MANEJO DE MICROPIPETAS MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS Y PRECISION PRECISION DE SUS MEDIDAS Almanso Plaza Yisela ; Jaime Moya Natalia ; Miranda Gomez Jose; Parejo Tovar Miguel 1,
Universidad de Córdoba. Córdoba. Facultad de Ciencias Básicas, Departamento de Biología, Montería, Colombia
Resumen Las micrpipetas son dispositivos que se caracterizan por carecer de depósito y que se utilizan para medir o transvasar pequeños volúmenes de líquido de un recipiente a otro con gran exactitud. Inicialmente se fabricaron f abricaron en vidrio pero hoy en día existe una gran variabilidad de opciones. Objetivo Determinar las recomendaciones básicas y técnicas para el uso y manejo de micropipetas automáticas y la determinación de la precisión de sus medidas Metodología: para realizar esta práctica se seleccionó el modelo adecuado para medir el volumen, de manera que esté dentro del rango especificado para la pipeta. Resultados: se obtuvieron valores del w del agua mediante el micropipeteo que fueron analizadas por medio de una gráfica. Discusión: la gráfica obtenida mostro una relación directamente proporcional entre el volumen agregado al tubo y su peso, teniendo así, que por cada 100µL de agua agregados al tubo, su peso aumentaba; siendo un valor constante para cada volumen. Conclusión: el manejo de micropipetas se hizo de manera cuidadosa, evitando inclinaciones y formaciones de burbujas. Por otro lado es de destacar la exactitud que posee este instrumento, el cual es capaz de medir volúmenes considerablemente pequeños.
Palabras claves: Precisión, liquido, microlitros,tubo eppendortf. Abstract: He micrpipetas devices are characterized by lack of deposit and used to measure or transfer small volumes of liquid from one container to another with great exactitud.Inicialmete were manufactured in glass but today there is great variability of options.Objective: To determine the the basic and technical recommendations recommendations for the use and management of automatic pipettes and determining the accuracy of your measurements Methodology: To perform this practice was selected the right model for measuring the volume, so that it is within the specified range for the pipette. Results: water w values were obtained by micropipettor which were analyzed by means of a graph. Discussion: the graph obtained showed a direct relationship between the amount added to the tube and weight, thus having, for every 100l of water added to the tube, his weight increased; It is a constant value for each volume. Conclusion: handling micropipettes are made carefully, avoiding inclinations and formation of bubbles. On the other hand it is noteworthy that the accuracy has this instrument, which is capable of measuring small volumes considerably.
Keywords: Accuracy, liquid, microliter tube eppendortf. Introducción Las pipetas son dispositivos que se caracterizan por carecer de depósito y que se utilizan para medir o transvasar pequeños volúmenes de líquido de un recipiente a otro con gran exactitud.Inicialmete se fabricaron en vidrio pero hoy en día existe una gran variabilidad de opciones. Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo: los más habituales, denominados p20, p50 y p100, admiten un máximo de 20, 50 y100 l, respectivamente. Las podemos encontrar de dos tipos: manuales y automáticas. En ambas el volumen deseado se selecciona haciendo girar una rueda que se encuentra en el extremo superior, aunque también existe el volumen fijo. La automática se diferencia más moderna y exactas (Casado et.al 2012). Las Micropipetas más comunes son 0.1-1 μL, 0.5-10 μL, 10- 100 μL, 20200 μL, 100 - 1.000 μL, 1.000 - 5.000
μL.
Como
dijimos
anteriormente,
algunas de ellas solo trasvasan volúmenes fijos pero la gran mayoría permiten un intervalo de microlitros a seleccionar. Lo ideal sería tener una mayor cantidad, ya que sufren menos degaste y no pierden la calibración con tanta facilidad. Pero en la práctica, saber el volumen exacto que necesitamos para todas las operaciones es imposible. Por eso, se recurre a aquellas que permiten transferir diferentes cantidades, otra característica son las puntas plásticas desechables, que permiten pipetear diferentes
reactivos en menor tiempo, ya que solo es necesario cambiar la punta y no cambiar o lavar la pipeta. Las puntas que no se extraen de forma manual, sino en la parte superior la micropipetas existe un botón expúlsalas (Casado et.al 2012).
MATERIALES
Micropipetas de 0.5 – 10 μl. Micropipetas de 10 – 100 μl.
Micropipetas de 100 – 1.000 μl.
Tubos eppendortf.
Puntas amarillas, blancas.
azules
y
Beaker de 500 ml. Balanza analítica.
Metodología Se procedió a identificar las partes de la micropipetas y el funcionamiento de esta como es el caso del embolo, cuando el émbolo se presiona sentirá un punto
de resistencia. Éste es el primer “alto” o "tope". Si continúa presionando encontrará un punto donde el émbolo ya no se mueve hacia abajo, este
corresponde al segundo “alto” o "tope". Oprimir el émbolo hasta el primer tope y colocar la punta dentro del líquido hasta una profundidad de 2 a 3 mm, de una manera lenta y controlada, disminuir la presión de este, para permitir que se desplace hacia arriba, no suelte el émbolo abruptamente, al permitirlo causará que el líquido pueda salpicar dentro de la punta produciendo volúmenes inexactos y generando contaminación de la pipeta. Utilizando la balanza analítica
se pudo obtener el peso del tubos eppendorf, y se extrajo determinadas cantidades de agua destilada (0-1000) por medio de la micropipeta de 1000ul, se pesó nuevamente el tubo con el agua, de esta manera se hizo con cada uno de los volúmenes a trabajar.
