CROMATOGRAFIA CROMA TOGRAFIA DE GASES Presentado por: •
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Manuel Francisco F rancisco Álvarez Álvarez Oscar Andrés Corredor Sergio Alfredo Angarita Carlos Valderrama •
Presentado a: Ing. Mgs. Ana María Fonseca Fonseca Universidad Univers idad Pedagógica Pedagógica y Tecnológica Tecnológica de Colombia Tunja-Boyacá 2013
LA CROMATOGRAFÍA DE GASES Y SUS S US APLICACIONES
INTRODUCCIÓN A LA CROMATOGRA CROMATOGRAFÍA FÍA DE GASES Introducción a la cromatografía. Definición Principios básicos Cromatografía de Gases Campo de aplicación Partes de un cromatógrafo croma tógrafo de gases
INTRODUCCIÓN A LA L A CROMATOGRAFÍA Definición Principios básicos Flujo Flu jo de fase móvil móvil
Definición
to
“Técnica que permite separar
los componentes compo nentes de una muestraa debido a su diferente muestr d iferente afinidad afini dad entre entre dos fases fa ses inmiscibles entre sí, una estacionaria (liquida o sólida) y otra móvil (gas o líquida)”
A B t1
A t2
B
La
muestra muest ra se introduce en la fase móvil mó vil y es es transportada transpo rtada a lo largo de la columna que contiene una fase estacionaria distribuida. Las
especies es pecies de la muestra muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la fase móvil y la fase estacionaria. Cuando
ambas fases se han escogido de forma adecuada, los componentes de la muestra muestra se separan separan gradualmente grad ualmente en bandas en la fase móvil. Los
componentes abandonan aband onan la columna en orden o rden creciente de interacción con la fase estacionaria. La
amplia gama de selección de materiales para la fase móvil y la estacionaria permite separar moléculas que difieren muy poco en sus sus propiedades pro piedades físicas y químicas. quími cas.
PROCESO PRACTICO (VIDEOCLIP)
Clasificación Clasifi cación de los métodos cromatográficos Cromatografía
Cromatog rafía de gases
Cromatog rafía de líquidos
Gas – Líquido Líquido
Gas – Sólido Sólido
Líquido – Líquido Líquido
Líquido – Sólido Sólido
GLC
GSC
LLC
LSC
Intercambio iónico
Exclusión EC
IEC
Casos particulares: Intercambio Iónico: Los Los componentes iónicos de la muestra se separan se paran por el el intercambio inte rcambio sele selectiv ctivo o con contraiones contraion es de de la fase estacionaria e stacionaria Excl usión: La fase estacionaria Exclusión: e stacionaria proporcion proporciona a una clasificación cl asificación de moléculas moléc ulas basada en la geometría l tamaño molecular
Comportamiento cromatográfico de los compuestos
El comportamiento cromatográfico de un componente componente de un una a muestra puede pu ede describirse desc ribirse de diversas diversas formas:
VR Volumen de retención
Volúmen de fase móvil m óvil necesario neces ario para transportar transpor tar la banda banda de un componente desde des de el punto punto de inyecc inyección, ión, a través t ravés de la columna, colum na, hasta el detector detec tor (en el máximo máximo de pico del componen componente) te)
tR tiempo de retención
Tiem po neces Tiempo necesario ario para que que el e l componente, una vez inyect inyectado ado pase a través de la columna y alcance el detector (en el máximo de pico del componente)
k´ razón de reparto reparto
Es una medida del tiempo que el componente está en la fase estacionaria en relación con el tiempo t iempo que que está en la fase móvil
Flujo Flu jo de fase móvil móvil
Señal
to
to
A B
t1
t1
A
B
t2
t2 A
B
tB
tB A
A t A
A t A tiempo
Señal to
k´ ra razón zón de de reparto reparto tR – tM k´=
tM
VR - VM =
VM
Donde tM es el e l tiempo de retención de de un compuesto que no interaccion interaccionara ara con la fase estacionaria y tR es el tiempo de retención del compuesto c ompuesto de interés. Lo mismo se puede expresar en relación con Los volúmenes volúme nes de retención. retenci ón.
tB
A t A tiempo
El objetivo objetivo de la cromatog cromatografía rafía es doble: •Separar los distintos componentes de la muestra •Identificar los componentes previamente previamente separados se parados
Separar los distintos componentes componentes de la muestra Selectividad y eficiencia
Buena selectiv selectividad idad Eficiencia baja
Baja selectividad Buena eficie eficiencia ncia
Buena selectividad Buena eficiencia
Identificar Identifi car los compone componentes ntes pre previamente viamente separados se parados
Selección de detectores adecuados que permitan el análisis cualitativo.
