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Cromatografía (espinaca)
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Cromatografía (espinaca)
Tenemos espinaca la cual vamos a extraer su pigmento por el método se maceración sin agregar algún disolvente hasta tenerla de manera cómo masa le agr...
Author:
Nayelli Banda
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CULTIVO DE LA ESPINACA
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Proyecto de Espinaca
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Cromatografía en Columna “Pigmentos Clorofílicos de La Espinaca”
Cromatografía en Columna “Pigmentos Clorofílicos de La Espinaca”
2003. FIAGRO. Manual de Producción de Lechuga y Espinaca Orgánica
Descripción completa
Determinacion de Hierro en Muestra de Espinaca Por El Metodo Espectrofotometrico
Practica 13 Aislamiento de DNA de guayaba o espinaca y su caracterización espectrofotométrica.”
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Determinacion de Hierro en Muestra de Espinaca Por El Metodo Espectrofotometrico
Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Laboratorio de iencias !"sicas ### $romatogra%&a 'espinaca() Alumna* !anda Sandoval Sandoval Na+elli Na+elli ,ocel+n -rupo* ./0/ 1ro%esora* 1ro%esora* 23 Ma3 Estela ,iménez Encarnación
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4esumen* 5enemos espinaca la cual vamos a extraer su pigmento por el método se maceración sin agregar alg6n disolvente 7asta tenerla de manera cómo masa le agregamos acetona para empezar a disolverla m"s8 lo agregamos a un embudo de decantación donde +a posteriormente agregamos éter de petróleo8 +a 7aciendo los lavados se de9ara en reposo reposo con sul%ato de sodio :ue %unciona como absorbente8 en ese tiempo del reposo se 7ar" una suspensión preparada con gel de s&lice + acetato de etilo8 se preparan ;0 placas :ue cada una ser" para cada disolvente3
empacamos la columna adecuadamente '7exano8 algodón8 gel de s&lice para columna8 sal8 pigmento vegetal + la mezcla de elu+entes +a elegida posteriormente( esperamos :ue el pigmento ba9e ba9e a punto de salir de la columna para poder colocar un mililitro en los tubos de ensa+o para volver a 7acer la cromatogra%&a en capa =na punteando en cada placa el extracto principal principal + el extracto obtenido por la cromatogra%&a en columna :ue se encuentra en los tubos de ensa+os +a terminado esto solo seleccionamos el elu+ente m"s adecuado3 Abstric ?e 7ave spinac7 @7ic7 @e @ e are going to extract its pigment b+ t7e maceration met7od @it7out adding some solvent until 7aving it in a @a+ as @e add acetone to begin to dissolve it more8 @e add it to a %unnel o% decanting @7ere alread+ later @e add et7er o% petroleum8 alread+ doing 57e @as7es are allo@ed to stand @it7 sodium sul%ate as an absorbent8 at @7ic7 time a suspension prepared @it7 silica gel and et7+l acetate is made8 ;0 plates are prepared @7ic7 @ill eac7 be %or eac7 solvent3 aving rested %or some time @e @ill =lter t7e extract o% t7e spinac78 @e @ill tap t7e plates and let eac7 solvent go up t7e plate3 ?e ?e c7oose t7e corresponding eluent to return to maBe maBe t7in la+er c7romatograp7+8 c7romatograp7+8 so @e can c7oose t7e most suitable eluent to continue @it7 column c7romatograp7+> ?e pacBed t7e column properl+ '7exane8 cotton8 silica gel %or column8 salt8 vegetable pigment and t7e eluent mixture alread+ c7osen later(
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in t7e =nis7ed test tubes8 t7is onl+ selects t7e most suitable eluent3
