Laporan Instrumentasi SPT

BORANG LAPORAN PRAKTIKUM LABORATORIUM SPT

No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak Revisi Halaman

LAPORAN PRAKTIKUM INSTRUMENTASI PENGENALAN ALAT, MIKROTOM, OPTI LAB, DAN PEMBUATAN PREPARAT

NAMA DOSEN

: Dawam Suprayogi : Dr. E.Suharyanto,M.S.,M.Sc., Ph.D

LABORATORIUM STRUKTUR PERKEMBANGAN TUMBUHAN FAKULTAS BIOLOGI UNIVERSITAS GADJAH MADA YOGYAKARTA 2013

The world's largest digital library

Try Scribd FREE for 30 days to access over 125 million titles without ads or interruptions! Start Free Trial Cancel Anytime.












I.

No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Tujuan Praktikum 1. Mahasiswa dapat mengetahui nama dan fungsi alat-alat yang ada di dalam laboratorium struktur perkembangan tumbuhan. 2. Mahasiswa dapat mengetahui mengetahui cara membuat preparat tumbuhan. 3. Mahasiswa dapat mengetahui cara kerja mikrotom dalam pembuatan preparat dan penggunaan optilab untuk keperluan pengamatan.

II.

Dasar Teori

2.1

Jenis Preparat Mikroteknik secara umum dikenal sebagai teknik pembuatan preparat

mikroskopis, menganalisis, dan juga melakukan mikrometri sebagai bagian dari proses penelitian histologi. Preparat tumbuhan dibuat dengan beberapa jenis tergantung dari tujuan penggunaan preparat tersebut. Jenis tersebut yaitu preparat segar, preparat semi permanen, dan preparat permanen. 1.

Preparat segar Preparat segar digunakan untuk mengamati jaringan dalam kondisi hidup. Salah satu contoh penggunaannya adalah pengamatan pergerakan kloroplas pada Hydrilla sp. Preparat segar menggunakan media akuades sehingga hanya dapat digunakan dalam waktu singkat. Setiap pengamatan menggunakan preparat segar dianjurkan untuk membuat preparat baru terlebih dahulu.

2.

Preparat semi permanen Preparat semi permanen dapat bertahan lebih lama dari pada preparat segar. Preparat ini menggunakan media gliserin. Menurut Susandarini (2004) gliserin memiliki indeks refraksi 1,4 dan baik digunakan untuk preparat semi permanen.












3.

No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Preparat permanen Media yang digunakan pada preparat permanen adalah balsam kanada. Adds et.al (2001) menjelaskan penggunaan balsam kanada memiliki keuntungan yaitu pengeringan lebih cepat dan tidak berubah warna dalam waktu lama. Preparat permanen yang diproduksi dengan cara ini dapat disimpan dalam waktu lama tanpa penurunan kualitas.

2.2

Metode Pembuatan Preparat Selain jenis-jenis preparat berdasarkan umur pemakaiannya, membuat

preparat juga dapat dilakukan dengan beberapa metode. Hal ini dilakukan berdasarkan tujuan pengamatan dari preparat yang akan dibuat. Metode tersebut yaitu antara lain metode paraffin, metode squash, metode asetolisis, metode maserasi, dan metode whole mount. Metode paraffin digunakan untuk pembuatan preparat yang memiliki tekstur lunak seperti daun, bunga, dan pucuk tumbuhan. Dengan di embedding pada paraffin, jaringan yang lunak akan menjadi lebih mudah untuk di iris. Selain metode paraffin dikenal juga metode squash. Metode ini digunakan untuk mengamati mitosis yang biasanya menggunakan akar tumbuhan. Metode asetolisis digunakan saat membuat preparat serbuk sari ( pollen) pollen) dan spora. Metode ini menggunakan campuran asam asetat glasial dan asam sulfat pekat dengan perbandingan 9:1. Dengan direndam pada campuran tersebut, dinding sel pollen pollen menjadi lisis. Sebelum diamati menggunakan mikroskop, objek di berikan minyak silikon (Preston, 1963). Metode maserasi digunakan dengan prinsip membusukkan beberapa bagian jaringan tertentu, Dengan cara ini, jaringan yang diamati akan tetap utuh dan lebih jelas. Metode ini memiliki tiga variasi cara yaitu met ode Jeffery, metode Harlow, dan metode Schultze (Bendre dan Kumar, 2009).











