“Determinación “Determinación de Bilirrubina Directa e Indirecta en Sangre” I. Introducción La hemoglobina de eritrocitos envejecidos o dañados se convierte, por una serie de reacciones en el pigmento biliar bilirrubina. La vida del eritrocito es de 100 días y diariamente se libera un total de 6gr aproximadamente. La hemo hemogl glob obin ina a proc proced eden ente te de la desi desint nteg egra raci ción ón de clu clula las s envejecidas, las clulas del sistema retículo endotelial, en especial el ba!o, hígado y mdula ósea, primero "agocitan a los eritrocitos y lueg luego o se conv convie iert rten en en bili bilirr rrub ubin ina a la hemo hemogl globi obina na libe liberad rada. a. La bilirrubina atraviesa los micros vellosidades sinusoides y pasa a la clula hep#tica. La proteína se separa del complejo y la bilirrubina se conv onviert ierte e a una una "or "orma m#s sol soluble uble median diante te reacc eaccio ione nes s de conjugación, proceso $ue tiene lugar en el retículo endoplasm#tico liso, catali!ado por la %&'(glucuroniltrans"erasa. %&'(glucuroniltrans"erasa. )or )ormalme alment nte e en la bil bilis de mamí amí"er "eros se encue ncuent ntra ra com como diglucor diglucoronido onido y monoglucor monoglucoronida onida de bilirrubina, bilirrubina, predomin predominando ando el primero. La conjugación con el #cido glucorónido es un pre(re$uisito para la eliminación de bilirrubina en la bilis, en el intestino su"re la acción redu reduct ctor ora a de en!i en!ima mas s bact bacter eria iana nas, s, los los prod produc ucto tos s de redu reducc cció ión, n, cole colect ctiv ivam amen ente te se desi design gnan an como como urobi urobili linó nóge geno nos, s, en el ileo ileon n terminal y en el colon una parte de urobilinógeno, es reabsorbida y excretada excretada por el hígado constituyendo un ciclo entero hep#tico. )ormalmente la mayor parte de este pigmento "ormado es oxidado a urobilina, compuesto de color pardo anaranjado, las urobilinas son excretadas excretadas por las heces. )ormalmente no se excreta bilirrubina por la orina y las cantidades de urobilinógeno $ue se elimina por orina es de alrededor de 0.* mg por +* horas.
Bilirrubina
s un producto de la descomposic sición o de desecho de la hemoglobina.. 'or lo general, se mide la bilirrubina total y la directa hemoglobina para explorar o monitorear una dis"unción del hígado o la vesícula biliar. l metabolismo metabolismo de de la bilirrubina comien!a con la descomposición de los glóbul glóbulos os rojos rojos por los "agoci "agocitos tos.. Los Los glóbul glóbulos os rojos rojos contie contienen nen hemoglobina,, la cual se descompone en -em y globina el -em se hemoglobina
1
convertido en bilirrubina y es transportado por la alb/mina en la sangre hasta el hígado, donde la mayor parte de la bilirrubina se conjuga liga $uímicamente con un glucurónido antes de excretarse en la bilis. La bilirrubina conjugada se denomina bilirrubina directa, mientras $ue la no conjugada se llama bilirrubina indirecta, y la suma de las dos con"orma la bilirrubina srica total. La bilirrubina conjugada es excretada en la bilis por el hígado y almacenada en la vesícula biliar o trans"erida directamente al intestino delgado. La bilirrubina sigue su proceso de metaboli!ación por bacterias en los intestinos y se convierte en urobilinas, las cuales contribuyen al color de las heces. %n pe$ueño porcentaje de estos compuestos se reabsorbe y aparece 2nalmente en la orina, donde se conoce como urobilinógeno.
