Cuestiones de exámenes de MSQA

Cuestiones de exámenes MSQA

Tema 1. Introducción a las separaciones cromatográficas cromatográficas 1. Definiciones: a- Cromatografía: Es una técnica que agrupa a un conjunto importante de técnicas que persiguen separar compuestos de mezclas homogéneas aprovechando la diferente distribución de los componentes de la mezcla entre una fase móvil (formada por un fluido que arrastra la muestra) y una fase estacionaria (que está en contacto íntimo con la fase móvil) !os componentes que se unan más a la fase estacionaria tardarán más en ser arrastrados y saldrán más tarde que aquellos componentes que se unan menos a la fase estacionaria" separando así la mezcla b- Tiempo de retención: Es el tiempo que transcurre desde que se inyecta la muestra hast hastaa que que el pico pico de conc concen entr traci ación ón del del analit analito o alcanz alcanzaa el detecto detector r !as especie especiess que no se retienen por la fase estacionaria recorren la columna en el mismo tiempo que la fase móvil" y al tiempo que emplean se le llama tiempo muerto c- Eficiencia de una columna cromatográfica: Es una medida de la estrechez de los picos cromatográficos #na cromatografía es tanto más eficiente cuanto más estrechos sean los picos $ara describir la eficiencia de una columna hay dos parámetros que son el n%mero de platos (que es directamente proporcional a la eficiencia) y la altura del plato (que es inversamente proporcional a la eficiencia) d- Difusión en remolino: Es el incremento de la longitud de la trayectoria que siguen siguen las molécu moléculas las cuando cuando atraviesa atraviesan n la fase estacio estacionar naria ia debido debido a que tienen que sortear las partículas de esta e- Resolución de una columna cromatográfica: Es una medida de la optimización de la separación #na separación es óptima cuando se produce una separación completa en el menor tiempo posible $or lo tanto" la resol solución es el conjunto de eficac cacia y sel selectividad $ara calcular la resolución a partir de un cromatograma se usa la e&presión' 2

R s =

[ ( t )

( t R ) A ]

R B −

W A + W B

f- atrón interno: Es una disolu disolució ción n (de concen concentra tración ción e&acta e&actamen mente te conoci conocida) da) de los mismos componentes que tiene la muestra problema que queremos separar omparando la seal producida por el patrón interno y la seal producida por la muestra problema se puede conocer la concentración de la misma g- Deri!ati"ación: Es el proceso que consiste en modificar químicamente un compuesto para formar un derivado con nuevas propiedades que permitan o faciliten su análisis !a modificación que se hace en el compuesto puede hacer" por ejemplo" que sea más volátil" que varíe su interacción con la fase estacionaria" que origine un grupo cromóforo o" en caso de compue compuesto stoss quirale quirales" s" origin originar ar diaster diastereóm eómero eross que present presentan an difere diferente ntess propie propiedad dades es físicas


#. reguntas de !erdadero o falso: uando la fase móvil es un gas y la fase estac estacio iona nari riaa es un líqu líquid ido o adso adsorb rbid ido o sobr sobree un sólido" se trata de una cromatografía gas*líquido En cromatografía" un cromatograma se define como la representación de la seal del detector frente al tiempo de retención o al volumen de fase móvil aadido !a velo veloci cida dad d prom promed edio io del del movi movimi mien ento to de las molé molécu cula lass de la fase fase móvi móvill en una una sepa separa raci ción ón crom cromat atog ográ ráfi fica ca coin coinci cide de con con la velo veloci cida dad d de migración de la especie no retenida !a velo veloci cida dad d prom promed edio io del del movi movimi mien ento to de las molé molécu cula lass de la fase fase móvi móvill en una una sepa separa raci ción ón crom cromat atog ográ ráfi fica ca coin coinci cide de con con la velo veloci cida dad d de migración de la especie más débilmente retenida +l aumentar el caudal de elución de la fase móvil disminuye el tiempo de retención de todos los picos del cromatograma

En un cromatogram cromatograma" a" la identificaci identificación ón de los picos se basa %nicamente en el tiempo de retención En un cromatograma" la relación entre la altura de un pico y el ruido de la línea base se utiliza para determinar el límite de detección !a velocidad de migración de los solutos en una colum columna na cromat cromatog ográfi ráfica ca se descri describe be median mediante te el factor de retención o factor de capacidad !a medi medida da cuan cuanti tita tati tiva va de la efic eficac acia ia de una una colu column mnaa crom cromato atogr gráf áfica ica se reali realiza za medi median ante te la altura de plato teórico y el factor de capacidad !a medi medida da cuan cuanti tita tati tiva va de la efic eficac acia ia de una una colu column mnaa crom cromato atogr gráf áfica ica se reali realiza za medi median ante te el fact factor or de sele select ctiv ivid idad ad y el n%me n%mero ro de plat platos os teóricos ,ue un plato teórico sea mayor en una columna cromatográfica que en otra" significa que la eficacia de la primera columna es mayor !a visc viscos osid idad ad de un diso disolv lven ente te"" así así como como la velo veloci cida dad d de difu difusi sión ón de un solu soluto to en dich dicho o disolvente influyen en la velocidad de transferencia

Verdadero. En este caso el equilibrio es la distribución entre un gas y un líquido. Verdadero. Es la definición de cromatograma.

Verdadero. Si una especie no se retiene tarda lo mismo en eluir que la fase móil. Falso. Coincide con la de la especie no retenida! no con la que está más d"bilmente retenida. Verdadero. #a contribución de la difusió sión longitudinal $%& $%& es ine inersa rsame ment ntee prop propor orci cion onal al a la elocidad de la fase móil! ya que cuanto más alto es el caudal! más bree es el periodo que el analito reside en la columna. Falsa. Se basa basa en el tiem tiempo po de rete retenc nció ión n y en la conf confir irma maci ción ón espectral Con estos dos Verdadero. parámetros se puede determinar la altura espectral. Verdadero. El parámetro '( describe las elocidades de migración de los solutos. reali) i)a a medi media ante nte la Falso. Se real altura de plato teórico y el n*mero de platos teóricos. Falso. Se real reali) i)a a medi media ante nte la altura de plato teórico y el n*mero de platos teóricos Falso. #a altura de plato es ine inersa rsame ment ntee prop propor orci cion onal al a la eficacia. iscosidad dad influy influyee Verdadero. #a iscosi cuando la fase móil es líquida y la elo eloci cida dad d de difus ifusió ión n infl influ uye


#. reguntas de !erdadero o falso: uando la fase móvil es un gas y la fase estac estacio iona nari riaa es un líqu líquid ido o adso adsorb rbid ido o sobr sobree un sólido" se trata de una cromatografía gas*líquido En cromatografía" un cromatograma se define como la representación de la seal del detector frente al tiempo de retención o al volumen de fase móvil aadido !a velo veloci cida dad d prom promed edio io del del movi movimi mien ento to de las molé molécu cula lass de la fase fase móvi móvill en una una sepa separa raci ción ón crom cromat atog ográ ráfi fica ca coin coinci cide de con con la velo veloci cida dad d de migración de la especie no retenida !a velo veloci cida dad d prom promed edio io del del movi movimi mien ento to de las molé molécu cula lass de la fase fase móvi móvill en una una sepa separa raci ción ón crom cromat atog ográ ráfi fica ca coin coinci cide de con con la velo veloci cida dad d de migración de la especie más débilmente retenida +l aumentar el caudal de elución de la fase móvil disminuye el tiempo de retención de todos los picos del cromatograma

En un cromatogram cromatograma" a" la identificaci identificación ón de los picos se basa %nicamente en el tiempo de retención En un cromatograma" la relación entre la altura de un pico y el ruido de la línea base se utiliza para determinar el límite de detección !a velocidad de migración de los solutos en una colum columna na cromat cromatog ográfi ráfica ca se descri describe be median mediante te el factor de retención o factor de capacidad !a medi medida da cuan cuanti tita tati tiva va de la efic eficac acia ia de una una colu column mnaa crom cromato atogr gráf áfica ica se reali realiza za medi median ante te la altura de plato teórico y el factor de capacidad !a medi medida da cuan cuanti tita tati tiva va de la efic eficac acia ia de una una colu column mnaa crom cromato atogr gráf áfica ica se reali realiza za medi median ante te el fact factor or de sele select ctiv ivid idad ad y el n%me n%mero ro de plat platos os teóricos ,ue un plato teórico sea mayor en una columna cromatográfica que en otra" significa que la eficacia de la primera columna es mayor !a visc viscos osid idad ad de un diso disolv lven ente te"" así así como como la velo veloci cida dad d de difu difusi sión ón de un solu soluto to en dich dicho o disolvente influyen en la velocidad de transferencia

Verdadero. En este caso el equilibrio es la distribución entre un gas y un líquido. Verdadero. Es la definición de cromatograma.

Verdadero. Si una especie no se retiene tarda lo mismo en eluir que la fase móil. Falso. Coincide con la de la especie no retenida! no con la que está más d"bilmente retenida. Verdadero. #a contribución de la difusió sión longitudinal $%& $%& es ine inersa rsame ment ntee prop propor orci cion onal al a la elocidad de la fase móil! ya que cuanto más alto es el caudal! más bree es el periodo que el analito reside en la columna. Falsa. Se basa basa en el tiem tiempo po de rete retenc nció ión n y en la conf confir irma maci ción ón espectral Con estos dos Verdadero. parámetros se puede determinar la altura espectral. Verdadero. El parámetro '( describe las elocidades de migración de los solutos. reali) i)a a medi media ante nte la Falso. Se real altura de plato teórico y el n*mero de platos teóricos. Falso. Se real reali) i)a a medi media ante nte la altura de plato teórico y el n*mero de platos teóricos Falso. #a altura de plato es ine inersa rsame ment ntee prop propor orci cion onal al a la eficacia. iscosidad dad influy influyee Verdadero. #a iscosi cuando la fase móil es líquida y la elo eloci cida dad d de difus ifusió ión n infl influ uye


de masa entre la matriz" la muestra y el fluido cuando la fase móil es gaseosa. El problema general de la elución en ! se puede Verdadero. Es lo que que se conoc conocee solucionar mediante la variación de la composición como como eluc elució ión n con con grad gradie ient ntee $o de la fase móvil durante la elución programación del disolente&. El problema general de la elución en - se puede Falso. Se cons consig igue ue medi median ante te el solucionar mediante el uso de un patrón interno incremento de la temperatura.