La selección selecci ón de un detector está relacionada con la nat naturaleza uraleza de las sustancias a determinar. Los componentes componentes de una muestra muestra se identifican por p or su tiempo de retención Se pueden emplear técnicas que aporten una mayor información sobre la naturaleza de los componentes: Acoplamiento con Espectrometría de Masas
Análisis Cuantitativos basados generalmente en la integración del área bajo los picos.
Calibración con patrones o estándares: estándares: Si se realizan realizan determina deter minaciones ciones cromatográficas cromatográfic as de muestras de concentración conocida c onocida de alguno de sus componentes, component es, se puede pue de realizar una u na recta de calibrado y posteriormente posteriormente el análisis análisis e integración de una muestra muestra de concentración descono desconocida cida del citado componente permitirá la cuantifcación del mismo. Estándar interno: Permite que varíen las condiciones de operación entre muestra y muestra mue stra..
Cromatografía de Gases “Es la técnica a elegir para la separación de compuestos orgánicos e inorgánicos térmicamente estables y volátiles”
Un cromatógrafo de gases consiste en el acoplamiento de varios módulos básicos ensamblados para: Proporcionar un flujo constante de gas portador Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye Contener la longitud apropiada de fase estacionaria Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del programa de temperatura) Detectar los componentes de la muestra a medida que eluyen de la columna Provee veerr una un a señal legible proporcional en magnitud a la Pro cantidad de cada coomponente
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Cromatografía de Gases
Sistema de iny inyección ección El modo estándar e stándar es la l a inyección directa, direc ta, la muestra es inyectada con una jeringa jeri nga a través través de un septum de goma a un alineador al ineador de vidrio donde donde es vapo vaporizada rizada y transportada por el gas al interior de de la columna. El bloque de de iny inyección, ección, se mantiene mantie ne a una temperatura tal tal que permi permita ta convertir convertir prácticamente práctic amente de forma instantánea instantá nea la muestra líquida en un tapón de vapor. vapor. Existen jeringas especiales especi ales para muestras gaseosas. Tambié También n se puede emplear un lazo o bucle para incoporar in coporar las muestras mue stras gaseosas al flu flujo jo de gas portador
Sistema de iny inyección ección El modo de se separación paración más extendido en la actualidad se basa en el empleo empl eo de columnas capilares. capi lares. Estas columnas column as requieren requiere n muy pequeños volúmenes de muestra. mue stra. Esto se logra l ogra empleando un inyector que incorpora i ncorpora un divisor de flujo (split). Normalmente Normalmente se introduce en la columna un 1% Cuando las sustancias a separar se parar se encue e ncuentra ntran n a muy bajas concentracio conce ntraciones nes se realiza reali za inyección iny ección sin divisor (splitless)
Sistema de iny inyección ección Para el análisis análi sis de de compuestos compue stos orgánicos orgá nicos volátiles en muestras sólidas y líquidas, l íquidas, se han desarrollado desarro llado algunas técnicas auxiliares: Espacio de de cabez cabeza a (Head space) space) Purga y trampa (Purge and trap)
Espacio de cabeza (Head space) Se analiza analiz a la fase de vapor en equilib equil ibrio rio termodinámico termodinámico con la la muestra en un sistema si stema cer cerrado rado.. Para ello Para el lo se procura un equilibrio equi librio estable, estab le, mediante el control de de la temperatura temperatur a del vial que q ue contien contienee la muestra. Posteriormente, Posterior mente, se arrastra ar rastra la fase vapor al interior del cromatógrafo. T
equilibrio
Gas portador
A la columna
Purga y trampa (Purge and trap) Es aplic apl icable able solo a muestras mu estras líquidas. Consiste en la l a continua renova renovación ción del del gas en equilib equil ibrio rio con la muestra muestra,, con lo que se consigue el desplazamien desplazamiento to dinámico de los l os compuestos volátiles volátiles de la l a muestra líquida l íquida a la fase f ase gaseosa. Los vapores se arrastran ar rastran a una trampa donde quedan que dan reteni retenidos dos y se van concentrando conc entrando.. Finalizado el proceso se calienta cal ienta la trampa y se arrastra ar rastran n los l os vapores vapores al interior interi or del cromatógrafo. 1) Gas portador
2) Gas portador trampa
trampa
T baja
T
T alta
T
A la columna column a
Columnas Colum nas cromatográficas
Columnas capilare capilaress
Columnas Empacadas
Columnas Colum nas cromatográficas empacadas
Se construy constr uyen en con tubo de acero inoxidable, inox idable, niquel o vidrio. Los diámetros diámetro s interiores van van de 1,6 a 9 mm. La longitud suele ser inferior a los 3 m. Se rellenan relle nan de un material adsorbente adecuado a las sustancias que que se quiere separar.
