determinación de nitritos por espectrofotometria espectrofotometria en Vsible OBJETIVO Determinar la concentración de nitritos por espectroscopía UV-VIS. Conociendo la técnica y el manejo atraves de esta practica. FUNDAMENTO: Reacción del ácido sulfanílico en medio ácido, en presencia de ion amonio y fenol, que forma con los nitritos un complejo de color amarillo, cuya intensidad de color es proporcional a la concentración de nitritos. APLICACIONES Agua cuya concentración en nitritos está comprendida entre 0 y 0,92 mg de NO2- /l MATERIALES, INSTRUMENTOS Y REACTIVOS Denominación | Campo de medida | Tolerancia | Clase | Marca | Nºde serie | Pipeta Aforada | 5mL | ±0,030mL | B | Qualicolor | - | Pipeta Aforada | 5mL | ±0,015mL | A | Qualicolor | - | Pipeta Aforada | 0,5mL | ±0,050mL | A | Alamo | - | Pipeta Aforada | 10mL | ±0,040mL | B | Qulicolor | - | Pipeta Aforada | 15mL | ±0,020mL | A | Alamo | - | Pipeta Aforada | 20mL | ±0,030mL | A | Labbox | - | Micro pipeta | 1000µL | ±0.7% | - | Nichtpet | 00-NPX2-1000 | Matraz Af.x6 | 50mL | ±0,05mL | - | labbox | - | Vaso ppdo | 100mL | - | - | Labbox | - | Vaso ppdo | 250mL | - | - | Labbox | - | Vaso ppdo | 250mL | - | - | Simax | - | Vaso ppdo | 250mL | - | - | Simax | - | Vaso ppdo | 250mL | - | - | Simax | - | Vaso ppdo | 400mL | - | - | Labbox | - | Vaso ppdo | 1000mL | - | - | Labbox | - | Erlenmeyer | 250mL | - | - | Simax | - | Cubeta Espect. | - | - | - | - | - | Pipeteador | - | - | - | - | - | Pipeta pasteur | 1mL | - | - | ICO-3 | - |Denominación | Rango fotómetrico | Medición | Ancho de banda espectral | Marca | Espectr.UV-Visible | UV de200-1100nm | A,%T,C | 5nm | GENESYS 5 | Denominación | Capacidad MAX. | Tolerancia | Nºserie | Marca | Balanza anaalitica | 120g | 0,0001g | - | Cobos | Balanza granataria | - | - | - | - |
Reactivo | Formula | Calidad | Conc. | Pictogr. | Peso mol | Eliminación | Nitrito de sodio | NaNO2 | PRS | 99% | O;T;N | 68,9953 | Q+NH4Cl* | Nitrito de sodio | NaNO2 | ¨¨CODEX | 97% | O;T;N | 68,9953 | Q+NH4Cl* | Acido muriatico | HCl | PA | 37% | T;C | 36,43 | neutralizar | Acido sulfanirco | C6H7NO3S | - | - | Xi | 173,2 | neutralizar | Fenol cristalizado | C6H6O | PS | 99% | T;C;Xn | 94,11 | Residuo.tóxico | Hidroxido de amonio | NH4OH | PA | 30% | C;N | 35,04 | Residuo.tóxico | Agua | H2O | desioniz | - | - | 18 | normal | *Se elimina calentado resto del NaNO2 agregando un poco de NH4Cl hasta su descomposción, también la mezcla de acido sulfanilco hace descomponer la composición. PREPARACIONES DE LOS REACTIVOS: 30/01/2012 Prepararon G1,G2 Y G3 Reactivo de Zambelli: diluir 260 ml de HCl del 37% en 500 m l de agua destilada. Añadir 5,0 g de ácido sulfanílico y 7,5 g de fenol cristalizado. Calentar suavemente hasta disolución. Dejar enfriar y añadir 135 g de cloruro de amonio. Cuando todo esté disuelto, completar hasta un litro en un matraz aforado (preparar la cantidad que se vaya a usar). Amoniaco concentrado. Solución patrón A de nitritos: disolver 0,3450 g de NaNO2 en agua destilada hasta un litro en un matraz aforado (1 ml equivale a 0,230 mg de NO2-) Esta solución se conserva un mes en el refrigerador, si se añade 1 ml de cloroformo. En caso contrario, deberá prepararse cada vez que se vaya a usar. Solución patrón B de nitritos: tomar 1 ml de la solución patrón A y diluir a 100 ml con agua destilada. (1ml equivale a 0,0023 mg de NO2-) Procedimiento: Curva patrón: 1. Tomar 0, 1, 5, 10, 15 y 20 ml de la solución B en seis matraces aforados de 50 ml y enrasar con agua destilada. 2. Pasar los patrones a un vaso y añadir con pipeta 2 ml del reactivo de Zambelli, mezclar bien y esperar 10 minutos. 3. A continuación añadir con pipeta 2 ml del amoniaco concentrado, homogeneizar bien y esperar 5 minutos. 4. Llevar las disoluciones preparadas al espectrofotómetro y leer la absorbancia a 425 nm en cubetas de 1 cm de paso de luz, calibrando previamente el cero de absorbancia con la muestra en blanco. El color es estable 24 horas.