Tema #. Cromatografía de gases


1. Definiciones a- $olumen de retención neto en %C: Es el volumen de retención (volumen de gas que es necesario que fluya desde que se inyecta la muestra hasta que sale el soluto) multiplicado por un factor de corrección de caída de presión (j) debido a que dentro de la columna la presión no es función lineal del cociente $ i.$ El volumen de retención neto corresponde a la presión promedio de la columna' 0

0

V R= j· t R · F V M = j· t M · F

b- &actor de corrección de caída de presión: Es un parámetro que se debe incluir para calcular el volumen de retención neto debido a que debido a que dentro de la columna la presión no es función lineal del cociente $i.$ /e esta forma el volumen de retención neto corresponde a la presión promedio de la columna' 3

j = 2

[ ( P / P ) − ] [ ( P / P ) − ] 2

1

i

3

1

i

c- $olumen de retención específico en %C: Es el volumen neto de eluyente a 0 1 necesario para transferir la mitad del soluto en un sistema normalizado a 2 gramo de fase estacionaria y sin presión en la gota 3e calcula mediante la e&presión' 0

V g=

0

V R −V M W

·

273

T C

=

jF ( t R−t M ) W

·

273

T C

=

K 273 · ρ S T C

4 5 masa de la fase estacionaria 6 5 coeficiente de distribución

d- %as portador: Es el gas que sirve como fase móvil en - /ebe ser químicamente inerte por lo que se suele usar 7e" 89 o 79 dependiendo del tipo de detector que se utilice +ntes de introducirse en la columna debe atravesar un regulador de presión y un regulador de caudal para mantener una determinada presión :ambién puede llevar un tamiz molecular para eliminar agua e impurezas e- Tami" molecular: Es un filtro de carbón activo que se coloca antes de la columna en - y que sirve para eliminar agua e impurezas que pueda arrastrar el gas portador f- Detector de ioni"ación en llama '&ID( empleado en %C: Es el más usado de los detectores En un quemador se mezcla el efluente de la columna con hidrógeno y aire para luego encenderse eléctricamente produciendo iones y electrones +l aplicar una diferencia de potencial entre el quemador y un electrodo colector la corriente se pude medir Es un detector sensible" con un amplio intervalo de respuesta y un bajo ruido Es resistente y fácil de utilizar" pero es destructivo de la muestra g- Detector de captura de electrones 'ECD( empleado en %C: Es el más usado en el análisis de muestras medioambientales por su selectividad para detectar halógenos El efluente de la columna pasa por un emisor ; que ioniza el gas portador (generalmente 8 9) y genera electrones 3i no hay especies orgánicas la corriente es constante pero esta corriente disminuye con la presencia de especies orgánicas que capturan electrones Es un detector selectivo a determinados grupos (halógenos" peró&idos" quinonas y grupos nitro)" es


altamente sensible" no altera la muestra" pero el intervalo de respuesta se limita a uno o dos órdenes de magnitud )- *ndice de retención de +o!ats: 3e define como cien veces el n%mero de carbonos de un compuesto sin considerar el relleno de la columna" la temperatura u otras condiciones cromatográficas 3e determina representando en una serie homóloga el logaritmo del tiempo de retención ajustado frente al n%mero de átomos de carbono (e&ceptuando el miembro de la serie con menor n%mero de carbonos) e interpolando el soluto de interés

#. reguntas de !erdadero o falso: El caudal promedio en el interior de una columna en cromatografía de gases se puede medir fácilmente en cabeza de columna con un medidor de pompas de jabón En cromatografía de gases" la inyección lenta de muestras demasiado grandes provoca un ensanchamiento de las bandas y una mala resolución !a cámara de vaporización de la muestra debe estar a 20 1 por encima del punto de ebullición del compuesto volátil de la muestra En cromatografía de gases" las columnas capilares necesitan muestras mayores que las columnas empaquetadas !as columnas tubulares abiertas de pared recubierta" 4<:" utilizadas en cromatografía de gases" presentan menor eficacia que las columnas abiertas recubiertas con soporte" 3<: En una separación cromatográfica de cinco analitos por cromatografía de gases" en régimen isotérmico" el aumento de la temperatura de trabajo de la columna implica un aumento del tiempo de elución de los analitos =ncrementar la temperatura de una columna de cromatografía de gases aumenta el tiempo de retención

En una separación cromatográfica de cinco analitos por cromatografía de gases" en régimen isotérmico" el aumento de la temperatura de trabajo de la columna implica una reducción del tiempo de elución de los analitos !a fase estacionaria de una columna

Falso: El medidor de pompas de +abón se coloca al final de la columna Verdadero: ,ebido a eso la muestra debe inyectarse de un solo golpe. Falso: ,ebe estar por encima de los - /C. Falso: #as columnas capilares exigen muestras menores que en las ordinarias Falso: #as columnas SC01 son menos eficaces que las columnas 2C01 Falso: #a resolución óptima se asocia con una temperatura mínima. Si se reduce la temperatura se aumenta el tiempo de elución. Falso: #a resolución óptima se asocia con una temperatura mínima. Si se reduce la temperatura se aumenta el tiempo de elución. Verdadero: #a resolución óptima se asocia con una temperatura mínima. Si se reduce la temperatura se aumenta el tiempo de elución. Verdadero: Además debe tener


cromatográfica" en cromatografía de gases" ha de ser inerte químicamente y de baja volatilidad El detector de ionización en llama es sensible a compuestos orgánicos con e&cepción de compuestos carbonílicos y carbo&ilos

estabilidad t"rmica y alores de '( y de 3 apropiados. Verdadero: Estos grupos producen pocos iones o prácticamente ninguno.

,. reguntas de desarrollo: a- Explicar brevemente el fundamento básico de la cromatografía de gases. Dibujar un diagrama esquemático de un equipo de cromatografía de gases indicando cada uno de sus componentes. !a cromatografía de gases es una técnica analítica de separación de mezclas que se basa en el diferente reparto de las moléculas de la mezcla entre una fase móvil (gas) y una fase estacionaria (líquido o sólido) $resenta como ventajas una gran capacidad de resolución" un análisis rápido" la necesidad de un volumen de muestra pequeo" que se puede hacer un análisis cuantitativo y que hay detectores muy sensibles 3in embargo" tiene como inconvenientes que solo es aplicable a compuestos volátiles no termolábiles $or lo general la utilización de la cromatografía de gases está restringida a la separación de compuestos con un peso molecular menor de 2000 a una temperatura má&ima de trabajo de apro&imadamente >00 1 /entro de esos límites" la %nica limitación será la estabilidad térmica de la muestra $ara realizar una separación mediante cromatografía de gases" se inyecta una pequea cantidad de la muestra a separar en una corriente de un gas inerte a elevada temperatura? esta corriente de gas atraviesa una columna cromatográfica que separará los componentes de la mezcla por medio de un mecanismo de partición (cromatografía gas*líquido)" de adsorción (cromatografía gas*sólido) o" en muchos casos" por medio de una mezcla de ambos !os componentes separados emergerán de la columna a intervalos discretos y pasarán a través de alg%n sistema de detección adecuado" o bien serán dirigidos hacia un dispositivo de recogida de muestras #n equipo de cromatografía de gases tiene consta de las siguientes partes'

2 9 A > B

@uente de gas 3istema de inyección 7orno y columna 3istema de detección 3istema de registro


b.- Dibujar ! describir una válvula de in!ecci"n de # vías$ así como su funcionamiento. b.%- &bserve el esquema de la figura adjunta. 'omente de lo que se trata.

#na válvula de C vías es un sistema de inyección de muestra en cromatografía que sirve para análisis cuantitativos onsta de un bucle de carga con una capacidad perfectamente conocida y una válvula rotatoria que tiene dos posiciones' * En la posición de carga el bucle y el conducto que se dirige a la columna no se pueden poner en contacto 3e llena el bucle con la mezcla a separar quedando cargado * En la posición de inyección la válvula se gira de manera que se ponen en contacto el bucle y el conducto que se dirige a la columna /e esta manera el eluyente empuja al contenido del bucle hacia la columna y como se conoce e&actamente el volumen de muestra que se ha introducido" se puede llevar a cabo un análisis cuantitativo c- 'omentar brevemente los tipos de columnas ! fases estacionarias que se emplean en cromatografía de gases. on respecto a las columnas" pueden ser de dos tipos' * Columnas abiertas o columnas capilares: Es un tubo de vidrio o de sílice fundida en cuyo interior se dispone la fase estacionaria $ueden ser de dos tipos' Columnas 2C014 3on las más frecuentes o

porque son las más eficaces En ellas la fase estacionaria se encuentra depositada formando una película líquida directamente sobre la pared del tubo !as nuevas columnas 4<: son las @3<: que contienen sílice fundida o Columnas 5#014 En estas columnas la pared interna del tubo está recubierta por una capa de un soporte adsorbente 3i a su vez el soporte está impregnado con una fase estacionaria líquida" las columnas se denominan 3<: -eneralmente el material de soporte es tierra de diatomeas * Columnas rellenas: Están cada vez más en desuso 3on tubos de vidrio" de metal o de teflón que se rellenan con un material sólido finamente dividido y homogéneo que se recubre con una fina capa de fase estacionaria líquida on respecto a la fase estacionaria" las fases estacionarias más usadas son' * olisiloanos o siliconas: 3on los más usados debido a su estabilidad térmica y a que pueden modificar químicamente la estructura de su base para obtener fases con diferentes polaridades y selectividades !a estructura química de los polisilo&anos es'


!os grupos D pueden ser grupos metilo" fenilo o trifluorometilpropilo" resultando así una gran cantidad de fases estacionarias de distinta selectividad *

olietilenglicoles: 3on muy %tiles para separar compuestos polares y con posibilidad de formar puentes de hidrógeno !as características de retención de esta fase estacionaria están en la concentración de *<7 mientras que la estabilidad reside en el peso molecular

Estas fases estacionarias se pueden mejorar' *

*

&ases estacionarias enla"adas  con enlaces entrecru"ados: !as columnas comerciales tienen fases estacionarias con enlaces entrecruzados para originar una fase estacionaria de larga duración a la que no le afecte el sangrado (pérdida de una pequea cantidad de líquido estacionario durante el proceso de la elución) &ases estacionarias /uirales: 3irven para la separación de enantiómeros mediante cromatografía de gases 7ay dos procesos' El primero se basa en la formación de compuestos derivados del analito con un reactivo ópticamente activo" originando un par de diastereoisómeros" ópticamente activos El segundo utiliza un líquido quiral como fase estacionaria

d- Describir brevemente cinco de las características que debe poseer un detector ideal en cromatografía de gases.

