muestra muestra al al laborato laboratorio. rio.

e. Duplicación Duplicación de muestra muestra del del mismo mismo paciente paciente dentro de 24h, 24h, excepto excepto sangre. f. No indi indicar car tipo tipo de muest muestra ra o proced proceden encia cia.. g. No indi indicar car tip tipo o de exame examen n en la la orden. orden. h. Muestr Muestra a con prese preserva rvativ tivos. os. i. Muestr Muestra a der derram ramada ada o rotu rotura ra del envas envase. e. j. Hisopos se secos. k. Un solo Culturet Culturette te con múltiple múltiples s ordene ordenes. s. l. Muestr Muestra a para para anae anaerob robios ios en en envas envase e inapro inapropi piado ado.. m. Cultivo por anaerobios anaerobios de muestras con con flora anaeróbica normal.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA n. Frotis de Gram por N. por N. gonorrhoeae de muestras de cérvix, vagina y cripta anal, ya que pueden haber Neisserias saprófitas en el área. o. Cultivo Cultivo por por anaerobio anaerobios s de orina orina colectada colectada por por vaciado vaciado directo. directo. p. Orina Orina colecta colectada da de de la bolsa bolsa del del catéter catéter.. q. Saliva. r. Frotis Frotis direct directo o por por Gram Gram de de hiso hisopo pos. s. s. Volum olumen en inad inadec ecua uado do.. t. Contam Contamina inació ción n obvia obvia de la muestr muestra. a.

Nota: El rechazo de una muestra debe estar acompañado de la solicitud de un nuevo especímen. Es conveniente notificarlo directamente al médico solicitante.

1. MUESTRA MUESTRAS S DESAPRO DESAPROBADA BADAS S DEBIDO DEBIDO A SU CUSTIONA CUSTIONABLE BLE INFORMACION CLINICA : a. b. c. d. e. f. g. h. i. j. k.

Hisopo Hisopo super superfici ficial al oral. oral. Hisopo Hisopo de úlce úlcera ra de de decúb decúbito ito.. Hisopo Hisopo de úlcera úlceras s vari varicos cosas. as. Hisopo Hisopo de lesió lesión n superfi superficial cial gangreno gangrenosa. sa. Cont Conten enid ido o de de vej vejig iga. a. Vómito. Punta Punta de catét catéter er Foley Foley.. Desc Descar arga ga de de colos colosto tomí mía. a. Loquios. Aspira Aspirado do gástr gástrico ico de recién recién nacido nacido.. Frotis Frotis farí faríng ngeo, eo, nasa nasal, l, orina orina o heces. heces.

Muestras no adecuadas para cultivo por anaerobios : a. Lavado Lavado bronquio bronquioalve alveolar olar desprote desprotegido gido.. b. Hiso Hisopo po cer cervi vica cal. l. c. Aspi Aspira rado do end endot otra raqu quea eal. l. d. Loquios. e. Hisopo Hisopo nasofarín nasofaríngeo geo / Secreci Secreción ón farín faríngea. gea. f. Líqu Líquid ido o sem semin inal al o pro prost stát átic ico. o. g. Esputo Esputo por por expect expectora oració ción n o inducid inducido. o. h. Hece Heces s o mue muest stra ra rec recta tal. l. i. Secrec Secreción ión uretra uretrall / hisop hisopo o vagi vaginal nal o vulva vulvarr. j. Orina Orina por por vaci vaciad ado o dire directo cto o caté catéter ter..



4. PRIORIDAD DE LAS MUESTRAS :

Todas las muestras deben ser procesadas lo más rápidamente posible al llegar al laboratorio. Sin embargo, su manejo puede ser clasificado de la siguiente manera, independientemente de su orden .

MUESTRAS URGENTES

• • • • • • • • •

Sangre. LCR. ( Su estudio tiene Prioridad sobre cualquier otra muestra o trabajo ). Aspirado Transtraqueal Líquido pericardico. Líquido amniótico. Tracto respiratorio inferior. Muestras quirúrgicas de la sala de CIC. Líquido articular ( Artritis séptica ). Biopsia de Pulmón.



Nota: Cuando éstas muestras se encuentran encuentran rotuladas con la advertencia advertencia "Stat" o" Urgente", los resultados deben ser informados telefónicamente al médico solicitante.

MUESTRAS DE RUTINA

• • • • • • • •

Boca. Líquido pleural. Quemaduras. Ocular. Orina. Genitales Muestras quirúrgicas. quirúrgicas. Líquido peritoneal.

MUESTRAS ELECTIV ELECTIVAS AS

• • • • • • • • • •

Líquido ascítico. Bilis. Líquido articular ( No artritis ). Líquidos intravenosos. Genitales Nasal. Oído. Nasofaríngeo. Rectal. Ulceras, vesículas.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA • •

Piel. Post Mortem.

A. CONT CONTRO ROL L DE DE CALI CALIDA DAD D 1. CON CONTRO TROL L DE CALIDA CALIDAD D DE LOS MEDIO MEDIOS S DE CULTIV CULTIVO: O:

1. Los medios medios de cultivo cultivo deshidr deshidratad atados os son higroscó higroscópico picos s y la absorción absorción de agua del del exte exteri rior or,, así así como como la form formac ació ión n de agua agua dent dentro ro de la bote botell lla a como como consecuencia de las fluctuaciones de temperatura en el ambiente, favorecen el crecim crecimien iento to bacter bacterian iano. o. Esto Esto puede puede conduc conducir ir al consum consumo o de nutrie nutriente ntes, s, variaciones de Ph y cambios en el color del medio. Además la exposición a la luz puede llevar a importantes alteraciones en los constituyentes del medio de cultivo. 2. Toman omando do en cuen cuenta ta los los fact factor ores es ante antes s seña señala lado dos, s, los los medi medios os de cult cultiv ivo o deshidratados deben almacenarse siempre en lugares frescos, a temperatura ambi ambien ente te y prot proteg egid idos os cont contra ra la hume humeda dad d y la luz. luz. La mayo mayorí ría a de los los supl suplem emen ento tos s se guar guarda dan n en refr refrig iger erac ació ión. n. Util Utiliz izan ando do cond condic icio ione nes s de almacenamiento adecuadas, los medios elaborados en polvo tienen una vida útil de al menos 3 años. El material que ha sufrido cambios substanciales, substanciales, tales como hidratación, endurecimiento y cambio de color, deben descartarse. Se debe mantener un registro de cada frasco de medio de cultivo deshidratado, deshidratado, con con el nomb nombre re del del prod produc ucto to,, nomb nombre re y núme número ro tele telefó fóni nico co de la casa casa proveedora, número de control del frasco, fecha de recibo, fecha de expiración, número de lote y fecha en que se abrió el f rasco. 3. El grado grado de disolu disolució ción n de un medio deshid deshidrat ratado ado,, así como como la eficaci eficacia a del mismo ya preparado, depende en gran medida del procedimiento empleado en la rehidratación. Se recomienda utilizar agua recién destilada o completamente desmineralizada y un erlenmeyer con capacidad del doble del medio que se quie quiere re prep prepar arar ar.. Si el medi medio o va a dist distri ribu buir irse se en tubo tubos, s, debe debe agit agitar arse se constantemente para asegurar una adecuada homogenización al momento de servirlos. 4. Cuando Cuando se va a ester esterili ilizar zar,, debe debe asegura asegurarse rse en seguir seguir las instru instrucci ccione ones s de tiempo, presión y temperatura para la obtención de medios de cultivo óptimos. Una temperatura de 121 °C , presión de 15 libras y un tiempo de esterilización de 15 minutos, son suficientes para la mayoría de los medios. Si no se dispone de autoclave, es posible esterilizar en marmita de vapor a 100 °C por 30 minutos. En tal caso la esterilización deberepetirse durante 3 días consecutivos.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 5) El medio esterilizado debe ser enfriado a 45°-60°C en un baño maría, para evitar la formac formació ión n de agua agua de conde condensa nsació ción. n. Al ser vertid vertidos os en las placas placas Petri, Petri, evitar evitar la formación de burbujas y coágulos. Durante el proceso de servida, debe tomarse una muestra del medio para realizar el control de calidad por esterilidad y eficiencia.

6. El medio medio de cultivo cultivo recons reconstitu tituido ido tiene tiene una vida vida útil limitad limitada. a. Si no se emplea de inmediato, debe almacenarse bajo condiciones apropiadas para garantizar su utilidad durante un periodo de tiempo. El almacenamiento a 4°C es el mejor para la mayoría de los medios. Sin embargo, aquellos que contienen Tioglicolato, deben guardarse a temperatura ambiente. 7. Los medios medios deben deben mantener mantenerse se preferibl preferiblemen emente te en sitios sitios oscuros, oscuros, ya que la luz puede puede afecta afectarr alguno algunos s de sus compon componen entes tes.. Para Para evitar evitar la deseca desecació ción n se aconseja que se guarden en bolsas plásticas bien cerradas. Los platos Petri almacenados almacenados así, deben mantenerse con el fondo hacia arriba. 8. Dado Dado que que los los medi medios os alma almace cena nado dos s en refr refrig iger erac ació ión, n, cuan cuando do pasa pasan n a temperatura ambiente tienden a formar agua de condensación en la superficie, se recomienda poner los platos Petri en la incubadora a 35°C por 2 horas, colocándolos con el fondo hacia arriba para obtener una superficie seca. Esto es particularmente importante para que el agua no afecte la individualidad de las colonias en el aislamiento o en los casos de pruebas de sensibilidad a los antibióticos en los que el exceso de agua puede afectar la dilución de las colonias y por ende la lectura del halo de inhibición. 9. Cada lote lote prepara preparado do de medio medio de cultivo cultivo se prueba prueba antes antes de su uso uso rutinari rutinario, o, por eficiencia o calidad, mediante la inoculación de microorganismos cuyo comportamiento conocemos, conocemos, tanto para reacciones positivas como negativas. Puede utilizarse para ello cepas bacterianas domésticas o cepas control comerciales ( ATCC ). Se debe guardar un libro de registro de los resultados obtenidos. 10. Evite el congelamiento congelamiento de los medios preparados preparados o la sangre de carnero. 11. Al colocar en la refrigeradora refrigeradora los medios preparados, preparados, debe colocar los los de más reciente preparación al fondo y los mas viejos adelante.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 12. Rotular Rotular todos los medios preparado preparados, s, tanto en platos platos Petri como en tubos, indicando además, la fecha de preparación y expiración.

PRUEBAS BASICAS DE CONTROL DE CALIDAD DE MEDIOS PREPARADOS: a. b. c. d.

Ph Este Esteri rili lida dad d Capaci Capacida dad d de crec crecimi imien ento to y reacc reacción ión Esta Estab bilid ilidad ad

CRITERIOS DE CALIDAD DE LOS MEDIOS PREPARADOS: a. b. c. d. e. f. g. h. i. j.

Rajadu Rajadura ra del plato plato o envase envase.. Rajadu Rajadura ra en la la superf superfici icie e del medi medio. o. Variaci ariacion ones es en el el volume volumen n del medi medio. o. Hemólisis. Cris Crista tale les s en en el el med medio io.. Pres Presen enci cia a de de bur burbu buja jas. s. Pres Presen enci cia a de coá coágu gulo los. s. Camb Cambio io de de colo colorr norm normal al.. Contaminación. Falla Falla en en la la inhib inhibició ición n de microorga microorganism nismos os saprófito saprófitos. s.

FALLAS FAL LAS Y CAUSAS EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO : 1. Valor alor de de Ph Ph inc incorr orrect ecto: o: • •

• • • •

Medir el Ph por encima de los 25°C. Sobrecalentamiento Sobrecalentamiento en la esterilización, vuelta a fundir o calentamiento prolongado a 50°C. Solución incompleta del medio. Mala calidad del agua. Recipiente mal lavado o con residuos químicos. Mala conservación del medio deshidratado o vencido.

1. Turbi urbidéz déz o prec precip ipit itaci ación ón : • • •

Mala calidad del agua. Sobrecalentamiento. Ph incorrecto.



Solución incompleta.

1. Oscu Oscure reci cimi mien ento to : • • •

Sobrecalentamiento. Solución incompleta. Alteración del Ph.

1. Gel blando : • • • • •

Bajo porcentaje de agar en el medio. Errores en la pesada del medio deshidratado o en los suplementos. Sobrecalentamiento. Mala homogenización del medio. Exceso de agua.

1. Crecim Crecimien iento to bact bacteri erian ano o pobre pobre : • • •

Exceso de calentamiento. calentamiento. Substancias inhibidoras inhibidoras en el agua o en el recipiente. Alteración en el Ph.

EVALUACION EV ALUACION DE LA EFICIENCIA DE LOS MEDIOS DE CUL CULTIVO TIVO PREPARADOS : MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA

•

TSI E. coli ácido/ácido coli ácido/ácido TSI Shigella flexnerii alcalino/ácido flexnerii alcalino/ácido

•

TSI Pseudomona aeruginosa alcalino/alcalino

• •

SIM Proteus mirabilis movilidad positiva SIM K. pneumoniae movilidad negativa

•

Citrato de Simmons K.pneumoniae color azul. Crece

•

Citrato de Simmons E. coli color coli color verde. No crece.

•

Caldo de urea Proteus mirabilis Rojo-Morado. Rojo-Morado. Positivo.

•

Caldo de urea E. coli color coli color Naranja. Negativo.

•

Agar sangre Estr.Betahem.Grupo B Crece. Betahemólisis.

•



Agar sangre S. pneumoniae Crece. Alfahemólisis. Alfahemólisis.

•

Agar sangre K.pneumoniae Crece. No hemolítico.

•

McConkey E. coli Crece. coli Crece. Colonias moradas.

•

•

McConkey Proteus sp Crece. Colonias claras. McConkey Estafilococos No crece. McConkey Sorbitol E.coli 0157:H7 E.coli 0157:H7 Colonias claras. Sorbitol negativo McConkey Sorbitol Proteus sp Colonias claras. Sorbitol negativo

•

McConkey Sorbitol Klebsiella sp Colonias rosadas. Sorbitol positivo

•

EMB E. coli Brillo coli Brillo metálico EMB Proteus sp colonias Claras

•

•

•

•

•

• •

•

•

Manitol Sal Estafilococos Colonias amarillas Manitol Sal E. coli No coli No crece.

SS agar Salmonella agar Salmonella sp Crece. Colonias claras con H2S SS agar E. agar E. coli No coli No crece.

Agar alcohol-fenil etílico Estafilococos Crece. Agar alcohol-fenil etílico E. coli No coli No crece.

•

Thayer-Martin N. gonorrhoeae Crece. Thayer-Martin E. coli No coli No crece.

•

OF – medio E. coli Amarillo coli Amarillo ambos tubos. Fermentador

•

OF – medio Pseudomona sp Un tubo amarillo. Oxidativo OF – medio Moraxella sp Ningún tubo amarillo. Inerte

•

•

MEDIO DE CULTIVO ORGANISMO CONTROL REACCION ESPERADA MANUAL DE CONTROL DE26CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA


Lysina decarboxylasa Citrobacter freundii alcalino/ácid freundii alcalino/ácido o H2S +

•

Lysina decarboxylasa Proteus vulgaris Rojo/ácido H2S -

•

Lysina decarboxylasa Salmonella arizonae Alcalino/alcalino Alcalino/alcalino H2S +

•

Bili-Esculina Streptococcus mitis Incoloro

•

Bili-Esculina Enterococcus faecalis Negro

•

Caldo Malonato Klebsiella pneumoniae Azul

•

Caldo Malonato E. coli No coli No cambia el color

•

NaCl 6.5% Streptococcus mitis No crece NaCl 6.5% Enterococcus faecalis Crece

•

• • •

• • • •

Sabouraud-Dextrosa Sabouraud-Dextrosa agar Levaduras Crece Sabouraud-Dextrosa Sabouraud-Dextrosa agar Dermatofitos Crece Sabouraud-Dextrosa Sabouraud-Dextrosa agar Estafilococos Crece

Mycosel agar Levaduras Crece Tioglicolato Flora mixta Crece Selenita Flora mixta Crece en menos de 24h Caldo Cerebro-Corazón Cerebro-Corazón Flora mixta Crece

CONTROL DE CALIDAD DE LOS SUPLEMENTOS :

1. Es important importantee tener en cuenta cuenta que que los suplemen suplementos tos de los los medios medios de cultivo, cultivo, pudieran confrontar problemas de eficiencia o inhibición, ya que como todo producto pudiera no haber sido almacenado y/o transportado adecuadamente. Solo el uso rutinario de los medios de cultivo preparados con éstos suplementos, pudieran darnos la alarma de problemas en los mismos. MANUAL DE CONTROL DE27CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 2. Muchos Muchos suplementos suplementos son son lábiles lábiles al calor, calor, por ello se añaden añaden al medio medio después después de la esterilización para evitar su deterioro. 3. Los Los medi medios os prepa preparad rados os con la mezcl mezclaa inhi inhibi bido dora ra VCN , deben ser utilizados dentro de los 8 días siguientes a su preparación ya que la eficacia de la mezcla decrece muy rápidamente. La misma advertencia es aplicable a los frascos de VCN rehidratados, por lo que conviene guardarlos congelados si no se va a usar de inmediato. No sobrepasar los 15 días.