Columnas Colum nas cromatográficas capilares Se construy constr uyen en con sílice sílic e fundida. fundida. Los diámetros interiores suelen ser de 200-250 mm. La longitud suele ser superior a los l os 20 m. Hay dos tipos: Empacadas con partículas sólidas Empacadas sólidas ocupando el tot total al del diámetro de la columna col umna (mic (micro-empa ro-empacadas) cadas) Tubulares abiertas, abier tas, con tra trayectoria yectoria para el flujo abierta abie rta y sin restricción restr icción por el centro ce ntro de la l a columna colu mna
Ejemplos Ejemp los de fases estacionarias en cromatografía de gases
Separac iones por Separaciones por punto de eb e bullición de compuestos c ompuestos en un intervalo interv alo amplio de pesos moleculares: moleculares : Escualano Polidimetilsiloxano
Para hidrocarburos hidr ocarburos insaturados y otros compuestos polidifenildimetilsiloxano policarboranometilcianoetilsilicón
Para compuestos nitrogenados nitrog enados poliamida policianoetilmetilsilicon
Para alcoholes, alcoh oles, ésteres, cetonas cetonas y acetatos polietilenglicol pentaeritritol pentae ritritol tetracian tetracianoetilado oetilado
Horno
Las columnas cromatográficas se enrollan, se sujetan en un soporte y se introducen en el interior de un horno
El horno debe poderse calentar y enfriar rápidamente
La temperatura se debe poder programar para poder trabajar en régimen de gradiente
Muchas aplicaciones y métodos cromatográficos requieren comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental
Horno
T1
T2> T1
Sistemas de detección detecci ón Características ideales de un detector para Cromatografía de Gases: Características Ga ses: Sensibilidad alta y estable; típicamente 10-8 g soluto/s Bajo nivel nivel de ruido r uido Respuesta lineal li neal en un amplio rango dinámico Tiempo de respuesta corto Buena Buen a respu respuesta esta para toda clase de compu compuestos estos orgánicos Insensibilidad a las variaciones del flujo y la temperatura Estabilidad y robustez Simplicidad en su operación Identificación Identifica ción de compuestos positiva Técnica no destructiva Pequeño Pequ eño volumen en prevención prevención del mez me z clado de componentes
Sistemas de de detección Detector de ionización de llama (FID)
Este detector añade hidrógeno hi drógeno al eluyente de la columna. La mez me z cla pasa a través del conducto de un mechero, donde donde se mezcla mez cla con aire externo y lue luego go arde. Cuando entra entra en la llama material material ionizable del eluyente el uyente de la columna Se quema y la l a corriente aumenta aumenta notablemente. Este detector es ideal para compuestos oxidables. No responde respon de a los compuestos de carbono totalmente totalmen te oxidados, oxidados, como carbonilos o carboxilos carboxilos y grupos g rupos éster
Sistemas de de detección Detectorr de condu Detecto conductiv ctividad idad térmica (TCD) (TCD)
Utili za un filamento Utiliza fi lamento caliente colocado coloc ado en el e l flujo de gas emergente. La cantidad canti dad de calor cal or por conducción conducc ión que pierde p ierde el fil filamen amento to hacia hacia las paredes del detector depende depe nde de de la la conductividad conductivi dad térmica de la fase gaseosa. Es útil para determinar determi nar la presencia incluso incl uso de pequeñas peque ñas cantidades cantidades de materiales material es orgánicos que producen una reducci reduc ción ón relativament relativamentee grande en la l a conductivi conductividad dad térmica del eluyente de la columna.