2 9 A > B C F G

+decuada sensibilidad uena estabilidad y reproducibilidad Despuesta lineal para los solutos que se e&tiende a varios órdenes de magnitud =ntervalo de temperatura de trabajo comprendido desde la temperatura ambiente hasta al menos >00 1 :iempo de respuesta corto que sea independiente del caudal +lta fiabilidad y manejo sencillo Despuesta semejante para todos los solutos o" por el contrario" una respuesta selectiva y altamente predecible para uno o más tipos de solutos 3er un detector no destructivo de la muestra

e- Enumerar cinco detectores de los más empleados en (' ! comentar las características de uno de ellos. !os detectores más empleados en cromatografía de gases son' * /etector de ionización en llama (@=/)' * /etectores de conductividad térmica (:/) o catarómetros' * /etectores de quimioluminiscencia de azufre (3=/)' * /etectores de captura de electrones (E/)' * /etectores de emisión atómica (+E/)' * /etectores termoiónicos (:=/)' * /etectores fotométricos de llama (@$/)' * /etectores de fotoionización


f- Describir brevemente el detector de llama en cromatografía de gases. El detector de ionización de llama es" tal vez" el más ampliamente utilizado en cromatografía de gases Este tipo de detector es en la práctica de respuesta universal" ya que es selectivo hacia los compuestos que presenten enlaces * 7" por lo que son muy pocos los compuestos que no dan seal en él En un detector de ionización de llama" el gas procedente de la columna se mezcla con hidrógeno y esta mezcla se quema en una cámara con e&ceso de aire $or encima de la llama" se dispone un colector cilíndrico polarizado con el fin de recoger los iones generados? sobre este dispositivo" se mide la corriente iónica que se establece entre la punta del quemador y el electrodo colector El mecanismo de generación de iones en este detector es complejo" pero se cree que son generados por medio de un proceso de ionización química" en el que la energía liberada por reacciones fuertemente e&otérmicas es retenida por las moléculas orgánicas" generándose iones a partir de las moléculas e&citadas !a ionización en llama de los compuestos que contienen carbono es más compleja" aunque se sabe que el n%mero de iones producidos es directamente proporcional al n%mero átomos de carbono reducidos En este caso el detector responde al n%mero de átomos de carbono que entran en el detector" por lo que es más un detector sensible a la masa que sensible a la concentración $or otra parte" los grupos carbonilo" alcohol" halógenos y aminas no originan iones y además es insensible a los gases no combustibles como agua" < 9" 3< 9 y 8< & por lo que es muy %til para el análisis de compuestos orgánicos y también sirve para la detección de contaminantes en muestras de agua Es un detector sensible" con un amplio intervalo de respuesta y un bajo ruido Es resistente y fácil de utilizar" pero tiene el inconveniente que es destructivo de la muestra g- Explicar el fundamento de la cromatografía gas-s"lido ! comentar los distintos tipos de adsorbentes que se utili)an. 3e basa en la adsorción de sustancias gaseosas sobre superficies sólidas !os coeficientes de distribución son generalmente mucho mayores por lo que es uHtil para la separación de especies que no se retienen en columnas de gas*líquido (componentes del aire" 7 93" 39" 8<&" <" < 9 y gases nobles) 3e lleva a cabo tanto en columnas de relleno como en columnas abiertas En estas %ltimas se fija en las paredes del capilar una delgada capa de adsorbente (y se les denomina columnas abiertas de pared porosa o columnas $!<:) !os adsorbentes pueden ser de dos tipos' * :amices moleculares' 3on intercambiadores de iones de silicato de aluminio * $olímeros porosos' + partir de estireno polimerizado con divinilbenceno


Tema ,. Cromatografía lí/uida de alta eficacia '0C( 1. Definiciones: a- Constante de distribución en C: #n soluto establece un equilibrio entre la fase móvil y la fase estacionaria" con una constante denominada constante" coeficiente o razón de distribución' A móvil ⇄ A estacionaria K =

[ A ] [ A ]

cs

estacionaria =

móvil

cm

+ aquellas cromatografías donde el valor de 6 es constante en un amplio intervalo de concentraciones se les denomina cromatografías lineales y en ellas los picos son gaussianas simétricas características y los tiempos de retención son independientes de la cantidad del analito inyectado b- lato teórico en C: Es un parámetro relativo que se usa para cuantificar la eficacia de una columna cromatográfica y que relaciona el tiempo de retención y la anchura de banda El n%mero de platos teóricos de una columna se puede calcular como' N =16

( ) t R

2

W

c- Ensanc)amiento de banda etracolumna en C: Es un ensanchamiento de banda no provocado por la propia columna o su relleno que tiene lugar cuando se transporta la muestra a través de tubos como los que se utilizan en los sistemas de inyección" en los detectores y en los tubos que conectan los distintos componentes de cualquier instrumental de cromatografía 7$! 3e debe a las diferencias en las velocidades en el interior del fluido porque las capas centrales se mueven más rápidamente que las capas adyacentes a las paredes del tubo d- Elución en gradiente: Es una cromatografía 7$! en la que se usan dos o más disolventes y se cambia la proporción de los mismos a lo largo del proceso e- Elución isocrática: Es una cromatografía 7$! en la que se usa un solo disolvente" por lo que la composición del disolvente es constante a lo largo de toda la elución f- 2omba recíproca en 0C: Es una pequea cámara donde el disolvente es impelido por el movimiento de vaivén de un pistón accionado por un motor de arrastre /os válvulas con cierre de bola" que se abren y se cierran alternativamente" controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia afuera de un cilindro :ienen la desventaja de producir un flujo pulsado g- Cromatografía de pares iónicos: Es un tipo de cromatografía de reparto inversa que se usa para la determinación de especies iónicas cuya fase móvil es un tampón acuoso con un disolvente orgánico y un compuesto iónico que aporta un contraión al analito para formar una especie neutra que es retenida por el relleno de la fase inversa 3e usa para la separación de iones clorato y nitrato


#. reguntas de !erdadero o falso: !a elución isocrática se produce por un cambio continuo de la composición del disolvente !a elución en gradiente en una columna por cromatografía de líquidos consiste en eluir cambiando la concentración de los componentes de la fase móvil Iuestras y eluyentes" en 7$!" deben filtrarse a través de membranas y tamao de poro pequeo para eliminar partículas no solubles !as precolumnas analíticas se utilizan para aumentar la vida de la columna analítica y se colocan justo antes de la entrada al detector El acoplamiento de un espectrómetro de masas a un cromatógrafo de líquidos necesita una interfase debido a las elevadas condiciones de presión que requiere el detector !a eficacia" n%mero de platos teóricos de un sistema 7$! depende del caudal de trabajo En 7$! la identificación de los picos se basa solo en el tiempo de retención !a eficacia de una columna de 7$! aumenta cuando aumenta el tamao de partícula del relleno !a cromatografía en la que se utiliza una fase estacionaria apolar y un disolvente polar se denomina cromatografía en fase inversa o reversa

!os compuestos orgánicos polares no pueden ser analizados por fase reversa

Falso. Es aquella en la que la fase móil tiene un solo disolente. Verdadero. Se usan dos o más disolentes y se a cambiando su relación de forma programada. Falso. A eces se filtra el eluyente! pero no es un proceso imprescindible. Falso. Se coloca delante de la columna cromatográfica! como su propio nombre indica. Falso. #a interfase se debe colocar porque en la columna 6ay un olumen grande mientras que en el detector se necesita acío. Verdadero. #a altura de plato es proporcional al caudal. Falso. Se basa en el tiempo de retención y la confirmación espectral. Falso. #a eficacia aumenta cuando disminuye el tama7o de partícula. Verdadero. En fase reersa la fase estacionaria es apolar $6idrocarburo& y la fase móil es relatiamente polar $agua o metanol& Verdadero. #os solutos tienen que tener polaridad seme+ante a la fase estacionaria y en fase reersa esta fase es apolar. Falso: Es al re"s! de más polar a menos polar. Falso. #as mol"culas grandes no se retienen por los poros y por lo tanto no se retienen.