4. En el caso de la sangre de carnero para la preparación del agar sangre, es importante cada vez que se reciba un nuevo lote, anotar su apariencia, observar por presencia de coágulos, hemólisis, número de lote, fecha de recibo y expiración, hacerle una determinación de hemoglobina, la cual debe medir entre los 13.0 - 15.0 g/dl, y por supuesto se debe tomar con una jeringuilla una pequeña muestra del vial para sembrarla en agar sangre y tioglicolato para determinar su esterilidad. También se debe examinar el agar sangre preparado con sangre de carnero, por adec adecua uada da form formac ació ión n de hemó hemóli lisi sis, s, espe especi cial alme ment nte e util utiliz izan ando do Estreptococos hemolíticos.

1. CONTRO CONTROL L DE DE CALID CALIDAD AD DE DE REACT REACTIVO IVOS S: Un elemento fundamental en el trabajo diario del laboratorio, lo constituyen los reac reacti tivo vos, s, tant tanto o come comerc rcia iale les s como como de prep prepar arac ació ión n domé domést stic ica, a, que que son son utilizados en la caracterización de microorganismos. Estos reactivos merecen una especi especial al atenci atención ón,, toda toda vez que fallas fallas en su funcio funciona namie miento nto pueden pueden generar en identificaciones identificaciones equivocadas. equivocadas. Por ello, se recomienda correr controles diarios con las bacterias tipo y seguir estrictame estrictamente nte las indicaci indicaciones ones en cuanto cuanto almacena almacenamien miento to de los reactivos reactivos,, metodología de la prueba y tiempo de lectura. Es reco recome mend ndab able le que que los los reac reacti tivo vos s come comerc rcia iale les s sean sean exam examin inad ados os inmediatamente cuando se abre un nuevo lote o vial y llevar un registro de su funcionamiento.

REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA • •

•

• •

Coagulasa Staphylococcus aureus Coágulo. Coagulasa positiva Coagulasa Cepa ATCC 25923 Coágulo. Coagulasa positiva Coagulasa Stafilococcus epidermidis Inerte. Coagulasa negativa

Oxidasa Pseudomona aeruginosa Negro. Oxidasa positiva Oxidasa E. coli Inerte. coli Inerte. Oxidasa negativa



•

Catalasa Staphylococcus Staphylococcus sp Burbujas. Catalasa positiva

•

Catalasa Streptococcus sp Inerte . Catalasa negativa

• •

Betalactamasa S. aureus ATCC 29213 Rojo. Positiva Betalactamasa H. influenzae ATCC 10211 Inerte. Negativa

•

Optoquina S. pneumoniae Halo de >/= 12 mm

•

ONPG E. coli Amarillo. coli Amarillo. Positivo ONPG Proteus sp Incoloro. Negativo

•

•

Ehrlich E. coli Anillo coli Anillo rojo. Indol positivo Ehrlich K .pneumoniae Incoloro. Indol negativo

•

Cloruro férrico Proteus sp Verde. Fenilalanina positivo

•

Cloruro férrico E. coli Incoloro. coli Incoloro. Fenilalanina negativo

•

REACTIVO MICROORGANISMO REACCION ESPERADA • •

Sobres de Anaerobiosis Bacteroides sp Crecimiento en Anaerobiosis Anaerobiosis Suero para tubos germinales Candida albicans Tubos germinales positivo

2. CON CONTRO TROL L DE DE CALID CALIDAD AD DE DE LOS LOS TINTE TINTES S: La clasificación correcta de las bacterias de acuerdo a las reacciones bioquímicas, dependen de la pureza, reactividad y estabilidad de los reactivos. La concentración de las soluci solucione ones s por efecto efecto de la evapo evaporac ración ión de los solven solventes tes o las variac variacion iones es introducidas en los métodos recomendados, puede afectar los resultados de modo adverso. Este es el caso de las tinciones para diferenciar bacterias por su reacción al Gram y la morfología bacteriana, tintes para cápsulas, esporas, etc. El control de calidad de éstos tintes debe realizarse primero con cada nuevo lote preparado; luego basta con un control cada semana para mantener un grado de seguridad apropiado en su uso. En el caso de la tinción de Gram, sin lugar a dudas una de las herramientas más importantes del microbiólogo, se recomienda tener especial cuidado con la mezcla de


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA alcohol-acetona alcohol-acetona para decolorar la placa. Es posiblemente éste reactivo el que produce mayores problemas ya sea por decoloración excesiva o por débil decoloración de los microorganismos. Es también la etapa de la tinción de Gram en la que el tiempo de exposición es más determinante. determinante. Para Para faci facili lita tarr el cont contro roll de los los tint tintes es,, se reco recomi mien enda da prep prepar arar ar plac placas as con con microorganismos microorganismos aislados en el trabajo rutinario, utilizando cepas frescas, tomando en cuenta aquellos que pudieran ser más útiles según la tinción a evaluar.

Algunos ejemplos son :

TINCION MICROORGANISMO REACCION ESPERADA

•

Gram Estafilococo sp Morado. Gram-Positivo. Gram E. coli Rosado. coli Rosado. Gram-Negativo. Gram-Negativo. Gram Mezcla de ambos Mezcla de ambas colores. Zielh-Neelsen Mycobacterium sp Rosadas. BAAR positivo

•

Zielh-Neelsen E. coli Azul. coli Azul. BAAR negativas.

•

Kellung S. pneumoniae Detección de cápsula positiva

•

Kellung E. coli Detección coli Detección de cápsula negativa Verde malaquita Clostridium sp Espora de color verde. Resto de la célula rosada. Verde malaquita E. coli Célula coli Célula completa rosada.

• • •

• •

•

ALGUNAS CAUSAS DE ERROR DURANTE LA TINCION :

1. El Violet Violeta a Crista Cristall tiende tiende a hacer hacer precip precipita itació ción, n, lo cual cual puede ser ser causa causa de observación de estructuras ficticias en el frotis. Si se observa precipitación, proceda a filtrar el tinte. 2. La evapora evaporación ción puede puede ser ser causa de de mal funcion funcionamie amiento nto de los los tintes. tintes. 3. Las placas placas que que no han han sido previa previamen mente te limpiad limpiadas as o con resto restos s de grasa grasa,, pueden ser causa de mala fijación y tinción de la muestra . 4. Sobrecal Sobrecalenta entamien miento to de la placa duran durante te la fijación. fijación. El exceso exceso de calor calor provoca provoca un daño daño físico físico en la pared pared celula celularr de las bacteri bacterias as que que puede puede afecta afectarr la retención de los colorantes. 5. Lavado Lavado muy muy fuerte fuerte de la placa placa durant durante e la tinció tinción. n. 6. Proporció Proporción n no adecua adecuada da de los los compone componentes ntes de de la tinción tinción.. 7. Algunos Algunos tintes tintes como Safran Safranina ina y Fucsina Fucsina básica básica pueden pueden contamin contaminarse arse.. Si se sospecha esto , cultive 1 ml en Tioglicolato, Tioglicolato, o descarte el tinte. 8. La tinción tinción de Zielh-N Zielh-Neels eelsen en tiene tiene sus limitacio limitaciones nes en cuanto cuanto a no ser específic específica a para micobacterias y su baja sensibilidad, ya que el nivel de detección es de 5,000 a 10,000 bacilos por mililitro de esputo. Esto debe ser tenido en cuenta a l evaluar una placa. 9. Una Cepa Control positiva, debe ser teñida cada vez que un nuevo lote de tintes para Zielh-Neelsen es preparado y cuando se reciba un nuevo pedido de


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA tintes y reactivos. Se puede utilizar la cepa de Mycobacterium tuberculosis ATCC 25177 como control positivo.

1. CONTRO CONTROL L DE CALIDAD CALIDAD DE DE ANTI ANTISUER SUEROS OS :

El mund mundo o de la micr microb obio iolo logí gía a ha sido sido inun inunda dado do cada cada vez vez más más por por prod produc ucto tos s comerciales hechos con el objetivo de detectar agentes etiológicos de enfermedades en el menor tiempo posible, con el mayor grado de especificidad , sensibilidad y algunos de ellos con la intención de eliminar el cultivo bacteriano como única forma diagnóstica. Estos sistemas actúan algunos con solo la muestra del paciente y otros requie requieren ren de la cepa cepa aislad aislada a o detect detectan an sus metabo metabolit litos. os. Estos Estos sistem sistemas as se han han convertido en un arma imprescindible para el microbiólogo y en muchos casos dan confianza en la seguridad del diagnóstico y en otras se utilizan en la detección de microorganismos difíciles de cultivar. Estos productos para la detección directa del espécimen o la cepa bacteriana, son considerados exámenes bacterianos y no test serológicos. En forma general éstos kit deben ser probados cada vez que se recibe un nuevo lote y cada vez que se utilicen, se le deben correr sus controles positivo y negativo que vienen con cada kit.

CONSIDERACIONES GENERALES EN EL USO DE ANTISUEROS :

1. 2. 3. 4. 5.

Los sistemas son para uso exclusivo de diagnóstico in vitro. vitro. Conserva Conservarr todos todos los los reactivo reactivos s en refrigera refrigeración. ción. Anotar Anotar la la fecha fecha en en que se abre abre el el kit. kit. No congel congelar ar los reacti reactivos vos.. No utilizar utilizar los los reactivos reactivos si se sospecha sospecha deteri deterioro oro de los mismos mismos,, tales como como si se observa cambio de color, autoaglutinación en el envase, no producen la reacción esperada con los controles respectivos, reactivos contaminados o con signos de evaporación. 6. El personal personal de laborat laboratorio orio califica calificado, do, debe utiliza utilizarr las técnicas técnicas aséptica asépticas s y las precauciones precauciones habituales para protegerse de los agentes infecciosos. 7. Nunca Nunca pipetear pipetear con la boca boca las las muestras muestras y/o los reactiv reactivos. os. 8. No utiliz utilizar ar reacti reactivos vos de lotes lotes diferente diferentes. s. 9. No utiliza utilizarr los reacti reactivos vos despué después s de la fecha fecha de caduc caducidad idad.. 10. Después Después de sacar sacar los reactivos reactivos de la refrigerado refrigeradora, ra, dejarlos a temperatur temperatura a ambiente antes de utilizar. 11. Todos los productos inoculados deben ser considerados como potencialmente potencialmente infecciosos. 12. No volver a utilizar las tarjetas tarjetas desechables , después después de haber sido utilizadas. utilizadas.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 13. Algunas pruebas pruebas deben estar precedidas por su apropiado cultivo, cultivo, aislamiento y pruebas bioquímicas preliminares, antes de realizar métodos serológicos y una identificación final. 14. Al terminar la prueba, todo el material sucio y productos inoculados inoculados deben ser sometido sometidos s a esteriliz esterilizació ación n por autoclav autoclave, e, incinera incinerados dos o sumergid sumergidos os en un desinfectante germicida adecuado, adecuado, antes de su eliminación. eliminación. 15. La interpretación de los los resultados debe ser hecha por por personal calificado, calificado, que tomará en cuenta el contexto clínico, el origen de la muestra, los aspectos macro y microscópico y su experiencia. 16. Aglutinación por Antígenos de Estreptococos : Un test positivo está indicado por la aparición de una aglutinación nítida de látex en 2 minutos en un círculo, lo cual permite la identificación identificación de grupo. No tomar en cuenta las aglutinaciones débiles que pudieran aparecer en otros círculos. Una aglutinación intensa en varias suspensiones de látex, representa una mezcla de grupos o una cepa autoaglutinable. Volver a hacer el aislamiento de la colonia y el test de látex. Una vez a la semana verificar la reactividad de las suspensiones bacterianas. Para ello seguir las indicaciones del fabricante y reemplazar la cepa a analizar , por el control positivo. Debe aparecer una aglutinación en cada suspensión látex. También la especificidad del test se puede analizar utilizando cepas • control como el Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ó seguir la técnica sin emulsionar colonias en la enzima de extracción, o mezclar los reactivos de látex con una gota de NaCl 0.15 mol/l. No debe aparecer aglutinación en las suspensiones de látex. Pueden aparecer resultados falsamente negativos si se estudia una cantidad insuficiente de colonias Cuando se utiliza el método de detección directa de antígenos en muestras del tracto respiratorio superior, hay que tener en cuenta la baja sensibilidad del test, por lo que todo resultado negativo debe ser seguido por su correspondiente cultivo para verificar. •

•

•

•

•

•

17) Detección •

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• •

de antígenos asociados a meningitis bacteriana : El antígeno de N.meningitidis grupo B es más difícil de detectar, ya que está relacionado estructural e inmunologicamente con el antígeno de E.coli K1. E.coli K1. Por ello una reacción positiva con éste antisuero en LCR de reci recién én naci nacido do o prem premat atur uro, o, indi indica ca en la mayo mayorí ría a de los los caso casos s la presencia de E.coli K1. E.coli K1. En un sujeto de más edad, si puede indicar la presencia de N. meningitidis grupo B. La sensibilidad de éste látex de aglutinación tiene un rango entre 65% para S. pneumoniae y 95% para H. influenzae. influenzae. Como otras pruebas de látex, un valor positivo depende del nivel de antígenos detectable. Este es un test de descarte, que no reemplaza al cultivo.



Cada laboratorio laboratorio debe evaluar la sensibil sensibilidad idad,, especific especificidad idad y valor valor predecible para su población de pacientes.

18) Aglutinación por Salmonella sp : • •

Sea estricto en el tiempo de la reacción. Miembros del grupo Salmonella están antigénicamente relacionados a Citrob Citrobact acter er y Arizon Arizona. a. Antíge Antígenos nos de éstos éstos microo microorga rganis nismos mos tien tienen en estr estruc uctu tura ras s comp compar arti tida das, s, por por lo que que pued puede e habe haber r reacciones cruzadas. Por Por esto esto es impo import rtan ante te que que la prue prueba ba de aglu agluti tina naci ción ón por por Salmon Salmonell ella a solo solo se realic realice e a aquel aquellas las cepas cepas que que muestr muestran an patrón bioquímico del género Salmonella. 



5. CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS MEDIANTE DISCO: Hemos querido resaltar los aspectos de control de calidad de la prueba de sensibilidad a los antibióticos por difusión simple en agar, utilizando discos de sensibilidad, ya que es la prueba de mayor utilidad en nuestro medio. Es importante tener presente que ésta prueba a sido designada exclusivamente para examinar microorganismos microorganismos de rápido crecimiento, utilizando la normativa

NCCLS M2-A6 , volumen 13, número 24. Este Este método método no es útil útil para para organi organismo smos s fastid fastidio iosos sos,, de creci crecimie miento nto lento lento o para para anaerobios. El método de difusión simple en agar es sin lugar a dudas el sistema de mayor uso para la realización de la sensibilidad bacteriana. Hay que tener en cuenta el gran valor de ésta prueba en la detección temprana de multiresistencia, escogencia y valoración de un antibióti antibiótico co frente frente a un microorg microorganis anismos mos patógeno patógeno,, protección protección de infección infección,, estudios epidemiológicos, epidemiológicos, etc . La prueba de sensibilidad a los antibióticos consta de varios elementos que deben ser tenidos en cuenta: El medio de cultivo, inoculo, incubación, lectura e interpretación y el reporte.

