4.10 Fe+2 y Fe+3
Introducción El hierro está presente en la biosfera en dos estados de oxidación, Fe +2 y Fe+3, los cuale cualess son termod termodiná inámic micam ament ente e establ estables es bajo bajo condi condicio ciones nes anóxic anóxicas as y óxicas, óxicas, res respect pectivam ivamente ente El Fe+3 se encuentra en una amplia variedad de formas formas !u"micas !u"micas,, como como mineral minerales es altament altamente e cristali cristalinos# nos# ma$neti ma$netita ta %Fe %Fe 3&'(, $eotita $eotita %Fe&&)( %Fe&&)(,, hematita hematita %Fe %Fe2&3(, vivianita vivianita %Fe %Fe3%*&'(2.)2&( o ferrihi ferrihidrit drita a 3 %Fe%&)( (, y minerales con poca o nin$una estructura cristalina# oxihidróxidos amorfos %)acher et al, 2-( .as bacteria bacteriass reducen reducen prefer preferentem entemente ente los oxihidr oxihidróx óxidos idos amorfos amorfos de Fe +3 %.ovley y *hillips, -/0( El m1todo más comnmente utiliado para medir la concentración de estos compuestos amorfos de Fe +3 en suelos y sedimentos es la t1cnica de extracción extracción con oxalato ácido de amonio 4in embar$o este m1todo puede cataliar la disolución de las formas cristalinas !ue no son biodisponibles para las bacterias reductoras de Fe, y no distin$ue entre entre la fracci fracción ón crist cristali alina na y la amorfa amorfa 5n m1todo m1todo más se selec lectiv tivo o para para la extracción de los oxihidróxidos amorfos de Fe +3 es la t1cnica de extracción con hidroxilamina hidroclorada %.ovley y *hillips, -/06 7yon$8)un et al, 2-( 91todo Este m1todo es aplicable para extraer Fe +2 y Fe+3 de muestras de suelo con una solución ácida y su cuanti:cación por colorimetr"a Fundamento .a prueba se basa en la extracción de Fe +2 y Fe+3 en muestras de suelo con una solución ácida, y la medición indirecta de los iones Fe +2, o8fenantrolina, !ue absorbe a ;- nm Fe %II( + 3 <%o8fenantrolina()+= alores de p)? de @, provocan una recuperación ine:ciente de Fe +2 .a presencia de AaA& 3 a concentraciones mayores de -9 provoca una recuperación variable y a p) 0 el Fe +2 puede ser oxidado de forma abiótica por nitra nitratos tos o nitrit nitritos os .a prese presenci ncia a de sulfa sulfato to provo provoca ca !ue !ue sól sólo o sea extra" extra"bl ble e aproximadamente -;B del Fe +2 total entre un p) de ' y ; 9aterial y e!uipo
*robetas de - ml 9atraces volum1tricos de -. Cubos de ensayo de vidrio con tapa de rosca de 2 ml *ipetas $raduadas de - y - ml >asos de precipitados de 2;, ; y - ml >órtex Cubos de centr"fu$a de -; ml Dentr"fu$a Espectrofotómetro visible
eactivos y soluciones -( cido clorh"drico %)Dl( ; 9 2( )idroxilamina hidroclorada %A) 2&).)Dl( 2; 9 en )Dl 2; 9 Gdicionar hidroxilamina en un matra volum1trico de -., disolver con - ml de una solución de )Dl ;9 y posteriormente aforar con la misma solución 3( Etanol -B '( o8fenantrolina %D -2)A2.)2&( 2;B *esar 2; $ de o8fenantrolina y llevar a - ml con una solución de etanol al -B ;( 7uHer de acetato %D2)3&2.Aa( al -B *esar - $ de acetato de sodio y disolver en - ml de a$ua destilada Gjustar a p) ' con ácido ac1tico @( 4olución estándar de sulfato ferroso amoniacal %Fe%A) '(2%4&'(2.@)2&( %; ppm de Fe( *esar 3;-2 $ de sulfato ferroso amoniacal y transferir a un matra volum1trico de -., disolver y aforar con solución de )Dl ; 9 *rocedimiento A. Extracción.
-( En un tubo de centr"fu$a de -; ml pesar - $ de suelo hmedo bajo condiciones anaerobias y adicionar ; ml de solución de )Dl ; 9 G$itar en forma intermitente durante una hora en vórtex 2( Dentrifu$ar por - minutos a @ rpm 3( 5tiliar el sobrenadante para la determinación de Fe +2 y Fe+3 Nota# 4i es necesario, diluir la muestra para poder hacer una lectura dentro del
ran$o de - a de absorbancia
B. Cuantifcación.
-( *ara la cuanti:cación de Fe +2, tomar 2 ml del sobrenadante de la centrifu$ación, adicionar - ml de solución de o8fenantrolina, - ml de solución buHer, completar a - ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente en vórtex *ermitir el desarrollo del color %-; a 2 minutos( y leer la absorbancia a ;- nm 2( *ara la cuanti:cación de Fe total, tomar 2 ml de sobrenadante de la centrifu$ación, adicionar - ml de solución de hidroxilamina y esperar una hora *osteriormente, adicionar - ml de solución de o8fenantrolina, - ml de solución
buHer, completar a - ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente en vórtex *ermitir el desarrollo del color %-; a 2 minutos( y leer absorbancia a ;- nm Curva patrón. *reparar una curva patrón con la solución estándar de sulfato ferroso amoniacal %; ppm de Fe( de acuerdo con la tabla '-2
5na hora *osteriormente adicionar - ml de solución de o8fenantrolina, - ml de solución buHer, completar a - ml con a$ua destilada y a$itar vi$orosamente en vórtex *ermitir el desarrollo del color %-; a 2 minutos( y leer la absorbancia a ;- nm Dálculos Dalcular la concentración de Fe +2 y Fe total en el extracto, con la ecuación lineal de la curva estándar