VALORES NORMALES 3ilirrubina total es de 0,+4 a 1 mg 5dl 3ilirrubina directa es de 0,1 a 0,* mg 5dl . 3ilirrubina indirecta7 0,8 a 1,9 mg5dl Los valores normales pueden variar levemente entre laboratorios. La bilirrubina se secreta en la 3ilis. La secreción en la bilis de la bilirrubina conjugada tiene lugar mediante un mecanismo de transporte activo, $ue puede ser el limitante de la velocidad de todo el proceso del metabolismo hep#tico de la bilirrubina. l transporte hep#tico de la bilirrubina conjugada hacia la bilis es inducible por los mismos "#rmacos capaces de inducir la conjugación de la bilirrubina. 'or tanto, los sistemas de conjugación y de excreción se comportan como una unidad "uncional coordinada. n condiciones 2siológicas, b#sicamente la totalidad de la bilirrubina secretada a la bilis se encuentra conjugada. :ólo despus de la "ototeraputica es posible encontrar en la bilis cantidades importantes de bilirrubina no conjugada. n el hígado existen sistemas para la secreción a la bilis de compuestos naturales y "armacuticos, una ve! $ue stos se metaboli!an. ;lgunos de estos sistemas secretores son compartidos con el diglucurónido de bilirrubina, pero otros operan independientemente.
2
Etructura de la bilirrubina 1.
II.
&eterminar la bilirrubina total, directa e indirecta de la suero sanguíneo.
Materiale ! Reacti"o ;. =ateriales =ateriales7 >eactivos7 'ipetas ?raduadas - ;lcohol metílico ?radilla - 3ilirrubina total @ubos de nsayo - 3ilirrubina indirecta =icropipetas ( :uero sanguíneo $uipos7 Aentrí"uga 3año =aría spectro"otómetro
III. M#todo$%rocedimiento &. BILIRR'BINA (O(AL M)(ODO DE A'DI( DIA*NOS(I+ 'reparar el siguiente sistema de tubos de ensayo7
Reacti"o & Reacti"o / Muetra
I ,Blanco&.ml &00ul
II ,Muetra&.ml 0ul &00ul 3
=e!clar, leer la densidad óptica despus de 4 minutos de incubación. • Leer la absorbancia de los 3lancos de =uestra a 444 nm "rente a agua destilada. •
NO(A1 La est#ndar es de 0.01* /. BILIRR'BINA DIRE+(A M)(ODO DE A'DI( DIA*NOS(I+ 'reparar el siguiente sistema de tubos de ensayo7
Reacti"o & Reacti"o / Muetra
Blanco Muetra &.ml &00 ul
Muetra &.ml 0ul &00ul
=e!clar, leer la densidad óptica despus de 4 minutos de incubación. • Leer la absorbancia contra el blanco de la muestra a 444 nm. •
NO(A1 La est#ndar es de 0.01*
VII. +2lculo ! Reultado 'ara poder anali!ar cuanto de [ 3ilirrubina ] hay en la sangre se debe reali!ar la siguiente "órmula7
Bilirrubin a] [
mg dl
=
DO Des x factor DOSt
DE(ERMINAMOS LA BILIRR'BINA (O(AL
;bsorbancia D 0.006 ;bsorbancia est#ndar D 0.01*
4
BILIRR'BINA (O(AL mg3dl 4 &.<. muestra 5 &.<. est#ndar x + mg5dl
BILIRR'BINA (O(AL mg3dl 4 0.006 5 0.01* x + mg5dl BILIRR'BINA (O(AL mg3dl 4 0567mg3dl
DE(ERMINAMOS LA BILIRR'BINA DIRE+(A
;bsorbancia D 0.0+6 ;bsorbancia est#ndar D 0.01*
BILIRR'BINA DIRE+(A mg3dl 4 &.<. muestra 5 &.<. est#ndar x + mg5dl
BILIRR'BINA DIRE+(A mg3dl 4 0.0+6 5 0.01* x + mg5dl BILIRR'BINA DIRE+(A mg3dl 4 857&9mg3dl DE(ERMINAMOS LA BILIRR'BINA INDIRE+(A BILIRR'BINA INDIRE+(A mg3dl 4 BILIRR'BINA (O(AL $ BILIRR'BINA DIRE+(A
