TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN En estas técnicas se hacen visibles los complejos Ag-Ac por la aglutinación que producen los anticuerpos cuando el Ag forma parte o se ha unido artificialmente a la superficie de glóbulos rojos, plaquetas, leucocitos, partículas de látex, etc. Normalmente se utilizan glóbulos rojos (hemoaglutinación) o partículas de látex.
AGLUTINACIÓN DE PARTÍCULAS RECUBIERTAS POR ANTÍGENO Mientras que el entrecruzamiento de los antígenos proteicos multivalentes con el anticuerpo produce una precipitación, la interrelación entre células o partículas de gran tamaño con los anticuerpos dirigidos contra los antígenos de superficie conducen a una aglutinación. Dado que la mayoría de las células poseen cargas eléctricas, se requiere una cantidad razonable de anticuerpos entre dos células antes de que se supere la repulsión mutua. Por esto, puede ser difícil lograr la aglutinación de células que sólo poseen un número pequeño de determinantes, a menos que se utilicen métodos especiales, como el tratamiento adicional con un reactivo antiglobulina. De manera similar, la mayor avidez del anticuerpo multivalente IgM con respecto a la IgG hace que el primero sea más eficaz como agente aglutinante, molécula por molécula. Las reacciones de aglutinación se utilizan para identificar bacterias y para tipificar los glóbulos rojos; estas reacciones fueron observadas con leucocitos y plaquetas, e incluso con espermatozoides en cientos casos de infertilidad masculina debida a aglutininas presentes en el esperma. Debido a su sensibilidad y conveniencia, el uso de la prueba se ha extendido a la identificación de anticuerpos contra antígenos solubles que de modo artificial se adhieren sobre eritrocitos, las partículas de látex o de gelatina. La aglutinación de las partículas de látex recubiertas por IgG se utiliza para detectar los factores reumatoideos. Pruebas similares que utilizan partículas recubiertas con antígeno pueden llevarse a cabo en placas de microtitulación con fondo en U, donde puede observarse el patrón de sedimentación en el fondo de las cubetas; esto proporciona un indicador mas sensible que la aglutinación macroscópica. La cuantificación de grados más sutiles de aglutinación puede lograrse por nefelometría o por un contador Coulter
AGLUTINACIÓN DIRECTA La presencia de antígenos en la superficie de los glóbulos rojos se puede detectar por la hemoaglutinación producida cuando se añade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antígenos. Esta técnica se emplea habitualmente para la identificación de los grupos sanguíneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le añaden los antisueros correspondientes: anti-A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh negativos). Habrá aglutinación cuando los glóbulos rojos posean la especificidad del antisuero añadido (Tabla 4). De igual manera se procede
AGLUTINACIÓN INDIRECTA Se basa en el principio de la inhibición de la hemoaglutinación. Para su realización se precisan glóbulos rojos a los cuales se les ha unido la misma sustancia que se desea detectar o cuantificar (Figura 13). Si estos glóbulos rojos son puestos en presencia de anticuerpos preparados frente a dicha sustancia se producirá su aglutinación. Por el contrario, cuando se añade un suero problema que contiene la sustancia a cuantificar entonces los anticuerpos se unirán a dicha sustancia y no a los glóbulos rojos. En este caso no se producirá la hemoaglutinación. Por tanto, aglutinación (+) indica ausencia de la sustancia a estudiar, y aglutinación (-) indica presencia de la misma. La medida de gonadotrofina coriónica (HCG) para el diagnóstico de embarazo puede realizarse por esta técnica.
Bibliografía Bloisi, R.M. 1988. Principles of Immunology and Inmunodiagnostic. Ed. Lea/Tebiger. Bullock, G.R., Petrusz, P. 1989. Techniques in immuno-citochemistry. Vol. 4, Academic Press. de Carvalho Gomes, P.A., 2000, Surface plasmon resonance as a tool in the functional analysis of an immunodominant site in foot-and-mouth disease virus, Tesis de doctorado, Universitat de Barcelona