1. Con Contro troll de calid calidad ad del del medio medio de culti cultivo: vo: 1. Utiliz Utilizar ar agar agar de Muel Muelle ler-H r-Hint inton. on. 2. La calidad calidad del del agua agua es determin determinante, ante, ya que que la misma misma debe debe estar estar libre de ione iones s metá metáli lico cos. s. Las Las vari variac acio ione nes s de cati cation ones es diva divale lent ntes es,, prin princi cipa palm lmen ente te calc calcio io y magn magnes esio io,, afec afecta tará rá los los resu result ltad ados os con con aminoglicósidos, tetraciclina y colistina, cuando se prueban ante cepas de Ps. Aeruginosa. Un contenido excesivo en catión, reducirá la zona


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA de inhibición, mientras que un escaso contenido en catión, puede dar un inaceptable aumento en el tamaño de la zona. 3. Servir Servir en platos platos Petri Petri grand grandes es de 150 150 x 15 mm mm preferible preferiblemente mente o 100 x 15 mm, con una profundidad de 4 a 5 mm 4. Aproxima Aproximadame damente nte se utiliza utilizan n 25 cc para para platos platos de 100 mm y 60 cc cc para platos de 150 mm. 5. Volúmenes mayores de medio provocan disminución en el tamaño del halo de inhibición, y volúmenes menores halos más pequeños. 6. Se deben seguir las normas generales establecidas para almacenamiento almacenamiento del medio de cultivo. 7. Los platos Petri deben ser colocados en la incubadora para secarlos de restos de agua producto de la condensación, condensación, antes de ser utilizados para no diluir el inoculo bacteriano.

1. Contro Controll de calida calidad d de los los discos discos de sensi sensibil bilida idad: d: Las metas de un programa de control de calidad van destinadas a monitorear: La preci recisi sió ón y exact xactiitud tud del del proc proced ediimie miento nto de la prueb rueba a de susceptib susceptibilid ilidad, ad, el comporta comportamien miento to de los reactivos reactivos utilizad utilizados os en la prueba y la actuación de las personas que llevan a cabo las pruebas y sus resultados. 1. Los discos discos deben deben ser ser almacenad almacenados os a un temperatu temperatura ra entre entre –20 y +8°C. +8°C. Algunos discos, especialmente los de antibióticos ß-lactámicos deben guar guarda dars rse e cong congel elad ados os a -20° -20°C. C. Solo Solo los los vial viales es en uso uso debe deben n mantenerse a temperatura de refrigeración. 2. Al sacarlos sacarlos de la la refrigera refrigeradora dora para para su uso, uso, espere espere a que los viales viales


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA alcancen la temperatura ambiente por 1 a 2 horas. 3. Siempre Siempre utilice utilice primero primero los viales viales con fecha fecha de caducida caducidad d más próxima. próxima. 4. Siem Siempr pre e que que un cart cartuc ucho ho a sido sido extr extrai aido do del del paqu paquet ete, e, éste éste debe debe guardarse en un desecador que cierre perfectamente. 5. Cuan Cuando do se util utilic ice e el apar aparat ato o disp dispen ensa sado dorr que que cont contie iene ne los los disc discos os deberá mantenerse siempre refrigerado. 6. Los disco discos s son coloca colocados dos en el medio medio a una dista distanci ncia a de más de 24 mm del centro de uno al centro del otro. En todo caso no colocar más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni más de 5 discos sobre la placa de 100 mm. 7. Procurar Procurar no colocar colocar discos discos de antibió antibiótico ticos s bactericid bactericidas as ( Ej. Penicilina Penicilina,, Cefalosporinas, Aminoglicósidos, Vancomicina ) al lado de antibióticos bacterios bacteriostátic táticos os ( Ej. Cloranfe Cloranfenico nicol, l, Tetracicli etraciclina, na, Sulfonami Sulfonamidas das ) para evitar el antagonismo antibiótico. 8. Colocar Colocar las placa placas s en la incubado incubadora ra dentro dentro de los los 15 primeros primeros minuto minutos s después de su aplicación. 9. Para Para veri verifi fica carr el esta estado do de los los disc discos os de sens sensib ibil ilid idad ad,, util utilic ice e cepa cepas s control ATCC, las cuales son seleccionadas por su estabilidad genética y por su utilidad en el método utilizado. Estas cepas se corren como una muestra más y se correlaciona el tamaño de los halos de inhibición con las medidas expresadas en los Manuales NCCLS M2-A6.

Entre las cepas ce pas ATCC ATCC ( American Type Culture Collection ) recomendadas están: Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 4961 9 Haemophilus influenzae ATCC 49247 y 49766 Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 49 226 Escherichia coli ATCC coli ATCC 25922 y 35218 ( La E coli 35218 como 35218 como organismo de control para combinaciones combinaciones con inhibidor de betalactamasa, como aquellos que contienen ácido clavulánico, sulbactam o tazobactam ). Staphylococcus Staphylococcus aureus ATCC 25923 y 29213 Pseudomona aeruginosa ATCC 27853 27 853


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Enterococcus faecalis ATCC 29212 29 212 ( Para ser utilizado con discos de alto contenido de Aminoglicósidos Aminoglicósidos ).

EL ESTANDAR McFARLAND :

a. La dens densid idad ad de la turb turbid idez ez del del Está Estánd ndar ar McFa McFarl rlan and d debe deberá rá ser ser verificada utilizando un espectrofotómetro con dirección de luz de 1 cm y cubetas cubetas adecuada adecuadas s para determina determinarr absorban absorbancia. cia. Para realizar el control de un estándar McFarland de 0.5 , la absorbancia deberá leer entre 0.08 a 0.10 i. a una una longi longitud tud de onda onda de 625 625 nm. nm. b. La suspensi suspensión ón de Sulfato Sulfato de Bario Bario deberá deberá transfe transferirse rirse en alícuo alícuotas tas de 4 a 6 ml dentro de tubos con rosca. Estos tubos deberán guardarse a temperatura ambiente ambiente en un lugar fresco y oscuro. c. Antes Antes de ser usados, usados, los patro patrones nes deberán deberán agitar agitarse se para una una adecuada adecuada homogenización. d. Mensualm Mensualmente ente los los patrones patrones son descar descartado tados s y vueltos vueltos a preparar preparar,, o en su defecto se debe comprobar su densidad.

HABITUALES CAUSAS DE ERROR EN LA PRUEBA CON DISCO: a. Error Error administr administrativo ativo en en la transcrip transcripción ción de de los datos datos del contro controll de calidad. b. Lectura Lectura erróne errónea a al medir medir el diámetr diámetro o de la la zona. zona. c. Contamin Contaminació ación n u otros otros cambios cambios en en la cepa control. control. d. Suspensi Suspensión ón del inócul inóculo o demasiad demasiado o fuerte fuerte o demasiado demasiado débil débil.. e. Mala agita agitación ción del del estánda estándarr McFarland McFarland o estánd estándar ar dañado. dañado. f. Incorrect Incorrecta a temper temperatura atura,, tiempo tiempo o atmósf atmósfera era de incubació incubación. n. g. Perdida Perdida de la poten potencia cia del disco disco durant durante e su transporte transporte,, su manejo manejo o su almacenaje en el laboratorio.

3) Control de calidad de la lectura e interpretación:

1. Cuando se va a determinar la sensibilidad del S. Pneumoniae a la Penicilina, utilizar un disco de Oxacilina de 1 µg. Las cepas de S. Pneumoniae con zonas de Oxacilina de >/- a 20 mm son susceptibles a penicilina penicilina ( CIM

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 2. Se recomien recomienda da utilizar utilizar un un disco de de Oxacilina Oxacilina de de 1 µg para probar probar Resistencia a Oxacilina y Meticilina de los Estafilococos. Esto se debe a que que la Ox Oxac acil ilin ina a es más más resi resist sten ente te a la degr degrad adac ació ión n dura durant nte e el alma almace cena naje je y porq porque ue es más más prob probab able le que que dete detect cte e a las las cepa cepas s heteroresistentes heteroresistentes de Estafilococo. 3. Las pruebas pruebas para para detectar detectar Estafilo Estafilococo cocos s Meticilina Meticilina Resiste Resistentes ntes ( MRSA), deben incubarse a 35° C por 24 horas exactas.

4. Los Estafiloc Estafilococos ocos meticil meticilina ina resisten resistentes tes deberán deberán informa informarse rse como como resist resistent entes es a todos todos los Cefem Cefems s y otros otros betal betalact actámi ámicos cos,, así como como Ampicili Ampicilina/á na/ácido cido clavulán clavulánico, ico, Ampicilin Ampicilina/Sul a/Sulbacta bactam, m, Ticarci Ticarcilina lina/ácid /ácido o clavulánico, clavulánico, Piperacicilina/T Piperacicilina/Tazobactam azobactam e Imipenem, independiente de los resultados in vitro con dichos agentes. agentes . 5. Los Entero Enterococ cocos os pueden pueden ser resist resisten entes tes a Penici Penicilin lina a y a Ampicil Ampicilina ina debido debido al desarr desarroll ollo o de poca poca afinid afinidad ad de las proteí proteínas nas fijado fijadoras ras de penicilina ( PBP’s) o a la producción de betalactamasa. Las pruebas de difusión en disco pueden detectar con exactitud los aislamientos que poseen alteradas las PBP’s , pero no detectarán con fiabilidad las cepas producto productoras ras de betalacta betalactamasa masa.. Estas últimas han de detectar detectarse se con pruebas directas de betalactamasa ( Ej. Cefinasa ). Las placas han de leerse con luz transmitida para visualizar cualquiera pequeña colonia dentro del halo, que haría la cepa resistente. 6. Todo caso caso de Estafiloco Estafilococo co resisten resistente te a la Vancom Vancomicin icina, a, debe ser ser confirmado, enviado a un laboratorio de referencia e informar a las Autoridades de Salud Pública. 7. Cuan Cuando do se trat trata a de Sulf Sulfon onam amid idas as,, los los micr microo oorg rgan anis ismo mos s debe deben n desarrollarse por varias generaciones antes de que ocurra inhibición, por lo que se hace caso omiso del crecimiento leve, al igual que de un vestigio de proliferación dentro del halo de inhibición. 8. Si se obse observ rvan an colo coloni nias as dent dentro ro de un halo halo de inhi inhibi bici ción ón,, debe deberá rá confirmarse la pureza de la cepa y repetir la prueba. 9. La difusión ( " swarming ") de los Proteus sp no es inhibida por todos los antibióticos, por lo que no se toma en cuenta. 10. Ocasionalmente se pueden observar varis colonias esparcidas por una zona de inhibición. Este fenómeno es constante para la Serratia sp y la Polimi Polimixin xina. a. Las coloni colonias as se consid considera erarán rán signif significa icativ tivas as y la cepa cepa resistente


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 11. Solo Solo es nece necesa sari rio o prob probar ar una una Tetra etraci cicl clin ina a y sus sus resu result ltad ados os son son equivalentes a la Tetraciclina, Minociclina, Doxiciclina. 12. 12. Los result resultado ados s obten obtenido idos s con al Polimi Polimixin xina, a, pueden pueden aplic aplicars arse e a la Colimicina. Su halo es pequeño debido a su pobre difusión en agar. 13. Se ha informado que algunas cepas de Providencia sp dan resultados de sensib sensibili ilida dad d falsos falsos con discos discos de Cefpr Cefprozi ozill , las cepas de éste éste género no deben analizarse ni informarse con éste disco. Estafiloc lococo ocos s resist resistent entes es a la Metici Meticilin lina, a, Oxacil Oxacilin ina a o Nafci Nafcilin lina, a, 14. Los Estafi tamb tambié ién n pued puede e ser ser info inform rmad ados os como como resi resist sten ente tes s a la Peni Penici cili lina na,, Cefalo Cefalospo sporin rinas as , carbap carbapene enem m y combin combinaci acione ones s de inhibi inhibido dores res de betalactamasa, a pesar de su aparente sensibilidad in vitro, vitro, lo cual no se refleja in vivo. vivo. 15. La Cefaloti Cefalotina na puede puede utilizarse utilizarse para represen representar tar Cefaloti Cefalotina, na, Cefradin Cefradina a Cefaclor y Cefadroxil 16. 16. Los Los dato datos s de sens sensib ibil ilid idad ad al ácid ácido o nali nalidí díxi xico co,, Nitr Nitrof ofur uran anto toin ina, a, Norfloxa Norfloxacina cina,, Sulfonam Sulfonamidas idas y Trimeth Trimethopri oprim, m, se aplican aplican solament solamente e a cepas aisladas de infecciones urinarias. 17. El disco de Sulfisoxazol Sulfisoxazol puede ser usado usado para representa representarr cualquie cualquiera ra de las Sulfonamidas disponibles.

18. En cepas de Salmonella y Shigella, solo Ampicilina, una Quinolona y Trime Trimetho thopri prim/s m/sulf ulfame ametox toxazo azoll deben deben ser probad probados os e infor informad mados os de rutina en heces. Además el Cloranfenicol y una cefalosporina de tercera generación deben ser probados e informados en cepas de Salmonella sp extraintestinal. sp, los aminoglicósidos y las 19. En cepas de Salmonella sp y Shigella sp, cefalospo cefalosporina rinas s de primera primera y segunda segunda generació generación, n, pueden pueden aparecer aparecer como activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y no deben ser informados como susceptibles. 20. La prueba de la betalactamas betalactamasa a predice predice la resistenc resistencia ia a la Penicilina, Penicilina, Ampicilina y Amoxicilina. 21. Las cefalosporinas pueden aparecer activas in vitro contra Listeria sp, sp, pero no son efectivas clínicamente y no deben ser informadas como susceptibles. cefalosporinas, los aminoglicósido aminoglicósido ( Excepto por 22. Los Enterococos sp las cefalosporinas, resi resist sten enci cia a de nive nivell alto alto ), Trime rimeth thop opri rim/ m/su sulf lfam amet etox oxaz azol ole e y la Clindamycina, pueden aparecer activos in vitro pero no son efectivos clínicamente y éstas cepas no deben informarse como susceptibles. 23. 23. La susc suscep epti tibi bili lida dad d y resi resist sten enci cia a a Azit Azitro romi mici cina na,, Clar Clarit itro romi mici cina na y Diritromicina puede ser interferida por la prueba de Eritromicina. 24. Solo los resultados de las pruebas de Ampicilina, una cefalosporina de terc tercer era a gene genera raci ción ón,, el Clor Cloran anfe feni nico coll y Mero Merope pene nem m debe deben n ser ser inform informad ados os de rutina rutina en todas todas las cepas cepas aislad aisladas as de H. influenz influenzae ae aisladas de sangre y LCR de pacientes con infecciones severas. resultado ados s de las prueba pruebas s de suscep susceptib tibili ilida dad d con Penici Penicilin lina, a, 25. Los result Cefota Cefotaxim xime e o Ceftr Ceftriax iaxone one,, Merope Meropenem nem y Vancomi ancomicin cina, a, deben deben ser MANUAL DE CONTROL DE38CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA informados de rutina en cepas de S. pneumoniae aisladas de sangre y LCR LCR de paci pacien ente tes s con con infe infecc ccio ione nes s seve severa ras s como como meni mening ngit itis is y bacteremia.

Verificación de antibiogramas atípicos : a. Examine Examine primero primero por por errore errores s de trascripc trascripción. ión. b. Reexam Reexamin ine e el plato plato de sensi sensibil bilida idad. d. c. Evalué Evalué reportes reportes previ previos os del pacie paciente nte para para observa observarr su patrón patrón de sensibilidad anterior. d. Repita Repita los test de identifi identificaci cación ón y sensibilid sensibilidad ad a los antibióti antibióticos. cos.