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak

LAPORAN PRAKTIKUM LABORATORIUM SPT

Revisi Halaman

pengamatan struktur utuh dari suatu organisme dan objek akan terlihat dengan jelas ketika diamati menggunakan mikroskop. Struktur yang dapat diamati menggunakan metode whole mount ini adalah struktur reproduksi maupun struktur vegetatif pada suatu organisme. Objek preparat tumbuhan yang dapat dibuat sengan metode ini adalah tumbuhan kecil yang dapat di tempatkan dalam kaca objek. Objek tersebut di mounting dengan asam laktat 85% (Youssef dan Dugan, 2000).

2.3

Mikrotom Mikrotom adalah alat yang digunakan untuk memotong spesimen. Alat ini

digunakan untuk membuat preparat jaringan. Hasil preparat yang baik tergantung pada pengetahuan yang mendalam tentang peralatan dan pengalaman praktis. Mikrotom dapat mempuat potongan specimen dengan ketebalan yang paling umum digunakan yaitu 5-10µm (Majrit, 2008). Kebanyakan

proses

pembuatan

preparat

menggunakan

mikrotom

dilakukan pada blok jaringan yang ditanam pada parafin. Mekanisme kerja mikrotom adalah obyek (blok parafin) bergerak maju dengan jarak yang telah ditentukan sampai bersentuhan dengan pisau pemotong. Spesimen bergerak secara vertikal melewati permukaan pisau sehingga menghasilkan irisan tipis jaringan (Bancroft et al ., ., 2008). Berdasarkan prinsip kerjanya mikrotom terdiri dari beberapa jenis, diantaranya: 1. Mikrotom Tangan (Hand microtome) microtome) Mikrotom

tangan

merupakan

bentuk

paling

dasar.

Bentuknya

menyerupai penggulung benang, dan memiliki satu lubang tempat memasukkan dan mengunci objek (dalam fiksatif) yang akan diiris. Setelah objek dimasukkan ke dalam lubanmg mikrotom, pengirisan











No. Dokumen


FO-UGM-BI-07-13


Selain itu, alat ini dapat juga digunakan untuk mengiris jaringan yang bertekstur keras.

2. Mikrotom Putar (Rotary Microtome) Microtome) Mekanisme dasar mikrotom putar menggunakan roda yang dapat diputar 360o. Spesimen bergerak vertikal melewati permukaan pisau pemotong dan kembali ke posisi awal. Mikrotom putar memiliki beberapa

model

yaitu:

manual,

semi

otomatis,

dan

otomatis.

Keuntungan penggunaan mikrotom ini yaitu: kemampuan untuk memotong tipis spesimen, dan dapat digunakan pada semua jenis jaringan (Mailhiot, 2005 dalam Bancroft dalam Bancroft et al ., ., 2008).

3. Mikrotom geser (Sliding microtome) microtome) Pada mikrotom ini bagian yang bergerak pada saat pengirisan sampel adalah pisaunya. Sampel diletakkan pada bagian yang terkunci, lalu pisau yang digerakkan akan mengiris objek dengan ketebalan yang ditentukan. Mikrotom ini digunakan untuk sampel yang bertekstur keras atau pada sampel yang di embedding dalam celloidin (Bancroft et al ., ., 2008).

2.4

Mikroskop cahaya Keingintahuan akan benda-benda kecil yang mikroskopis, mendorong

ditemukannya mikroskop. Mikroskop yang pertama kali ditemukan dan dikembangkan adalah mikroskop cahaya. Dalam mikroskop cahaya, cahaya tampak diteruskan melalui spesimen dan kemudian melalui lensa kaca. Lensa ini merefraksikan cahaya sedemikian rupa sehingga citra spesimen diperbesar ketika diproyeksikan ke mata atau ke kamera.











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak


Revisi Halaman

dengan ukuran objek sebenarnya. Mikroskop cahaya dapat memperbesar secara efektif 1000 kali ukuran objek sebenarnya. Dengan perbesaran lebih tinggi lagi akan membuat detail benda tidak lagi terlihat jelas. Resolusi adalah ukuran kejelasan citra; jarak minimum yang dapat memisahkan memi sahkan dua titik sehingga masih dapat dibedakan sebagai dua titik. Parameter ketiga adalah kontras, ini didefinisikan sebagai kemampuan menonjolkan perbedaan bagian dari sampel. Sehingga bagian-bagian sel dapat lebih jelas dibedakan (Reece et. al., 2011).

III.

Metode

3.1

Waktu dan Tempat Waktu dan tempat pelaksanaan praktikum yaitu : Hari, tanggal

: Selasa, 3 Desember 2013

Pukul

: 09.00 sampai selesai

Tempat

: Laboratorium

Struktur

Perkembangan

Tumbuhan

Universitas Gadjah Mada 3.2 Alat Pada praktikum kali ini dijelaskan cara penggunaan alat-alat yang digunakan pada laboratorium struktur perkembangan tumbuhan. Antara lain: 1.