En fase reversa el orden de elución es de menos polar a más polar En la cromatografía de e&clusión molecular" cuanto mayor sea el tamao de las moléculas de un soluto" mayor será el tiempo de permanencia en la columna En la cromatografía en capa fina la fase móvil Falso. #a fase móil siempre es puede ser un líquido o un gas líquida En cromatografía en capa fina el flujo de la fase Falso. #a fase móil fluye por


móvil se puede producir por capilaridad y por gravedad !a detección y localización de las manchas en la placa de :! se hace inicialmente observando el color inherente de los componentes

capilaridad o por un potencial el"ctrico. Falso. Se 6ace nebuli)ando sobre la placa una disolución de yodo o ácido sulf*rico que reaccionan con los compuestos orgánicos para dar productos oscuros.

,. reguntas de desarrollo: a - 'romatografía de líquidos de alta eficacia. Fundamentos$ instrumentaci"n ! aplicaciones. @undamentos de la 7$! y aplicaciones' !a cromatografía líquida de alta eficacia (7$!" del inglés 7igh $erformance !iquid hromatography) es la técnica analítica de separación más ampliamente utilizada por su sensibilidad" versatilidad y su gran aplicabilidad a infinidad de sustancias !a 7$! agrupa a cuatro tipos diferentes de cromatografía' de reparto" de adsorción" iónica y de e&clusión por tamao El uso de una u otra técnica depende del peso molecular y de la polaridad de la sustancia a separar $ara solutos de masa molecular superior a 20000" a menudo se usa la cromatografía de e&clusión por tamao o la cromatografía de reparto en fase inversa $ara especies iónicas de masa molecular más pequea" se utiliza con frecuencia la cromatografía de intercambio iónico !os métodos de reparto se aplican a las especies poco polares pero no iónicas y para la separación de integrantes de una serie homóloga !a cromatografía de adsorción se elige para separar especies no polares" isómeros estructurales y grupos de compuestos como por ejemplo" los hidrocarburos alifáticos de los alcoholes alifáticos =nstrumentación' Jer siguiente pregunta b- Dibujar un dibujo esquemático de un equipo de cromatografía de líquidos indicando cada uno de sus componentes. !os componentes básicos para la 7$! se muestran en la siguiente figura'


8ecipiente para la fase móil y sistemas para el tratamiento de los disolentes4 #n aparato de 7$! contiene uno o más recipientes con un disolvente 3i se usa un solo disolvente se denomina elución isocrática? si se usan dos o más disolventes se denomina elución con gradiente +demás" también se equipan con dos sistemas adicionales' * 3istema para eliminar los gases disueltos '4 #  5#(: !as burbujas que producen estos gases pueden provocar un ensanchamiento de banda e interfieren en el funcionamiento del detector El desgasificador puede ser un sistema de destilación" un agitador de disolventes o un sistema de purga que arrastra los gases disueltos mediante burbujas de un gas inerte de baja solubilidad * 3istema de filtración de pol!o  de partículas en suspensión: $ara evitar que se dae la bomba" los sistemas de inyección y la columna Estos dos sistemas no son imprescindibles si el disolvente se filtra con un filtro millipore previamente a la introducción en el recipiente Sistema de bombeo4 3e utilizan tres tipos de bombas' * 2ombas recíprocas: Es una pequea cámara donde el disolvente es impelido por el movimiento de vaivén de un pistón accionado por un motor de arrastre /os válvulas con cierre de bola" que se abren y se cierran alternativamente" controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia afuera de un cilindro :ienen la desventaja de producir un flujo pulsado * 2ombas de despla"amiento: 3on grandes cámaras" como una jeringa" equipadas con un émbolo que se activa mediante un mecanismo de tornillo accionado mediante un motor paso a paso El flujo está libre de pulsaciones" pero tiene una capacidad de disolvente limitada y es incómodo el cambio de disolvente * 2ombas neumáticas: !a fase móvil se coloca en un recipiente plegable colocado en una vasija que se puede presurizar mediante gas comprimido Estas bombas están e&entas de impulsos" pero tienen una capacidad limitada y una baja presión de salida Sistemas de inyección de la muestra4 $ara evitar el ensanchamiento de banda" los vol%menes de muestra han de ser muy pequeos (de unas décimas de microlitros hasta los B00 Kl) El mecanismo más simple es con una jeringa a través de un elastómero que cierra herméticamente El mecanismo más utilizado es el de válvula rotatoria (bucles de muestra) igual que en la cromatografía de gases


Columnas para cromatografías de líquidos4 3e construyen con un tubo de acero ino&idable de diámetro interno uniforme 3i la presión es menor de C00 psi se pueden utilizar también tubos de vidrio de paredes resistentes Sistemas de detección4 En cromatografía de líquidos no hay detectores universales ni tan fiables como en cromatografía de gases #n detector ideal para cromatografía de líquidos debe presentar las mismas características que un detector para cromatografía de gases (ver tema 9) e&cepto que no es necesario que sea sensible en un amplio intervalo de temperaturas +demás" debe tener un volumen mínimo para reducir el ensanchamiento de banda !os detectores en 7$! pueden detectar una propiedad de la disolución que es inherente al efluente (índice de refracción" constante dieléctrica o densidad) o una propiedad del soluto que es inherente a la fase móvil (absorbancia en #J" fluorescencia o corriente límite) c- 'omentar los posibles sistemas de bombeo que se emplean en *+,'. $ara que un sistema de bombeo de 7$! sea eficaz debe cumplir cinco requisitos' *$resiones por encima de los C000 psi * @lujo libre de pulsaciones * =ntervalo de caudales de 0"2 a 20 m!.min * ontrol y reproducibilidad del caudal mejor del 0"B L * omponentes resistentes a la corrosión (teflón o acero ino&idable) 3e utilizan tres tipos de bombas' * 2ombas recíprocas: Es una pequea cámara donde el disolvente es impelido por el movimiento de vaivén de un pistón accionado por un motor de arrastre /os válvulas con cierre de bola" que se abren y se cierran alternativamente" controlan el flujo del disolvente hacia dentro y hacia afuera de un cilindro :ienen la desventaja de producir un flujo pulsado

*

2ombas de despla"amiento: 3on grandes cámaras" como una jeringa" equipadas con

un émbolo que se activa mediante un mecanismo de tornillo accionado mediante un motor paso a paso El flujo está libre de pulsaciones" pero tiene una capacidad de disolvente limitada y es incómodo el cambio de disolvente * 2ombas neumáticas: !a fase móvil se coloca en un recipiente plegable colocado en una vasija que se puede presurizar mediante gas comprimido Estas bombas están e&entas de impulsos" pero tienen una capacidad limitada y una baja presión de salida + veces muchos instrumentos comerciales se equipan con dispositivos que permiten medir el caudal a través de un restrictor colocado a la salida de la bomba uando hay una diferencia de seal se aumenta o se disminuye la velocidad del motor de la bomba d- ombrar qu tipos de detectores se utili)an en ,' ! explicar el fundamento de uno de ellos. En cromatografía de líquidos no hay detectores universales ni tan fiables como en cromatografía de gases #n detector ideal para cromatografía de líquidos debe presentar las


mismas características que un detector para cromatografía de gases (ver tema 9) e&cepto que no es necesario que sea sensible en un amplio intervalo de temperaturas +demás" debe tener un volumen mínimo para reducir el ensanchamiento de banda !os detectores en 7$! pueden detectar una propiedad de la disolución que es inherente al efluente (índice de refracción" constante dieléctrica o densidad) o una propiedad del soluto que es inherente a la fase móvil (absorbancia en #J" fluorescencia o corriente límite) * Detectores de absorbancia: El esquema del detector se muestra en la figura adjunta $ara minimizar el ensanchamiento de banda e&tracolumna" el volumen de estas cubetas debe ser mínimo /etectores de absorbancia #J con filtros' 3e trata de un detector #J con un filtro que aísla una línea de una determinada longitud de onda El soluto debe absorber a esta longitud de onda aislada Estos dispositivos son %tiles cuando se hacen análisis cuantitativos conociendo la composición cualitativa de la muestra ya que se puede elegir una secuencia de filtros apropiados /etectores de absorbancia #J con monocromadores' onsisten en un espectrofotómetro de barrido con una red entre sus componentes ópticos /etectores de absorbancia en el =D' !as cubetas son semejantes a las de #J e&cepto que las ventanas tienen que ser de cloruro de sodio o de fluoruro de calcio #no de sus mayores inconvenientes es la baja transparencia de muchos disolventes al =D /etectores de fluorescencia' !a fluorescencia se detecta por medio de un detector fotoeléctrico colocado perpendicularmente respecto al haz de e&citación de mercurio y uno o más filtros para aislar la radiación emitida :ienen la ventaja de su alta sensibilidad * Detectores de índice de refracción: En estos detectores" el disolvente en su camino hacia la columna pasa a través de una mitad de la cubeta y el eluyente de la columna pasa por la otra mitad !os dos compartimentos están separados por una placa de vidrio montada a un ángulo tal que si las dos disoluciones difieren en el índice de refracción se produce una desviación del haz incidente El desplazamiento resultante del haz con respecto a la superficie fotosensible del detector provoca una variación de la seal de salida" la cual" una vez amplificada y registrada" proporciona el cromatograma Estos detectores son universales" fiables y no dependen del caudal" pero son muy sensibles a los cambios de temperatura * Detectores de lu" dispersada tras e!aporación: El efluente se pasa a un nebulizador donde se convierte en una fina niebla mediante un flujo de nitrógeno o de aire !a nube de 








