CROMATOGRAFIA DE GASES Y HPLC
1. Cuáles son las variables experimentales a manipular en una separación por CG?
2. Por que la cromatografía gas-solido no se usa más extensamente que la gasliquido? 3. Enumere las características que debe cumplir un detector de cromatografía - suficientemente universal - sensible - Respuesta lineal - estable, reproducible y fiable - robusto - tiempo de respuesta corto - no destructivo de la muestra - insensible a cambios de temperatura presión, flujo, y composición de fase móvil - fácil manipulación - Económico 4. Que es la programación de temperatura en CG, ventajas y desventajas 5. Diferencia entre las columnas capilares y las empacadas en CG? Las columnas empaquetadas suelen ser tubos de vidrio o de acero inoxidable con las
características de longitud y diámetro interno ya mencionadas, y que se llenan con un soporte sólido de grano fino (60-100 mallas, 0.25-0.15 mm) recubierto de una capa delgada (0.05-1 _m) de un líquido no volátil que actúa de fase estacionaria. Una buena columna empaquetadas puede contener entre 1000 y 2000 platos teóricos por metro, mientras que las columnas capilares pueden llegar hasta los 10000 platos por metro. Las primeras suelen tener una longitud comprendida entre 1 y 6 metros, con un diámetro interno que oscila entre 2 y 6 mm, mientras que las columnas capilares tienen longitudes entre 10 y 100 metros y diámetros comprendidos entre 0.1 y 0.6 mm. En cuanto a los materiales de que están fabricadas, suelen ser acero inoxidable o vidrio para las columnas empaquetadas, y sílice para las capilares, si bien se han utilizado también otros metales como aluminio o cobre, e incluso teflón. Las columnas tubulares abiertas o columnas capilares son mucho más estrechas y suelen
ser mucho más largas que las columnas empaquetadas. La teoría de las columnas sin relleno fue inicialmente expuesta por Golay en 1957 y como consecuencia inmediata de esta teoría se deduce que el primer término ( A) de la ecuación de van Deemter debe ser cero, si el flujo de la columna es laminar
6. Cuáles son las variables experimentales a manipular en la separación por hplc?
7. Por que por unidad de longitud de columna (por cm), la altura equivalente de platos teóricos es mayor en CG que en HPLC y entonces porque las columnas de CG poseen mayor número de platos teóricos que las columnas de HPLC? 8. Clasifique la cromatografía de HPLC, según los modos de separación 9. Ventajas y limitaciones de HPLC sobre CG ventajas -no se limita a la volatilidad y la estabilidad térmica de la muestra a analizar - la fase móvil participa activamente en el proceso de separación lo cual indica otro parámetro disponible para aumentar la selectividad - es más versátil en cuanto a la fase estacionaria por lo que posee mayores métodos de separación.
desventajas - instrumentación mas costosa requiere mayor tiempo de entrenamiento - mas versátil en cuanto al tipo de columna a utilizar - matrices no volátiles.
10. Que características deben cumplir las bombas de HPLC - componentes resistentes a la corrosión - químicamente inerte - flujo libre de pulsaciones - capaz de hacer cambios rapidos de solvente - caudal de 1 a 10 ml/min en columna típica - buena reproducibilidad de flujo <0,1% 11. Qué ventajas ofrece que la elución por gradientes en comparación con la elución isocratica - la elución por gradientes se utiliza para mejorar la separación , se puede hacer cambios en la composición de la fase movilen función del timpo (análisis mas rapidos, mejora separaciones, mejora la simetría entre las bandas, aumenta la sensibilidad) (desventaja el tiempo de eqauilibrio es mas largo para estabilizar el sistema) 12. Qué ventajas ofrece que la fase estacionaria este unida químicamente al soporte
* Superficie relativamente grande, para que la película de la fase líquida depositada sea fina y se mantenga distribuida de forma que ofrezca el máximo contacto con los solutos de la fase móvil, para facilitar el rápido intercambio entre ambas fases.
* Material relativamente duro, para que las partículas no se rompan durante el proceso de impregnación con la fase líquida y de llenado. * Material estable térmicamente y poroso, para no producir una caída de presión excesiva. Por otra parte, la uniformidad del tamaño de las partículas reduce el término A de la ecuación de van Deemter, con lo que se reduce la altura de plato y se incrementa la resolución. * La superficie ha de ser químicamente inerte y no absorbente de los solutos, es decir, no deberá contribuir a la separación cromatográfica. 13. Qué diferencias hay entre cromatografía de fase normal y fase inversa? Y en cuanto a escoger los eluentes que diferencia en la polaridad debe existir? - Fase normal. La fase móvil es poco polar y se va añadiendo solventes mas polares, en la fase inversa la elución se lleva a cabo comenzando con una fase de elevada polaridad como es en el caso de una disolución acuosa conteniendo concentraciones diversas de un solvente de menor polaridad. 14. Cuál es la limitación de la silica como soporte de la fase estacionaria liquida en HPLC 15. Qué ventajas ofrece la columna de suspensión iónica en el detector de conductividad iónica 16. Porque la espectroscopia de masas es considerada una de las técnicas de análisis de mayor potencial, tanto cualitativa como cuantitativamente 17. Haga un diagrama en bloque de un espectrómetro de masas 18. De que dispositivos del espectrómetro de masas depende las características de un espectro de masas 19. Defina pico base e ion molecular 20. Qué ventajas ofrece el masas como detector en cromatografía.
1) ¿Cuáles son los pasos a seguir en el momento de hacer un análisis por CG de una muestra desconocida? 2) ¿Cuáles son todas las variables experimentales disponibles para lograr la mejor separación por CG? 3) ¿Qué es la programación de temperatura ventajas y desventajas? 4) ¿Cuáles son las ventajas de las columnas capilares sobre las empacadas? 5) ¿Cuáles son las precauciones a tomar en cuenta en el momento de inyectar la muestra en CG? 6) Ventajas y limitaciones de CG sobre HPLC. 7) ¿Por qué por unidad de longitud de columna, la altura equivalente de platos teóricos es menor en HPLC que en CG?
8) ¿Por qué las columnas de CG, poseen un mayor número de platos teóricos que las columnas de HPLC? 9) Clasifique los modos de HPLC en función del tipo de interacción. 10) ¿Qué características deben cumplir las bombas de HPLC? 11) ¿Qué ventajas y desventajas ofrece la elución por gradientes? 12) ¿Qué diferencia hay entre cromatografía fase normal y cromatografía fase inversa? 13) ¿Qué precauciones se debe tener al disminuir el diámetro interno de la columna? 14) Haga un diagrama en bloque de un espectrómetro de masas. 15) ¿Por qué la espectrometría de masas es considerada una de las técnicas de análisis de mayor potencial? 16) ¿De qué dispositivos instrumentales depende las características de un espectro de masas? 17) ¿Qué ventajas ofrece el masa como detector para cromatografía?
