Determinación de Proteínas Por El Método de Lowry

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DEPAR DEPART TAMENTO DE BIOQUÍMICA BIOQUÍMI CA LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS

Determinación Determinación e !r"te#na$ !"r e% m&t"" e L"'r(

A%)mn"* Ric" In"cenci" +"$& Or%an" C"m!a,era* Pic-ar" C"ntrera$ Niia Patricia Gr)!"* .Qm/ Sección* / Pr"0e$"re$* Lari"$ Serrat" 1i"%eta 2ern3ne4 Ló!e4 5ranci$c" 1346)e4 5%"re$ L)i$ Ben#te4 I7arra R"8e%i" Cer9ante$ Cer9ante$ Mart-a Patricia

Determinación e !r"te#na$ !"r e% m&t"" e L"'r( 5)nament" E% m&t"" e L"'r( e$ )n m&t"" c"%"rim&tric" e 9a%"ración c)antitati9a e !r"te#na$: en %a 6)e %a m)e$tra 0"rma )n c"m!%e;" c"%"rea" !r"!"rci"na% en inten$ia a %a c"ncentración e !r"te#na$: eterminaa ac"re a %a %e( e Lam7ert 5"rmación e )n c"m!%e;" c"%"ri" a4)%: en mei" a%ca%in": entre %"$ i"ne$ c=!ric"$ ?C) @> ( c)atr" 3t"m"$ e nitró8en" e %"$ en%ace$ !e!t#ic"$: en e% 6)e $e !r")ce )n e$"7%amient" e %a e$tr)ct)ra triimen$i"na% e %a !r"te#na: e!"nien" %"$ re$i)"$ 0enó%ic"$ ( ar"m3tic"$ e amin"3ci"$ c"m" %a tir"$ina ( e% tri!tó0an": c"n %"$ 6)e $e 9a e0ect)ar %a $e8)na eta!a: @> La re)cción: tam7i&n en mei" a%ca%in": e% reacti9" e 5"%in: e c"%"r amari%%": en "ne e$t"$ 8r)!"$ ar"m3tic"$ 9an a tran$0erir e%ectr"ne$ a% c"m!%e;" 0"$0"m"%i7at"0"$0"t)n8$tat" !ara !r")cir )n !r")ct" ine$ta7%e e c"%"ración a4)% 6)e $e %ee a . nmF

O7;eti9"$ A!%icar e% m&t"" e eterminación e !r"te#na$ e L"'r(: !ara %a c)anticación e %a c"ncentración e i0erente$ $"%)ci"ne$ e a%7=mina: em!%ean" e )na c)r9a e ca%i7raciónF C"n"cer e% e0ect" e $)$tancia$ n" !r"te#nica$: en e% e$arr"%%" e% c"%"rF A !artir e )n an3%i$i$ e$ta#$tic" e in0erir $"7re e$te m&t""F

Re$)%ta"$  Ta7%a /F C)r9a e ca%i7ración e a%=minaF M&t"" e L"'r(F A.  T)7" N"F / @  K .

Cantia e !r"te#na ?HL> @. . . / /@.

Serie a F/ F/@J F@ F@ F@

Serie 7 F@ F/K F/ F@ F@.

0?>  F  F@. R  FJ Serie a Linea e tenencia Serie 7 L#nea e tenencia

Gr3ca /* C)r9a e ca%i7ración e %a a%7=mina Ecuación general de la recta: y = bx+a y = 0.0020x + 0.0324  A590 = 0.0020x + 0.0324 y = A590 x = Cantidad de Albúmina (µg) Pendiente (b) = 0.0020 Odenada al !igen (a) = 0.0324 C!e"i#iente de #!ela#i$n () = 0.9930 C!e"i#iente de detemina#i$n ( 2)=0.9%&0

'Cmle * #a la ,ey de -!ge y -ee /i 'nte 1 limite* de #antidad de !tena /i *e #mle !1e la ley ela#i!na la inten*idad de l entante en n medi! #!n la inten*idad *aliente de** de 1e en di#! medi! *e !d#a ab*!#i$n6 *e !b*ea en n inteal! de 50 a 700 µg de !tena.

La eterminación e %a cantia e !r"te#na en %a$ m)e$tra$ !r"7%ema e$!e;an" %"$ 9a%"re$ e  e %a ec)ación e %a recta ?(  FKK F/> 6)ear#a*  x =

 y −0.0322 0.0020

An3%i$i$ E$ta#$tic"*  Ta7%a @F R&!%ica$ !ara e% an3%i$i$ e$ta#$tic"F  Ta7%a F Re$)%ta"$ e$ta#$tic"

A.  T)7" N"F S /

´  x

S@ F/.@

Cantia e e% an3%i$i$ a%7=mina ?8>  CF 1F  .F

F. @

F/J/ KFK@

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  ?F/.@< .F

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

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F/

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@F/

n

 x ∑ =

i

 x´ =

S=

i

1

n

√

 x´ =

721.49 10

F<FJ/

F@@>F@

 @F/

n

( x − x´ ) ∑ =

2

i

i

1

 

F.

n −1

S@ ?F.>@  KFK@ S   6.59 C . V . =  x 100 C . V .=  x 100  F/K  x´ 100.9272.10

 μ= x´ ±

tS

=¿ @F/ √ n

±

( 2 . 262 ) (6.59 )

 μ=72.10 + ¿  KF/ F  μ=72.10 −¿

KF/ FJ/

3 . 162

 Ta7%a KF E0ect" e a%8)na$ $)$tancia$ n" !r"te#nica$ en e% M&t"" e L"'r(F Cantia  Ti!" e e inter0eren 2em"8%"7i cia na ?8> 8eneraa

 T)7" N"F

S)$tancia

A.