Medida de la muestra problema. Tomar entre 10 y 20 ml de muestra problema y aforar a 50 ml. Pasar a un vaso, y operar exactamente igual que con los patrones. Hallar la concentración de ion nitrito en la muestra, a partir de la curva patrón.
CÁLCULOS PREVIOS: - Reactivo de Zambelli: Preparar 200ml para toda la clase Cantidades de cada componente: Reactivos | Cantidad g/mL | agua | 100mL | Acido clorhidrico al 37% | 52mL | Acido sulfanilico | 1g | Fenol crsitalizado | 1,5g | Calentar suavemente hasta su disolucióny dejar enfriar | Cloruro de amonio | 27g | Con el Agua Enrasar hasta 200mL | * Patrón A de nitritos: Preparar 100 ml para compartir entre dos grupos. No añadir cloroformo. g/NaNO2 pesado | Peso molecular del NaNO2 | Moles de NaNO2 | 0,3468g | 68,9953g/mol | 5,0264.10-4 | Moles de NO2- | Peso molecular de NO2- | Gramos de NO2- | 5,0264.10-4 | 46,01g/mol | 0,2312g | Concentración NaNO2/ppm | Concentración NO2/ppm | 346,8000ppm | 201,11074ppm | Patrón B de nitritos: Preparar 500 ml para compartir entre dos grupos V/mL de Patrón A tomado | VF/mL de patrón B | Concetración inicial | Concentración final | 5mL | 500mL | 346,8ppm/NaNO2 | 3,468ppmNaNO2 | Concentración NO2- | Concentración NO2- aplicando 99% de NaNO2 | 2,3127ppm | 2,2895ppm | - Concentración de NO2- en el patón A: 201,11074ppm - Concentración de NO2- en el patón B:2,2895ppm DATOS EXPERIMENTALES: Concentración de patrones en ml/L de NO2- | Absorbancia a 425 nm | 0|0| 0,04578 | 0,019 |
0,2289 | 0,116 | 0,4578 | 0,184 | 0,6867 | 0,303 | 0,9156 | 0,405 | Muestra | 0,099 | Dilución realizada a la muestra: 360,4ppm ; ; 233,125*V=0*50; V=0mL 233,125*V=0,9156*50; V=0,1964mL como no hay materiales volumetricoa esa cantidad, excepto una micropipeta de un rango de 200µL, tuvimos que realizar una serie de dilucionescogimos 1mL y lo llevamos a 100mL y despues de esa dislución cogimos 5mL y lo pasamos a 50mL REPRESENTACIÓN GRAFICA: ABS | ppm | 0|0| 0,019 | 0,04578 | 0,116 | 0,22890 | 0,184* | 0,45780* | 0,303 | 0,68670 | 0,405 | 0,91560 | Representación A /Concentración: *suplimido en la grafica para mejorar la recta de calibración. MAX. ABS | Ecuación de la Recta | R2 | ABS/Dilución de muestra | 425nm | y=0,44169086199x+0,00382959049 | 0,998 | 0,099nm | CALCULOS REALIZADOS Según la ecuación de la recta me dá una concentración de 0,23280 8961ppm. Pero esta cantidad está dentro de las diluciones realizadas. Es decir nosotros hemos tomado 1mL de la muestra original y se enrasó a 50mL y a partir de esa disolución, tomamos un volumen de 5mL llevando a un volumen final de 50mL y de esa diluciones analizamos las concentraciones. Por lo tanto tendremos que saber la concentración de la muestra original. Para ello se realiza retroceso de diluciones: Ya tenemos la concetración en ppm en la muestra original. Finalmente para conocer la pureza del Nitrito tenemos que dividir la concetración obtenida es decir 232,808961ppm entre los gramos pesados de nitritos expresada en ppm al 97%. Y finalmente multiplicarlo por 100. Pero
para realizar los calculos las unidades ppm, pasaremos al g/L: % ~ 99,86% RESULTADO FINAL ------------------------------------------------Concentración /Nitro:232,8089ppm ------------------------------------------------Riqueza: 99,86% Según el protocolo seguido y los caculos realizados. Nos da una concenctración de nitritos 232,8089ppm con su error relativo a 0,14%. Y una riqueza de 99,86% Este porcentaje comparando con la purza inicial a variado 2,86%. Esto debe ser por los calculos de las concetraciones de nitrtos realizados ya que esto varió ligeramente un error de 0,14% y esto puede que sea por los errores sistematicos cometidos en el laboratorio o incluso, en los arrastres decimales, durante el proceso de calculos matemáticos. También puede que la muestra nitrito de sodio, halla cogido un poco de humedad. Pero esta afirmación no es segura y es necesrario realizar un comapración interlaboratrio para conseguir una estadistica general y su posterior determinación de humedad. como una prueba preconfirmativa. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: Según el origen de las aguas, su contenido en nitritos varía, y el método utilizado para su deteminacióon es distinto. Así para aguas con contenido en NO2 superior a 50ppm se emplea el método del reactivo de zambelli. Para contenidos inferiores a 50 ppm el métod de la sulfalamida presenta mayor sensibilidad. En esta practica preparamos la muestra cuya concentracón de NO2 superior a 50ppm. Por esta razón elegimos el reacativo zambelli para someter en el analisis de nitritos. El reactivo zambelli. Consiste en la reacción con acido sulfanilico en presencia de amonioy fenol, formando un compuesto de color amarillo-naranjado. La intensidad de la coloración es proporcional a la cantidad de nitritos existente, y midiendo la intensidad de la coloración por espectrofotometría visible a una longitud de onda 425nm determinaremos la concentración de nitritos existente en la muestra. Por lo tanto se trata den un método sensible. Otro método recomendado es el de la sulfalanida o reaccion de griess. Se hace reaccionar la muestra con sulfalanida en medio ácido. Su posterior trataminto con N-L- naftil-etilen diamina y deternminación espectrofotmetrica del color desarrollado a 543nm. Es mas sensible que la del anterior. Su reaccion se fundamenta en diazotación. En presencia de medio acido. Amina aromatica primaria como sulfaramida reacciona con el azoderivado como N-L- naftil-etilen diamina o α-Naftilamina y se acopla en ella formando diazotación de color caracteristico naranja-rojizo podiendo asi medir la absorvancia con mas sensibilidad que la del zambelli.
OBSERVACIÓN Utilizamos el reactivo zambelli, preparado por el grupo de la tarde Reactivo zambelli | Fecha | 25/01/2012 | Tecnico/a | Javier y Marta | Curso | 2º LACC B | ANEXO Composición de los Nitritos Los nitritos son sales o ésteres del ácido nitroso (HNO2). En los nitritos inorgánicos se encuentra el anión NO2. En la naturaleza los nitritos se forman por oxidación biológica de las aminas y del amoníaco o por reducción del nitrato en condiciones anaeróbicas. En la industria se pueden obtener al disolver N2O3 en disoluciones básicas. Los nitritos forman parte de muchas forrmulaciones de sales para salar carnes, como nitrito potásico y nitrito sódico. Cobran importancia por su capacidad de mantener un color rojizo deseado en la materia prima ya que reaccionan con la hemoglobina. Sin embargo la concentración debe ser baja ya que hay sospechas que favorecen el desarrollo de cáncer. Además por su interacción con la hemoglobina resultan tóxicos. Pero en otras fuentes de información dicen que el nitrito sodico no tiene tanta toxicidad y solo esto será cancerigeno al reaccionar a un grupo de aminoacido de una proteina formando nitrosamina*considerando compuesto dañino para nuestra salud. *Nitrosamina: son compuestos orgánicos que generalmente se originan debido a la reacción de una amina secundaria con nitritos en un medio muy ácido (por ejemplo, dentro del estómago). Las temperaturas moderadamente altas también pueden desencadenar la formación de nitrosaminas. Son productos carcinogénicos (inductores de tumores cancerígenos) y habitualmente son la causa del cáncer de esófago. Las temperaturas relativamente altas, como las ocasionadas al freír, pueden desencadenar la formación de nitrosaminas. Ciertas formas de cocinar los alimentos (exceso de frituras en la dieta) pueden ser responsables de miles de casos de cáncer de colon cada año en todo el mundo.