Sistemas de de detección Detectorr de Detecto d e captura captu ra de electrones (ECD) (ECD)
El eluyente el uyente pasa entre dos electrodos. el ectrodos. Uno de los electrodos e lectrodos tiene en su superficie un radioisótopo radioisótopo que emite e mite electrones el ectrones de alta energía conforme decae. Los ele electrones ctrones bombardean el gas portador (N 2) formándose formándose un plasma p lasma que contien c ontienee ione ioness positivos, positivos, radicales y electrones e lectrones térmi térmicos. cos. Se aplica apli ca una diferencia de de potencial de modo que se recole re colectan ctan los electrones el ectrones generados. Los compuestos c ompuestos que absorben electro elec trones nes reaccionan reaccionan con c on los electrónes el ectrónes tér térmic micos os dismin disminuy uyendo endo la corriente corri ente del detector dete ctor,, la cual es medida y permite pe rmite la cuantificación cuantificación
Sistemas de de detección
Los eluyentes e luyentes son son ionizados ioni zados y fragmentados. Detector de espectroscopía de masas (MS) Los iones i ones resultantes se dirigen dirige n a través tra vés de un cuadrupolo c uadrupolo y se ordenan orden an en función funci ón de de su masa masa.. Ese detector permite obtener el espectro de de masa masass del compuesto c ompuesto que ha eluido. Podemos Pod emos por tanto conoce conocerr, además además del tiempo tie mpo de de retención el espectro de masas del compuesto comp uesto y contrastar c ontrastarlo lo con bibliotecas de de espectros espectros.. Se trata por tanto de un detector detec tor universal para la mayoría mayoría de los compuestos compue stos conoci conocidos. dos.
Cromatografía Iónica
Polaridad Basándose en la Basándose l a polaridad de la fase estacionaria y la fase móvil, se distinguen disti nguen los siguientes si guientes métodos métodos de cromatografía cromatografía líquida: l íquida: Polaridad de la fase estacionaria Cromatografía en fase normal
iónico
Cromatografía en fase reversa polar
Cromatografía de pares iónicos Cromatografía iónica
no polar
no polar
polar
iónico
Polaridad de la fase móvil
El intercambio iónico como mecanismo de separación La gran mayoría de las separaciones por cromatografía iónica ocurren por intercambio iónico sobre fases estacionarias con grupos funcionales cargados. Los correspondientes contraiones del eluyente se localizan en la vecindad de los grupos funcionales y se intercambian con iones del analito de la misma carga en la fase móvil. Para cada ion el proceso de intercambio se caracteriza por un equilibrio de intercambio iónico correspondiente, que determina la distribución del analito (M + ó A-) entre la fase móvil y la fase estacionaria:
A E A E
K A
E f .e. A f .m.
f.e.
f.m.
f.m.
E f .m. A f .e.
f.e.
A- es el ion del analito E- es el ion del d el eluyente (contraion) (contraion)
El intercambio iónico como mecanismo de separación El grupo g rupo más importante de intercambiadores intercambiadores iónicos son los l os basados basados en resinas sintéticas hechas de un copolímero de estireno y divinilbenceno. Los intercambiadores i ntercambiadores catióni catiónicos cos se obtienen obtie nen por posterior sulfonación de esta e sta resina resin a de estireno e stireno-divinil -divinilbenceno benceno.. Los intercambiadores i ntercambiadores aniónicos por post posterior erior clorometila clorometilació ción n seguida se guida de aminación.
Intter In erca camb mbiiado dorr cat catión óniico
Intter In erca camb mbiiado dorr an anión óniico
Cromatografía iónica También llamada cromatografía de intercambio iónico, iónico, dete termin rmina a iones inorgánicos y orgánicos, normalmente por conductividad. Se utilizan dos tipos de técnicas en la práctica: Supresión química, química,
en la que la conductividad de fondo se suprime tanto química como electrónicamente. Normalmente utilizada en aniones.
Supresión
electrónica,, en la que se emplean eluyentes con sales de electrónica ácidos orgánicos en baja concentración sobre intercambiadores de iones de muy baja capacidad para alcanzar una conductividad de fondo relativamente relativamente baja, que puede ser suprimida suprim ida directamente directamente por medios electrónicos.