CONDICIONES SUGERIDAS QUE REQUIEREN VERIFICACIÓN DEL RESULTADO RESULTADO DE SENSIBILIDAD A LOS ANTIBIÓTICOS :

1. S. aureus resistente a Oxacilina. 2. S. pneumoniae resistente a Penicilina. 3. Cefalosporinas de amplio espectro ( Cefotaxime, Ceftriaxone ) resistente a S. pneumoniae. pneumoniae. Streptococcus ccus viridans viridans peni penici cili lina na resi resist sten ente te o inte interm rmed edio io,, 4. Streptoco aislados de áreas estériles del cuerpo. 5. Esta stafilo filoco coco cos s o Ente Entero roco coco cos s resi resite ten ntes tes a la Peni Penici cili lina na o intermedio. 6. Entero Enterococ cocos os con altos nivele niveles s de resiste resistenci ncia a a la Genta Gentamic micina ina aislados de áreas estériles del cuerpo. MANUAL DE CONTROL DE39CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 7. Klebsiella sp o E. coli con coli con potencial espectro de betalactamasa. betalactamasa. ( Ej. Resistente a Ceftazidime ). 8. Bacilos Gramnegativos Gentamicina-

no

fastidiosos

resistentes

a

Tobramicina-Amikacina. Trimethoprim-Sulfametoxazole. zole. 9. S. maltophilia resistente a Trimethoprim-Sulfametoxa 10. H. influenzae Ampicilina resistente y betalactamasa negativa.

11. Un aislamient aislamiento o para el cual el antibiog antibiograma rama es atípico para la especie. 12. Ampicilina y/o Cefalotina Cefalotina susceptible para para Enterobacter sp, Citrobacter freundii , Serratia marcescen y Ps. Aeruginosa. Aeruginosa.

13. Klebsiella sp sensible a Ampicilina. 14. Bacilo Bacilos s Gramne Gramnega gativ tivos os Imipen Imipenem em resist resistent entes es o interm intermed edio, io, excepto S. maltophilia. maltophilia. 15. Bacilos Gramnegativos Gramnegativos Ciprofloxacina Ciprofloxacina resistente, excepto S. maltophilia o B. cepacia. cepacia.

C. CONTRO CONTROL L DE CALIDAD CALIDAD DE LA SENSI SENSIBILIDAD BILIDAD A LOS LOS ANTIBIÓTICO ANTIBIÓTICOS S EN LOS SISTEMAS COMPUTARIZADOS :


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Los Laboratorios de Microbiología modernos tienen a su alcance una creciente gama de sistem sistemas as comput computari arizad zados os para para la identi identific ficaci ación ón de los micro microorg organi anismo smos s y su susceptibilidad a los antibióticos. Algunos de estos sistemas traen consigo programas de computadora para ayudar a evaluar el control de calidad de los mismos. En algunos casos, casos, la computad computadora ora hace un control control periódico periódico de su funciona funcionamien miento to mediante mediante comandos u ordenes preestablecidas. preestablecidas. Debido a que en nuestro medio existe solamente el Sistema Vitek de identificación microbiana, solo haremos algunas observaciones relativas a éste sistema. El Sistema Vitek utiliza una determinación turbidimétrica de la rapidez de crecimiento del microorganismo, en presencia de agentes antimicrobianos para obtener un análisis de regr regres esió ión n line lineal al y post poster erio iorm rmen ente te dete determ rmin inar ar un algo algori ritm tmo o deri deriva vado do de la concentración inhibitoria inhibitoria mínima ( CIM ). Actualmente el laboratorio cuenta con un grupo limitado de tarjetas Vitek para la sensibilidad sensibilidad a los antibióticos, tal como sigue:

a. Sensib Sensibili ilidad dad de llos os Gramneg Gramnegati ativos: vos: 1. GNS : Para uso en Policlínicas y área hospitalaria. hospitalaria. 1. GNS-P GNS-PA : Para Para uso hospita hospitalario lario – Cuida Cuidados dos intensi intensivos. vos. 2. GNS-GD GNS-GD : Uso hospi hospitala talario rio – Líquidos Líquidos corporal corporales es 3. GNS-OP GNS-OP : Uso exclusivo exclusivo para uroculti urocultivos. vos.

a. Sensib Sensibili ilidad dad de llos os Grampos Grampositiv itivos: os: 1. GPS-SA : Para Estafilococos y bacilos Grampositivos. Grampositivos. 2. GPS-TA : Para Estreptococos, inclusive Enterococos.

Al hacer el control de calidad de las tarjetas de sensibilidad a los antibióticos, se recomienda utilizar cepas ATCC ATCC con CIM conocidas. Estas pruebas se pueden realizar una vez al mes durante 10 días seguidos, en los cuales se aceptan no más de 2 valores valores de CIM para cada combinac combinación ión de Antibiótico Antibiótico/Org /Organism anismo o fuera fuera del rango establecido. Si se diera el caso de deben correr controles de calidad con cepas ATCC durante 30 días consecutivos, en los cuales no se aceptan más de 3 valores fuera de rango. Si los hay, llamar al Departamento de Servicio de Vitek para el chequeo correspondiente. Para realizar los controles se recomiendan las siguientes cepas ATCC ATCC para las tarjetas respectivas:

TARJETA CEPAS ATCC • •

GNS E. coli ATCC coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853 faecalis ATCC 29212 29 212



GNS-PA E. coli A coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853 27 853

TARJETA CEPAS ATCC

•

GNS-GD E. coli ATCC coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853 2785 3

•

coli ATCC coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212 2921 2 GNS-OP E. coli ATCC coli ATCC 25922 / Ps. aeruginosa ATCC 27853 2785 3

• • • • •

coli ATCC coli ATCC 35218 / E. faecalis ATCC 29212 2921 2 GPS-SA E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213 coli A coli ATCC 35218 3521 8 GPS-TA E. faecalis ATCC 29212 / S. aureus ATCC 29213 2921 3

Las tarj tarjet etas as de sensib sensibil ilid idad ad a los los an anti tibi biót ótic icos os del Sist Sistema ema Vitek Vitek,, ha han n sido sido comp co mpar arad ado o co con n los los está estánd ndar ares es de la NCCL NCCLS, S, medi median ante te las las técn técnic icas as de microdilución para obtener la CIM; sin embargo, bioMérieux Vitek recomienda la utiliz utilizació ación n de método métodoss alterno alternoss para confir confirmar mar la suscept susceptibi ibilid lidad ad a ciertos ciertos microorganismos contra drogas específicas.

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO GNS Ampicilina A. Ampicilina A. lwoffii, Aeromona sp, Citrobacter sp GNS Carbenicilina Carbenicilina Acinetobacter Acinetobacter lwoffii GNS Cefoxitin A. Cefoxitin A. lwoffii, Aeromona sp. GNS Cefalotina Aeromona Cefalotina Aeromona sp GNS Trimeth/Sulfa A. Trimeth/Sulfa A. lwoffii, Aeromona sp GNS-PA Ceftazidime Ceftazidime A. A. jejunii, A. lwoffii GNS-PA Imipenem Aeromona Imipenem Aeromona sp GNS-PA Mezlocilina Aeromona Mezlocilina Aeromona sp GNS-PA Piperacilina A. Piperacilina A. jejunii, A. lwoffii Aeromona sp , Ps. aeruginosa GNS-PA Ticarcilina A. Ticarcilina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp



GNS-GD Ampicilina A. Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp, Citrobacter sp GNS-GD Cefazolina Aeromona Cefazolina Aeromona sp GNS-GD Cefoxitina A. Cefoxitina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp GNS-GD Imipenem Aeromona Imipenem Aeromona sp GNS-GD Piperacilina A. Piperacilina A. jejunii , A. lwoffii , lwoffii , Aeromona sp, Ps. aeruginosa

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO

GNS-GD Ticarcilina/Acido clavulánico Aeromona clavulánico Aeromona sp, Ps. aeruginosa GNS-GD Trimetho/Sulfametoxazol Trimetho/Sulfametoxazole e A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp GNS-OP Acido nalidíxico Pseudomona sp ( diferente a Ps. aeruginosa) aeruginosa) GNS-OP Ampicilina A. Ampicilina A. jejunii, A. lwoffii , Aeromona sp, Citrobacter sp GNS-OP Carbenicilina Carbenicilina A. jejunii , A. lwoffii GNS-OP Cefalotina Aeromona Cefalotina Aeromona sp GNS-OP Ceftriaxone Klebsiella sp GNS-OP Norfloxacina Acinetobacter Norfloxacina Acinetobacter sp GNS-OP Trimetho/Sulfametoxazole A. Trimetho/Sulfametoxazole A. jejunii, A.lwoffii, Aeromona sp

GPS-SA Eritromicina Enterococcus sp, sp, Estreptococos grupo D GPS-SA Tetraciclina Estafilococos coagulasa negativa,


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Enterococcus sp, sp, Estreptococos grupo B, Estreptococos grupo D. GPS-SA Vancomicina Enterococcus sp. sp. GPS-TA Cloranfenicol Staphylococcus Staphylococcus sp GPS-TA Eritromicina Estafilococos coagulasa negativa, Enterococcus sp, sp, Estreptococos grupo B, Estreptococos grupo D GPS-TA Vancomicina Enterococcus sp

Existe un grupo de microorganismos en que se desconoce la capacidad de las tarjet tarjetas as de sensibi sensibilid lidad ad para para detect detectar ar resiste resistenci nciaa a antibi antibióti óticos cos específ específicos icos,, debido a que las cepas resistentes no estaban disponibles en el momento de realizar los test comparativos. Entre ellos tenemos :

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO GNS Amikacina Aeromona Amikacina Aeromona sp GNS Cefalotina A. Cefalotina A. lwoffii GNS Gentamicina Aeromona Gentamicina Aeromona sp GNS Tetraciclina A. Tetraciclina A. lwoffii GNS Tobramicina Aeromona Tobramicina Aeromona sp GNS-PA Amikacina Aeromona Amikacina Aeromona sp GNS-PA Aztreonam A. Aztreonam A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp GNS-PA Ceftazidima Ceftazidima Aeromona Aeromona sp

TARJETA ANTIBIOTICO MICROORGANISMO GNS-PA Ciprofloxacina Aeromona Ciprofloxacina Aeromona sp GNS-PA Gentamicina Aeromona Gentamicina Aeromona sp GNS-PA Tobramicina Aeromona Tobramicina Aeromona sp GNS-GD Cefazolina A. Cefazolina A. jejunii, A. lwoffii


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA GNS-GD Cefotaxime Cefotaxime A. A. jejunii, A. lwoff ii, ii, Aeromona sp, Citrobacter sp GNS-GD Ciprofloxacina Ciprofloxacina Aeromona Aeromona sp GNS-GD Gentamicina Aeromona Gentamicina Aeromona sp GNS-GD Tobramicina Aeromona Tobramicina Aeromona sp GNS-OP Acido nalidíxico A. nalidíxico A. jejunii, A. lwoffii GNS-OP Amoxicilina/Acido clavulánico A. clavulánico A. jejunii, A. lwoffii GNS-OP Cefalotina A. Cefalotina A. jejunii, A. lwoffii GNS-OP Ceftriaxone Ceftriaxone Aeromona Aeromona sp GNS-OP Ciprofloxacina Ciprofloxacina Aeromona sp GNS-OP Nitrofurantoina Nitrofurantoina A. jejunii, A. lwoffii, Aeromona sp GNS-OP Norfloxacina Aeromona Norfloxacina Aeromona sp GNS-OP Tetraciclina Tetraciclina A. A. jejunii, A. lwoffii GPS-SA Penicilina y Ampicilina Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa GPS-TA Penicilina y Ampicilina Enterococcus sp : Utilizar Betalactamasa

CONSIDERACIONES GENERALES: a. Se debe tener tener especia especiall cuidado cuidado en la preparació preparación n del inóculo. inóculo. Fallas Fallas en su prepar preparaci ación, ón, tiene tienen n efecto efecto sobre sobre el funcio funcionam namien iento to de todo todo el instrumento. b. Siempr Siempre e tener tener present presente e que el sistema sistema no puede puede examinar examinar todos todos los grupos relevantes de bacterias. c. El uso de colonias absolutamente aisladas es clave en el aprovechamiento aprovechamiento de los sistemas computarizados. computarizados. d. Algunos Algunos de los los organismo organismos s sugerido sugeridos s por el fabrica fabricante nte para para control control de calidad, podrían no detectar deterioro en el instrumento o la calidad de los reactivos. e. Es relevante relevante utiliz utilizar ar métodos métodos alternos alternos de sensib sensibilid ilidad ad a los antibióti antibióticos cos en aquellos casos en que la literatura que acompaña las tarjetas indique que el sistema falla en detectar resistencia. f. Se han reportado casos de falsa sensibilidad o resistencia, particularmente debido al lector del instrumento o a un corto periodo de


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA incubación durante la prueba de sensibilidad. Un periodo de 3.5 a 6 horas podría no ser adecuado para expresar todos los mecanismos de resistencia de las bacterias. Tal es el caso caso de algu alguno nos s baci bacilo los s Gram Gramne nega gati tivo vos s que que indu induce cen n resist resistenc encia ia media mediada da por ß-lact ß-lactama amasa sa a alguno algunos s antimi antimicro crobia bianos nos enzi enzimá máti tica came ment nte e lábi lábile les s a la ß-la ß-lact ctam amas asa, a, como como ocur ocurre re con con el Citrobacter freundii, Enterobacter sp, Serratia sp, Morganella morganii, Providencia sp y Ps. aeruginosa.

g. Se ha observado una falsa resistencia a Aztreonam, especialmente por Proteus y Morganella sp por problemas de detección fotométrica del crecimiento. h. Se han reporta reportado do falsa falsa resistenci resistencia a a Imipenem Imipenem para varias varias especi especies es en periodos largos y cortos de incubación. Esto no es común y se debe a la degradación del antibiótico o la concentración de Zinc en el medio. i. Una baja o moderado nivel de resistencia a la Vancomicina frente a Enterococcus sp se ha detectado, especialmente del tipo VanB, ya que podría no ser detectado en periodos cortos de incubación. j. Se han observado o problemas en la detección de resistencia a altos niveles de Gentamicina o Estreptomicina frente a Enterococcus sp en incubaciones incubaciones largas y cortas. k. Tener ener pres presen ente te colo coloca carr las las marc marcas as exte extern rnas as en la tarjet tarjeta, a, ante antes s de meterla a la incubadora/lector. l. No deje deje pasar pasar más más de 15 minuto minutos s despué después s de prepa prepara ra el inócu inóculo, lo, para para llenar las tarjetas y colocarla en la incubadora. m. Chequear Chequear la solución solución salina por esterilid esterilidad. ad. Para ello inocule inocule en caldo de cultivo e incube a 35°C por 24 horas. n. Con Con cada cada lote lote de prep prepar arac ació ión n de inóc inócul ulo, o, esta estand ndar ariz izar ar prim primer ero o el calorímetro. o. Haga Haga que que el Depa Depart rtam amen ento to de Serv Servic icio io técn técnic ico o de Vitek itek revi revise se periódicamente periódicamente el lector del aparato para calibrarlo. p. Lleve Lleve un récord récord de cualquier cualquier discrep discrepanci ancia a en la identificac identificación ión de cepas cepas está estánd ndar ar de cont contro rol. l. Igua Igualm lmen ente te el tipo tipo de tarj tarjet eta, a, lote lote,, fech fecha a de expiración, etc.

PATRON DE RESISTENCIA ESPERADA PARA ALGUNOS MICROORGANISMOS:

MICROORGANISMO RESISTENCIA ESPERADA • • •

Citrobacter, Enterobacter , Ampicilina Klebsiella, Morganella, Providencia, Proteus vulgaris,



•

Proteus penneri, Serratia, Yersinia. Citrobacter freundii, Enterobacter , Cefazolin, Cefalotina Morganella, P. Vulgaris, P. penneri, Providencia, Serratia, Yersinia.

•

Klebsiella Ticarcilina

• •

• •

•

freundii, Enterobacter, Enterobacter, Serratia. Cefoxitin, Cefotetan freundii, Enterobacter , Cefuroxime

•

P. vulgaris, Serratia.

•

MICROORGANISMO RESISTENCIA ESPERADA

•

Citrobacter, Enterobacter, Serratia .

•

Ampicilina/Sulbactam

• • • • •

Amoxicilina/ácido clavulánico

Acinetobacter baumannii , Ampicilina, Cefazolin, Burkholderia cepacia, Cefalotina, Cefoxitin, Ps. aeruginosa, Aeromonas, Cefmetazole. Stenotrophomonas maltophilia. Acinetobacter baumannii Ticarcilina,

Cefotetan,

Mezlocilina, Piperacilina.

