Crite rit erios rio s biológ bio lógico icoss en la inte int erpretació rpretación n de los análisis anális is de Ca Campo mp o PATOLOGÍA JORGE CHÁVEZ RIGAÍL Biólogo Ag A g o s t o 2008
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ANÁ A NÁL L ISIS EN FRESCO Para este análisis serán colectados 10 camarones al azar, del sector de la compuerta de salida que serán debidamente embalados sin agua y etiquetados en bolsas plásticas, para ser enviadas al laboratorio lo más rápido posible, en casos en que no sea posible deberán ser colocado en un recipiente con hielo, para preservarlos del calor, y evitar su descomposición. Para desarrollar el análisis de patología, debemos dividir este este análisis en varios puntos de control. CONTROLES EXTERNOS. •
A 10 camarones revisamos su textura, duros, flácidos ó mudados, su coloración, y principalmente si presentan algún tipo de lesión Quitinosa ó Necrosis.
•
Si los Pleópodos Pleópodos están de color amarillo, estos estos animales entrarán entrarán a muda en los días siguientes, se puede confirmar este detalle sí ¨quebramos¨ la punta del rostro esta deberá “sonar” si el camarón esta duro, ó, simplemente se quiebra y se quedará unida a través del nuevo tejido epitelial que se está elaborando, cuando esta saliendo de muda.
CONTROLES INTERNOS.
1.- ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOARIOS. BRANQUIAS. Zoothamium sp, Epistylis sp, Acineta sp, Ascophrys sp, son algunos de los mas importantes protozoarios que atacan las branquias, región oral, cutícula y apéndices, pudiendo ocasionar severas mortalidades en el cultivo, siendo las post larvas las mas afectadas ante el ataque de estos microorganismos. Afectan a la locomoción, alimentación, respiración, pero lo mas importante será determinar cual es la significancia de su presencia, generalmente están relacionados directamente con una mala calidad de los sedimentos y de agua de la piscina.
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ANÁ A NÁL L ISIS EN FRESCO Para este análisis serán colectados 10 camarones al azar, del sector de la compuerta de salida que serán debidamente embalados sin agua y etiquetados en bolsas plásticas, para ser enviadas al laboratorio lo más rápido posible, en casos en que no sea posible deberán ser colocado en un recipiente con hielo, para preservarlos del calor, y evitar su descomposición. Para desarrollar el análisis de patología, debemos dividir este este análisis en varios puntos de control. CONTROLES EXTERNOS. •
A 10 camarones revisamos su textura, duros, flácidos ó mudados, su coloración, y principalmente si presentan algún tipo de lesión Quitinosa ó Necrosis.
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Si los Pleópodos Pleópodos están de color amarillo, estos estos animales entrarán entrarán a muda en los días siguientes, se puede confirmar este detalle sí ¨quebramos¨ la punta del rostro esta deberá “sonar” si el camarón esta duro, ó, simplemente se quiebra y se quedará unida a través del nuevo tejido epitelial que se está elaborando, cuando esta saliendo de muda.
CONTROLES INTERNOS.
1.- ENFERMEDADES CAUSADAS POR PROTOZOARIOS. BRANQUIAS. Zoothamium sp, Epistylis sp, Acineta sp, Ascophrys sp, son algunos de los mas importantes protozoarios que atacan las branquias, región oral, cutícula y apéndices, pudiendo ocasionar severas mortalidades en el cultivo, siendo las post larvas las mas afectadas ante el ataque de estos microorganismos. Afectan a la locomoción, alimentación, respiración, pero lo mas importante será determinar cual es la significancia de su presencia, generalmente están relacionados directamente con una mala calidad de los sedimentos y de agua de la piscina.
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Preparados Preparados en fr esco.
Cortes para branquias, con la ayuda del bisturí bisturí # 4, gillette # 23, realizamos realizamos un corte sagital al nivel de las branquias, tratando en lo posible de hacerlo en la región central de las mismas, y obtenemos la muestra de un arco branquial de los 5-10 camarones, colocando sobre ellos una gota de agua salina al 0.9% ó 9ppt. Los 5-10 arcos branquiales, los cortamos transversal-longitudinalmente sobre una placa porta objeto, la muestra ya preparada podrá ser leída al microscopio en un tiempo no posterior a los 10 minutos, en todo caso preocuparse de que siempre, tengan suficiente líquido.
Zoothamiu m sp.
Acin eta sp.
CRITERIO CRITERIO BIOLOGICO EN LA INTERPRE INTERPRETACIÓN TACIÓN DE LAS LA S PLACAS. PLA CAS. •
En la lectura de la plac placa, a, se se utiliza utiliza el el criterio de abundancia abundancia relativa.