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Db9etivos Extraer los pigmentos de un producto natural asignado 'espinaca( 7aciendo uso de la técnica de m"s adecuado3 Elegir mediante la capa =na el elu+ente o mezcla del elu+ente para separación los di%erentes pigmentos de la espinaca espinaca por cromatogra%&a3 eri=car en la cromatogra%&a capa =na :ue se logró la separación de pigmentos en cromatogra%&a de columna3 ipótesis Se seleccionar" seleccionar" un buen sistema de elucción elucción a partir partir de la cromatogra%&a en capa =na por lo tanto se obtendr" los compontes vegetales 'cloro=lo( de la espinaca promedio de la cromatogra%&a en columna3 Antecedentes* Un rasgo caracter&stico de la cromatogra%&a es la presencia de dos %ases> dispuestas de tal manera :ue mientras una permanece estacionaria dentro del sistema '%ase estacionaria(8 la otra se desplaza a lo largo de él '%ase móvil(3 La clave de la separación en cromatogra%&a es :ue la velocidad con la :ue se mueve cada sustancia depende de su a=nidad relativa por ambas %ases 'e:uilibrio de distribución(3 En el experimento de 5s@ett8 5s@ett8 la separación de los pigmentos vegetales se logró gracias gracias a :ue cada uno de ellos ten&a una a=nidad di%erente por las %ases3 En general8 los componentes m"s a=nes a la %ase estacionaria avanzan lentamente 'm"s retenidos( mientras :ue los m"s a=nes a la %ase móvil 'menos retenidos( se mueven con ma+or rapidez3 1or consecuencia8 el medio cromatogr"=co 'columna8 placa o papel( %unciona como un controlador de la velocidad de cada sustancia :ue constitu+e la mezcla8 logrando as& su separación + mediante el uso de un detector8 detector8 su caracterización :u&mica3 Aun:ue los principios %undamentales son los mismos8 se acostumbra clasi=car los métodos cromatogr"=cos seg6n el estado %&sico de la %ase móvil* romatogra%&a l&:uida3 La %ase móvil es un disolvente o mezcla de disolventes + la %ase estacionaria un sólido :ue interact6a con las sustancias :ue se desea separar 'cromatogra%&a l&:uidoCsólido(8 o bien un l&:uido inmiscible con la %ase móvil8 depositado en la super=cie de un sólido 'cromatogra%&a l&:uidoCl&:uido(3 Esta %orma de cromatogra%&a puede realizarse con di%erentes arreglos experimentales* en columna8 en capa delgada o en papel3 En el primer caso8 la %ase estacionaria se encuentra rellenando un tubo> en el segundo8 se dispersa sobre una l"mina de vidrio o aluminio %ormando un lec7o de espesor uni%orme> en la cromatogra%&a en papel8 la %ase estacionaria es la solución acuosa contenida en el interior de las celdas %ormadas por las =bras de la celulosa8 + es por tanto una %orma de cromatogra%&a l&:uidoCl&:uido romatogra%&a romatogra%&a de gases3 En este caso la %ase %as e móvil es un gas inerte '7elio o nitrógeno( + la %ase
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paredes de un tubo mu+ delgado '03GHmm de di"metro( di"metro( + largo '7asta ;00m(3 Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares + proporcionan la ma+or capacidad de separación3 Ie acuerdo con el mecanismo de retención8 la cromatogra%&a se puede clasi=car en los siguientes tipos* adsorción 'normal8 de %ase reversa( partición l&:uidoCl&:uido l&:uidoCl&:uido intercambio iónico permeación sobre gel de a=nidad Las "reas de aplicación son mu+ diversas + abarcan pr"cticamente todas las actividades en las :ue interviene la :u&mica8 por e9emplo* se emplea en* El an"lisis de drogas + %"rmacos en uidos biológicos como la saliva8 la sangre8 la orina> Seguir la trans%ormación de las sustancias responsables de la transmisión neurológica> Ieterminar la presencia de contaminantes en el