•

cepacia, S. maltophilia, Gentamicina S. maltophilia Imipenem, Meropenem.

•

Ps. aeruginosa Trimethoprim-Sulfametoxazole.

•

6. CONTROL

DE CALIDAD DE EQUIPOS Y MATERIALES DE TRABAJO:

Objetivo: Todos odos los instrumen instrumentos tos utilizado utilizados s en el laborato laboratorio rio clínico, clínico, deben deben estar estar amparados por un programa de control de calidad y de mantenimiento preventivo, basados en las instrucciones del fabricante y los procedimientos procedimientos establecidos.

Programa de mantenimiento: Un programa de mantenimiento preventivo es esencial para para asegur asegurar ar la exacti exactitud tud y longev longevida idad d del del instru instrumen mento. to. El chequ chequeo eo perió periódic dico o recomendado es importante para minimizar el daño o la necesidad de servicio y repara reparació ción. n. El Direc Director tor del labora laborator torio io es respon responsab sable le por el progra programa ma genera general, l, recayendo en el jefe de la sección la responsabilidad primaria en su área de trabajo.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Puede en algunos casos relegar la responsabilidad en el Departamento de Biomédica de la inst instit ituc ució ión n quie quiene nes s coor coordi dina nará rán n con con la casa casa supl suplid idor ora a el prog progra rama ma de mantenimiento. Manual al Está Estánd ndar ar de Manual Manu al Est Estánd ándar ar de Pro Procedi cedimie miento ntoss Ope Operaci raciona onales: les: El Manu Procedimientos Procedimientos Operacionales debe ser organizado por grupo de equipos. Un listado de los equipos debe incluir: nombre, marca, modelo, número de serie, fecha de recibo y número de inventario de la institución. Los nuevos equipos requieren una inspección previa de Biomédica para garantizar su funcionabilidad funcionabilidad y seguridad eléctrica. El Manual Manual debe incluir incluir el récord récord de mantenim mantenimiento iento preventivo, preventivo, periodicida periodicidad d de la inspección y fallas del instrumento. El Manual debe estar accesible en todo momento.

Validación de Equipos : Los nuevos equipos de mayor impacto en el cuidado del paciente ( Vitek, Bactec, BacT/alert) requieren estudios de validación para determinar que su funcionamiento es al menos comparables a los equipos existentes o a métodos de referencia. Estos equipos son aceptados solo si logran cumplir las metas mínimas de funcionabilidad y eficiencia al compararse con los existentes. Este récord de validación debe mantenerse por toda la vida útil del equipo.

Manual de Instrucciones del Uso del Instrumento: Estos Manuales deben estar incluidos en el Manual de Operaciones del instrumento, redactados en forma clara, en el idioma de los usuarios, inclusive la documentación documentación del entrenamiento entrenamiento del personal. Cada Cada protoc protocolo olo debe debe inclu incluir ir precau precaucio cione nes s de seguri seguridad dad y los proced procedimi imient entos os de limpieza y cuidado del instrumento. Los Manuales deben incluir instrucciones básicas para resolver problemas menores y un récord de incidencias, que incluye el tipo de problema, los pasos tomados para resolverlo y la acción correctiva para evitarlo en el futuro.

Calibración del Instrumento : Los equipos que requieren un exacto nivel de precisión para obtener un resultado seguro, requieren de una calibración periódica. La fecha de la calibración, frecuencia y resultado, deben ser mantenidos en un libro récord dentro del laboratorio.

Control Control de Calidad: Todo equipo debe ser evaluado por un programa de Control de Calidad en base a las instrucciones del proveedor y las regulaciones internas del laboratorio. Debe mantenerse un libro récord de todo lo realizado al respecto, con el


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA nombre del instrumento, fecha, resultado y comentarios. En otro capítulo se afianzarán los conceptos sobre éste tema.

Referencias y Lectura Suplementaria: El Laboratorio guardará en un fólder toda literatura extra que se obtenga sobre un equipo, sus accesorios, materiales, estudios foráneos sobre su funcionamiento, funcionamiento, etc.

a) INCUBADORAS: a. Controle Controle diaria diariament mente e la temperatura temperatura de las las incubadora incubadoras s , antes de sacar sacar los platos y anote en una hoja control el resultado. b. Observe Observe el termoreg termoregulado uladorr por cualquie cualquiera ra alteració alteración n en su posición posición preestablecida. c. Coloque Coloque las las muestras, muestras, platos platos y tubos, tubos, en una posición posición segura segura.. d. Un papel papel de filtro filtro humedeci humedecido do con agua agua en el fondo fondo de la incub incubador adora, a, es adecuado para mantener la humedad requerida. e. Las incuba incubadora doras s de CO2 requie requieren ren medir medir el nivel nivel de gas diari diariamen amente. te. f. El jefe jefe de sección sección debe debe ser ser notificad notificado o cuando cuando una una incubad incubadora ora falla falla en en mantener el rango de temperatura aceptable. g. Observe Observe macroscó macroscópica picament mente e los platos Petri Petri para observar observar desecaci desecación. ón. h. En incubad incubadoras oras de de CO2 , se puede puede colocar colocar un culti cultivo vo de N. N. Gonorrhoeae ATCC 43069 , subcultivandola cada día, para observar su óptimo crecimiento, ya que es un microorganismo que necesariamente requiere CO2 para crecer. i. Todas las incuba incubadora doras s deben deben ser ser limpiad limpiadas as mensua mensualmen lmente te y llevar llevar un récord de mantenimiento preventivo.

b) AUTOCLAVES :

Procedimiento Por corrida Diario Semanal Mensual 1. Examine récord de Temperatura y Presión

X

2. Utilice Indicadores de Esterilización X 3. Récord de uso, fecha, temperaturas, presión X 4. Chequeo del nivel de agua

X

5. Uso de Indicadores biológicos biológicos de Esterilidad

X


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 6. Chequeo de la válvula de seguridad X 7. Limpieza del Interior y Exterior.

X

8. Limpieza de la Pantalla de Temperatura 9. Limpieza del drenaje y sellos

X

X

c) CAMARAS DE SEGURIDAD : a. b. c. d. e. f. g. h. i. j. k. l. m.

Apague Apague la lámpar lámpara a Ultraviole Ultravioleta ta antes antes de comenzar comenzar a trabaja trabajarr. Prenda Prenda el blower blower 15 minutos minutos antes antes de de utilizar utilizar.. Observ Observe e que no no se obstr obstruye uye el el flujo flujo de aire aire.. Si hay derrame derrame dentro dentro de la cabina, cabina, limpie limpie con un desinfe desinfectan ctante te apropiado apropiado,, manteniendo apagada la cabina. Evite el uso uso de meche mecheros ros de de flama flama dentro dentro de la cabina cabina.. Lleve Lleve un un contr control ol de de la medida medida del flujo flujo de de aire. aire. Lleve Lleve un contro controll de la la calibra calibración ción del flujo flujo de de aire. aire. Lleve Lleve un control control del del rempla remplazo zo de de los filtros. filtros. Compru Comprueb ebe e los sist sistema emas s de alarm alarma a de funci funciona onamie miento nto.. La superfi superficie cie interio interiorr de la mesa mesa de trabajo trabajo de la cabina, cabina, puede puede ser ser cultivad cultivada a semanalmente semanalmente para detectar contaminación. Desinfec Desinfecte te la cabin cabina a antes antes y después después de utiliza utilizarr. No utilice utilice las las cabinas cabinas bioló biológica gicas s para hacer hacer mezcl mezclas as de sustanc sustancias ias química químicas sy viceversa. Cuando trabaje trabaje en la cabina, evite la entrada brusca de aire aire y el uso uso innecesario de las puertas del área.

d) INCINERADOR : a. En condicio condiciones nes normale normales s el incinerado incineradorr logra la temper temperatura atura óptima óptima de esterilización ( 815°C ) 10 minutos después de haber sido encendido. b. Bastan Bastan 5 segundos segundos para para lograr lograr la destrucció destrucción n de bacteria bacterias, s, hongos hongos y micobacterias. c. No es neces necesario ario obser observar var incand incandesce escencia ncia en en el asa para logra lograrr la esterilización. d. Inspeccio Inspeccione ne la cerámi cerámica ca del incin incinerad erador or por por rajadura rajaduras. s. e. Aleje Aleje el incinerad incinerador or de elemento elementos s que puedan puedan incendiar incendiarse se por el calor calor generado.

e) GENERADORES DE AMBIENTE - SISTEMA GasPak MANUAL DE CONTROL DE50CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA


a. Mantenga Mantenga los los generador generadores es de gas a temperatu temperatura ra ambiente ambiente y el sobre sobre sellado. sellado. b. Mantenga Mantenga los los catalizado catalizadores res en lugar lugar seco, seco, a temperatura temperatura ambient ambiente e y las bolsas sellados. c. Mantenga Mantenga los los indicador indicadores es de anaerobi anaerobiosis osis a temperat temperatura ura de refriger refrigeració ación n ( 2-8°C ). d. El tiempo tiempo de genera generación ción de la la atmósfera atmósfera dentro dentro de de la jarra jarra es de 30 minutos minutos.. e. El indicado indicadorr de anaerobio anaerobiosis sis cambia cambia de color color azul a blanco blanco dentro dentro de la jarra jarra en 4 a 5 horas. f. Una evide evidencia ncia suges sugestiva tiva de de ambiente ambiente anaer anaerobio obio,, es el cambio cambio de de color color a rojo vino del agar sangre. microbiólogos utilizan un agar inoculado con Clostridium novyi B novyi B g. Algunos microbiólogos ( ATCC 19402 ) como indicador de ambiente anaerobio, ya que el mismo es anaerobio estricto. h. Los catalizad catalizadores ores de Paladio, Paladio, pueden pueden ser regenera regenerados dos colocánd colocándolos olos en horno horno a 160 °C por 2 horas. i. Cont Contro roll biol biológ ógic ico o de cre creci cimi mien ento to::

CEPA ATCC RESULTADO • • •

Cl. perfringes 13124 Crece Micrococcus luteus 9341 No

crece Campylobacter jejuni 33291 Crece

a. Refr Refrig iger erad ador oras as :

a. b. c. d. e.

Contro Controll diario diario de de la tempe temperat ratura ura.. Coloque Coloque los platos platos Petri Petri en posición posición invertid invertida a con la tapa hacia hacia abajo. abajo. Manten Mantenga ga la la tempe temperat ratura ura entre entre 4 – 8 ° C. C. Utilice Utilice refrig refrigerad eradoras oras que no hacen hacen escarcha. escarcha. No coloque coloque medio medios s de cultivo cultivo aún liger ligeramen amente te caliente calientes s dentro dentro de la refrigeradora. f. Evite abrir abrir con con frecuen frecuencia cia la puert puerta a de la refrig refrigerad eradora. ora. g. Lleve Lleve un registro registro de problema problemas s de funcionami funcionamiento ento,, causa y solución solución.. h. No guarde guarde alimento alimentos s en refrigerad refrigeradoras oras para para especíme especímenes nes clínicos. clínicos.



a. Mi Micr cro osc scop opio ioss :

Cuidados y mantenimiento Diario Mensual Semestral 1. Limpieza del aceite de objetivos, condensador, condensador, etc X 2. Apagar la fuente de luz X 3. Colocar cobertor contra el polvo X 4. Limpieza de Ocular, condensador, diafragma con líquido de limpieza de lentes X 5. Limpieza y ajuste del sistema óptico X 6. Limpieza y ajuste del sistema lumínico X 7. Limpieza y lubricación del sistema mecánico X

b. Cent Centrí rífu fuga gass :

Elemento / acción Por corrida Diario Semanal Mensual Anual 1. Verificar tubos por rajaduras X 2. Verificar por restos de vidrio o líquido dentro del portatubo o las copas X 3. Verificar por balance de cada lote X


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 4. Verificar por la temperatura de funcionamiento funcionamiento ( Refrigeradas Refrigeradas ) X 5. Limpieza de cualquier derrame X 6. Limpieza de la olla del rotor X 7. Limpieza externa X 8. Desinfección de la olla del rotor X 9. Verificación de brochas X 10. Chequeo del circuito eléctrico X 11. Certificación del velocímetro X 12. Medición de la temperatura interna con termómetro calibrado ( Centrífugas refrigeradas ) X

Problemas y Limitaciones:

1. Vibración a. Cheque Chequear ar por por balanc balance e aprop apropiad iado. o. b. Cheque Chequear ar tama tamaño ño de de los los tubo tubos. s. c. Mirar Mirar si la centrífug centrífuga a está sobre sobre una superfici superficie e plana. plana.

2. Rotura

a. Cheque Chequear ar tama tamaño ño de de los los tubo tubos. s. b. Bala Balanc nce e corr correc ecto to.. c. Verificar erificar el interior interior de los portatubos portatubos

3. Despr Desprend endim imien iento to de de tapa tapas: s:

a. Util Utilic ice e tapa tapas s de de rosc rosca. a. b. Si no es es posible, posible, use use Parafilm Parafilm sobre sobre los los tapones tapones de de caucho. caucho. c. Siempre Siempre que que sea sea posible posible utilice utilice tubos tubos de plásti plástico. co. 4) No centrifuge grandes volúmenes de líquidos inflamables, los cuales pueden producir vapores que pueden incendiarse durante la operación del equipo.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 1. La concentrac concentración ión de materiale materiales s infecciosos infecciosos para para cultivo cultivo puede realizar realizarse se en el área rutinaria de cultivo, siempre y cuando los tubos estén bien cerrados. 2. No colocar colocar las las tazas tazas o los portat portatubos ubos en en el horno horno o autocla autoclave ve para para descontaminar. 3. Evitar Evitar utilizar utilizar para la limpiez limpieza a solucione soluciones s que contenga contengan n cloro o sal, sal, ya que son altamente corrosivas.

1. CONTRO CONTROL L DE CALIDAD CALIDAD DE EQUIP EQUIPOS OS COMPUT COMPUTARI ARIZADO ZADOS S

El laboratorio de microbiología moderno se auxilia de equipos computarizados para ayudar en la rapidez y precisión del diagnóstico etiológico. etiológico. En la sección de Microbiología del Laboratorio Clínico del C.H.M,Dr. A.A. Madrid contamos hasta la fecha de 4 sistemas computarizados: BacT/Alert y Bactec para los hemocultivos, Vitek System para la identificación y antibiogramas y mas recientemente el Bactec MGIT 960 para la detección de micobacterias. micobacterias. Cada uno de éstos equipos, consta de sus propios sistemas para el control de calidad. A continuación presentamos algunas observaciones relativas al control de calidad de los referidos equipos:

a) BacT/Alert:

genera CO2 cuando los micr microo oorg rgan anis ismo mos s meta metabo boli liza zan n los los substratos del medio de cultivo. Si el crecim crecimie iento nto de los microo microorga rganis nismos mos genera CO2, el color del sensor gasperm permea eabl ble e inst instal alad ado o en el fond fondo o de cada frasco de cultivo cambia de verde a amarillo. El sistema BacT/Alert es utilizado para la detección temprana de microo microorga rganis nismos mos en hemocu hemoculti ltivos vos u otro otros s flui fluido dos s corp corpor oral ales es.. El sist sistem ema a utiliza un sensor colorimétrico y una luz reflejada para monitorear la presencia y prod produc ucci ción ón de CO2 CO2 disu disuel elto to en el medio de cultivo. Si existen micr microo oorg rgan anis ismo mos s en la mues muestr tra, a, se

Cada Cada equi equipo po trae trae cons consig igo o un kit kit de reflectancia estándar para los procedimientos de control de calidad y de calibración. Además, de un software para para ayuda ayudarr en pantal pantalla la a realiz realizar ar el mismo. A parte de esto, cada lote de frascos de cultivo es suministrado con un Certificado de Análisis de control de calidad de fábrica.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control de calidad: Control de calidad de las celdas, Calibración de las celdas y Calibración de la temperatura del equipo.