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Cuantos arcos branquiales branquiales en un campo, presentan ectoparásitos. ectoparásitos.
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Solo es suficiente que haya un ectoparásito en un arco branquial.
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Los resultados son expresados en porcentaje.
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El porcentaje estimado que corresponde al grado de infestación de la piscina.
ANÁLISIS DE HEPATOPÁNCREAS (HP).
La Hepatopancreatitis necrotizante, enfermedad mejor conocida como NHP en camarones de cultivo, ha sido responsable de grandes pérdidas económicas para los camaronicultores de varias partes del mundo, al afectar principalmente a los cultivos de Litopenaeus vannamei. Tomando en consideración la incidencia económica que esta enfermedad, a continuación se presenta una breve revisión de sus métodos de diagnóstico. Uno de los principales problemas por resolver para entender mejor la biología de estas bacterias, es que aún no se cuenta con un método para multiplicar y poder estudiar la bacteria in vitro.
2.- LA ENFERMEDAD NHP es producida por una Alpha-proteo bacteria, pleomórfica similar a las rickettsias, gram negativa, de transmisión horizontal a través de las heces de los reproductores ó por canibalismo, en análisis de PCR, aún no se detecta el agente causal en gónadas ni nauplios. Por lo que la transmisión vertical aún espera. Viven mejor 28-30°C y en salinidades altas 2038 ups.
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Morfológicamente es un bacilo que no presenta flagelos, de 0.25 por 0.90 micrones. Su hélice contiene 8 flagelos apicales de 0.25 por 2-3.5 micrones. Su replicación es citoplasmática, y principalmente ataca al tejido del hepatopáncreas. Preparados en fr esco.
El primer corte, será transversal sobre el punto de unión del cefalotórax con el abdomen (Cabeza – Cola), procurando que sea algo inclinado hacia la cabeza para evitar la mayor cantidad de músculo sobre la glándula del Hepotopáncreas. Con la ayuda de las pinzas punta fina retiramos una pequeña porción de HP, de que forma? Tratando de separar el cordón fecal de la glándula. •
Introducimos la pinza cerrada y perforamos la glándula, y recogemos una pequeña porción de ella.
•
En una placa porta objeto colocamos las 10 muestras de Hp, en dos bloques de 5 muestras cada uno, que serán cubierta por el cubreobjeto 22 x 22.
•
Una vez montada las muestras no debe de demorarse en su lectura, pues pasados los 10-15 minutos la muestras sustancialmente pueden variar su lectura.
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FASE TEMPRANA DE LA ENFERMEDAD: •
Infiltración hemocítica inter tubular intensa.
•
Número variable de túbulos melanizados.
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Necrosis y desprendimiento de células epiteliales de los túbulos del Hepatopáncreas.
•
Reducción marcada de los niveles de lípidos.
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Masas citoplasmáticas de las bacterias intracelulares.
•
La microscopía electrónica muestra las diferentes formas. Es común la presencia de infecciones secundarias como Vibrio sp.
FASE CRÓNICA DE LA ENFERMEDAD:
Atrofia marcada de los túbulos y reducción del tamaño de las células epiteliales. Pared celular. Escasas reservas de lípidos.
* Métodos de diagnóstico. Dr. Carlos Pantoja
QUE INFORMACIÓN EVALUAMOS EN ESTE ANÁLISIS?
Evaluamos el estado nutricional de los animales, a través de la cantidad de lípidos asimilados desde el grado 1 – 4 Abundancia Relativa.
El tamaño de los lípidos sí son grandes ó pequeños, este factor nos indicará procesos fisiológicos relacionados a alguna enfermedad.
•
La abundancia relativa de los lípidos, nos indican adicionalmente, si el nivel de alimentación esta dentro de los limites poblacionales.
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En este cuadro se muestra los túbulos del Hepotopáncreas con las respectivas claves para definir los grados de lípidos en abundancia relativa.
Podemos atrevernos a decir, que La cantidad de balanceado
administrado al cultivo se encuentra entre, los dos casos más extremos, sobre-alimentación ó baja-alimentación.
También podemos asumir si el balanceado es ó no asimilado por el camarón.
El punto de mayor importancia será el diagnostico de los daños causados por el NHP, bacterias intracelulares tipo Rickettsias, que a microscopia óptica podemos identificarla y prevenirla sin llegar a análisis más complejos ó costosos.
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CRITERIOS PARA DEFINIR LOS GRADOS DE NHP Estos cuadros muestran los diferentes grados de daños ocasionados por el NHP, y la for mación de ¨Infundíbulo¨
Este criterio se basa en el análisis de los daños causados en los túbulos del Hepotopáncreas.
Si se presentan túbulos con paredes delgadas y lípidos grandes en gran cantidad, ese camarón no presenta daño.