partículas de analito pasa a través de un láser cuya dispersión se detecta mediante un fotodiodo * Detectores electro/uímicos: 3e basan en la amperometría" la voltamperometría" la culombimetría y la conductimetría 3on métodos sencillos" sensibles y con una e&tensa aplicabilidad * Detectores por espectrometría de masas '0C673(: #n problema fundamental para acoplar cromatografía de líquidos y espectrometría de masas es que en la primera hay un volumen relativamente grande de disolvente y en la segunda se necesita vacío $or eso es necesario una interfase que adapte el pase de una técnica a otra !a más moderna se denomina termovaporización En ella el líquido se vaporiza en un tubo capilar de acero ino&idable calentado y se forma un chorro de aerosol constituido por moléculas de analito y de disolvente El analito se ioniza por intercambio de carga con acetato de amonio y va al espectrómetro e- Explicar el fundamento de la cromatografía de pares i"nicos. Es un tipo de cromatografía de reparto inversa que se usa para la determinación de especies iónicas cuya fase móvil es un tampón acuoso con un disolvente orgánico y un compuesto iónico que aporta un contraión al analito para formar una especie neutra que es retenida por el relleno de la fase inversa 3e usa para la separación de iones clorato y nitrato f- /e dispone de una me)cla de tres compuestos 0$ 1 ! '$ de polaridad decreciente 2polaridad de los compuestos 0 3 1 3 '4$ ! dos columnas para *+,' de diferente relleno. ,a columna  posee un relleno de al5mina 2relleno de fase normal4 ! la columna % posee un relleno de '-6 2relleno de fase inversa4. Discutir el orden de eluci"n de estos tres solutos en cada caso. 20!5dese de un esquema gráfico4. En fase normal el orden de elución es de menos a más polar" por lo tanto" el orden de elución será **+ En fase reversa el orden de elución es de más a menos polar" por lo tanto" el orden de elución será +** g- /e desea separar n-7exano$ metanol ! cloroformo en una me)cla utili)ando la cromatografía de adsorci"n en fase normal. 8ndicar de forma ra)onada el correcto orden de eluci"n de estas tres especies. En fase normal el orden de elución es de menos a más polar" por lo tanto" será n*he&ano el primero" luego ira el cloroformo y finalmente el metanol 7- /ugerir un tipo de cromatografía líquida adecuado para la separaci"n de los compuestos que se indican. 0demás$ comente en pocas palabras 2no más de 9 líneas4 el fundamento en el que se basa este tipo de cromatografía. a) romatografía de adsorción (o líquido*sólido) porque puede separar compuestos isómeros b) romatografía de reparto c) romatografía de intercambio iónico (cromatografía iónica) porque está separando dos cationes


d) romatografía de e&clusión por tamao (porque se usa para compuestos de alto peso molecular

i- Explicar el fundamento de la cromatografía de exclusi"n por tamao. :ambién se le llama cromatografía de penetrabilidad sobre geles o de filtración sobre geles y se usa fundamentalmente para especies de alto peso molecular 3u característica es que" a diferencia de otras cromatografías" no implica una interacción física o química entre los analitos y la fase estacionaria El fundamento de esta cromatografía se basa en que la columna contiene una red de poros uniforme en los que se pueden difundir las moléculas del soluto y del disolvente !as moléculas son atrapadas en los poros y el tiempo de residencia depende del tamao efectivo de las moléculas' * 3i son más grandes que el tamao medio de los poros" no se retienen * 3i son más pequeas pueden penetrar a través del laberinto de poros y están atrapadas más tiempo" teniendo en cuenta que la penetración media en los poros depende del diámetro de las moléculas 1eoría de la cromatografía de exclusión por tama7o4 El coeficiente de distribución del soluto se puede determinar mediante la e&presión' V e− V o cS = K = V i c M V e =Volumen e elución V o=Volumen li!re e"terior a las #art$culas e gel V i=Volumen el isolvente retenio

!os valores de 6 oscilan entre 0 (para las moléculas muy grandes que no se retienen) y 2 para el caso de moléculas muy pequeas El intervalo %til de pesos moleculares para un determinado relleno se obtiene a partir de una curva de calibrado +quí podemos definir tres partes' * ímite de eclusión: Es el peso molecular de una especie por encima del cual no e&iste retención :odas las moléculas de pesos moleculares superiores no se retienen y eluyen conjuntamente (formando el pico + de la figura adjunta) * ímite de penetración: Es el peso molecular por debajo del cual las moléculas pueden penetrar completamente $or debajo de este límite las moléculas son tan pequeas que eluyen dando lugar a una sola banda (anda / de la figura adjunta * Región de penetración selecti!a: Esta comprendida entre los dos límites anteriores y


en ella tiene lugar el fraccionamiento dando lugar a picos de solutos individuales (andas  y  de la figura adjunta)

j.- Explicar brevemente el fundamento de la cromatografía en capa fina$ así como el desarrollo de la placa ! locali)aci"n de los analitos en la misma 2a!5dese de un esquema gráfico4. j.%- Describir brevemente c"mo se reali)an las separaciones en capa fina. 0!5dese de un dibujo. j.9- 'romatografía en capa fina: Fundamento de la separaci"n ! aplicaciones. 3e emplea una fina capa plana y delgada de un material que a la vez es el soporte" o bien recubre una superficie !a fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria por capilaridad o ayudada de un potencial eléctrico 5roceso de separación en capa fina4 7ay que partir de una placa que constituye la fase estacionaria !as placas comerciales se presentan en dos categorías' la convencional y la de alta eficacia siendo las primeras más delgadas que las segundas !as de alta eficacia permiten separaciones mejores y más rápidas" pero tienen menor capacidad de carga 3obre esta capa se aplica la muestra con un capilar o con un aplicador mecánico y se marca su posición mediante una marca + continuación" se va a producir el desarrollo de la placa introduciéndola en un recipiente cerrado y saturado con los vapores del disolvente con el que se efectuará el desarrollo #n e&tremo de la placa se introduce en el recipiente (sin que la muestra lo toque) y se espera a que el eluyente ascienda por capilaridad uando se pone en contacto con la muestra" la disuelve y la arrastra por la placa distribuyéndose entre el disolvente que la desplaza y la fase estacionaria El paso final consiste en determinar los analitos de la placa $ara ello se rocía la placa con una disolución de yodo o de ácido sulf%rico ya que ambos reaccionan con los compuestos orgánicos para dar productos oscuros + veces se pueden emplear reactivos específicos" como la ninhidrina

Es el cociente entre la distancia alcanzada por el compuesto y la distancia alcanzada por el frente del disolvente  R R F =  M !os valores de D @ pueden variar desde 0 hasta 2 (para solutos que no se retrasan)

Tema 8. 4tros m9todos de separación 1. Definiciones: a- &luido supercrítico: Es una sustancia que se encuentra por encima de la temperatura y la presión crítica !os fluidos supercríticos tienen las siguientes características' difusividad más alta que en los líquidos" viscosidades más bajas que en los líquidos" alta capacidad para disolver moléculas grandes no volátiles y los analitos disueltos en ellos pueden ser fácilmente recuperados permitiendo que las disoluciones se equilibren con la atmósfera a temperaturas bajas #n ejemplo de sustancia con la que se puede trabajar como fluido supercrítico es el dió&ido de carbono que es barato e inocuo b- Temperatura  presión supercrítica: !a temperatura crítica de una sustancia es la temperatura por encima de la cual no puede e&istir en fase líquida independientemente de la presión !a presión de vapor a esa temperatura es la presión crítica c- Etracción con fluidos supercríticos: Es un método para separar los componentes de una mezcla usando para ello fluidos supercríticos que presenta varias ventajas' * Es un método rápido porque la velocidad de difusión en el fluido es alta y la viscosidad es baja * El poder disolvente puede modificarse por los cambios en la presión y la temperatura * Iuchos de los fluidos supercríticos son gases a temperatura ambiente por lo que la recuperación del analito es sencilla * 3on baratos" no tó&icos e inertes por lo que se pueden eliminar fácilmente d- 7o!ilidad electrofor9tica'(: Es la velocidad que adquiere la partícula por unidad de campo eléctrico aplicado" por lo tanto" es el cociente entre la velocidad de la partícula y el campo eléctrico aplicado Es directamente proporcional a la carga eléctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento e- $elocidad de migración de un ion en electroforesis capilar: Es el producto de la intensidad de campo aplicada por la movilidad electroforética v = % e & = %e

V '

f- Electroforesis capilar en gel: Es un método de separación que se basa en la diferente velocidad de migración de las especies cargadas en una disolución amortiguadora a la que se aplica un campo eléctrico constante y que permite separaciones con vol%menes pequeos y con una elevada resolución 3e lleva a cabo inyectando una muestra en una matriz polimérica con estructura de gel poroso (poliacrilamida) cuyos poros contienen un tampón en el que se lleva a cabo la separación $ara que se produzca la separación es imprescindible que el analito tenga carga !a migración dependerá del tamao y de la forma del ion y de la viscosidad del medio 3e usa para separar proteínas" fragmentos de +/8 y oligonucleótidos que tienen la misma carga" pero distinto tamao


g- Isotacoforesis capilar: Es un tipo de electroforesis capilar en la que las bandas de todos los analitos migran a la misma velocidad y sirve para separar cationes o aniones" pero no ambos a la vez !a muestra se inyecta entre dos tampones con diferente movilidad por lo que al proporcional el potencial inicial los iones migran a una velocidad característica hasta separarse en las distintas bandas adyacentes #na vez separados todos migran a la misma velocidad porque el potencial es menor para las bandas más móviles y mayor para las bandas menos móviles por lo que la corriente es la misma en todas las zonas del tampón