La opción Control Control de Calidad Calidad de las Celdas es utilizada para asegurar que las celdas del instrumento están en su óptima capacidad de detección.. Este control debe ser parte del mantenimiento normal del sistema. Un kit estándar de reflectancia es propo proporci rciona onado do con cada cada instru instrumen mento to para para los proces procesos os de contro controll de calida calidad d y calibración. Son dos estándares de reflectancia en cada kit, sin embargo, el proceso de control de calidad solo utiliza el estándar de reflectancia B. El anillo al final de los estándares identifica su número estándar de reflectancia. Cuando el control de calidad de una celda falla y no es recalibrada, ésta automáticamente es inactivada. Generalmente el periodo de control de calidad para cada celda está configurado en 30 días en base al menú Editar Configuración del Sistema del capítulo Mantenimiento de Funciones del Sistema. Este control solo se puede realizar en celdas vacías. Al final de que todas las celdas han sido evaluadas, puede obtenerse por impresión un Reporte del Estado de las Celdas, luego de lo cual el instrumento retorna automáticamente al menú Funciones de Mantenimiento del Instrumento.

La opc opción ión Cal Calibra ibració ción n de Cel Celdas das, es utilizada para recalibrar cualquier celda que haya fallado el control de calidad. El kit viene con dos estándares de reflectancia. El procedimiento utiliza ambos. El instrumento automáticamente recalibra la celda una vez se ha introducido el estándar cuando lo indique el instrumento. Si la calibración de la celda celda falla, falla, el instrume instrumento nto automáti automáticame camente nte inactiva inactiva la celda. celda. Al final final se puede puede obtener un reporte del estado del instrumento y la pantalla retorna automáticamente automáticamente al menú de Funciones de Mantenimiento Mantenimiento del Instrumento.

La opción Calibración de la Temperatura , es utilizada para calibrar la temperatura dentro dentro del del instru instrumen mento. to. Primer Primero o se mide mide la tempe temperat ratura ura intern interna a del instru instrumen mento to util utiliz izan ando do el proc proces eso o desc descri rito to en Verif erific icac ació ión n de la Tempe empera ratu tura ra del del capí capítu tulo lo Manten Mantenimi imient ento o Preven Preventiv tivo. o. Solo Solo utilic utilice e ésta ésta opción opción si hay discre discrepan pancia cia entre entre la temperatura marcada por el equipo y la temperatura óptima preestablecida. preestablecida.

1. En el Menú principa principall ir a Otras Funciones Funciones BacT/Aler BacT/Alert. t. 2. Manten Mantenimi imient ento o del del Instru Instrume mento nto.. a1) Control de calidad. b1) Control de calidad de celdas. c1) Lista de Celdas d1) Seleccionar la tecla F9 f1) Introducir los estándares de calibración de celdas siguiendo las instrucciones de la pantalla. a2) a2) Calibrar

celdas.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA b2) Quiere calibrar la celda "x " c2) Si d2) Introducir el estándar I en la celda "x"

a3) Calibrar

temperatura

b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del equipo.

Observaciones y Limitaciones del Sistema: 1. 2. 3. 4.

En cada frasco frasco se debe debe anotar su número número de labora laboratori torio o y la casilla asigna asignada. da. Colocar Colocar los frasco frascos s hasta hasta el fondo de la la celda. celda. No aere aerear ar los los frasc frascos os anaer anaerob obios ios.. Todo frasco frasco con frotis negativo, negativo, debe ser colocado colocado nuevamente nuevamente en el aparato. aparato. 5. Ciertas variantes de H. influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y P. anaerobius, anaerobius , pueden ser sensibles al anticoagulante ( SPS ) lo que resulta en una falta de crecimiento o baja producción de CO2.

6. En el caso de cultivo cultivo de otros otros fluidos fluidos corpora corporales, les, se requier requiere e agregar agregar sangre sangre u otro suplemento al frasco si se intenta recuperar organismos tales como H. influenzae y N. gonorrhoeae. gonorrhoeae. 7. En contadas contadas ocasion ocasiones es pueden pueden presenta presentarse rse BacT/Ale BacT/Alert rt positivos positivos,, con frotis y subcultivos negativos, debido a una excesiva cantidad de glóbulos blancos en la muestra de sangre. 8. Se recomienda quitar del aparato, aquellos frascos considerados positivos por el BacT/Alert, para evitar cultivos no viables debido a autolisis, especialmente en microorganismos fastidiosos como el S. pneumoniae. pneumoniae.

a. BA BACT CTE EC 924 92400 :

El sistema Bactec 9240 es utilizado para la detección temprana de microorganismos en hemocultivos por el método de la fluorescencia. fluorescencia. Cada frasco contiene un sensor que puede detectar aumentos del CO2 producido por el crecimiento de los microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el aumento de la fluorescencia del sensor, la que se relaciona con la cantidad de CO2 presente.



Observaciones y limitaciones del Sistema:

1. No utilice utilice frasco frascos s con signos signos evide evidentes ntes de de deterioro deterioro.. 2. No utilice utilice frascos frascos de cultiv cultivo o después después de la fecha fecha de caducid caducidad. ad. 3. Los frascos frascos inoculad inoculados os deben deben ponerse ponerse en el instrume instrumento nto tan pronto pronto como como sea posible. 4. Si se ha tardad tardado o en colocar colocar un frasco frasco inocul inoculado ado en el el instrumen instrumento, to, y se puede puede ver ver crec crecim imie ient nto, o, el fras frasco co no debe debe anal analiz izar arse se en el inst instru rume ment nto, o, sino sino subc subcul ulti tiva vars rse e y hace hacerr plac placa a por por Gram Gram,, cons consid ider erán ándo dolo lo como como un fras frasco co presuntamente positivo. recomiend enda a analiz analizar ar el rendim rendimien iento to de cada cada lote lote de frasco frascos s recibi recibidos dos,, 5. Se recomi utilizando un control positivo y uno negativo. El frasco positivo debe inocularse con con 1.0 1.0 ml de una una susp suspen ensi sión ón de E. coli coli o S. aureu aureus s con un estánd estándar ar McFarland de 0.5. 6. El control control negati negativo vo está consti constituido tuido por por un frasco frasco sin inocul inocular ar.. 7. Dado que que la sangre sangre puede neutra neutraliza lizarr la acción tóxica tóxica del antico anticoagul agulante ante SPS SPS 8. sobre sobre algun algunas as Neise Neiseria rias s y cocos cocos Grampo Gramposit sitivo ivos s anaer anaerobi obios, os, se recomi recomien enda da utilizar volúmenes de sangre no menores a 1.0 ml para facilitar el crecimiento. 9. Cierto Ciertos s organ organism ismos os exigen exigentes tes como como el H. influenza influenzae e requi requiere eren n para para su crecimiento de elementos que se encuentran en la sangre como el factor V. Si la muestra de sangre es reducida, es posible que se requiera agregar éstos suplementos al frasco si se sospecha de éstos microorganismos. 10. Puede darse casos de falso falso positivo en pacientes con un un conteo de leucocitos muy elevado.

a. Sist Sistem emaa Vit ViteK eK::

El control de calidad , es un subsistema del Vitek, que examina la seguridad de sus tar tarje jeta tas. s. El co cont ntro roll de cal calid idad ad op opera era si simi milar larmen mente te a la eva evalu luaci ación ón de exámenes clínicos. El test clínico identifica el organismo, el examen de control de calidad valida el test. 1.

El programa programa de control control de de calidad evalúa evalúa el kit kit del Vitek Vitek y los los organism organismos os de control de calidad listados en el paquete.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 2. Las tarjetas tarjetas de control control de calidad calidad utiliza utilizan n 7 dígitos, dígitos, compuestos compuestos de 2 partes: partes: Los primeros 6 dígitos identifican el tipo de tarjeta y un organismo ATCC. El séptimo dígito identifica el número de lote. 3. Cada número número predef predefinido inido de refere referencia ncia en el control control de calida calidad d significa significa un tipo tipo de test y un organismo. Un número de referencia de control de calidad es más que un número de identificación de tarjeta. Cada uno de éstos números significa la paridad de un tipo de tarjeta con un organismo. Así por ejemplo el número de referencia 900101 corresponde al Proteus mirabilis ( ATCC 7002 ) y el 900102 a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ). 4. Un campo campo para contr control ol de calidad calidad demog demográfi ráfico co está accesi accesible ble para para la información del lote de la tarjeta. 5. El control control de calida calidad d provee provee su propio propio set especia especiall de reporte. reporte. 6. El flujo de de operación operación del contro controll de calidad calidad es idéntico idéntico al flujo flujo de una muestra muestra clínica. 7. Los resultad resultados os de control control de calidad calidad se transfiere transfieren n de la incubadora incubadora/lecto /lectorr a la base de datos, si la opción de transferir la tarjeta finalizada está activa. 8. Todos los los resultados resultados se mueven a través del manejador de desviaciones desviaciones del del control de calidad, el cual compara los resultados actuales con los conocidos. 9. El programa programa de control control de calida calidad d Vitek Vitek permite permite ver los resultado resultados s del control control en pantalla., los cuales aparecen en 3 diferentes formatos: Resultado de la identificación, identificación, resultado de la sensibilidad a los antibióticos y Resultado de la Identificación de Urocultivos. La pantalla nos indica : La identificación del organismo esperado ( ATCC ). Resultado de la identificación actual. Lote de la tarjeta. Fecha del test. Fecha de expiración de la tarjeta. • • • • •

•

• •

Reacciones bioquímicas esperadas y de la prueba actual. Cada uno de los test bioquímicos son señalados tanto en lo esperado como en el resultado actual, y se genera una lista de los test que se han desviado del resultado esperado. Igual patrón al anterior muestra la tarjeta de sensibilidad a los antibióticos. Todos los resultados de control de calidad pueden ser imprimidos para guardar en un libro récord.

•

La base de datos de los equipos de identificación identificac ión computarizados, debe deben n ser ser frecu frecuen entem temen ente te revis revisad ados os para para actua actuali lizar zarlo lo en lo referente a los cambios taxonómicos que ocurran. Igualmente se


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA debe prestar atención a la información proveniente de la casa manufacturera acerca del producto y las investigaciones que con el equipo aparezcan en la literatura especializada.

•

El sistema Vitek también cuenta con un programa que ayuda a evaluar los resultados, minimizando los errores de interpretación. interpretación. Se trata t rata del bioMérieux Vitek Expert System, un programa que usa la lógica proposicional, es decir llega a ofrecer ciertas conclusiones basado en la información formulada.

El programa puede detectar: •

• • • •

Identificaciones Identificaciones que son inconsistente con los resultados de sensibilidad. Errores técnicos. Fenotipos raros o improbables. improbables. Expresiones de resistencia incompleta. Resistencia cruzada.

2. El sistema sistema también también permite permite la adició adición n de reglas reglas ( CAR CAR ) en la la que se establecen parámetros parámetros que debe cumplir el reporte antes de su impresión.

a. Si Sist stem emaa Bact Bactec ec MG MGIT IT 960 :

El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la detección temprana de micobacterias en especímenes clínicos. El control de calidad del instrumento es automático y está activo continuamente para asegurar la operación confiable del sistema. El reporte de control de calidad suministra una lista del estado de todos los detectores del instrumento con la fecha y hora de la última verificación, e incluso la lista de las celdas bloqueadas, bloqueadas, temperatura de cada incubadora, estado de los sensores, etc.

Control Diario del Equipo: a. Verificar erificar la operaci operación ón de las gavetas/i gavetas/incuba ncubadora doras s y las lámparas lámparas indicadoras de estación. b. Realizar Realizar test test de las las luces luces LED indica indicadora doras s ( Verde Verde y Roja ). ). c. Chequear Chequear el termóm termómetro etro apretando apretando el botón botón de de test. test.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos MGIT , se sugiere control de calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook 7H9.

Especie ATCC Dilución 0.5 McFarland Días para ser detectado ( Suspención en salina ) Positivo • • •

M. tuberculosis 27294 1:500 6 – 10 M. kansasii 12478 kansasii 12478 1:50000 7 – 11 M. fortuitum 6841 1:5000 1 - 3

Control de Calidad Negativo: d. Utilic Utilice e un frasco frasco MGIT con soluci solución ón descont descontami aminan nante te MycoPre MycoPrep p kit y PANTA ( Mezcla antimicrobiana ). colóquelo en la incubadora/detector. e. Colo Coloca carr un fras frasco co de MGIT MGIT sin sin mues muestr tra a y sin sin desc descon onta tami mina nant nte e y colóquelo en la incubadora/detector. f. Inocule una suspensión de E. coli dentro coli dentro de un tubo MGIT y colóquelo dentro de la incubadora/detector.

Control de Calidad Positivo: a. Inoc Inocul ule e un fras frasco co de MGIT MGIT con con una una cepa cepa cont contro roll domé domést stic ica a de Mycobacterium tuberculosis o una cepa contro controll de M. Tube Tubercu rculos losis is ATCC 25177 25 177 o M. Intracellulare ATCC 13950 y colóquelo en la incubadora. b. Es importante comprobar que el agua, reactivos de tinció ción, suplemen suplementos, tos, etc, están están libres libres de contamina contaminación ción por micobact micobacteria erias s ambientales especialmente especialmente M. Gordonae y M. Terrae. Terrae.

2. CONTRO CONTROL L DE CALIDAD CALIDAD DE DE FORMULA FORMULAS S LACTEA LACTEAS Sy MAMADERAS PARA EL SERVICIO DE NEONATOLOGIA :


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA El control de calidad de las fórmulas lácteas y sus mamones se realiza como un servicio al Departamento de Neonatología del hospital. Básicamente éste control consiste en un recuento bacteriano de bacterias mesófilas y recuento de bacilos coliformes.

Consideraciones referentes al control de calidad de formulas y mamaderas: a. Mantener Mantener control control sobre sobre la esteril esterilidad idad de de los platos platos Petri Petri y las pipetas. pipetas. b. Si al calenta calentarr los tubos tubos para dilui diluirr el agar base base o el Red Red Bile presen presentaran taran turbidéz, descartar ya que es signo de contaminación del medio. c. Es preferib preferible le no mezclar mezclar por por inversió inversión n la leche leche para homog homogeniz enizar ar,, ya que se puede salpicar la parte interna de los mamones y si hubiera contaminación contaminación de la leche, ésta se puede extender al mamón afectando la calidad de los mismos. d. Evitar Evitar servir servir muy caliente calientes s el agar base base o el Red Red Bile al plato plato Petri Petri conteniendo la muestra a evaluar, ya que se pueden matar los posibles gérmenes. Una temperatura de aproximadamente 30-40 °C es apropiada, sin dejar coagular el agar. e. Mezclar Mezclar homogé homogéneam neamente ente el agar agar y la muestra muestra rotan rotando do el plato plato y sin permitir la formación de coágulos. f. Las fórmu fórmulas las lácteas lácteas solo pueden pueden guarda guardarse rse en en refriger refrigeració ación n por un máximo de 48 horas antes de ser procesadas. g. En condicio condiciones nes normal normales es la leche leche y los mamone mamones s deben deben ser estériles estériles,, especialmente especialmente no deben contener bacterias coliformes. h. Si repetitiv repetitivamen amente te se observa observa contamina contaminación ción de la leche, leche, solicita solicitarr a las nutricionistas encargadas encargadas de la supervisión de la preparación de las fórmulas, una muestra de leche en polvo para un cultivo directo y una muestra de agua, si fuera necesario.

NOTA: Solo como referencia se describen los grados de leche pasteurizada establecidos en Panamá Grado A : El recuento bacteriano no debe exceder de 30,000 col/ ml. Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml. Grado B: El recuento bacteriano no debe exceder de 50,000 col/ml. Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.

2. CONTRO CONTROL L DE CALID CALIDAD AD DEL DEL AGUA AGUA DEST DESTILA ILADA DA : MANUAL DE CONTROL DE61CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA El agua destilada utilizada en la preparación de medios de cultivos y para reconstituir reactivos, debe tener un control de calidad básico que incluye los parámetros químicos y bacterianos.

Control de Calidad Químico: Este control puede ser realizado teniendo en cuenta una gran variedad de parámetros a evaluar, tales como: • • • • • • • • • • •

Ph Conductividad Olor Color aparente Turbidéz Alcalinidad Dióxido de carbono Dureza Iones Cationes Metales pesados

Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar un estudio profundo, recomendamos recomendamos el siguiente método sencillo y apropiado para determinar la calidad del agua, aparte de la determinación de su Ph ( 5.0 – 5.5 ).