Si se presentan túbulos con paredes gruesas, corrugadas, con lípidos pequeños y especialmente reducción en su abundancia relativa. Ese camarón tiene NHP.
La formación de los infundíbulos dentro de los túbulos del
Hepotopáncreas no es una condición normal, el camarón esta sufriendo una descamación del epitelio interior del túbulo que ha iniciado un proceso de necrotización.
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En los infundíbulos es más fácil identificar la presencia de los cuerpos de inclusión de varios virus.
Entonces solo el conjunto de estos datos; Grosor de la pared, Baja de lípidos, Tamaño de los lípidos, Arrugamientos ó estrangulaciones de los túbulos, y siempre presente en mas de 10 túbulos, nos llevará
sin lugar a equivocación a un diagnóstico seguro.
TÚBULOS DE HEPATOPÁNCREAS CON DAÑO R1
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TÚBULOS DE HEPATOPANCREAS CON DAÑO
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POR QUÉ ESTA INFECCIÓN ES TAN IMPORTANTE?
Esta bacteria intracelular sólo se reproduce en el HP, órgano básico del camarón encargado de digerir y metabolizar el alimento. El HP es la mayor glándula digestiva y contiene diversas células denominadas E.- Se caracterizan por su actividad mitótica, fuente de otras células y están
localizadas en la porción distal. R.- Son las células más abundantes, almacenan los lípidos y el glicógeno. F.- Las células F, son menos abundantes y secretan enzimas. B.- Las células B, tienen una función de digestión, acumulación de nutrientes y
transporte de material digerido, Entonces se dice que la enfermedad NHP, es del tipo E, R, F, B, por la ubicación dentro de los túbulos del Hepotopáncreas.
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TÚBULOS DE HEPATOPANCREAS CON DAÑO
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TÚBULOS DE HEPATOPANCREAS CON DAÑO
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ANÁLISIS DEL CONTENIDO INTESTINAL .
3.- GREGARINAS. Las gregarinas son parásitos de distribución mundial, las principales especies son: Nematopsis sp, Cephalolobus sp, Paraophioidina sp , estos protozoarios no son considerados altamente patógenos, pero en un alto grado de abundancia, causan una disminución en el consumo de alimento, reducción del crecimiento y causan serias lesiones en el epitelio intestinal llegando incluso a su perforación convirtiéndose en un fácil camino para otras bacterias patógenas del tipo vibrios. La obtención de las muestras para análisis del contenido intestinal la realizamos con la ayuda de una pinzas de punta fina, con la que obtenemos muestras de heces de por lo menos 5 camarones que colocamos a todas juntas, luego las cortamos bien, para que queden bien distribuida la muestra, evitando que no queden grumos, la muestra preparada con una pequeña porción del intestino anterior será disuelta en 2-3 gotas de agua evitando los grumos, en la cual identificaremos y reportaremos •
La cantidad de algas, si existiere un grupo predominante también lo reportamos.
•
Los detritus, son los frústrulos de diatomeas asimiladas.
•
Materia orgánica se la identifica como los grumos de color café oscuro con filo en los bordes, formado por las fibras consumidas.
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•
Los restos de Balanceado, digeridos ó no asimilados, que son grumos de color café claro con bordes redondeados.
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Nosotros podemos reportar cada uno de estos puntos de control, en base a su abundancia relativa, (+), (++), (+++), (++++).
•
La parte mas delicada de este análisis es la determinación de que si existen ó no gregarinas, y su cuantificación, para determinar si están en condiciones de afectar al cultivo.
•
La presencia de gregarinas a simple vista, puede estar asociar al color amarillento que desarrollan en las heces del tracto digestivo.
•
Incluso se puede presentar un intestino curveado en su trayectoria, sin embargo se puede presentar una alta cantidad de gregarinas aún con el tracto intestinal vacío. Motivo por el cual se debe recurrir al análisis confirmatorio bajo microscopia.
CRITERIO BIOLOGICO EN EL REPORTE DE GREGARINAS
La muestra de las heces disueltas en 2-3 gotas de agua, sobre una placa portaobjeto, ocupa aproximadamente el espacio de 5 fajas verticales, nosotros analizaremos sólo una, la central, de arriba hacia abajo. •
Las gregarinas que serán contadas en la faja central, serán adultas, juveniles, huevos y serán reportadas en un solo grupo.
•
El valor total de la faja lo multiplicamos por 5 (# de fajas en una muestra).
•
Vamos a considerar el 100% de la infestación al multiplicar el peso promedio: Por 20 para Cultivos extensivos. Por 15 para Cultivos semintensivos. Por 10 para Cultivos intensivos.