Supresión química Se basa en el uso de sales de ácidos débilmente disociables (NaHCO 3, por ejemplo) e jemplo) como eluyentes eluy entes.. Estos eluyentes eluyentes se s e pueden eliminar elim inar en gran medida m edida mediante una reacción postcolumna de acuerdo con el siguiente proceso
El ácido carbónico formado como resultado del intercambio catiónico se disocia muy débilmente, por lo que aporta poca conductividad. Por otro Por otr o lado, los iones de la muestra sufren la reacción correspondi cor respondiente. ente. Por Por ejemplo, para el cloruro
El proceso de supresión convierte convierte el NaCl al correspondien cor respondiente te ácido fuer fuerte, te, el cual tiene una mayor may or conductiv c onductividad idad que la sal original. Cuanto menor fuerza tenga el ácido producido, el incremento en sensibilidad debido a la supresión química será menor.
Supresión química
Eluyent Eluy ente e - bom bomba ba
Inyección de muestras
Separación
Supresión
Detección
Sin supresión química Eluyente: Eluyent e: ácido ftálico
Con supresió sup resión n química Eluyente: HCO3-/CO3-
Aniones
Cationes sin supresión supresión química
Eluyent Eluy ente e - bom bomba ba
Inyección de muestras
Separación
Supresión
Detección
Detección por conductividad La conductividad es una medida de la capacidad que tienen las disoluciones de electrolitos electrolitos para trans transportar portar la corriente por p or migración migración iónica en un campo eléctrico eléc trico aplicado entre dos electrodo ele ctrodos. s. La conductividad (κ ) es directamente proporcional a la concentración para disoluciones diluidas, siguiendo la relación
c(eq)
1000 Donde Λ
es la conductividad conductividad equ equiv ivalente alente en Scm2mol-1
c(eq) es la concentración equivalente en eq/l o normalidad normalidad
Eluyent Eluy ente e - bom bomba ba
Inyección de muestras
Separación
Derivatización
Detección
Detección UV/VIS Directa Directa::
Se usa en la determinación de iones que absorben fuertemente en el rango UV (nitrito, nitrato y aniones orgánicos, p.e.) en presencia de altas concentraciones de iones inorgánicos (cloruro, fosfato y sulfato, p.e.) p.e.) que tienen escasa o nula absorción UV.
Indirecta:: Indirecta
Se utiliza con eluyentes de alta absorción UV (ftalato, p.e.). De este modo, los iones con menor m enor actividad actividad UV que el eluyente darán picos negativos negativos y los iones con mayor mayor actividad UV que el eluyente darán picos positivos.
Con
reacción post-columna: post-columna: Usada en la detección de metales de transición (Fe, Ni, Cu, Mn y Zn, p.e.)
Eluyent Eluy ente e - bo bomba mba
Inyección de muestras
Separación
Detección
Detección electroquímica Se utili u tiliza za ocasionalme ocasionalmente. nte. Requiere que los iones a determinar sean sean susceptib susce ptibles les de de oxidarse o reducirse. Entre ellos ell os ha hay muchos compuestos orgánicos (azúcares y aminas, p.e.), metales metale s de transición transic ión y aniones ani ones como nitrito, nitri to, nitrato, haluros, sulfuro, sulfu ro, cian cianuro, uro, sulfi sulfito to y sulfato. Hay cuatro técnicas técni cas dife diferentes rentes : Amperometría Amperometría:: Medida de de
la corriente a potencial potenci al consta constante nte
Culombimetría Culombimetría:: Medida Medida de de
la corrien corriente te a potencial constante con 100% de
conversión conv ersión del analito
Voltametría:: Medida de la l a corriente cor riente frente al al Voltametría de potencial
potencial en un rango rango definido defin ido
pul sos:: Medida de la l a corriente a pulsos pul sos de potencial potenci al Amperometría de pulsos constante
Estado, cantidad y preparación de muestras Los
líquidos líquid os que sean sean acuosos acuosos o miscibles miscibles en el agua se puede pueden n analizar directamente. Los líquidos, sólidos y gases inmiscibles en agua deben ser extraídos o disueltos en disolución acuosa antes del análisis.