/

Tri$ / M: !2 F

F/@

KF

Ne8ati9"

@

G%icer"% a% / 

F/

JFK

Ne8ati9"



Deter8ente c"mercia% a% / 

F/

.FK

Ne8ati9"

K

D"eci% $)%0at" e $"i" a% / 

F/.

/F

Ne8ati9"

.

Áci" tric%"r"ac&tic" a% . 

F/K

.F

Ne8ati9"

Di$c)$i"ne$ De ac)er" a %"$ re$)%ta"$ "7teni"$: en %a ta7%a / %a c)r9a e ca%i7ración e %a a%7=mina !re$enta )na %inea%ia cercana a /: %" c)a% !r"!"rci"na )na iea a cerca e %a re%ación a7$"r7ancia
C)e$ti"nari"  Ta7%a .F C"m!aración e m&t""$ !ara eterminación e !r"te#na$ M&t""

1enta;a$

De$9enta;a$

L"'r(

E$ e% m&t"" m3$ $en$i7%eF / 9ece$ m3$ $en$i7%e 6)e e% e Bi)retF Re%ati9amente r3!i"

Bi)ret

E$ e% m&t"" m3$ $im!%e !ara meir !r"te#na t"ta%F M)( !"ca$ inter0erencia$ e "tr"$ c"m!)e$t"$ en e% e$arr"%%" e% c"%"rF

Bra0"r

E$ )n m&t"" m)( r3!i" ( $enci%%"F Re6)iere e )n $"%" reacti9"F E% c"%"r e$arr"%%a" e$ e$ta7%eF A7$"r7ancia a E$ )n m&t"" m)( r3!i"* @J nm re6)iere e m)( !"ca cantia e !r"te#naF E% $)%0at" e am"ni" n" interere: mientra$ 6)e en %a ma("r#a e %"$ m&t""$ $i ei$te inter0erenciaF La m)e$tra n" $e e$tr)(e (

Re6)iere e m)c-"$ c)ia"$ en %a e$tanari4ación (a 6)e* La inten$ia e c"%"r 9ar#a entre !r"te#na$ E% c"%"r n" e$ $iem!re !r"!"rci"na% a %a c"ncentraciónF Ei$te inter0erencia e $acar"$a: %#!i"$: am"rti8)a"re$ e !2: m"n"$acari"$ ( -e"$amina$: (a 6)e reacci"nan c"n %"$ reacti9"$ e L"'r(F E% $)%0at" e am"ni": %"$ $)%0-iri%"$ ( %"$ 0"$0at"$ tam7i&n intereren en %a eterminaciónF Se re6)iere e @
!)ee $er )$aa en "tr"$ an3%i$i$F

W;e%a-%

D)ma$

n)c%eic"$F 1ar#a %a cantia e ar"m3tic"$ entre !r"te#na$F E$ e% m&t"" m3$ c"m=n ( P)ee -a7er !&ria$ e !"r %" tant" !ermite nitró8en" e7i" a %a c"m!arar 03ci%mente tem!erat)ra e i8e$tión ( a% re$)%ta"$ c"n "tr"$ cata%i4a"rF %a7"rat"ri"$F E% c"nteni" e nitró8en" en %a Determina t"" e% c"nteni" !r"te#na !)ee 9ariar e nitró8en" e )n c"n$iera7%emente ( !"r %" a%iment"F tant" e% 0act"r )$a" !ara E% nitró8en" n" !r"teic" c"n9ertir nitró8en" a !r"te#naF !)ee $er ana%i4a" E% nitró8en" n" !r"teic" $e e$!)&$ e !reci!itar %a e7e t"mar en c)enta (a 6)e !r"te#na c"n &$te $e mie ;)nt" c"n e% aci"tric%"r"ac&tic"F !r"teic"F Se )$an reacti9"$ ( c"nici"ne$ )n tant" !e%i8r"$a$F E% !r"ce$" e$ %ar8"F Se !)een -acer an3%i$i$ Se re6)iere e e6)i!" m)( -a$ta en / min: c"n %"$ c"$t"$"F e6)i!"$ a)t"mati4a"$ 6)e La !re$encia e nitró8en" n" ei$ten en e% merca"F !r"teic" interere en %a$ eterminaci"ne$F

Re0erencia$ 7i7%i"8r3ca$ 1a%"ración e !r"te#na$ !"r e% m&t"" e L"'r(F Man)a% e !r3ctica$: Uni9er$ia e A%ca%3: %icenciat)ra en 6)#micaF P38* / a F C)anticación e !r"te#na$* )na re9i$iónF 2)m7ert" Garc#a: Ra0ae% 1346)e4F Bit3c"ra /J 1"%F  In$tit)t" e 7i"tecn"%"8#a UNAMF C)erna9aca: M"re%"$F M&ic"F P38*  a J@F Re9i$ión e m&t""$ e$!ectr"$có!ic"$ ( e%a7"ración e c)r9a e$t3nar e !r"te#naF Materia% e a!"(" !ara %"$ e$t)iante$ e% c)r$" e 7i"6)#mica e!erimenta%F S"7eia S3nc-e4F UNAM: 0ac)%ta e 6)#mica: @/F P38* // a /F Determinación c"%"rim&trica e c"m!)e$t"$ 0enó%ic"$ en a8)a meiante e% reacti9" e 5"%in