Ejemplo:
Si hemos contado en una faja de la muestra 18 gregarinas, y el peso promedio de mi camarón es de 5 gramos, 12 gramos, 24 gramos, y es un cultivo extensivo, entonces: •
18 x 5 = 90 gregarinas por placa.
Para el caso de 5 gramos. ( 5 x 20 ) = 100 greg/placa .............100% 90 greg/placa………. Grado de infestación de la muestra
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=
X
90%.
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Para el caso de 12 gramos ( 12 x 20 ) = 240 greg/placa …………100% 90 greg/placa…………...X Grado de infestación de la muestra
•
Para el caso de 24 gramos ( 24 x 20 ) =
=
37%.
480 greg/placa…………100% 90 greg/placa…………...X
Grado de infestación de la muestra
=
19%.
La pregunt a que vamos a hacer ,. Desde cuando medicamos u na piscina.
Esto dependerá también de cual es nuestra población de siembra, así: Cultivos Extensivos.…………………………………a partir del 40 %. Cultivos Semi-Intensivos..…………………………. a partir del 30 %. Cultivos Intensivos………………………………….. a partir del 20 %. Sugerencias. Estos valores pueden ser ajustados a las necesidades de cada compañía, no son una regla fija, dependerá mucho de la calidad de agua y suelos del cultivo. *CRITERIO UTILIZADO EN MEXICO, para cuantificar los daños de gregarinas. G0
No hay presencia de gregarinas, (0) por campo.
G1
La presencia de gregarinas, es muy baja, (1-15) por campo
G2
Presencia moderada (16-50), lesiones en el epitelio intestinal.
G3
Presencia alta de gregarinas (51-100) por campo.
G4
Abundancia de gregarinas + de 100 por campo *Dra. María Soledad Morales Covarrubias.
Con que la tratamos?
Mi sugerencia, hoy en día y después de haber probado muchos tratamientos, que la medicación contra las gregarinas es una utopía, Ecuador como país productor esta prohibidos el consumo de anti-coccidios en los cultivos. Por lo tanto es mas sano corregir los suelos, eliminar la materia orgánica y de esa forma no habrán las condiciones apropiadas para la proliferación de gregarinas, al faltar el “vehículo” intermedio, Los Moluscos, de esta forma romperíamos el ciclo de vida de ellas.
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Se reportaron muchos tratamientos químicos años atrás, entre ellos, el uso de Monoenzimas sodica como: Elancoban, Avimix, Salinomicina sodica al 12%, e incluso Farmatan, medicamento usados para controlar las diarreas en bovinos.
Adultos
Huevos
OTRAS PATOLOGÍAS REPORTADAS. Clasificación de los virus, por D.V. LIGHTNER.
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4.- Camarón Azul. La coloración azul en la cutícula de los camarones puede ser el simple resultado de un ajuste compensatorio del animal con respecto al medio ambiente que lo rodea y por otro lado también puede deberse a la presencia ó falta de pigmentos específicos en su alimentación suplementaria. “astaxantinas” El cuerpo azul en los camarones también ha sido relacionado con la infección IHHNV,
5.- Cola Roja. La coloración rojiza se debe a una distensión de cromatóforos del abdomen y de los apéndices de los camarones esta asociada a diferentes patógenos ó a la combinación de varios de ellos, motivo por el cual no es un factor determinante para el diagnostico en fresco de una patología.
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En Larvas: •
Nos indicará la presencia ó el ataque de una bacteria patógena tipo Vibrios, Pseudomonas, etc.
•
Además es un buen indicador de una condición extrema de stress, por variaciones en las condiciones físico químicas del cultivo.
En Adultos: •
Están altamente relacionados con el ataque viral de WSSV, STV, ó a una muy común infección por vibrios.
6.- MANCHAS BLANCAS EN EL CEFALOTORAX. La presencia de manchas blancas en la cutícula del cefalotórax esta asociada al virus de la mancha blanca, sinembargo estas inclusiones también pueden deberse, a numerosos factores ambientales que incluyen una alta concentración de Calcio iónico y elevado pH, además de que la presencia del virus debe ser confirmada por un análisis especial de histología o PCR, para determinar las características típicas del virus.
7.- CABEZA AMARILLA. La coloración amarilla del cefalotórax ha sido reportada como un ataque de la infección Hepatopancreatitis y para el ataque del virus de la cabeza amarilla. Sin embargo la infección de estos dos patógenos también puede ocurrir
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en la ausencia de la coloración amarillenta de la cabeza, por lo cual se deberá recurrir a un análisis confirmatorio de nuestras sospechas.