medio ambiente> Iesci%rar la composición de los combustibles %ósiles> 4ealizar el control de calidad de los productos :u&micos + %armacéuticos manu%acturados> en =n8 la lista de e9emplos es interminable3 romatogra%&a en capa =na La cromatogra%&a en capa =na se basa en la preparación de una capa8 uni%orme8 de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte3 Los re:uisitos esenciales son8 pues8 un adsorbente8 placas de vidrio8 un dispositivo :ue mantenga las placas durante la extensión8 otro para aplicar la capa de adsorbente8 + una c"mara en la :ue se desarrollen las placas cubiertas3 Es preciso también poder guardar con %acilidad las placas preparadas + una estu%a para activarlas3 La %ase móvil es es l&:uida + la %ase estacionaria consiste en un sólido3 La %ase estacionaria ser" un componente polar + el elu+ente ser" por lo general menos polar :ue la %ase estacionaria8 de %orma :ue los componentes :ue se desplacen con ma+or velocidad ser"n los menos polares3 1olaridad de los compuestos org"nicos en orden creciente* 7idrocarburos J ole=nas J 6or J cloro J nitro J alde7&do J ester J alco7ol J cetonas J aminas J "cidos J amidas La cromatogra%&a en capa =na presenta una serie de venta9as %rente a otros métodos cromatogr"=cos 'en columna8 en papel8 en %ase gaseosa( +a :ue el utilla9e :ue precisa es m"s simple3 El tiempo :ue se necesita para conseguir las separaciones es muc7o m uc7o menor + la separación es generalmente me9or3 me9or3 1ueden usarse reveladores corrosivos8 :ue sobre s obre papel destruir&an el cromatograma3 El método es simple + los resultados son %"cilmente reproducibles8 lo :ue 7ace :ue sea un método adecuado para =nes anal&ticos3 Al realizar la elección del adsorbente adsorbente se debe tener en cuenta el tamaKo de las part&culas del adsorbente8 cuanto m"s =namente dividido dividido esté ma+or ser" su ad7esión al soporte8 aun:ue también se le puede aKadir un ad7erente3 En la elección del elu+ente inu+en varios %actores* 1recio3 1ureza3 No utilizar mezclas de elu+entes 'reproducibilidad(3 No utilizar compuestos mu+ vol"tiles3
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La elección del elu+ente se realiza de %orma emp&rica3 a+ :ue estudiar la polaridad del componente componente + probar con elu+entes cada vez menos polares3 -eneralmente se utiliza como reactivo revelador +odo8 el cual %orma comple9os coloreados con los componentes org"nicos 'con tonos amarilloCmarrón(8 pero las manc7as desaparecen con el tiempo con lo :ue es conveniente seKalar las manc7as aparecidas3 Dtro reactivo revelador bastante utilizado es el "cido sul%6rico8 :ue reacciona con los componentes org"nicos produciendo manc7as negras3 Sin embargo debe tenerse en cuenta :ue el tamaKo de las manc7as no est" relacionado con la cantidad de componente separado3
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1ara me9or claridad vamos 7acer de manera individual cada proceso para llevar acabo la cromatogra%&a3 1roceso ;3 Material Mortero con pistilo 1robeta de H0mL Embudo de decantación /00mL Soporte Universal Anillo de 7ierro Embudo de tallo corto Matraz Erlenme+er ;GHmL Frasco de vidrio
4eactivos ter de petróleo Acetona Sul%ato de Sodio
1asos a seguir* ;3 1esar esar G0gr G0gramo amos s de de espinaca +a limpia + seca3
Dbservar la ilustración ;
#lustración ;
G3 Empeza Empezarr a macera macerarr la espinaca sin ning6n disolvente3
Dbservar la ilustración G
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.3 En el el emb embud udo o de de decantación el éter de petróleo ;00mL 3 Dbservar la ilustración .
#lustración .