BILIRR'BINA INDIRE+(A mg3dl 4 0,E4Fmg5dl G 8,F1*mg5dl BILIRR'BINA INDIRE+(A mg3dl 4 $/567mg3dl
5
VIII. Reumen ! +oncluione l metabolismo de la bilirrubina comien!a con la descomposición de los hematíes en el sistema reticuloendotelial. La hemoglobina es liberada desde los hematíes y descompuesta en las molculas heme y globina. l heme es cataboli!ado despus para "ormar biliverdina, $ue se trans"orma en bilirrubina. sta "orma de bilirrubina se denomina no conjugada indirecta. n el hígado, la bilirrubina indirecta es conjugada con glucurónido para producir bilirrubina conjugada o directa. La bilirrubina conjugada se excreta despus por las clulas hep#ticas hacia los canalículos intrahep#ticos, $ue acaban conducindola a los conductos hep#ticos, el conducto biliar com/n y el intestino. La mayor parte de la bilirrubina de la bilis $ue alcan!a el intestino est# conjugada. La bilirrubina conjugada no es apreciablemente absorbida por el intestino. La acción de las bacterias intestinales sobre la bilirrubina da por resultado la desconjugación y la oxidación o reducción, con "ormación de compuestos $ue colectivamente se denominan urobilinógeno. stos compuestos est#n no conjugados, lo $ue permite su absorción. La mayor parte del urobilinógeno absorbido es excretado por el hígado, aun$ue pueden aparecer pe$ueñas cantidades normalmente en la orina. Aantidades mayores se encuentran en la orina cuando la excreción de bilirrubina por la bilis est# aumentada, como en la hemólisis. < cuando el hígado en"ermo no puede segregar "#cilmente urobilinógeno absorbido por el intestino. La ictericia es una coloración amarillenta de piel y mucosas causada por niveles sanguíneos de bilirrubina anormalmente altos. l color amarillo se aprecia cuando la bilirrubina srica total es superior a 1,6 mg por 100 ml en los casos de origen hep#tico o biliar, re$uirindose ci"ras mayores para $ue se mani2este en HictericiaI una hiperbilirrubinemia de origen hemolítico. 6
I:. Re;erencia Bibliogr2
=%>>;J >,K. ?>;))> &.K. =;J:, '.;. y ><&LL M,. +001. 3io$uímica de -arper. 16 a d. dit l =anual =oderno. =xico.
'L%==> ',@ 19E1. 3io$uímica 'r#ctica. 18a d. dit. l =anual =oderno :.;. &e A.M. =xico &.N.
><)&<)O, '. Aompendio de 3io$uímica con ;plicación a la 'atología y al &iagnóstico. * ta dición. ditorial L;3<> :.;. =adrid G spaña.
3iblioteca de Aonsulta =icroso"t P ncarta P +004. Q 1998(+00* =icroso"t Aorporation. >eservados todos los derechos.
7
“A=o de la +umbre Mundiale en el >er?” 'ni"eridad Nacional de la Ama@ona >eruana acultad de armacia ! BioCumica >RA+(I+A DEL LABORA(ORIO & *ru%o1 Fue"e ,&& a &%m-
(itulo
1
Aignatura Docente 1
Alumna
“Determinación de la Bilirrubina (otal5 Directa e Indirecta en Suero Sanguneo”. 1
3io$uímica
R.N. il"redo <. ?utirre! ;lvarado R.N. -enry &elgado ong
1
ecGa de EFecutacion
1
ecGa de >reentación
1
M#s$ue! >odrígue! ?nesis &el >osario
jueves 1F de abril
jueves +* de abril
8
/006
ICuito$0$>er?
9