8.- OPACIDAD MUSCULAR. El tejido muscular del abdomen de los crustáceos como ya lo vimos es del tipo estriado, y es un buen indicador del estado de salud del cultivo, generalmente el músculo debe de ser de un color translucido algo transparentes. Si están opacos nos indica que los animales están siendo sujetos del ataque de algún agente patógeno como: •
Enteritis hemocítica. ( E.H )
•
Necrosis Idiopática Muscular. (NIM)
•
Síndrome del Acalambramiento Muscular.
•
Infección por Microsporidios.
9.- ACALAMBRAMIENTO MUSCULAR. El “Cramped shrimp”, es caracterizado por la flexión ventral del abdomen hacia el cefalotórax, aparece espontáneamente y esta acompañado de la opacidad muscular con manchas blanquecinas que nos sugieren una necrosis muscular. Los Animales con esta patología son delicados y están sujetos a las variables ambientales de stress. Sí el proceso de stress se acelera, la rigidez de la cola, la coloración blanquecina también aumenta, siendo este proceso irreversible que terminará con una diaria y continua mortalidad. La etiología de este enfermedad tiene sus raíces en las malas condiciones nutricionales y ambientales, especificicamente en el desbalance iónico entre Calcio: Magnesio: Potasio .
10.- NECROSIS IDIOPATICA MUSCULAR. Caracterizado por la presencia de zonas blanquecinas en el abdomen del camarón, que continua con una ligera inflamación lateral y termina con el J. Chávez R.
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proceso de la necrosis muscular ó muerte del tejido. Hoy en día se reconoce a esta patología como el virus del NIM, nació en la zona norte del Brasil, y se ha extendido toda la costa Atlántica del mismo país. Hasta inicios del año 2000, se sospechaba que la causa de esta necrosis se debía al desbalance iónico entre Calcio-Magnesio-Sodio-Potasio, en los alimentos balanceados ó en el medio ambiente, seguidos de una alargada condición de stress, de esta forma las manchas blanquecinas en el músculo eran colonizadas por bacterias patógenas ocasionando la muerte celular en la zona afectada.
11.- ENFERMEDAD DEL ESPERMATÓFORO NEGRO. En esta patología los espermatóforos alcanzan una coloración que va desde el CAFÉ al NEGRO, de esta forma la ampolla espermática que junto a las vías deferentes se atrofian. La etiología de esta enfermedad esta relacionada con el ataque de bacterias patógenas oportunistas.
12.- BACTERIAS FILAMENTOSAS. Leucothrix mucor Microorganismos Gram Negativos, aeróbicos, son filamentos largos no ramificados, frecuentemente adheridos a sustratos vivos a través de una célula basal cilíndrica, esta bacteria se fija a La cutícula de los crustáceos en las branquias, pleópodos, periópodos de larvas, juveniles y adultos, generando dificultades en La respiración, alimentación, locomoción y reproducción, pudiendo ocasionar la muerte en los camarones.
13.- ENFERMEDADES MICOTICAS. EN LARVAS Lagenidium sp, Sirolpi dium sp .
Hongos que pertenecen al grupo de los ficomicetos, letales en las primeras fases de cría del camarón, especialmente en los estadios de nauplios. Los organismos que presentan esta enfermedad tienen una J. Chávez R.
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respuesta de inflamatoria. Los principales vectores son los reproductores, huevos y larvas de balanos que ingresan en el agua de abastecimientos de los laboratorios. Lagenidium sp .- fijan sus zoosporas que se enquistan en la cutícula de
los huevos, nauplios o post larvas, luego estas germinan, y el tubo de germinación penetra en el cuerpo de los animales infestados desplazando a los tejidos epiteliales y musculares. Sirolpidium sp.- se diferencia del anterior porque sus zoosporas ingresan
al huésped a través del ano, boca u heridas.
Lagenidium sp.
EN ADULTOS Fusarium solani.
Pertenece al grupo de los hongos imperfectos, pudiendo atacar a los juveniles como a los adultos,
distribución
mundial, se encuentra presente sedimentos
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en de
los las
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piscinas en forma natural tornándose en un agente altamente oportunista que atacará al camarón cuando este ingresa a los sedimentos a cumplir con parte de su ciclo biológico. Interfieren el intercambio gaseoso, locomoción, crecimiento, sus lesiones causan una mecanización de las zonas afectadas, también se conoce a esta enfermedad como de las “ Branquias negras ”. Análi sis en fr esco .- se toma una porción del tejido infectado donde se
observará las macroconídias típicas en forma de canoa.
14.- ENFERMEDAD DEL CAMARON LECHOSO MICROSPORIDIUM. Microorganismos pertenecientes al phylum Microspora (Balbini, 1882), son parásitos intracelulares obligados, parasitan a insectos, peces y crustáceos en casi todos los tejidos y órganos del huésped, sistemas excretor, nervioso, reproductor, muscular, las principales especie reportadas: Ameson sp, Agmasoma sp, Pleistophora sp, El camarón es un huésped intermediario en su ciclo de vida, requiriendo de un pez para completar su ciclo, los cultivos intensivos, ó semintensivos como los de larvas silvestres son los que presentan una mayor incidencia. Los camarones afectados con esta enfermedad, presentan el músculo de un color blanco lechoso o algodonoso, con una cutícula azulada, son fácilmente atacados a cualquier variación climática ó condición de stress.