H3 Filtra Filtramos mos el extra extracto cto 'acetona + espinaca( + lo vertimos en el embudo de decantación3
Dbservar la ilustración H
#lustración H
3 Mezcla Mezclarlo rlo de de %orma %orma :ue :ue al terminar se pueda distinguir el extracto3 Dbservar la ilustración
#lustración
3 olver a 7acerlo 7acerlo a7ora con dos lavados de GHmL de acetona3
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Material Frasco 5ransparente ranspar ente 1orta Db9etos 1apel aluminio 1apel Filtro 1ipeta -raduada ;0mL apilares
4eactivos -el de S&lice para capa =na ter de petróleo exano 5olueno !enceno loro%ormo loruro de etileno Acetato de etilo Acetona Etanol Metanol
Pómo se preparaQ ;( En el %rasco coloca colocarr acetato acetato de etilo + gel de s&lice s&lice tapar tapar + agitar bien para :ue los componentes se incorporen de manera 7omogénea3 G( Metere Meteremos mos las las placas placas de9ando libre aproximadamente ; cm las limpiamos de los lados + el extremo 'Metemos dos placas al ingresarlas al Ilustración 8 %rasco(3
Dbservar la ilustración O
/( Lo colocamos colocamos dentro dentro de la estu%a para activar las placas por /0 min3 Dbservar la ilustración R Ilustración 9
.( Filtra Filtramos mos el extra extracto cto :ue :ue de9amos reposado con el
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( Lo adent adentram ramos os a los los ;0 c"maras cada una con ;0mL de cada sustancia3
Dbservar la ilustración ;G
Ilustración 12
( Antes Antes :ue el diso disolve lvente nte llegue al =nal del gel de s&lice debemos sacar la placa3
Dbservar la ilustración ;/ Ilustración 13
O( Elegimos Elegimos algunos algunos disolventes disolventes para para poder mezclaros mezclaros de los cuales tenemos :ue guiarnos por la polaridad de la sustancia para volver 7acer la cromatogra%&a cromatogra%&a en capa =na + poder elegir el m"s adecuado3 Dbservar la ilustración ;.
Ilustración 14
Las combinaciones adecuadas son las siguientes* ter de petróleo Acetona exano Acetato de etilo El cual se 7ar"n las siguientes mezclas 'HH(8 'R;(8 ';R(8 'OG(8 'GO(8 '/(8 '/(8 '.( + '.(
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4esultados 4esultados de ter de 1etróleo m"s acetona3
Dbservar la
ilustración ;H
Ilustración 15
4esultados 4esultados de exano + Acetato de etilo3 ilustración ;
Dbservar la
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Ilustración 17
romatogra%&a en olumna Material !ureta Matraz Erlenme+er Algodón idrio de 4elo9 Matraz de bola Embudo Esp"tula arilla 1ipeta -radilla
4eactivos Sal exano Acetato de etilo -el de s&lice para columna
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!3 Se aden adentra tra un peda pedazo zo de algodón sin de9ar alguna burbu9a de aire3
Dbservar la ilustración ;R
Ilustración 19
3 Se pesa pesa ;G ;G gramos gramos de gel gel de s&lice en columna3
Dbservar la ilustración G0
Ilustración 20
I3 En el matraz matraz de bola de ;00mL ;00mL se agrega agrega el gel de s&lice s&lice + 7exano aproximadamente medio dedo arriba del gel de s&lice3 on a+uda de un embudo lo agregamos con una constante agitación3 Dbservar la ilustración G;
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La ilustración 27 nos muestra como el extracto recorrerá por toda la bureta Ilustración 25
#3 olo oloca carr Gm GmL del del extracto alrededor de toda la sal3
Dbservar la ilustración GH
,3 ertimos la mezcla '7exanoC acetato de etilo( en la bureta + se volver" a de9ar en el goteo3
Dbservar la ilustración G Ilustración 26
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Ilustración 29
Dbservar la ilustración GR del lado dereco se encuentra el punteo de los tubos de ensa"o " del lado i#$uierdo el punteo del extracto ori!inal%
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UES5#DNA4#D IE 4DMA 4DMA5D-4AFA 5D-4AFA ¿A qué grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?
Carotenoides y xantofilas. ¿A qué se debe que estos compuestos sean coloridos?
Carotenoides: son los responsables de la gran mayoría de los colores amarillos, anaranjados y rojos pres entes en los alimentos vegetales. Entre mayor sea la intensidad de color, mayor será el contenido de carotenoides. Xantofilas: son compuestos compuestos químicos pertenecientes al grupo de los carotenoides que poseen uno o más átomos de oxígeno en su estructura. e encuentran de forma natural en muc!as plantas y presentan tam bi"n acci#n fotosint"tica. Estos pigmentos, más resistentes a la oxidaci#n que las c lorofilas, proporcionan sus tonos amarillentos y pardu$cos a las !ojas secas. Explique la diferencia entre cromatografía de adsorción y partición.