Hot plate

2.

Kaca objek dan Kaca penutup

3. Mikroskop 4. Mikrotom 5. Optilab 6. Oven 7. Pengasah Pisau Mikrotom














No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


3.3 Bahan Selain penggunaan alat, digunakan juga beberapa bahan-bahan, antara lain: 1. Alkohol 2. Balsam Kanada 3. Fast Green 4. Parafin 5. Safranin 6. Xilol

3.4 Prosedur Kerja Berikut dijelaskan prosedur kerja pembuatan preparat: 

Preparat Segar 1. Diteteskan akuades akuades di tengah kaca objek objek bersih. 2. Diambil bagian tumbuhan tumbuhan yang akan diamati, diamati, bila jaringan terlalu besar gunakan pisau silet untuk mengirisnya m engirisnya 3. Ditempatkan objek objek pengamatan pengamatan ke dalam dalam akuades pada kaca objek. 4. Ditempatkan kaca penutup secara secara perlahan menyentuh akuades akuades pada kaca objek dengan membentuk sudut 60 derajat lalu dijatuhkan dengan hati-hati hingga objek tertutup.

Preparat Semi Permanen











BORANG LAPORAN PRAKTIKUM LABORATORIUM SPT 

No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Preparat Permanen Tanpa Embedding Hari ke I: Fiksasi: Dipakai Fiksasi: Dipakai larutan Alkohol 70% Pengirisan: Dibuat Pengirisan: Dibuat irisan-irisan melintang atau membujur dengan menggunakan Sliding microtome dengan ketebalan 20-30µm (mikronmeter). Irisan ditampung dalam petridish yang diberi Alkohol 70%. Pewarnaan: Dengan Pewarnaan: Dengan menggunakan Safranin 1 % dalam Alkohol 70% selama 24 jam.

Hari ke II: Safranin dibuang lalu diganti berturut-turut dengan : Alkohol 70% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 10 menit Alkohol 80% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 10 menit Alkohol 95% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 10 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 10 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 10 menit Alkohol/xilol 3:1 .......................... ............. .......................... .......................... ................. .... 10 menit Alkohol / xilol 1:1 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 10 menit Alkohol / xilol 1:3 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 10 menit Xilol .......................................................................... 10 menit Xilol .......................................................................... 10 menit











BORANG LAPORAN PRAKTIKUM LABORATORIUM SPT 

No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Preparat Permanen dengan Embedding pada Paraffin Hari ke I: I: Fiksasi: Dipakai Fiksasi: Dipakai larutan FAA : Formalin ................................................................... 5 bagian Asam asetat glasial ................ ... .......................... .......................... ..................... ........ 5 bagian Alkohol 70% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 90 bagian Diamkan selama 24 jam.

Hari ke II: Pencucian dan dehidrasi: dehidrasi : Fiksatif dibuang lalu diganti berturut-turut dengan : Alkohol 70% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 30 menit Alkohol 80% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 30 menit Alkohol 95% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 30 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 30 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 30 menit Dealkoholisasi: Alkohol / xilol 3:1 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 30 menit Alkohol /xilol 1:1 ......................... ............ .......................... .......................... ................. .... 30 menit Alkohol/xilol 1:3 .......................... ............. .......................... .......................... ................. .... 30 menit Xilol .......................................................................... 30 menit Xilol .......................................................................... 30 menit Campuran Xilol/paraffin 1:9 dengan temperature 57°C selama 24












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Hari ke V: Pengirisan: Pengirisan: Dibuat irisan-irisan dengan menggunakan rotary microtome dengan microtome dengan ketebalan 6-12µm (mikronmeter). Perekatan: Irisan Perekatan: Irisan direkatkan pada gelas benda dengan campuran Gliserin : Albumin yang dibubuhi air, kemudian gelas benda ditaruh diatas Hot plate dengan temperature 45°C sampai pita paraffin merenggang.

Hari ke VI: Pewarnaan : Pewarnaan : dengan safranin 1% dalam Alkohol 70% dan fast green 1% dalam Alkohol 95%. Berturut-turut gelas benda dimasukkan dalam : Xilol .......................................................................... 3 menit Xilol .......................................................................... 3 menit Alkohol / xilol 1:3 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 3 menit Alkohol / xilol 1:1 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 3 menit Alkohol / xilol 3:1 .......................... ............. .......................... ........................... ................ 3 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 3 menit Alkohol 100% ......................... ............ .......................... .......................... ..................... ........ 3 menit Alkohol 95% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 3 menit Alkohol 80% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 3 menit Alkohol 70% ........................... .............. .......................... .......................... ..................... ........ 3 menit Safranin 1% 1% dalam Alkohol 70% .......