Varianza:
(0,9197-1.,179)2 = 0.067
Resultados y análisis Tabla 1. Volumen y peso de la muestra. Volum W W W agua en (µl) tubo tubo + (g) w agua 0,9172 0,9197 0 0,002578 0,9172 0,9747 0,0575 100 200 0,9172 1,1155 0,1958 0,9172 1,2272 0,31 300 0,9172 1,3262 400 0,409 0,9172 1,4412 500 0,524 600 0,9172 1,5223 0,6051 700 0,9172 1,6316 0,7144 800 0,9172 1,7228 0,8056 900 0,9172 1,8255 0,9083 1000 0,9172 1.8908 1.0049
Dato – media (al cuadrado) Suma de resultado de Dato – media entre el número de datos
(0,9747- 1,4179)2 = 0.196 (1,1155 – 1,4179 )2 =0.091 (1,2272 – 1,4179 )2 = 0.036 (1,3262 – 1,4179 )2 = 0.008 (1,4412 – 1,4179 )2 = 0.0005 (1,5223 – 1,4179 )2 = 0.010 (1,6316 – 1,4179 )2 = 0.045 (1,7228-1,4179)2 = 0.092 (1,8255-1,4179)2 = 0.166 (1.8908- 1,4179)2 = 0.223
Varianza: 0.084
Desviación estándar: Los resultados nos muestran una relación directamente proporcional con respecto al volumen del agua, para esto se realizó una diferencia entre el peso del tubo de Eppendorf con un volumen de agua, menos el peso del tubo vacío, obteniendo el peso del agua por volúmenes desde los 100 µL hasta los 1000 µL.
Media: número de datos/N N = 11
0,9197+ 0,9747+ 1,1155+ 1,2272+ 1,3262+ 1,4412+ 1,5223+ 1,6316+1,7228+ 1,8255+1.8908 = 15,5975
15,5975/ 11 = 1,4179
Varianza
0.084
= 0.291
Hay que tener en cuenta varios factores que pueden intervenir en el porcentaje de error de los datos dentro de los cuales se pueden mencionar:
La descalibración de la micropipeta o de la balanza analítica utilizada: esto se pudo deber a errores como tomar volúmenes por encima o por el mínimo de dicho instrumento, por ello es necesario asegurarse que
está usando la micropipeta correcta para el volumen que necesita.
Errores al momento del pipeteado, por ello es recomendable pipetear siempre en posición vertical y utilizar la punta específica de la micropipeta, además de evitar volúmenes de agua que queden en la punta y luego afecten el volumen que la persona quiera tomar.
Volumen (µl) 1200 ) l 1000 µ ( 800 n e m 600 u l o 400 V A 200
Volumen (µl)
instrumento de laboratorio empleado para succionar y transferir pequeños volúmenes de líquidos, la utilización de micropipetas de volumen fijo nos permitirá tener un mayor control dentro de los volúmenes exactos que se deben tomar, los volúmenes captables por estas varían según el modelo: las utilizadas se encuentran en un rango de
0.5, 10, 100 y hasta
1000 μl,
respectivamente. Es destacable que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar estas porque para ello se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Existen varios tipos de puntas dependiendo del volumen que se desee tomar por tal razón se puede decir que las micropipetas son muy útiles y necesarias para los laboratorios de la biología molecular.
0
PREGUNTAS DE CONSULTA W agua
1. Consulte los siguientes conceptos: exactitud y precisión .
Volumen (µl)
Precisión se refiere a la dispersión del
1000 800 ) l µ ( n 600 e m u 400 l o V
Volumen (µl)
200 0 00.2 0.4 0.6 0.811.2 1.4 1.6 1.822.2 2.4 2.6 2.83 W agua + W tubo
CONCLUSION Después de haberse realizado la práctica se puede decir que la micropipeta es un
conjunto de valores obtenidos de mediciones repetidas de una magnitud. La precisión es la capacidad de un instrumento de obtener el mismo resultado en mediciones diferentes, desarrolladas bajo las mismas condiciones. Se conoce como máquina de precisión a un aparato construido con el objetivo de obtener resultados exactos. La diferencia entre el valor medido y el valor real recibe el nombre de error de medición.
Exactitud se refiere a cuán cerca del valor real se encuentra el valor medido.
Así pues una medición es más exacta cuanto más pequeño es el error de medida.
2. Calcula la media, varianza y la desviación estándar para los datos obtenidos en la práctica. Media de w agua: 1,4179 Varianza de w agua: Desviación estándar de w agua:
Bibliografía Casado, E; Duran, P; Miro, T;
Paredes, A. 2012. Operaciones básicas de laboratorio. Ediciones paraninfo, SA. Madrid, p34- 35