Reactivos: a) Solución Acuosa de Nitrato de plata ( NO3Ag ) NO3Ag ......... 5.1 g Agua destilada ............ 300 ml b) Acido Nítrico

Método: Colocar en un vaso químico limpio : 1. 10 ml ml de agua agua desti destilad lada a a exam examina inar r 2. 2 got gotas as de de áci ácido do nítr nítric ico o 3. 1 ml de Sol Soluc ució ión n de NO3A NO3Ag g

Evaluación: El agua deberá continuar completamente clara. Si aparece una ligera turbidéz blanquecina, blanquecina, indicará que la calidad es deficiente.

Ref: manual de Técnicas Básicas OPS/OMS N° 439, pag. 58



Control de Calidad Microbiológico del Agua destilada: 1. 2. 3. 4.

Agregar 1 ml de agua destilada a examinar, a un tubo de Tioglicolato. Agregar 1 ml de agua destilada a examinar a un plato de agar sangre. Incubar a 35.5 °C por 4 días. Llevar un libro récord del control de calidad del agua.

A. EL CE CEP PAR ARIO IO :

Los sistemas de Validación son los procesos que se requieren para asegurar que los paráme parámetro tros s de funcio funciona namie miento nto de los test, test, tanto tanto comerc comercial iales es como como los de uso domésticos, son los esperados y las pruebas pueden ser utilizadas como métodos de diagnóst diagnóstico ico en el laborato laboratorio. rio. La mayoría mayoría de los procedim procedimiento ientos s en Microbiol Microbiología ogía Clínica, dependen de que los microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mant manten ener er sus sus cara caract cter erís ísti tica cas s morf morfol ológ ógic icas as , fisi fisiol ológ ógic icas as y que que sean sean típi típica cas s y reproducibles. reproducibles. Para ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control de Calidad, son un componente esencial de un proceso de validación.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Existen varias colecciones de cepas utilizables para el control de calidad. Algunos ejemplos son: ATCC : American Type Culture Collection- Rockville, USA Survey, Inglaterra NCIC : National Collection of Industrial Bacteria- Survey,

JFCC: Japanese Federation of Culture Collection of Microorganism- Japón CCTM : Colección Nacional – Lille, Francia RIA: USSR Reseach Institute for Antibiotics- Moscú, Rusia. NCIB : Colección Nacional industrial – Aberdeen, Escocia DSM : Deutsche Sammlung von Mikroorganismen – Gottinger, Alemania.

Así, la E. coli ATCC coli ATCC 25922 es igual a la DSM 1103 y a la NCIB 12210.

Los organismos que han de ser utilizados en el control de equipos o sistemas de identificación, generalmente son estipulados por los fabricantes o bien escogidos por el usuario. Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas domésticas, es necesario tener un historial del organismo que incluye nombre, área de aislamiento, reacciones bioquímicas y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último transplante, etc En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos: • • •

Características típicas. Características estables. Reproducibilidad

1. MÉTODOS DE CONSERV CONSERVACIÓN ACIÓN DE CEP CEPAS AS BACTERIANAS: Los métodos de conservación de las cepas estándar de control de calidad, deben asegurar que las mismas mantengan sus características típicas y que puedan ser reproducidas después. El medio utilizado para su conservación debe mantener un mínimo mínimo de mutacion mutaciones. es. Estas Estas mutacion mutaciones es pueden pueden evitarse evitarse permitie permitiendo ndo también también el mínimo crecimiento del microorganismo y aportando óptimas condiciones ambientales para su sobrevivencia, con el menor número de subcultivos Para una mejor clasificación de los métodos de conservación de cepas, los dividiremos en tres categorías: Cultivos Stock, Semistock y Cultivos de Trabajo diario. diario.

a) Cultivos Stock: MANUAL DE CONTROL DE64CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Estos representan el verdadero " Banco de Cultivos" . Estos son mantenidos en un sistema cerrado de conservación, minimizando su actividad genética y fisiológica, para evitar su potencial mutación. Los dos más importantes métodos para conservación en Stock, son la Liofilización y el Ultracongelamiento.

LIOFILIZACION: Se hace una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven en leche estéril o similar, y se coloca en tubos con rosca y se siguen las instrucciones del aparato liofilizador, que puede ser tan sencillo como un simple bomba de vacío, hasta un sofisticado sistema. Durante este proceso evitar que el cultivo se derrame dentro el aparato liofilizador y la formación de aerosoles Este sistema tiene la ventaja de ser el que permite la sobrevivencia por un mayor periodo de tiempo y mayores facilidades para el transporte de las cepas.

ULTRACONGELAMIETO: Hacer una suspensión fuerte de la colonia pura en caldo Brucella conteniendo 15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de 0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo profundo del congelador a -45°C.. Tambié ambién n se puede puede utiliz utilizar ar la modifi modificac cación ión de Ultracongelami Ultracongelamiento ento en Nitrógeno Nitrógeno líquido, que consiste consiste en coloca colocarr en una ampolla ampolla especi especial al dentr dentro o de un aparat aparato o específicamente designado designado para el mantenimiento mantenimiento de cepas en nitrógeno líquido. Ambos sistemas preservan las bacterias por largos periodos de tiempo.

b) Cultivos Semistock: Este término se refiere al mantenimiento de cultivos por un periodo intermedio entre el relativamente permanente permanente cultivo en Stock y el cultivo de cepas control para el trabajo diario. De las 5 técnicas listadas a continuación, solo la de congelamiento es utilizable para el mantenimiento de cepas de anaerobios.

1. Congel Congelamie amiento nto en en congela congelador dor conven convencio cional nal : Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre -10 a –25°C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso de la ultracongelación y son colocados en el congelador. El método permite la sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por años y en la mayoría de las veces por al menos de 6 a 12 meses.

2. Cult Cultiv ivo o en CTA: CTA: MANUAL DE CONTROL DE65CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Se preparan tubos con rosca conteniendo Cisteína- Tripticasa y Soya agar. Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un crecimiento moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o pre preferi feribl blem emen ente te en refr refrig iger erac ació ión n, si es posi posib ble en la oscu scurida ridad. d. Microorganismos Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año y los fastidiosos por 6 meses.

3. Secad Secado o en dis disco coss con gel gelat atin ina: a: Este Este méto método do es cono conoci cido do tamb tambié ién n como como méto método do Stam Stamp p en hono honorr de su creador. Corte pequeños círculos de papel encerado y colóquelo en un plato Petri de vidrio. Esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión. Prepare una suspensión de caldo nutriente con 10% de gelatina en polvo ( Peso por Volumen ) y 0.25% de ácido ascórbico ( P x V ) y dispense en tubos con rosca y esterilice en autoclave. Haga una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven y coloque una gota del mismo con una pipeta estéril sobre uno de los discos de papel acerado estéril en un plato Petri. Con una pinza estéril, transfiera el disco a un desecador de vacío conteniendo Pentaóxido de fósforo. Evacue el desecador con la bomba de vacío. Cuando el disco está seco, asépticamente asépticamente introducir en un tubo estéril con tapa de rosca y colocar en el refrigerador. Para hacer un subcultivo del disco, asépticamente retire un círculo de papel con las colonias y colocarlo en un tubo conteniendo un caldo de cultivo e incubar por 24 horas a 35C y luego hacer transplante a agar sangre e incubar nuevamente.

4. Conservación Conservación en medio medio de cultivo inclinado inclinado con con aceite aceite mineral: mineral: Es un método especialmente utilizado para hongos, pero es útil también para algunas bacterias. En el caso de los hongos, se utiliza un cultivo joven y bien esporulado en un medio medio de cultiv cultivo o inclin inclinad ado, o, tal como como agar agar de Sabou Sabourau raud-d d-dext extros rosa. a. Cubrir Cubrir completamente con aceite mineral estéril. El aceite debe ser esterilizado a 15 libras de presión por 45 minutos, para asegurar su esterilidad absoluta.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Para reactivar la cepa, colocar la boca del tubo cerca de la llama de un mechero o incinerador y remueva una porción visible de crecimiento con una asa estéril larga o una aguja. Este método permite la sobrevivencia por muchos años . Si el método método se va a utiliz utilizar ar para para conser conservar var bacteria bacterias, s, se utiliz utiliza a Agar de Cerebro-Corazón o agar Mueller-Hinton suplementados con hemoglobina al 2% e Isovitalex al 1%. Los medios se sirven en tubos con rosca. Se esterilizan y luego se les hace coagular en forma inclinada. Las bacterias son inoculadas en el medio e incubadas a 35°C por 24 horas, toman tomando do en cuenta cuenta sus requer requerimi imient entos os de oxíge oxígeno. no. Luego Luego las cepas cepas son cubie cubierta rtas s con aceite aceite minera minerall estéri estéril, l, hasta hasta 1 cm por encima encima del final del inclinado. Los cultivos son viables por 2 años a temperatura ambiente.

5. Manteni Mantenimien miento to en tierra tierra estéril estéril:: Es utilizado primeramente para hongos y bacterias esporuladas. esporuladas. Esterilice en autoclave tierra suelta en tubos con rosca a 15 libras de presión por 1 hora. Haga una suspención fuerte del microorganismo joven y esporulado y colóquelo en el tubo con tierra estéril. Deje secar y colocarlo en un refrigerador.

a. Culti Cultivos vos de trabajo tra bajo diario dia rio : Los cultivos control para el trabajo diario, son una forma conveniente para realizar el control de calidad de pruebas de uso frecuente y que requieren una lectura comparativa al momento de su lectura. Tal es el caso de las pruebas de coagulasa y oxidasa, entre otras. Para éste propósito se utilizan cultivos de 24 horas y son transplantados diariamente. •

Bacterias resistentes: Tal es el caso de Estafilococos y Enterobacteriaceas. Se transfiere una colonia joven de un cultivo en Stock o semistock y se transfiere a un tubo con agar nutritivo inclinado e incubar por un mínimo de tiempo tal que haya crecimiento. Guardar en refrigerador. refrigerador. Los cultivos para trabajo diario, son transferidos a otros tubos de agar inclinado cada mes por un intervalo de 6


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA meses. Después de éste tiempo, se debe volver a hacer otro pase del cultivo stock. o

Bacterias delicadas : Los culti Los cultivos vos de trab trabajo ajo diar diario io de organ organism ismos os de deli lica cados dos como N. Mening Meningiti itidis dis,, N. Gonorr Gonorrho hoeae eae,, S. pneum pneumoni oniae ae y algun algunos os menos delicados como el S. pyogenes, pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por 24 horas en medios apropiados como agar chocolate en ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refr refrig iger erac ació ión. n. Desp Despué ués s de una una seri serie e de 6 tran transp spla lant ntes es consecutivos, se debe preparar otro cultivo para uso diario a partir de la cepa en stock.

•

Bacterias anaeróbicas: Los cultivos para trabajo diario de la mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con 0.5% de carbonato de sodio adicionado después de esterilizar por autoclave. Los Los cult cultiv ivos os se incu incuba ban n por por 24 a 48 hora horas s y guar guarda dado dos s a temperatura ambiente.

•

Hongos: Los cultivos de uso diario de hongos, son mantenidos en tubos con agar Sabou Sabourau raud d o sustit sustituto uto.. .. Los Los cultiv cultivos os se incuba incuban n a temperatura ambiente hasta que haya crecimiento, y ocurra la esporula esporulación ción,, para luego ser colocado colocados s en refrigerac refrigeración. ión. Los cult cultiv ivos os de trab trabaj ajo o debe deben n ser ser tran transf sfer erid idos os cada cada 2 mese meses s . Pasado éste tiempo se debe preparar otro cultivo de trabajo a partir de la cepa en stock.

•

Cultivos de trabajo comerciales: Son Son prep prepar arad ados os por por casa casa come comerc rcia iale les s util utiliz izan ando do cepa cepas s conocidas como la ATCC.. Estas son estables en refrigeración por un año. Tal es el caso de Bact-Chek de Roche Diagnostics, Bactrol Disk de Difco, entre otras. Para reactivar las cepas se colocan en un caldo nutritivo como el caldo de Tripticasa y Soya e incubados por 24 horas a 35°C.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Luego se hace un transplante a un medio de enriquecimiento o a agar sangre.

2. Man Mante teni nimi mien ento to del del Cepa Cepario rio:: Se debe tener especial cuidado en el mantenimiento del cepario, ya que el mismo constituye una ayuda importante en la validación de equipos, materiales, reactivos y habilidad del personal. Debe existir un programa metódico de transplantes de cepas , archivo de cada uno de los cultivos con sus características bioquímicas, sensibilidad sensibilidad a los antibióticos, origen de la cepa, método de identificación, fecha de siembra y próximo transplante, etc

3. Cep epaas AT ATCC: En nuestro medio por situaciones muy especiales y altamente beneficiosas, pode podemo mos s tene tenerr acce acceso so a las las cepa cepas s cont contro roll del del America American n Type Cultur Culturee Collection ( ATCC ) , la colección más grande e importante del mundo. Estas cepas bacterianas pueden ser utilizadas como control en una gran variedad de utilid utilidade ades, s, lo cual cual nos permi permite te conoce conocerr el grado grado de confia confiabil bilida idad d de los productos comerciales o elaborados en el laboratorio.

A continuación algunas referencias de las cepas ATCC:

Microorganismo ATCC Medio Característica E. coli 25922 coli 25922 McConkey Colonia rosada S. typhimurium 14020 McConkey Colonia incolora P. mirabilis m irabilis 12453 McConkey Colonia incolora E. faecalis 29212 McConkey No crece St. pyogenes 19615 Agar sangre ß-hemólisis St. pneumoniae 6305 Agar sangre alfa-hemólisis S. epidermidis 12228 Agar sangre no hemolítico Candida albicans 60193 Agar sangre no hemolítica Candida albicans 60193 Tubos germinales Positivo Candida tropicalis 66029 Tubos germinales Negativo


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Microorganismo ATCC Medio Característica S. aureus 25922 Manitol sal Colonia amarilla S. epidermidis 12228 Manitol sal Colonia incolora P. mirabilis m irabilis 12453 Manitol sal No crece M. tuberculosis (TBC) 2577 Low-Jensen Crece. Incoloro M. kansassi ( kansassi ( I ) 12478 Low-Jensen Low-Jensen Crece. Amarillo + luz M. scrofulaceum (II ) 19981 Low-Jensen Crece. Amarillo – luz M. intracellulare ( III ) 13950 Low-Jensen Crece. Incoloro M. fortuitum ( IV ) 6841 Low- Jensen Crece. < 7 días. E. coli 25922 coli 25922 Low-Jensen No crece

LISTADO DE CEPAS ATCC SUGERIDAS PARA CONTROL DE CALIDAD

MICROORGANISMO ATCC Campylobacter Campylobacter jejuni .............................................. jejuni .............................................. 33290 Enterococcus faecalis ............................................... 29212 Escherichia coli......................................................... 25922 Escherichia coli ........................................................ coli ........................................................ 35218 Proteus vulgaris ....................................................... 8482 Pseudomona aeruginosa .......................................... 27853 Salmonella typhimurium ........................................ 14028 Shigella sonnei ........................................................ sonnei ........................................................ 9290 Shigella sonnei ........................................................ sonnei ........................................................ 25911 Shigella flexnerii ..................................................... flexnerii ..................................................... 12022 Enterobacter aerogenes ........................................... 13048 Staphylococcus Staphylococcus aureus ............................................ 25923


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Staphylococcus Staphylococcus aureus ............................................ 29213 Staphylococcus Staphylococcus epidermidis .................................... 12228 Steptococcus pyogenes ............................................ 19615 Streptococcus pneumoniae ....................................... 6305 Streptococcus pneumoniae ....................................... 49619 Streptococcus faecalis ............................................... 19433 Haemophilus influenzae ............................................ 49247 Haemophilus influenzae ............................................ 49766 Neisseria gonorrhoeae ............................................... 49226 Escherichia coli 0157:H7 .......................................... 0157:H7 .......................................... 43894 Bacteroides fragilis .................................................... 23745 Clostridium perfringes ............................................... 3624 Clostridium sporogenes ........................................... . .......................................... 19404 Clostridium tertium ................................................... 19405 Clostridium novyi A novyi A ................................................. 19402 Fusobacterium necrophorum necrophorum ............... ........................25286 Fusobacterium nucleatum ............................................25586

4. Trans ransport portee de cepa cepass bacte bacterian rianas: as:

La mayoría de las naciones han implementado regulaciones internacionales para el empaque y transporte de materiales biológicos potencialmente potencialmente nocivos para el hombre o los animales. Estas reglas intentan proteger al público de accidentes al tener contacto directo o indirecto con dichos productos. El personal que prepara éste envío debe ser apropiadamente entrenado en las formas de empaque y en las regulaciones internacionales internacionales que lo rigen.