1 jam












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Xilol .......................................................................... 1 menit Xilol .......................................................................... 1 menit

Penutupan: Penutupan: Irisan ditutup dengan gelas penutup dengan pemberian Balsam Kanada terlebih dahulu. Preparat dikeringkan diatas Hot plate dengan temperature 45°C hingga Balsam Kanada kering.

Pemberian nama: Disebelah nama: Disebelah kiri gelas penutup dilekatkan etiket dan diberi keterangan: nama spesies, organ, penampang.

IV.

Hasil dan Pembahasan

4.1

Deskripsi Laboratorium Laboratorium Struktur dan Perkembangan Tumbuhan Fakultas Biologi

Universitas Gadjah Mada merupakan sebuah laboratorium yang digunakan untuk melakukan berbagai akitivitas yang berkaitan dengan percobaan maupun kegiatan-kegiatan penelitian. Dalam menjalankan fungsinya, laboratorium ini didukung dengan perangkat peralatan, bahan-bahan, mekanisme termasuk tata cara penggunaan alat, dan organisasi pengelolaannya. Laboratorium ini dipimpin oleh Bapak Dr. E. Suharyanto, M.S, M.Sc, Ph.D., dan dibantu oleh staff dosen lainnya yaitu Prof. (Emeritus) Dr. Issirep Sumardi, Prof. Dr. L. Hartanto Nugroho,














No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


ini meliputi ruang kuliah dan praktikum, ruang penelitian, ruang pembuatan preparat, ruang kultur jaringan, dan ruang asisten.

4.2

Instrumentasi Alat dan Bahan Pada praktikum instrumentasi ini, dijelaskan beberapa alat yang biasa

digunakan dalam praktikum maupun penelitian pada laboratorium struktur perkembangan tumbuhan. Setiap alat memiliki fungsi dan spesifikasi masingmasing, sehingga dalam penggunaannya menyesuaikan dengan kebutuhan peneliti. Selanjutnya akan dijelaskan beberapa alat yang terdapat dalam laboratorium struktur perkembangan tumbuhan. 1. Hot plate Dalam pembuatan preparat, hot plate plate digunakan untuk mengeringkan preparat. Preparat yang telah diletakkan di kaca objek, di beri gliserin atau kanada balsam (tergantung jenis preparat). Setelah diberi











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak


Revisi Halaman

2. Kaca objek dan kaca penutup Kaca objek (object (object glass) glass) dan kaca penutup (cover (cover glass) glass) sangat umum digunakan dalam pembuatan preparat. Kaca ini berfungsi sebagai tempat meletakkan irisan-irisan preparat. Untuk menjaga agar kaca penutup tetap melekat dengan kaca objek pada preparat biasa digunakan gliserin atau kanada

balsam.

Pada

Gambar

2

terlihat

penggunaan kaca objek dan kaca penutup sebagai Gambar 2. Preparat pada kaca objek

tempat meletakkan preparat yang telah di iris menggunakan mikrotom dengan metode paraffin.

3. Mikroskop Mikroskop

secara

umum

digunakan

untuk

membantu mengamati benda yang berukuran











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak


Revisi Halaman

4. Mikrotom Terdapat dua jenis mikrotom di laboratorium struktur

perkembangan

tumbuhan.

Mikrotom

tersebut adalah mikrotom geser (Gambar 4) dan mikrotom putar (Gambar 5). Penggunaan dua jenis mikrotom ini dibedakan berdasarkan sampel yang akan diiris. Mikrotom geser digunakan untuk sampel yang teksturnya keras dan tidak perlu di embedding dalam paraffin.

Gambar 4. Mikrotom geser (sliding microtome) microtome )

Mikrotom

putar

digunakan

untuk

mengiris preparat yang teksturnya

keras

maupun lunak. Untuk penggunaan mikrotom putar, objek biasanya di embedding dalam dalam paraffin. Pada











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak

LAPORAN PRAKTIKUM

Revisi

LABORATORIUM SPT

Halaman

10X. Optilab adalah salah satu alat bantu untuk menayangkan bidang pengamatan mikroskop melalui komputer/laptop. Dengan

dihubungkannya

bidang

pengamatan

mikroskop

ke

komputer/laptop, hasil pengamatan tersebut juga dapat disimpan sebagai gambar atau video, dan juga dapat ditayangkan melalui infocus proyektor. Sebagai upaya modernisasi perangkat mikroskop, penggunaan optilab sangat berperan positif termasuk dalam

dunia

pendidikan..