El
volumen típico a analizar analizar es de 5 a 200 µl, µ l, aunque se puede partir de volúmenes tan grandes como 100 ml, utilizando técnicas de preconcentración cromatográficas cuando se requiera una mayor sensibilidad.
Dilución
y filtración son los procedimientos procedimientos más comunes de preparación de muestras. Se requiere extracción para muestras no acuosas o preconcentración para muestras diluidas. La necesidad de derivatización precolumna es rara.
Técnicas complementarias Absorción Absor ción ató atómi mica ca,, emisión atómica y plasma de acoplamiento acoplamie nto inducti i nductiv vo. Se usan para determinar la cantidad total de un metal me tal en ve ve z de una cier ci erta ta for forma ma iónica.
PORTAL DE REVISTAS UR REVISTA CIECIAS DE LA SALUD Caract erización por cromatografía de gases Caracterización gases-e -espec spectrom trometría etría de masas del thinner thinner c om omercialm ercialmente ente disponi disponible ble en la ciudad de Cartagena Jesus Olivero, Katia Nog Noguera, uera, Wi Wilson lson Maldon Maldonado ado
Resumen El thinner thinner es uno uno de los productos productos de mayor mayor util ut ilización ización en la indu industria stria de las las pintura pinturas, s, lu lubri bricantes cantes y pegamentos. pegam entos. Su comp composición osición es e s vari variabl ablee de acuerdo acuerdo con c on su uso uso y calidad. calidad. Sin embarg embargo, o, la exposición exposición crónica es una una preocupación debi debido do a que que puede afectar órga órganos nos principal principales es tales como como pulm pulmones, hí hígado, gado, ri riñón ñón y glándulas glándu las suprarr suprarrenales. enales. En este est estudio udio fue caract erizada la c om omposición posición de varias varias muestras muestras de thinner, thin ner, di disponi sponibles bles comer comercialm cialmente ente en la la ciudad ciudad de Cartagena, Cartagena, que fueron fueron recolectadas recolect adas en diferentes diferentes almac alm acenes enes y anali analizadas zadas por cromatografía cromatografía de gases acoplada a espec trom tromet etrí ríaa de masas(GC/MS). masas(GC/MS). Los resultados mostraron mostraron que no solo la co com mposición, sino también también la distribución relativa de los los componente componentess presentes presen tes en las muestras muestras son variabl variables. es. Trein Treinta ta y dos compuestos compuestos fueron detect ados, entre los los que se encuentran encuen tran:tol :toluen ueno, o, o-xi o-xilen leno, o, px pxilileno eno y etilb etilbenceno, enceno, con frecuen frecuencias cias de apa apari rición ción de 91 91,7, ,7, 66 66,7, ,7, 75 75,0 ,0 y 66,7 %, respectivam respectivamente. ente. El desconocim desconocimien iento to del riesgo riesgo de in intoxicación, toxicación, gener generado ado al mani anipul pular ar este tipo de mezclas, puede ser la la c ausa de muchos muchos de los los problem problemas as de salud salud en personas personas expu e xpuestas estas al thinn thinner, er, tanto en act ivi ividades dades labor laborales ales c om omo o domésticas. domésticas. Un Unaa min minerí eríaa de datos mostró mostró la asociación potencial entre los los componentes comp onentes del thin thinner ner y mani manifestac festac ion iones es clíni clínicas, cas, las cuales incluyen incluyen daño daño renal renal y hepático, hepático, pérd pérdid idaa de cabello cabel lo,, al alteraci teraciones ones hematol hematológi ógicas, cas, der derm matiti atitis, s, ans ansied iedad ad y probl problem emas as de equil equilib ibri rio, o, entr entree otras. otras. En conclu conc lusión sión,, el thinner thinner posee gran gran variabi variabililidad dad tanto en sus componen componentes tes como en la prop proporción orción rel relativa ativa de los los mism ismos. os. Los efec tos perjud perjudiciales iciales en la la salud salud por exposición exposición directa direc ta o indir indirec ecta ta a estos componentes componentes han sido ampli am pliamente amente desc descritos ritos en la la literat literat ura
Palabras clave Neur eurotóx otóxico, ico, sol solvente, vente, ex exposi posición ción oc upa upacion cional al FUENTE BIBLIOGRAFICA: http://revistas.urosario.edu.co/index.php/revsalud/article/view/2806