CAMARÓN LECHOSO
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ENTERITIS HEMOCÍTICA. La etiología de esta enfermedad parece estar relaciona a las toxinas dentro de conducto intestinal debido a la ingestión de algas especificas d el grupo cianobacterias: Microcistys sp, Anabaenas sp, Nostoc sp y otras mas. La enfermedad consiste en necrotizar las células epiteliales del intestino medio ya que estas células carecen de lignina en su cutícula para permitir en ingreso e intercambio de los elementos nutricionales. La enteritis hemocítica se inicia con una inflamación del epitelio intestinal, que incluso puede afectar al Hepatopáncreas, una vez inflamado el epitelio el camino queda libre para el ataque de bacterias oportunistas ú de otros microorganismos como Euglenas sp, gregarinas sp, que como resultado son altas mortalidades.
NIMV.
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IHHNV.
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PATOLOGÍA DE LARVAS. La calidad de los NAUPLIOS, si tienen una incidencia directa en la obtención de una buena larva, nuestro país Ecuador, se ha empezado a formar las primeras líneas familiares, pero que significa esto?, se ha empezado a medir el Coeficiente de Consanguinidad ó distancia FIS , determinando que una buena larva proviene de un buen manejo genético, es decir que si analizamos la distancia FIS de sus progenitores, y esta es igual o menor a 0.04 ó 4%, significa que es una línea “familiar pura”, información necesaria para saber si este ó aquel grupo de reproductores responde a las condiciones adversas donde se encuentra nuestras fincas, pero que sucede si nuestra larva presenta una distancia FIS del 8% ó mayor del 10% , esto significaría que hay muy poco manejo genético y que lo que estamos comprando es solo un “grupo familiar”, animales que presentan un cierto grado de parentesco entre los “abuelos-padres-tataranietos-sobrinos etc”. Entonces podemos decir que, si al analizar nuestras post larvas y nos indican que el numero de grupo familiares es bajo, esto significará que ese laboratorio arranco su larvicultura de un buen nauplio y por consiguiente, tendríamos una buena larva de buen crecimiento. También se ha demostrado que el efecto del fotoperíodo en la producción de nauplios es indispensable, así como otro de los principales problemas en la producción de nauplios esta basado en el arte de oblacionar ó no oblacionar. Las estadísticas indican que reproductores oblacionados presentan un número mayor ó igual al 10% de deforma ción en las espinas furcales y que los reproductores no oblacionados , pueden presentar un máximo del 4% de deformación. ALGUNAS DE LAS PRINCIPALES DEFORMACIONES EN LAS ESPINAS FURCALES DE UN NAUPLIO
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UN NAUPLIO NORMAL.
El análisis patológico a las larvas de laboratorios, se constituye en un a herramienta muy indispensable, ya que de su calidad dependerá en un gran porcentaje (40%-50%) el éxito del cultivo en la finca. Dentro de las observaciones que rutinariamente se realizan tenemos: •
La natación, en que sección del vaso-recipiente están nadando.
•
La actividad de ellas,
•
El color.
•
La dispersión de tallas,
Estas observaciones sumadas a las del microscopio nos determinaran cual es la mejor semilla que llevaremos. •
La muestra de larvas serán colectadas con la ayuda de un cedazo, preferiblemente de dos ó tres lugares diferentes y entre unos 20-30 cm. de profundidad.
•
La muestra no deberá ser menor de unos 30 animales,
•
En el microscopio observaremos cual es su desarrollo branquial, información necesaria para determinar la edad biológica; la morf ología, deformaciones e inflamaciones de los arcos branquiales que sirven para determinar la calidad de las Larvas. CLAVE PARA DETERMINAR LA EDAD B IOLOGICA DE UNA POST -LARVA Arco Secundarios Nadando hacia 0 1 2 3
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Arcos terciarios Adelante
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Edad Biológica PL 1 PL 2 PL 3 PL 4 PL 5
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4 5 6 7 8 8 8 8 •
PL 6 PL 7 PL 8 PL 9 PL 10 PL 11 PL 12 PL 13
1 2 3
Un cultivo de larvas, en condiciones normales buenas, presentarán entre 3 y 4 edades biológicas.
•
También debe registrarse la presencia de parásitos, necrosis, melanosis en cada una de las secciones del cuerpo de las larvas; Antenas, Cefalotórax, Abdomen, Periópodos, Pleópodos, Telson.