Penggunaan

optilab

meningkatkan efisiensi mikroskop, karena tidak diperlukan banyak mikroskop untuk pengamatan objek. Selain itu, dengan ditampilkannya hasil pengamatan ke layar, peserta didik dapat mengamati objek yang sama dalam waktu bersamaan. Hal ini dapat menghindari kesalahan persepsi peserta didik dalam

mendeskripsikan

objek

amatan

yang

Gambar

7.

Penggunaan











No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak

LAPORAN PRAKTIKUM

Revisi

LABORATORIUM SPT

Halaman

7. Pengasah Pisau Mikrotom Pisau yang digunakan pada mikrotom harus tajam agar menghasilkan irisan preparat yang sesuai dengan

ketebalan

yang

diinginkan.

Untuk

menjaga kerajaman pisau ini, beberapa jenis mikrotom mengharuskan pisaunya untuk diasah kembali menggunakan alat pengasah (Gambar Gambar 9. Alat pengasah pisau mikrotom

9). Namun ada juga mikrotom yang menggunakan pisau sekali pakai seperti pisau cutter .

8. Pisau Silet (Razor ) Dalam

pembuatan

preparat

segar

dapat

pula

menggunakan pisau silet (Gambar 10) untuk mengiris preparat. Namun, ketebalan irisan bisa tidak seragam bila dibandingkan dengan menggunakan mikrotom.













No. Dokumen

BORANG

FO-UGM-BI-07-13

Berlaku Sejak


Revisi Halaman

2. Balsam Kanada Balsam

kanada

digunakan

sebagai

perekat

objek

pengamatan ke kaca objek. Penggunaan balsam kanada biasanya pada preparat permanen. Adds et.al (2001) menjelaskan

penggunaan

balsam

kanada

memiliki

keuntungan yaitu pengeringan lebih cepat dan tidak berubah warna dalam waktu lama.












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


paraffin lalu ditempatkan pada skaca objek dan dibiarkan kering. Selanjutnya, parafin akan dihapus dengan xylene (xylol) atau pelarut lain.

5. Safranin Safranin merupakan salah satu pewarna preparat. Warna yang muncul dengan pemberian safranin adalah merah. Safranin dapat larut dengan air maupun alkohol.

6. Xylol












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


permukaan daun. Walaupun luas permukaan stomata hanya 1-2% luas permukaan daun, namun bagian permukaan daun yang lain dilapisi oleh kutikula berlilin yang membatasi keluarnya air dari permukaan daun. Setiap stomata diapit oleh sepasang sel penjaga yang mengatur membuka dan menutupnya stomata melalui perubahan tekanan turgor (Reece, 2011).

Sel tetangga Sel penjaga












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


terlihat pada objek pengamatan merupakan kloroplas. Pada saat pengamatan menggunakan optilab, terlihat pergerakan kloroplas pada daun Hydrilla sp.Hal Hydrilla sp.Hal ini terjadi karena daun tersebut masih aktif melakukan fotosintesis. Pengamatan berikutnya menggunakan preparat permanen yang telah tersedia di laboratorium struktur perkembangan tumbuhan. Preparat yang digunakan adalah akar, batang, dan daun Zea mays (Gambar 16). Pada pengamatan menggunakan preparat ini, bagian-bagian penyusunnya sangat jelas terlihat. Hal ini didukung dengan ketebalan preparat yang sama, sehingga memungkinkan pengamatan dapat dilakukan dengan baik. Pengirisan sampel











No. Dokumen

BORANG

Berlaku Sejak


V.

FO-UGM-BI-07-13

Revisi Halaman

Penutup

5.1 Simpulan Dari praktikum instrumentasi di laboratorium struktur perkembangan tumbuhan ini dapat disimpulkan: 1. Bidang penelitian yang dilaksanakan di laboratorium laboratorium struktur perkembangan perkembangan tumbuhan yaitu morfologi, anatomi, embriologi, mikroteknik, palinologi, organologi, metabolik sekunder, kultur jaringan, dan beberapa tema di bidang fisiologi tumbuhan. 2. Pemahaman tentang

alat dan bahan bahan sangat penting untuk














No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Daftar Rujukan Adds, J., Larkcom, E., Miller, R., Sutton R., 2001. Tools, Techniques and Assessment in Biology

A Course Guide for Students and Teachers












No. Dokumen

FO-UGM-BI-07-13


Sass, J. E., 1951. Botanical Microtechnique. Microtechnique. Iowa: The Iowa State College Press.

Susandarini, R., 2004. Diakses 7 Desember 2013. Teknik Preparasi Serbuk Sari

Laporan Instrumentasi SPT

Recommend Documents