)- Isoelectroenfo/ue capilar: 3e utiliza para la separación de especies anfóteras como aminoácidos o proteínas que tienen un grupo amino y un grupo ácido !os compuestos anfóteros pueden aceptar o ceder un protón y pueden estar en un estado con una carga positiva y una negativa (estructura de zMitterion) 3i las condiciones de p7 del medio son tales que las formas catiónicas son idénticas a las formas aniónicas no se produce migración" lo cual ocurre en el punto isoleéctrico En cambio" si el p7 cambia se producirá la migración !a separación se lleva a cabo en una mezcla de tampones cuyo p7 varía a lo largo del sistema de separación #na vez realizada la separación es necesario movilizar el contenido del capilar Esto se consigue aplicando una diferencia de presión o mediante el cambio de la disolución del compartimento del electrodo

i- Electroferograma: Es un gráfico realizado con los resultados de un análisis por electroforesis que muestra la secuencia de datos producidos por una máquina automática de secuenciación de +/8 ;- Concentración micelar crítica: Es la concentración mínima de surfactante a partir de la cual se forman micelas espontáneamente en una disolución Es un punto definido con precisión para cada compuesto y se puede conocer mediante DI8 <- Electrocromatografía capilar: Es una mezcla de la electroforesis capilar y la 7$! +l igual que en la electroforesis capilar" proporciona una alta eficacia en las separaciones? al igual que en la 7$! se utiliza para la separación de especies no cargadas !a fase móvil se transporta a través de la fase estacionaria por bombeo ejercido por el flujoelectroosmótico y no por bombeo mecánico" lo que simplifica el equipo y además provoca un perfil de flujo plano que mejora la eficacia de la separación 7ay dos tipos' electrocromatografía en columna rellena y cromatografía capilar electrocinética micelar l -Cromatografía micelar electrocin9tica: 3irve para separar solutos no cargados de bajo peso molecular En esta técnica se introduce un tensioactivo (dodecil sulfato de sodio) en el que se forman micelas que son una fase estable que es capaz de alojar compuestos no polares en el interior solubilizando así compuestos apolares uando se introduce una muestra los distintos componentes se distribuyen entre la fase acuosa y el interior de la micela en función de la polaridad' si la polaridad del soluto es alta se queda en la fase acuosa y si es baja se queda en la micela


#. reguntas de !erdadero o falso: !os fluidos supercríticos son capaces de disolver moléculas grandes no volátiles" dada su baja densidad E! <9 y el metanol no pueden emplearse conjuntamente como fluidos supercríticos !a presión en cromatografía de fluidos supercríticos no tiene apenas efecto sobre el factor de retención o de capacidad

En 3@" la presión tiene un efecto muy marcado sobre el factor de capacidad" debido a la disminución de la densidad de la fase móvil a medida que aumenta la presión E8 3@ la adición de un modificador orgánico a la fase móvil aumenta la solubilidad de los compuestos no polares !a fase móvil en 3@ se encuentra en una bala de gas a presión En modo dinámico" el fluido supercrítico llega continuamente fresco a la muestra y la sustancia e&traída fluye continuamente hacia el recipiente donde se recoge y tiene lugar la despresurización En modo estático" la cubeta de e&tracción se encuentra presurizada en condiciones estáticas /espués del tiempo adecuado" un flujo dinámico de fluido arrastra el contenido de la cubeta El detector de ionización de llama se emplea en cromatografía de gases" de líquidos y de fluidos supercríticos !a movilidad electroforética depende de las características del medio y no de los analitos a separar

Falso. Se debe a las altas densidades de los fluidos supercríticos. Falso. ,e 6ec6o! es muy frecuente que se empleen con+untamente. Falso. #a presión influye en el factor de retención debido al incremento de la fase móil a medida que aumenta la presión! aumentando la capacidad disolente de la fase móil y acortando los tiempos de elución. Falso. El efecto de la presión sobre el factor de capacidad se debe a que aumenta la capacidad disolente de la fase móil. Falso. Aumenta la solubilidad de los compuestos de eleada polaridad. Falsa. 9o se encuentra en una bala a presión. Verdadero. Es la característica de la extracción en modo dinámico.

Verdadero. Es la característica de la extracción estática.

Falso. Se usa solo cromatografía de gases.

en

Falso. Es directamente proporiconal a la carga el"ctrica del analito e inersamente proporcional a los factores de retardo por ro)amiento. !a movilidad electroosmótica depende de las Falso. ,epende de la carga de las características del medio y no de los analitos a especies a separar. separar En electroforesis" la separación de iones se produce Verdadero. #a masa no influye en e&clusivamente en función de su carga la electroforesis. En electroforesis capilar si se aumenta la Falso. 9o aumenta la elocidad concentración del electrolito aumenta la velocidad


electrostática En una separación electroforética" son necesarios potenciales muy pequeos para obtener una buena resolución En electroforesis capilar si se aumenta el campo eléctrico" aumenta el flujo electroosmótico

Falso. 5ara que aumente la resolución 6ay que aumentar el potencial Verdadero. Son directamente proporcionales.

,. reguntas de desarrollo: a.- Dibujar ! comentar un diagrama esquemático de un equipo de cromatografía de fluidos supercríticos$ indicando sus componentes$ así como la utilidad de cada uno de ellos. a.%. 'romatografía de fluidos supercríticos: Fundamento de la tcnica$ instrumentaci"n ! variables de operaci"n. !os equipos instrumentales para la 3@ son bastante parecidos a los de 7$! aunque se necesitan aadir dos instrumentos' * #n horno como el de la cromatografía de gases para mantener la temperatura termostatizada y mantener la temperatura de la fase móvil * #n restrictor o dispositivo de contrapresión para mantener la presión en la columna en un nivel deseado y para convertir el eluyente de fluido supercrítico a gas y poder arrastrarlo al detector #n restrictor típico es un capilar directamente unido al e&tremo final de la columna + veces puede ser una parte integrante de la columna

* Iicroprocesadores' #n instrumento de 3@ está equipado con uno o más microprocesadores que permiten el control de una serie de variables instrumentales' Efectos de la presión4 =nfluye en el factor de retención" NH" debido al incremento de la densidad de la fase móvil a medida que aumenta la presión Esto se traduce en un aumento de la capacidad disolvente de la fase móvil" lo que acorta los tiempos de elución :ases estacionarias4 !a 3@ se emplea en columnas abiertas más que en columnas rellenas !as columnas abiertas son semejantes a las columnas de sílice fundida :ases móiles4 !a más usada es el dió&ido de carbono porque disuelve moléculas orgánicas no polares" es transparente al #J" inolora" no tó&ica" de fácil disponibilidad y barata 3u temperatura crítica es de A2 1 y su presión crítica es F9"O atmósferas * /etectores' !a principal ventaja de la 3@ frente a la 7$! es que se pueden usar detectores de ionización de llama que es de respuesta universal a compuestos orgánicos"


de elevada sensibilidad y e&ento de problemas :ambién se pueden usar espectrómetros de masas y muchos detectores usados en 7$! como detector de absorción en el #J" en el =D" de emisión de fluorescencia" termoiónico y fotométrico de llama

b- Describir brevemente en qu consiste la extracci"n con fluidos supercríticos e indicar las ventajas de esta tcnica. !os análisis de materiales complejos a veces requieren la separación del analito #n método de separación debe ser rápido" sencillo" barato" sin pérdidas ni degradaciones y no producir deshechos !os fluidos supercríticos presentan se pueden usar para separaciones porque presentan las siguientes ventajas' * Es un método rápido porque la velocidad de difusión en el fluido es alta y la viscosidad es baja * El poder disolvente puede modificarse por los cambios en la presión y la temperatura * Iuchos de los fluidos supercríticos son gases a temperatura ambiente por lo que la recuperación del analito es sencilla * 3on baratos" no tó&icos e inertes por lo que se pueden eliminar fácilmente c- Describir la diferencia entre electroforesis convencional ! electroforesis capilar. !a electroforesis se puede dar en dos versiones Electroforesis convencional y electroforesis capilar !a convencional se lleva a cabo sobre un gel semisólido y poroso donde se disponen las muestras y tras el paso de la corriente se tie Es muy usada en el campo de la bioquímica" pero es lenta y difícil de automatizar !a electroforesis capilar permite separaciones con vol%menes pequeos y con una elevada resolución d- Definir flujo electroosm"tico ! la distribuci"n de cargas en la superficie de un capilar. 0!5dese de un esquema gráfico. +l aplicar un potencial elevado a un capilar con un tampón se produce un flujo electroosmótico por el que el disolvente migra también hacia los electrodos !a causa es la doble capa eléctrica que se forma en la interfase sílice.disolución + p7 superiores a A" los grupos silanol (3i*<7) están ionizados presentando carga negativa por lo que los cationes del tampón se agrupan sobre la superficie de sílice formando una doble capa eléctrica $or el contrario" los cationes son atraídos hacia el cátodo (electrodo *) y como están solvatados arrastran al resto de la disolución con ellos !a electroósmosis produce un perfil plano en la disolución" a diferencia del perfil parabólico del flujo en ! cuyo origen es la presión /ebido a esto" el flujo electroosmótico no contribuye de manera significativa al ensanchamiento de banda !a velocidad de flujo electroosmótico es" en general" mayor que las velocidades de migración de los iones individuales y llega a ser el mecanismo de bombeo de la fase móvil que arrastra a todas las partículas" tanto las cargadas positiva y negativamente como las neutras hacia el mismo e&tremo del capilar de modo que todas pueden detectarse al pasar


por un punto com%n /e esta forma" la velocidad de un ion es la suma de la velocidad de migración y de la velocidad de flujo electroosmótico'

