Química Analítica Biotecnológica Exercícios Cromatografia Gasosa e HPLC
1- Na análise por cromatografia gasosa de uma mistura contendo os compostos na tabela abaixo abaixo foi realizada. Escolha e justifique a ordem de eluição em uma coluna apolar e em uma coluna polar. Composto
Ponto de Ebulição ( oC)
Polaridade
A
75
Baixa
B
75
Média
C
60
Média
2-Calcule a eficiência da coluna em relação ao pico 5 da tabela abaixo, e a resoluçã reso luçãoo entre os picos (2 e 3) e (3 e 4). Considere t M = 1 cm. Pico
Largura do pico (cm)
t R (cm) (cm)
1
0,5
3,1
2
1,3
9,5
3
0,9
10,2
4
1,1
11,2
5
1,5
16,4
3-Em um equipamento de HPLC, inicialmente foi registrado o cromatograma para a injeção de uma solução 0,5 mM de paration. Um segundo cromatograma foi registrado para a injeção de um mesmo volume de outra solução 1mM de paration. Qual deve ser a diferença entre os cromatogramas no que se refere a (i) altura, (ii) área e (iii) tempo de retenção do pico relativo a este analito. 4-Uma amostra de vitamina E foi analisada pelo método da padronização externa, ou seja, a partir de um padrão de acetato de alfa-tocoferol foram preparadas 4 soluções com as seguintes concentrações: 200, 400, 600 e 800 mg/L. Em paralelo, foi preparada uma solução contendo 500 mg de amostra/L. As 5 soluções preparadas foram analisadas nas mesmas condições cromatográficas cromatográficas e o volume injetado foi sempre sempre o mesmo (20 µL). A partir das áreas dos dos picos em cada cromatograma, calcular a porcentagem em massa de acetato de alfa-tocoferol na amostra.
1
Solução
Área (mm )
Concentração (mg/L)
1
483
200
2
972
400
3
1454
600
4
1938
800
Amostra
1091
?
5- Em qual dos casos a eluição por gradiente é indicada? Para aqueles casos onde a eluição por gradiente for adequada, sugira um gradiente. Qual a modificação que solucionaria o problema nos outros casos. Para os três casos foi empregada uma coluna C18 e fase móvel composta por uma mistura de acetonitrila : água (1 : 1)
A
B
2
C
6- O cromatograma abaixo refere-se à análise de tolueno (PE = 111ºC) e fenol (PE = 182 oC) por cromatografia gasosa.
Coluna: 2mm x 200 cm FE: SE-30 Vazão nitrogênio: 30 mL/min Temp. injetor: 200ºC Temp. detector: 280ºC Temp. coluna: 180ºC Amostra dissolvida em metanol e injeção de 1 µL
Pede-se: Identifique os picos e explique. 7- Análise da cloroquina e hidroxicloroquina em leite.
Cloroquina
Hidroxicloroquina
3
Preparo da curva analítica:
Alíquotas de 1 mL de leite foram enriquecidas com padrões de
cloroquina e hidroxicloroquina nas concentrações especificadas abaixo. Em seguida, foram submetidas a extração com acetato de etila em meio básico. Volumes de 100 µL da fase orgânica foram coletados, evaporados até a secura, os resíduos foram dissolvidos em 100 µL da fase móvel e 20 µL foram injetados no sistema cromatográfico. Padrões
Cloroquina (µg/mL)
Hidroxicloroquina (µg/mL)
I
0,5
0,25
II
0,8
0,4
III
2,0
1,0
Amostra:
Diversas alíquotas 1 mL de leite de diferentes fabricantes foram analisadas.
Análise cromatográfica:
Coluna RP-18 (partículas 5 µm, 125 x 4,6 mm); fase móvel: água
alcalinizada com trietilamina pH 7,5 : acetonitrila (80:20,
v/v);
vazão 1 mL/min; detecção em 320
nm). Perguntas: a. Calcular a concentração de CQ e HCQ na amostra de leite b. Porque foi necessário alcalinizar a fase móvel c. Explicar a ordem de eluição
Cloroquina
Concentração (µg/mL) 0,5
Altura (cm)
Hidroxicloroquina
9
Concentração (µg/mL) 0,25
Altura (cm) 3
0,8
14
0,4
5
2,0
36
1,0
12
Amostra ?
Determinar a altura Amostra ? no cromatograma abaixo. Depois determinar a conc. da amostra
Determinar a altura no cromatograma abaixo. Depois determinar a conc. da amostra
4
5