Cromatografía de partici#n: %a mayoría de las sustancias tendrán distinta solubilidad en diferentes solve ntes. i una sustancia se pone en contacto con dos solventes que no se me$clan entre sí, se distribuirá e ntre los dos solventes en relaci#n a su solubilidad en cada uno. e llama efecto de partici#n a la distribuci #n de un soluto entre dos o más solventes que no se s e me$clan. El solvente o el líquido que es atrapado po r el medio del sost"n sea este papel, gel, sílice o al&mina, se llama fase estacionaria. 'l solvente revelad or se le llama fase m#vil. Cromatografía de adsorci#n: %a cromatografía de adsorci#n o liquido(s#lido, es la forma clásica de croma tografía de líquidos. %a adsorci#n se lleva a cabo cuando !ay una c oncentraci#n más alta en la superficie de un s#lido que en la soluci#n circundante. %a adsorci#n se refiere al enlace de una sustancia a la superf icie de otra. )eneralmente los adsorbentes usados en cromatografía son el carb#n mineral, el gel de sílic e, y la al&mina. ¿Cuáles son las enta!as y desenta!as de la cromatografía en capa fina e n comparación co n la cromatografía en columna?
Cromatografía en columna: %as separaciones en la cromatografía en columna pueden reali$arse por repa rto, adsorci#n o intercambio i#nico. El estado físico del adsorbente !a de ser de tal manera que permita el empaquetamiento empaquetamiento uniforme de la columna y el flujo libre de disolvente a trav"s de ella. ella. Cromatografía en capa fina: Cromatografía en papel y electro cromatografía. En todos los casos se emple
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Estos adsorbentes deben tener las siguientes características: 3ama4o 3ama4o de partícula peque4o o -iámetro de poro grande o 5rea superficial grande o 6omogeneidad o 'lta pure$a o #acer una lista de los eluyentes usados com$n menteen cromatografía en columna y capa delgada en orden creciente de polaridad • • • • •
7ter de petr#leo 6exano 3olueno 8enceno Cloroformo
• • • • •
Cloruro de metilo 'cetato de etilo 'cetona Etanol 9etanol
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m o/ i l as
iónico' exclusión'a+nidad as-l,$uido *L as-sólido *
¿Cuál es la función de la fase móil y como se llea a cabo la separación en la cromatografí a de adsorción?
u funci#n es eluir los componentes de la me$cla a separar a trav"s de la fase estacionaria. %a crom atografía de adsorci#n se lleva a c abo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observará l a eluci#n de los componentes de la me$cla, los cuales serán eluidos por el disolvente, que es la fase m#vil. ¿Cómo se prepara la papilla para la cromatografía en capa fina?' por lo menos dos
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%a polaridad del eluyente debe ser mayor Con relación al
R x & ¿Cuándo se usa el R x
en cromatografía en capa delgada?
Cuando no se cuenta con un compuesto con polaridad conocida, y por lo tanto elusi#n conocida, que se pueda usar como referencia en la C.C.-. ¿(ué significa la obtención de
R x
igual a uno?
Aue el compuesto y el eluyente tienen la misma polaridad, incluso !asta mayor la de este <imo. ¿Cuál es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografía en columna?
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P:ué se recomienda 7acerQ or$ue de no ser as, la )ase estacionaria se contraer,a " a!rietar,a% e de be reidratar conmás elu"ente si esto ocurre%
P1or :ué es importante :ue las muestras a separar por cromatogra%&a deban estar lo m"s secas posibleQ ara $ue no inter+era el a!ua con la elución' por medio del disol/ente' d e los
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Pu"l es la aplicación de la cromatogra%&a en placa preparativaQ La elección de un elu"ente ideal para cromato!ra),a en columna%
P2ué di%erencia existe entre cromatogra%&a en capa delgada anal&tica + cromatogra%&a en placa preparativaQ La preparati/a se emplea !eneralmente para ele!ir un elu"ente o me#cl a de elu"entes ideal para cromato!ra),a en columna% La anal,tica "a cuenta c on un elu"ente ideal " re!istra R x es decir' decir' se anali#a la elusión de los
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