v =( %e + %eo ) & /e esta forma el orden de elución es el siguiente' $rimero los cationes rápidos" después los cationes lentos" todas las especies neutras en una %nica zona seguidos de los aniones lentos? finalmente aparecen los aniones más rápidos 3in embargo" es posible que a veces la velocidad del fluo electroosmótico no sea lo bastante grande como para superar la velocidad a la que se mueven los aniones hacia el ánodo y en este caso" estas especies se desplazarán hacia el ánodo y no hacia el cátodo" como se puede observar en la figura adjunta El flujo electroosmótico se puede invertir aadiendo un tensoactivo catiónico al tampón para que se absorba sobre la pared capilar y quede cargada positivamente Esto se usa para acelerar la separación de los aniones 3i se desea evitar el flujo electroosmótico se recubre la pared del capilar con un reactivo como el trimetilclorosilano" para eliminar los grupos silanol de la superficie e- En el siguiente dibujo$ correspondiente a un capilar de electroforesis$ sit5e los iones que se indican en el sentido l"gico de la migraci"n 7acia el cátodo$ explicando brevemente el fundamento de esta tcnica. !a técnica es la electroforesis capilar que es una técnica que se basa en la diferente velocidad de migración de las especies cargas en una disolución amortiguadora a la que se aplica un campo eléctrico constante /ebido a la suma de la velocidad de migración y el flujo electroosmótico los cationes emigran hacia el cátodo (polo *) de una forma más rápida que las especies neutras (que aparecen todas juntas) y estas más rápido que los aniones" siempre teniendo en cuenta la relación q.m $or lo tanto" la primera especie será el catión de pequeo tamao" luego el catión mayor" luego la especie neutra" a continuación el anión de menor tamao y finalmente el anión de mayor tamao f.- Explicar brevemente el funcionamiento de la electroforesis capilar. Dibujar un diagrama esquemático de un equipo de electroforesis capilar de )ona$ indicando sus componentes. f.%- Electroforesis capilar. Fundamentos$ instrumentaci"n ! aplicaciones. :undamento4 Es un método de separación que se basa en la diferente velocidad de migración de las especies cargadas en una disolución amortiguadora a la que se aplica un campo eléctrico constante 3e lleva a cabo inyectando una muestra en una disolución tampón alojada en un tubo estrecho o en un medio soporte poroso y plano El potencial eléctrico que


se aplica a continuación a la disolución tampón impulsa a los iones de la muestra a migrar hacia un electrodo u otro $ara que se produzca la separación es imprescindible que el analito tenga carga y la migración dependerá del tamao y de la forma del ion y de la viscosidad del medio por lo que las separaciones se basan en la relación q.m de los analitos !a electroforesis se puede dar en dos versiones Electroforesis convencional y electroforesis capilar !a convencional se lleva a cabo sobre un gel semisólido y poroso donde se disponen las muestras y tras el paso de la corriente se tie Es muy usada en el campo de la bioquímica" pero es lenta y difícil de automatizar !a electroforesis capilar permite separaciones con vol%menes pequeos y con una elevada resolución ;nstrumentación4 !a instrumentación es sencilla' #n capilar de sílice fundida relleno de un tampón conecta dos recipientes con el mismo tampón y dos electrodos de platino !a introducción se lleva a cabo por un e&tremo y la detección por el otro e&tremo 3in embargo" como los vol%menes de muestra son pequeos hay dificultades en la introducción de la muestra y en la detección * Introducción de la muestra: !os métodos más frecuentes son la inyección electrocinética y la inyección por presión * =nyección electrocinética' #no de los e&tremos del capilar se coloca en un recipiente con la muestra y se aplica un potencial durante un tiempo determinado" entrando la muestra en el capilar debido a los fenómenos de migración iónica y de flujo electroosmótico + continuación" el electrodo se introduce en la disolución tampón El problema de esta técnica es que introduce una mayor cantidad de los iones más móviles * =nyección por presión' El e&tremo del capilar se coloca momentáneamente en un recipiente con la muestra y se introduce esta por diferencia de presión 3e introducen todos los iones por igual pero no puede utilizarse en capilares rellenos de gel * Detección: !os detectores son semejantes a los de 7$!" aunque hay que tener en cuenta que" debido a la diferente velocidad de migración" las bandas atraviesan el detector a diferentes velocidades por lo que las áreas de los picos dependen de los tiempos de retención * Iétodos de absorbancia' para mejorar la sensibilidad de las medidas de absorbancia se han diseado varios métodos $or ejemplo doblar el e&tremo del capilar en z" formar una burbuja cerca del e&tremo del capilar o depositar en el e&tremo del capilar un recubrimiento de plata reflectante * /etección indirecta' 3e usa en especies que debido a su pequea absortividad molar" resultan difíciles de detectar sin derivatización 3e incorpora un ion cromóforo al tampón de la electroforesis haciendo que el detector reciba una seal constante uando el analito desplaza a estos iones la seal desciende y se puede cuantificar


*

/etección por fluorescencia' =ncrementa la sensibilidad y la selectividad para los analitos fluorescentes * /etección electroquímica' $uede ser conductimétrica y amperométrica * /etección por espectrometría de masas' !os procesos más empleados son la electronebulización y el bombardeo por átomos rápidos 3e usa mucho para la separación de proteínas y fragmentos de +/8 +plicaciones' 3e puede llevar a cabo de cuatro maneras diferentes' * Electroforesis capilar de zona (PE)' 3e pueden separar iones pequeos o moléculas' =ones pequeos' En las separaciones de cationes estos se mueven hacia el cátodo mientras que en las separaciones de aniones se invierte el flujo electroosmótico tratando las paredes del capilar con una sal de alquilamonioEsta es la técnica más usada en la actualidad para separar iones pequeos Ioléculas' 3e pueden separar moléculas de pequeo tamao siempre que sean cargadas o puedan derivatizarse para dar un ion * Electroforesis capilar en gel (-E)' $ara separar proteínas" fragmentos de +/8 y oligonucleótidos que tienen la misma carga pero diferente tamao * =sotacoforesis capilar (=:$) 3irve para separar cationes o aniones" pero no ambos a la vez * =soelectroenfoque capilar' $ara separar especies anfóteras como aminoácidos g- Explicar brevemente el fundamento de la cromatografía capilar electrocintica micelar. 3irve para separar solutos no cargados de bajo peso molecular En esta técnica se introduce un tensioactivo (dodecil sulfato de sodio) en el que se forman micelas que son una fase estable que es capaz de alojar compuestos no polares en el interior solubilizando así compuestos apolares uando se introduce una muestra los distintos componentes se distribuyen entre la fase acuosa y el interior de la micela en función de la polaridad' si la polaridad del soluto es alta se queda en la fase acuosa y si es baja se queda en la micela


Tema =. 79todos automati"ados de análisis 1. reguntas de !erdadero o falso: !os análisis automáticos de análisis" al ser más rápidos" posibilitan el control continuo de la composición de los productos mientras se van fabricando y así modificar las condiciones para mejorar la calidad o el rendimiento En el procedimiento @=+ el tiempo de la operación debe ser reproducible porque pequeas variaciones en el mismo pueden producir graves alteraciones en el resultado En el procedimiento @=+ las medidas se realizan en condiciones de estabilidad

En el procedimiento @=+ cuando se detecta la seal" no se ha alcanzado el equilibrio físico ni químico En los métodos @=+" ning%n tipo de separación llega a ser completa" pero esto no tiene importancia porque los patrones y las muestras se tratan e&actamente igual En un sistema @=+" la dispersión está influenciada por la velocidad de bombeo !a dispersión en @=+ se ve incrementada con la disminución del volumen de la muestra El analizador centrífugo usa una centrífuga para mezclar las muestras con un reactivo" y luego transferirlas a las cubetas para las correspondientes medidas por conductividad térmica En las tiras reactivas multicapa" la capa difusora refleja la radiación procedente de una fuente" que atraviesa las capas de reactivo y el soporte" hasta el detector de un fotómetro

#. reguntas de desarrollo:

Verdadero. Es una de las enta+as de los m"todos de análisis automáticos +unto con a6orrar costes laborables y dar resultados más reproducibles. Falso. 9o es necesario que los tiempos de operación sean reproducibles. Falso. 9o es necesario que se 6aya alcan)ado el equilibrio porque los interalos de tiempo son muy reproducibles. Verdadero. 9o importa que se 6aya alcan)ado el equilibrio Verdadero. Solo es importante controlar la temperatura y los caudales de la muestra y de los patrones que mantengan. Verdadero. 0tros parámetros que influyen son el olumen de muestra y la longitud del tubo. Verdadero. &. Falso. #as medidas son por fotometría.

Verdadero. Es una de las tres funciones de la capa difusora. #as otras dos son esparcir la muestra y retener c"lulas y partículas.


a-Describir las ventajas e inconvenientes de los mtodos de análisis automáticos. !os métodos de análisis automáticos tienen tres ventajas" que llevan asociados inconvenientes' 2* =mportante ventaja económica al ahorrar costes laborales" aunque para ello se requiere que el volumen de trabajo sea grande como para compensar la inversión de capital y el gran esfuerzo que hay que hacer para que trabaje a pleno rendimiento omo consecuencia se necesita mucho menos personal cualificado" aunque se necesitan supervisores con una preparación mucho mayor 9* 3u velocidad es mayor que en los dispositivos manuales" lo que posibilita el control continuo de la composición de los productos mientras se van fabricando" y a su vez" esta información permite modificar las condiciones para mejorar la calidad o el rendimiento Esto es muy %til en medicina" donde el control continuo puede servir para establecer las condiciones normales de los pacientes y su respuesta a la terapia A* on un buen analizador se pueden conseguir resultados" durante largos periodos de tiempo" más reproducibles que con un instrumento manual El aumento en la precisión se debe" en primer lugar" a que las máquinas no se fatigan" y en segundo lugar a la elevada reproducibilidad de las medidas de los tiempos en las sucesivas operaciones de los instrumentos automatizados" que hace que no sea necesario que la reacción sea completa siempre que las muestras y los patrones se traten por igual b-0nálisis por in!ecci"n de flujo. Fundamento$ instrumentaci"n ! aplicaciones. Es un método de análisis derivado de los métodos de flujo segmentado =nstrumentación' El esquema más simple es el sistema para detección de iones cloruro onsiste en una bomba peristáltica que impulsa un reactivo colorimétrico hasta una válvula que permite la inyección de la muestra + continuación" se pasa por un reactor en forma de serpentín donde se origina un compuesto coloreado que atraviesa un fotómetro * Sistema de transporte de muestras y reactios4 7abitualmente la disolución circula a través del sistema por medio de una bomba peristáltica que es un dispositivo que comprime por medio de unos rodillos un fluido que se encuentra en el interior de un tubo logrando una corriente permanente de fluido a través del tubo Este diseo produce un flujo relativamente libre de impulsos * ;nyectores de muestra y detectores4 3on similares a los de 7$! Es vital que la inyección de la muestra sea rápida" en bolus" y que no alteren el flujo de la corriente portadora !a forma más normal de introducir la muestra es por una válvula de inyección que se gira permitiendo el paso de fluido o de la muestra alternativamente * Separaciones en :;A4 En las separaciones @=+ no se consigue la separación completa" pero como los patrones y las muestras se tratan por igual" no importa 3olo es importante controlar que la temperatura y los caudales de las muestras y de los patrones