•
Observar
la
morfología
del
rostr o ,
nunca
debe
presentar
deformaciones. •
Observar el nivel de lípidos y su color, y los posibles daños ó
deformaciones en los túbulos del Hepotopáncreas que son ocasionados normalmente por bacterias intracelulares. •
Dentro del Hepotopáncreas podemos observar
presencia de
los lípidos, y la
¨ Bolitas ¨ cuerpos redondos relacionados con la
presencia de otro tipo de bacterias patógenas en el cultivo, estas bolitas, conocida como el síndrome de las Bolitas, también se pueden observar en la primera sección del intestino.
•
•
•
PRUEBA DE STRESS DESDE PL 8 EN ADELANTE : Se debe tomar una muestra con salinidad inicial de 30 a 35 partes y se lo pasa a 0 de salinidad durante 30 minutos, luego se regresa a la salinidad inicial y después de 45 minutos se valora el porcentaje de supervivencia y actividad para esto se debe poner un poco de artemia. Esta prueba se debe evitar en tanques con larvas en periodo de muda o se haya realizado recambio de agua en el tanque. UNIFORMIDAD DE TALLAS (desde los 18 a 20 días de cultivo). Con una dispersión no mayor de tres tallas. Crecimiento PL/gramo : Esta observación junto con el nivel de lípidos determinan una buena calidad de larva, ya que asegura el paso de un estadio a otro. Es aceptable llevar larvas a partir de 250 PLs/gramo.
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•
•
DESARROLLO BRANQUIAL . La última lámela debe tener mínimo dos pares de lóbulos branquiales secundarios, si tienes menos, se considerará como atraso la falta de estos, el rango máximo de atraso a considerar será del 5%. EXAMEN DE IHHNV, vibrios, etc. Los análisis de patógenos deben darse de acuerdo a predominancia en zonas de cría. Virus IHHNV (endémico vertical), WSSV (falso vertical), TSV, BHP, Baculovirus (endémico), etc. Estos siempre se van a encontrar en los análisis que se realizan a las muestras de larvas lo importante que se debe tomar en cuenta es que la prevalencia sea la menor posible. PIGMENTACIÓN : Los cromatóforos no deben estar negruzcos serán de color pardo- rojizos y en forma de pequeñas barras entrecortadas nunca juntas ó punteadas.
LA LIMPIEZA DE POST LARVAS . Se observan las branquias, exoesqueleto y apéndices y sí estos presentan protozoarios, deben ser eliminados antes de la cosecha y transporte, además se debe observar la cantidad de muda antes de ser embarcada.
•
•
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EL GRADO DE OPACIDAD MUSCULAR . Se deben a condiciones de stress, calidad de agua, problemas bacterianos, si existe 10% de larv as con opacidad muscular se deben tomar medidas correctivas
LAS LARVAS DEBEN LLEGAR A PL 12 , a partir de los 18 días de cultivo, considerando la salinidad y la temperatura de cultivo.
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ALTA DIGESTIBILIDAD . No es lo mismo Hepatopáncreas lleno de
lípidos y de alimento no digerible ó no asimilable
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TOMAR EN CUENTA PARÁMETROS FÍSICO QUÍMICOS requeridos para la siembra en camaronera.
LÍPIDOS EN EL TRACTO DIGESTIVO. La abundante presencia de lípidos no solo en él Hepatopáncreas, sino también en todo el tracto intestinal, nos indicará que la larva está recibiendo una buena calidad y cantidad de alimento, Se valora este grado desde: 1 (escaso) a 5 (abundantes).
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MÉTODO DE CONTEO: Larvas menores a 1 cm. deben ser contadas con método volumétrico y larvas mayores a 1 cm. deben contarse con método gravimétrico. CHEQUEAR, O SOLICITAR A LAS MADURACIONES información sobre las condiciones de salud en reproducciones, maduraciones certificadas SPF, SPR, y lo más importante cual es la Distancia FIS de sus reproductores . CHEQUEAR TRANSPORTE Y DENSIDADES permitidas deacuerdo a parámetros establecidos para cada finca. INDICE DE MASA MUSCULAR. Desde PL 3, se puede observar el índice de masa muscular, que se obtiene analizando el 6to. segmento (la comparación entre ancho de músculo e intestino). Determinando que una larva es aceptable con grado 4 o 5. Larvas con grado 4/5 de IMM, presentan músculo más desarrollado Se acepta una larvas con grado 3, con un máximo del 10%, las post-larvas con grado 3 pueden llegar a completar desarrollo branquial pero se ven más pequeñas que las larvas de grados 4/5.
