Determinación de azúcares Azúcares reductores por el método de Fehling
Este método tiene su origen en el reactivo de Fehling, también conocido como Licor de Fehling, es una disolución descubierta por el químico alemán Hermann von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinación de azúcares reductores, un azúcar reductor es todo azúcar con un grupo carbonilo en su estructura, el cual puede funcionar como aldehído o cetona según su ubicación en dicha estructura, poseen la capacidad de reducir otros compuestos por la alta reactividad del doble enlace del oxígeno. Respecto al grupo carbonilo, los sacáridos se clasifican en aldosas o en cetosas . Los monosacáridos son un gran ejemplo de azúcares reductores. (aldosas: glucosa, ribosa, eritrosa, etc.) Este método sirve para demostrar la presencia de glucosa, así como para detectar derivados de ésta tales como la sacarosa o la fructosa. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas:
Sulfato de cobre cristalizado, 35 g y agua destilad hasta 1.000 mL. Sal de Seignette o Tartrato mixto de potasio y sodio 150 g, solución de hidróxido de sodio al 40 %, 3 g y agua hasta 1.000 mL.
Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso, para evitar la precipitación del hidróxido de cobre. El ensayo con el licor de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de los aldehídos. Éste se oxida a ácido y reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reacción es que la forma aldehído puede detectarse fácilmente aunque exista en muy pequeña cantidad. Si un azúcar reduce el licor de Fehling a óxido de cobre rojo, se dice que es un azúcar reductor. Esta reacción se produce en medio alcalino fuerte, por lo que algunos compuestos no reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona, puede enolizarse a la forma aldehido dando lugar a un falso positivo. Otras sustancias hecen que la prueba de Fehling no es específica, específica, sustancias que dan reacción reacción positiva son los fenoles, fenoles, aminofenoles, benzoína, ácido úrico, catecol, ácido fórmico, hidrazobenceno, fenilhidrazina, fenilhidrazina, pirogalol y resorcinol. Al reaccionar con monosacaridos se torna verdoso, y si lo hace con disacáricos toma el color del ladrillo.
Carbohidratos por el método de ácido-fenol-sulfúrico
El método presenta una reacción de color para medir la concentración de carbohidratos solubles en la muestra por espectrofotometría . Los carbohidratos serán destruidos por calor y por ácido, son particularmente sensible a ácidos fuertes y altas temperaturas. Bajo estas condiciones una serie de reacciones complejas toman lugar empezando con una deshidratación simples, si se continúa el calentamiento y la catálisis ácida se producen varios derivados del furano que condensan consigo mismos y con otros subproductos para producir compuestos obscuros o compuestos coloridos producto de la condensación de compuestos fenólicos y con heterociclos con el nitrógeno como heteroátomo. La condensación más común es con fenol. Este método es fácil, eficaz y rápido. Todos los azúcares como oligosacáridos y polisacáridos pueden ser determinados, recordando que estos bajo hidrólisis ácida producen monosacáridos. La forma en que procede la reacción no es estequiométrica y depende de la estructura del azúcar, por lo tanto se realiza una curva patrón.
Resultados Determinación de azúcares reductores método fehling
Solución patrón 2.5g/250 ml ---------- Concentración 0.01g/mL Muestra El refresco de la marca SPRITE contiene 9g de azúcar en 100 mL lo que equivale a 0.09 g en 1 mL. ---------------Se toman 0.99 g (11mL) 11ml y se aforan a 100ml -------- Concentración 0.00999g/mL (casi equivalente a 0.01 g/mL) Factor fehling Factor Fehling= (15 mL)(0.01 g/mL) =0.15 % AZÚCARES REDUCTORES % Azúcares reductores= (Factor Fehling/V muestra)100 % Azúcares reductores= (0.15/3.5)100= 4.28
Método de ácido-fenol-sulfúrico
La muestra de refresco light se toma directa, mientas que la de refresco normal se prepara la muestra haciendo una dilución 1:2000 antes del procedimiento. Curva estándar
tubo
Concentración (mg/ml)
Absorbancia (nm)
1 bco 2 3 4 5 6
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
0 0.317 0.405 0.467 0.52 0.596
Absorbancia de las muestras: Sprite light: 0.896 nm Sprite normal: 0.589 Ecuación de la recta para determinar mg/ml de azucares en la muestra: x-(y-0.2591)/3.365
donde: X=mg/ml y=absorbancia
Discusión Prueba de Fehling
De acuerdo a los cálculos obtenidos se muestra un porcentaje de azúcares reductores de 4.28%. Si nos fijamos en el etiquetado del refresco “Sprite” el contenido que tiene de azúcares totales es de
9g en 100 g. Sin embargo hay que recordar que el método empleado es un método semi cuantitativo por lo que no se puede tener mucha confianza de estos resultados, así que se preferiría usar un método de análisis meramente cuantitativo.
Método Fenol-sulfúrico.
A diferencia del método de Fehling, la ventaja de este método es el poder de cuantificación de los carbohidratos de una forma más detallada, lo que le da más sensibilidad y credibilidad a los resultados. Referencias
IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION https://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/5.pdf
DE
AZUCARES,
CARBOHIDRATOS, extraído http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CARBOHIDRATOS_21119.pdf
extraído
de
de
Bioquímica II, extraído de http://bioquimicaii.foroblog.net FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS DE ALIMENTOS, extraído de http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/FUNDAMENTOSYTECNICASDEANALISISDEALIMENTO S_12286.pdf Manual de métodos generales para la determinación de carbohidratos, extraído de Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, https://es.slideshare.net/LeidyCristancho/manual-demtodos-generales-para-determinacin-de-carbohidratos