Solo como una guía enumeraremos algunas regulaciones foráneas: •

U.S Public Health Service, 42 CFR part 72, Interstate shipments of Etiologic Agents.

•

International Air Transport Transport Association. Dangerous Goods Regulations. Regulations .

•

Unites Nations Recommendations Recommendations of the Committee of Experts on the Transportation Transportation of Dangerous Goods.

•

U.S Department of Labor, Labor, Occupational Safety and Health Administration, Administration, 29 CFR Part 1910.1030, Bloodborne Pathogens.

Generalmente el transporte de agentes etiológicos requiere un doble o triple empaque, dependiendo de las regulaciones del país de destino. Si la cepa está contenida en un tubo de vidrio, se recomienda que sea pequeño y de vidrio grueso. Este a su vez debe estar inmerso en un envase de metal con material aislante como el aserrín o foam desmenuzado. A éste envase se le puede adicionar otro que contenga igualmente aserrín o foam , dependiendo de las regulaciones y por último la caja externa no porosa, con recubrimiento de cera en su interior y a prueba de derrame. En ésta caja irán las etiquetas , guía aérea, etiquetas de advertencia, números telefónicos para contactar en caso de emergencia, tanto en el país de origen como en el de destino. Igualmente se etiquetará con un símbolo de material peligroso de color rojo.

A. SUP SUPER ERVIS VISON ON DEL DEL PERS PERSONA ONAL: L:

El personal es el factor más importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiología. microbiología. Este personal debe tener una dedicación y actitud positiva hacia el


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA trabajo, capacidad académica, actualización constante y contar con los elementos indispensables para su labor.

1. Evaluación del personal: La competencia del personal de microbiología, debe ser certificada por la revisión de su hoja de trabajo, la interpretación de muestras desconocidas , su habilidad técnica y exáme exámenes nes escrit escritos os anual anuales. es. Se debe debe llevar llevar un regist registro ro profes profesion ional al acerca acerca de su evaluación académica, reporte sobre su capacidad de trabajo, asistencia a programas de educació educación n continua continuada, da, responsa responsabili bilidad, dad, asistenci asistencia, a, trabajos trabajos de investig investigació ación, n, charlas, conferencias y su evaluación profesional profesional anual. Todo nuevo empleado que se adicione a la plantilla de la sección, debe ser documentado, documentado, evaluado y certificado, incluyendo las fases pre-analíticas, analíticas y post-analíticas de funcionamiento del laboratorio.

2. Programa de docencia:

Un eleme elemento nto fundam fundament ental al en el mante mantenim nimie iento nto apropi apropiad ado o de la compet competenc encia ia del person personal al es el progra programa ma de educac educació ión n contin continua uada. da. Este Este progra programa ma mantie mantiene ne al person personal al inform informad ado o en los avance avances s en la detec detecció ción n e identi identific ficaci ación ón de agent agentes es etiológicos, nuevos test, equipos, cambios en la taxonomía bacteriana y la evaluación correcta de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos. Este programa puede incluir charlas, mesas redondas, lecturas de artículos de interés, discus discusió ión n de casos casos clínic clínicos, os, evalua evaluació ción n de nuevo nuevos s test test o equip equipos, os, revisi revisión ón de la literatura sobre temas específicos, trabajos de investigación, etc. Se debe llevar un control sobre la participación individual del personal en el programa, su asistencia y actividad, lo cual formará parte de su evaluación anual.

3. Evaluación del informe final: El resultado final de la evaluación de un espécimen clínico luego de cumplir con todas las etapas de investigación, es el informe final que implica una identificación etiológica, si la hubiera, y su correspondiente sensibilidad a los antibióticos. Para llegar a éste resultado, el laboratorio de microbiología debe haber agotado todos los elementos diagnósticos de que dispone y hacer un juicio respecto a la posibilidad de que dicho informe represente el potencial agente infeccioso, tomando en cuenta los factores que están involucrados tales como el tipo de muestra, microorganismo aislado, edad del paciente, procedencia, informes previos, frotis directo y el patrón de comportamiento frente a los antibióticos, entre otros.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA En todo informe final debe prevalecer el concepto de rapidez y seguridad diagnóstica. Es recomendable y así está establecido en Manuales foráneos, que los resultados sean evaluados antes de su envío por un el jefe del laboratorio de microbiología o en su defecto por un Supervisor con experiencia y capacidad demostrada, con el fin de minimizar potenciales errores, omisiones o interpretaciones del informe final, tomando en cuenta el valor que éste reporte tendrá en la evaluación, tratamiento y la salud del paciente. Es importante en ésta etapa establecer los " Valores de Alerta " en microbiología, los cuales cuales son aquell aquellos os result resultado ados s de mayor mayor prepo preponde nderan rancia cia,, ya sea por el tipo tipo de microorganismo involucrado o por su significado en el control de enfermedades de notificación obligatoria.

VALORES DE " ALERTA " EN MICROBIOLOGIA MICROBIOLOGI A

1. Organismos vistos en LCR * Tinta china positiva 2. Detección de antígenos de Cryptococcus * Detección de antígenos de

LCR 3. Frotis BAAR positivos * Hemocultivos positivos 4. Cultivo de LCR positivo * Aislamiento de M. Tuberculosis

VALORES DE " ALERTA " EN MICROBIOLOGIA MICROBIOLOGI A

1. Aislamiento de Shigella sp * Aislamiento de Salmonella typhi 2. Aislamiento de E. coli 0157:H7 * Aislamiento de Neiserias patógenas.

3. Aislamiento Aislamiento de Estafilococ Estafilococos os resistentes resistentes a la Vancomi Vancomicina. cina. 4. Aislamiento Aislamiento de agentes agentes etiológi etiológicos cos de notificación notificación obligatoria. obligatoria.

Cuando se observen " Valores de Alerta " , se debe notificar al jefe de la sección.

4. Control de calidad externo: Es recomendable que los laboratorios de microbiología puedan participar en programas de evaluación externa. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para evaluar un desconocido y llegar a un resultado seguro. Los mismos consisten en la identificación de muestras o microorganismos desconocidos desconocidos en los cuales se debe informar del resultado de la identificación, pruebas utilizadas para el diagnóstico etiológico y sensibilidad a los antibióticos.



El Director del laboratorio debe escoger el programa que sea consistente con el nivel de calidad de su laboratorio. Generalmente estos desconocidos vienen con con un abst abstra ract cto o clín clínic ico o y son son reci recibi bido dos s al meno menos s 2 vece veces s al año. año. Los Los laboratorios que ofrecen éstos programas invalidan aquellos laboratorios que fallan fallan en respon responder der el cuesti cuestiona onario rio,, por lo que es necesa necesario rio mante mantener ner un contacto muy especial para no perder éste beneficio. Los resultados de la evaluaci evaluación ón de los desconoc desconocidos idos deben ser discutidos discutidos por todo el personal personal antes de su informe al laboratorio generador generador del programa.

Algunos laboratorios que ofrecen programas externos de evaluación de la calidad son : 1. Accutest: POBox 999 Westford, MA 01886-0031

2. American Association Association of of Bioanalysts Bioanalysts Proficie Proficiency ncy Testing Testing Service 205 West Levee Street Brownsville, TX 78520-5596 78520-5596

3. American American Profic Proficien iency cy Instit Institute ute 1159.Business Park Drive Traverse City, MI 49686

1. The Coll College ege of America America Patho Patholog logists ists-- Survey Survey College of American Pathologists 325.Waukegan Road Northfield, Il 60093-2750

1. Idaho Bureau of Laborato Laboratories ries Proficie Proficiency ncy Testing Testing Program Program 2220.Old Penitenciary Rd. Boise, ID 83712

1. Medical Medical Labo Laborat ratory ory Evalu Evaluati ation on (MLE (MLE ).). 2011 Pensnsylvania Av, NW, NW, Suite 800


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA Washington, DC 20008-1808

2. New Jersey Jersey Department Department of Health Health Proficien Proficiency cy Testing Testing Program, Program, CN 360 Trenton, NJ 08625-0360 USA

3. Paci Pacifi ficc Biom Biomet etri rics cs 110 Eastlake Avenue East Seatle, WA 98109

4. Puerto Puerto Rico Departm Department ent of Health Health Laboratory Service Program Department of Health of Puerto Rico, Bulding A Call Box 70184 San Juan, Puerto Rico 00936 ( Tel. (800)-769-7774 )

5. Univers Universita itair ir Zieken Ziekenhui huiss St. Rafa Rafael el B-300 B-300 Bacteriologie Leuven – Belgium Att: Prof. Dr. J. Vandepitte Prof. J. Verhaegen Tel. 0032-16-332150 Fax. 0032-16-336321 0032-16-336321

5. Certificación del laboratorio de microbiología:

Un nuevo nuevo concep concepto to en la organi organizac zación ión de los labora laborator torios ios es la acredi acreditac tación ión a Asocia Asociacio ciones nes especi especiali alizad zadas as que promu promueve even n la excele excelenc ncia ia en la calida calidad d de los


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA servic servicios ios de sus miembr miembros. os. Esta Esta calida calidad d está está enfoc enfocada ada no solo solo en los aspect aspectos os técnicos, sino también en los administrativos, racionalización racionalización de recursos, planificación gerencial, costos de operaciones, calidad de servicio al cliente, es decir, decir, un enfoque de Calidad Total. En los Estado Estados s Unidos Unidos éstas éstas acred acredita itacio ciones nes están están valida validadas das por por asocia asociacio ciones nes como como la Americ American an Societ Society y for Micro Microbio biolo logy gy,, Colleg College e of Ameri American can Pathologists, American Association Association of Bioanalysts, etc. En Latinoamérica Latinoamérica algunas asociaciones de laboratorios han creado comités de acreditación para laboratorios públicos y privados. El enfoq enfoque ue modern moderno o en un mundo mundo en que las distan distancia cias s se han han acorta acortado do y los concep conceptos tos de global globaliza izació ción n son una realid realidad, ad, la acred acredita itació ción n propor proporcio ciona na a los miembros la posibilidad de comunicarse mejor con otros laboratorios del mundo, lo cual permite un intercambio de experiencias en metodologías, compra de equipos, entrenamiento de personal, etc Los problemas legales y altos costos de operaciones, han obligado a los grandes laboratorios a encontrar un modelo aún más complejo de aseguramiento de la calidad, con el fin entre otros, de bajar costos. La Organización Internacional Internacional de Estándares ha desarrollado una guía llamada ISO 9000 que establece un flujograma de trabajo en los programas de aseguramiento de la calidad y unifica los diferentes actividades del control de calidad. La categoría apropiada para los laboratorios clínicos en general es el ISO 9002 el cual comprende 18 elementos de control. Para que un laboratorio pueda ser certificado bajo la norma ISO, debe cumplir con todos los elementos del estándar. En éstos casos un equipo de Aseguramiento de la Calidad implementa las medidas en cada una de las área con el fin de que cuando se esté listo, pueda pasar las pruebas a que es sometido todo el sistema por parte de auditores certificados. La obtención de ésta certificación ISO 9002 es el máximo galardón a la excelencia en control de calidad en los laboratorios clínicos.

A. PROFO PROFORMAS RMAS DE REPORT REPORTE E DEL CONTROL DE CALIDAD: CALIDAD:

Se adjuntan a continuación las hojas proformas utilizadas para llevar el registro del control de calidad en microbiología: 1. Libro Libro de reporte reporte de de control control de calidad calidad de medio medios s en platos. platos. 2) Libro de reportes de control de calidad de medios en tubos. 2. Libro Libro de reporte reporte de control control de de calidad calidad de antisue antisueros ros y reactivo reactivos. s. 4) Libro de reporte de control de calidad de fórmulas lácteas y mamaderas.


MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 5) Libro de reporte de control de calidad de la sangre de carnero. 1. 6) Libro Libro de reporte reporte de contro controll de calidad calidad de los los discos discos de sensibil sensibilidad idad a los los antibióticos. 7) Libro de control del cepario.

A. GLOSA GLOSARIO RIO DE TERMINOS TERMINOS EST ESTADIST ADISTICOS: ICOS:

1. Azar : Condición de desorden sin predicción de los resultados individuales. individuales.

2. Coeficiente de Confianza: Oportunidad que tiene un intervalo de confianza de ser incluido en el valor universal. 3. Curtosis: Grado de agudeza de la curva. dividida por el número de 4. Desviación Promedio: Es la desviación dividida determinaciones. determinaciones. Es un método que permite determinar la magnitud de la desviación estándar cuando se corren muchas pruebas. 5. Desviación Estándar : Raíz cuadrada del promedio de las desviaciones al cuadrado, de una media aritmética. 6. Distribución de Frecuencia: Agrupa los valores de una variable en orden de tamaño. 7. Distribución Normal: Distribución de datos en una frecuencia de tabulación que semeja una curva de campana. 8. Duplicados: Unidad o espécimen que se ha producido bajo las mismas condiciones. 9. Exactitud: Desviación de un valor estimado, del valor real. 10. Error Experimental: Desviación del valor esperado, debido a las limitaciones de la metodología o de la producción. 11. Error Relativo: Error medio en una serie de pruebas, que representan un porcentaje del valor verdadero. 12. Error Estándar : Error alrededor de la media de una serie de pruebas. MANUAL DE CONTROL DE78CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA

MANUAL DE CONTROL DE CALIDAD MICROBIOLOGIA CLINICA 13. Error medio: Diferencia entre el resultado verdadero y la media obtenida. 14. Factor de Corrección: Es una constante aplicada a valores observados en muestreos pequeños, pequeños, con el fin de obtener un mejor ajuste de datos a la distribución teórica chi cuadrado ( xª ). 15. Factores Fijos: Factores, variables o efectos que son constantes o iguales para todas las muestras. 16. Grado de Libertad: Es el número de diferencias independientes o variaciones posibles en las observaciones observaciones individuales. Si solo hay una observación, entonces hay un grado 0 de libertad, ya que no hay otra observación para comparar. 17. Histograma: Diagrama de barras que representan la frecuencia f recuencia de distribución. 18. Homocentesis: Distribución uniforme a ambos lados de la media. 19. Interacción: Tendencia a la combinación de dos variables de manera que el resultado difiere de la suma de sus actividades independientes. independientes. 20. Límite de Confianza: Límite alto y bajo de un intervalo de confianza. 21. Muestra: Grupo de datos o elementos utilizados en el estudio. 22. Mediana: Línea de igualdad que divide la distribución en igual número de casos por encima o por debajo de la línea. 23. Media Aritmética: Suma de una serie de pruebas dividido por el número total. 24. Modo: Tipo de dato que tiene la mayor frecuencia, lo que indica el punto central de la tendencia. 25. Parámetro: Constante de un universo que describe una característica individual. 26. Probabilidad: Frecuencia relativa al azar. Varía del cero al uno. 27. Precisión: Exactitud en las determinaciones repetidas de una prueba. A menor desviación estándar, mayor precisión. 28. Punto Fuera ( Outlier ): Valor ubicado en una posición extrema, fuera de los límites aceptables. 29. Reproducibilidad: habilidad para repetir el mismo resultado en diferentes ocasiones. variabilidad general que describe la 30. Rango: Es la medida más sencilla de la variabilidad diferencia entre el valor máximo y el mínimo. 31. Significativo: Resultados de la prueba que se salen de los límites de confianza. 32. Universo: La totalidad de los elementos del cual se toman las muestras para su tabulación. 33. Variabilidad: Es el cuadrado de la desviación estándar.

E-Mail: ecaballe[arroba]sinfo.net ecaballe[arroba]sinfo.net BIBLIOGRAFIA DE REFERENCIA:

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Manual de Control de Calidad en Microbiologia Clinica

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