CRITERIO BIOLOGICO
El músculo ventral del 6to segmento abdominal, bajo el intestino es uno de los músculos mas largos en una postlarva de camarón, así la relación entre el ancho del músculo y el ancho del intestino es un buen parámetro para definir la calidad de una postlarva, tomando en cuenta que el rango entre el músculo y el intestino en una larva silvestre esta alrededor de 5:1 (20%).
IMM: 1/5
Considerando las dificultades de medir en una placa portaobjeto al microscopio, por el movimiento ó la rigidez de una larva muerta, esta no J. Chávez R.
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mostraría la real condición de las larvas. Para fines prácticos hemos usado para fines prácticos el criterio de comparar grosor del músculo es una escala de 1 a 5 veces mayor que el grosor del intestino, la larva será ó no aceptable.
IMM: 3/5
IMM: 2/5
IMM: 5/5
Para este efecto se considera óptimo el Grosor del Intestino.
cuando el Grosor del Músculo es 5 veces
IMM de 5 y aceptable un IMM 4. Los resultados
preeliminares en fincas, demuestran que las larvas con un IMM 5, tienen un mejor crecimiento transformándose el cultivo en un negocio rentable. J. Chávez R.
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PISCINA # Fecha HEPATOPAN. Lipidos Necrosis Rickettsias 1 Rickettsias 2 Rickettsias 3 Baculovirus W.S.V S.T.V. BRANQUIAS Epistilis Zoothamium Acinetos sp. Necrosis Melanosis Deformes Leucotrix INTESTINOS Balanceado Materia Orga. Algas Detritus Greg x Camp % Grega TEXTURA Mudados Quitinosis Cola roja BACT - CAM. V. Algino V. Parahe. V. Luminisc. FITO - ZOO Cinofitas sp Euglenofitas Clorofitas sp. Crisofitas sp. Diatomeas sp. Dinoflagelados Zooplancton Alg. Totales BACT - AGUA V. Algino. V. Parahe. V. Luminisc. QUIMICOS NH3NO2Ca++ Mg++ K+ Sal. Tratamientos
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ANALISIS DE PATOLOGÍA
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Formato de Análi sis de Patología de Larvas.
Laboratorio F. Siembra: # de Tanque
EXTERNO Rostro Cefalotórax Abdomen Antenas Anténul as Periópodos Pleópodos Urópodos Telson
HEPATO. Lípidos Lóbulos Bvp Necrosis
BRANQUIAS Arc. Branq.
Edad Biol. Parásitos Necrosis Forma
INTEST. G. replesión Color
IMM. BACTER. V. algi. V. para. V. lumi.
CALIFICA:
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FACTORES QUE INFLUYEN EN LAS PATOLOGÍAS 1.- DESCOMPENSACIÓN DE LOS FACTORES FÍSICO-QUÍMICOS. 2.- FACTORES ECOLÓGICOS - Temperaturas - Turbidez - Salinidad. - Densidad/siembra. - Producción primaria. - Contaminación. - Balance iónico. - Desequilibrios en Flora bacteriana.
3.-
FACTORES FISIOLOGICOS -
4.-
Alteraciones tumorales. Balance iónico. Alteraciones del Metabolismo. Alteraciones en la Reproducción. Alteraciones en la Nutrición. Perdida de las defensas. Stress.
FACTORES DE ENFERMEDAD.
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Proclividad en la patogenía de diversos agentes, que en condiciones fisiológicas buenas no causarían mortalidad. Factores propios de la enfermedad ocasionadas por organismos patógenos.
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Reflexiones Antes de hacer el diagnostico de las diferentes patogenias revisadas, debemos analizar las diferencias que existen entre Enfermedad y Mortalidad. La Enfermedad. Es una alteración del Estado Fisiológi co de los individuos. •
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Si la enfermedad está producida por un Agente Pató geno , se considerará que existe un desequilibrio entre el organismo huésped agredido y el microorganismo agresor, el factor de enfermedad está casi siempre asociado a un defecto en la resistencia del hospedador causado por: 1. variaciones fisiológicas 2. variaciones en las condiciones del medio. Sí la enfermedad esta ocasionada por el Carácter Agresivo del agente patógeno, esto se debe a: 1. Que numerosos microorganismos pueden encontrarse naturalmente en estado saprofito y adquirir un poder patógeno por alteraciones del medio, y/o por una disminución en las defensas del huésped.
La Mortalidad se aprecia por la referencia del estado de salud de una población y se expresa por el número o porcentaje de individuos desaparecidos. La mortalidad será evidentemente por la consecuencia de: 1. Una enfermedad. 2. Otros orígenes diferentes: Desbalance iónico interno ó externo. En general, se puede decir que el brote de la enfermedad suele ser el resultado de la interacción entre el hospedador, el medio ambiente y el agente patógeno
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