se mantengan 3e pueden realizar tres tipos de separaciones' /iálisis" difusión de gases y e&tracción @undamento' =nmediatamente después de inyectar la muestra" la zona de muestra tiene un perfil de concentración rectangular" pero al ir circulando en el interior del tubo tiene lugar la dispersión o ensanchamiento de la zona !a dispersión se mide fácilmente inyectando un patrón y calibrando mediante la ley de !amer*eer En la dispersión influyen tres variables' El volumen de muestra (para vol%menes grandes la dispersión es la unidad porque no se mezclan suficientemente la muestra y el portador)" la longitud del tubo y la velocidad de bombeo +plicaciones' /ependen del tipo de dispersión' * Aplicaciones de la dispersión limitada4 3e refieren a dispersiones de 2 a A 7an tenido aplicación como sistemas de introducción de la muestra a alta velocidad en sistemas que usan como sistemas de detección la absorción y la emisión atómicas y el plasma de acoplamiento inductivo !a inyección con dispersión limitada también se usa con detectores electroquímicos como los selectivos a iones y los microelectrodos voltamperométricos * Aplicaciones de la dispersión media4 3e refieren a dispersiones de A a 20 #n ejemplo es un sistema de dispersión para la determinación colorimétrica de calcio * M"todos de flu+o detenido4 !a dispersión es casi nula cuando el flujo se detiene 3e usan para medidas cinéticas En este caso el flujo se detiene cuando la mezcla de reacción está en la cubeta de flujo * ?ariaciones por inyección en flu+o4 En este caso la mezcla inyectada se mezcla con el portador en un cámara de mezcla que da lugar a una gran dispersión + continuación" se mezcla con el reactivo que contiene un indicador c.- Describa brevemente los tres tipos de separaciones que se pueden llevar a cabo en sistemas de in!ecci"n en flujo. c.%- Explicar brevemente la separaci"n por diálisis ! difusi"n de gases. En las separaciones @=+ no se consigue la separación completa" pero como los patrones y las muestras se tratan por igual" no importa 3olo es importante controlar que la temperatura y los caudales de las muestras y de los patrones se mantengan 3e pueden realizar tres tipos de separaciones' * /iálisis' 3irve para separar iones inorgánicos como cloruro y sodio o pequeas moléculas orgánicas como la glucosa (proceso que suele preceder a la determinación de estas moléculas en sangre o en suero) ya que estas difunden rápidamente a través de membranas hidrofílicas de acetato o nitrato de celulosa !as moléculas difunden hacia una corriente aceptora que tiene un reactivo que reacciona con el analito formando un compuesto colorimétrico que se detecta fotométricamente * /ifusión de gases' Es una técnica muy selectiva para analitos gaseosos Es parecida a la diálisis" pero la membrana es de un material hidrofóbico microporoso como el teflón


*

#n ejemplo es la determinación de carbonato total en una disolución !a muestra se inyecta en una corriente de ácido sulf%rico y el dió&ido de carbono liberado difunde hasta la corriente aceptora que tiene un indicador ácido.base que se detecta colorimétricamente E&tracción' 3irve para separar cationes 3e mezcla la muestra con un líquido orgánico que contiene un agente complejante que se mezclan en un serpentín + continuación" se separan los dos líquidos inmiscibles !a fase orgánica va al detector y la acuosa se desecha

d- Definir el trmino de la dispersi"n en F80$ así como las variables que influ!en en la misma. =nmediatamente después de inyectar la muestra" la zona de muestra tiene un perfil de concentración rectangular" pero al ir circulando en el interior del tubo tiene lugar la dispersión o ensanchamiento de la zona El perfil resultante depende de dos fenómenos' * !a convección asociada al flujo laminar ya que el centro del fluido avanza más rápidamente que el líquido de las paredes * !a difusión $uede ser de dos tipos' radial o perpendicular a la dirección del flujo y longitudinal o paralela al flujo (que no es importante en los tubos estrechos) /ebido a la difusión" la muestra termina adquiriendo una distribución simétrica

!a dispersión se define como' c0 ( = c donde c0 es la concentración inyectada y c es la concentración que llega al detector !a dispersión se mide fácilmente inyectando un patrón y calibrando mediante la ley de !amer* eer En la dispersión influyen tres variables' El volumen de muestra (para vol%menes grandes la dispersión es la unidad porque no se mezclan suficientemente la muestra y el portador)" la longitud del tubo y la velocidad de bombeo e- ;ealice un esquema de un sistema de flujo 2indicando columnas$ detectores$ válvulas ! demás elementos necesarios4 diseado para la determinaci"n de calcio en muestras de lec7e ! basado en medidas de fotometría de llama. Explique el fundamento ! funcionamiento de este sistema F80. Dato: El calcio forma un complejo coloreado con ocresoftaleína complexona a p* <. 3e utilizaría un sistema de dispersión media que tendría el siguiente esquema'


En él" se usa un tampón de bóra& (p7 5 20) y un reactivo cromogénico (o*cresoftaleína) que se mezclan antes de la inyección de la muestra en un serpentín para mezcla (+ en la figura) + continuación" se inyecta la muestra mediante una válvula y se mezcla con la fase móvil en otra columna () que va al detector fotométrico f- ,a determinaci"n de tra)as de 7ierro en al5mina se llev" a cabo admitiendo la absorbancia del complejo 7ierro-sulfocianuro$ Fe2/'4 # 9- $ en medio ácido empleando un sistema de análisis por in!ecci"n de flujo 2F804. ,as figuras siguientes muestran el sistema F80 utili)ado ! las seales obtenidas para el calibrado ! dos muestras. Explicar las partes del sistema F80 ! calcular la concentraci"n de 7ierro en las muestras anali)adas.

7ay dos disoluciones !a primera contiene sulfocianuro" que es el agente complejante que se va a mezclar con la muestra problema en el inyector $or otro lado" viene una disolución tampón que mantiene un p7 ácido +mbas disoluciones se unen y atraviesan un reactor en serpentín que lleva finalmente al detector $ara determinar la cantidad de hierro de cada una de las dos muestras problemas se hace una recta de regresión y se interpola en esta +bsorbancia Q@eR 0">B 0"9FB 0"99B 0"2B

7ierro (ppm) 2 0"C 0"> 0"9

5 *0"2GAAA S 9"CCCCT +bs

$or lo tanto" la muestra 2 contiene 0"CGA ppm de hierro y la muestra 9 contiene 0"> ppm de hierro g.- Dado el siguiente esquema F80$ análisis por in!ecci"n en flujo$ indicar cuáles son las partes 0$ 1$ ' ! D ! para qu se emplean dic7as partes. g.%- +roponga un sistema F80 para la determinaci"n de una muestra = por reacci"n química con dos reactivos ; ! ;% que no pueden permanecer me)clados por ra)ones de


inestabilidad. 8ndique los canales$ serpentines ! puntos de confluencia necesarios ! comente brevemente el proceso. +' omba peristáltica' =mpulsa los reactivos ' =nyector de muestra ' $unto de mezcla /' Deactor en serpentín

7- &bserve los esquemas de montaje F80 de la figura adjunta. &rdnelos$ de forma ra)onada$ en sentido creciente de dispersi"n de la muestra in!ectada. !a dispersión será menor reduciendo la distancia entre inyector y detector" disminuyendo la velocidad y aumentando el volumen de muestra $or lo tanto" en orden creciente" de menor a mayor dispersión será' dUaUbUc i- Explique brevemente el fundamento del análisis con tiras reactivas$ así como su utilidad. 0!5dese de un dibujo esquemático. Es un método para realizar las distintas etapas de un análisis cuantitativo de forma automática en tiras individuales formadas por varias capas de reactivos colocadas sobre unas placas transparentes desechables 3e coloca una gota de la muestra en la parte superior de la tira haciendo que difundan los componentes y el analito interacciona con los reactivos dando productos coloreados que se cuantifican por fotometría de reflectancia 3e usa en la determinación de distintos metabolitos de la sangre * Estructura de las tiras' onstan de un soporte transparente" una o varias capas de reacción" una capa reflectora y una capa difusora o medidora #n esquema es la tira para la determinación de glucosa en suero !a tira tiene tres capas' #a capa difusora o medidora4 3obre ella se coloca la muestra :iene tres funciones' Deflejar la radiación procedente de una fuente" esparcir la muestra formando una capa uniforme y retener células" cristales y partículas #a capa de reactio4 ontiene un indicador redo&" la enzima glucosa o&idasa" pero&idasa y un tampón a p7 5 B El colorante o&idado absorbe a >OB nm Soporte transparente4 Es una placa rígida de plástico * =nstrumentación' !a medida se basa en la fotometría de reflectancia" la potenciaometría selectiva de iones y la fluorescencia :otómetro de reflectancia: Iide la reflectancia difusa de una tira reactiva !a muestra se ilumina por una radiación de una longitud de onda que absorba el analito formando un ángulo de >B1 con la tira (para minimizar la refle&ión frontal de la superficie) !os datos se e&presan como porcentaje de reflectancia

Cuestiones de exámenes de MSQA

Recommend Documents