Control de calidad interno de hematologia Objetivos: 1. Asegur Asegurar ar que los resultad resultados os obtenid obtenidos os son aceptabl aceptables es dentro dentro de los límites límites de variación. 2. Evaluar Evaluar la exactitud exactitud por medio medio de controles controles con valores valores conocidos conocidos 3. Detectar Detectar variaciones variaciones que permitan permitan determi determinar nar errores errores en el el procedimient procedimiento o Aspectos metodológicos Maneja de la muestra control Puede ser comercial o preparada en el laboratorio • La mues muestra tra tienen tienen valores valores conoc conocid idos os en el primer primer caso caso los cuale cualess son son • proporcionados por la casa comercial En el segundo caso, este puede ser de doble ciego, es decir , una muestra tomada • al azar Es analizado por el profesional y los técnicos • Posteriormente se comparan los resultados tomando como base los obtenidos • por el profesional Procedimientos: esto puede ser manual o automatizado. Los parámetros a medir son: Hemoglobina Hematocrito Recuento de leucocito Formula diferencial Selección de material de referencia referencia Muestras de sangre humana o equina (caballo o de burro) Cuando Cuando las muestras controles controles pretenden pretenden usarse como calibrador, calibrador, debe tener un valor asignado, después deben dividirse en alícuotas pequeñas, de las que por lo menos deben analizarse 10 veces como mínimo, seleccionadas aleatoriamente Análisis estadístico Media • Desviación estándar • Variación intra-lote expresadas como coeficiente de variación en % • Precisión • Exactitud • Medidas que deben ponerse en práctica A) En todo todo mome momento nto:: Formas de resultados acumulados • Correlación del aspecto del extendido con los recuentos celulares • Correlación de los recuentos celulares con los eventos clínicos • B) Diariamente Exámenes duplicados en muestras muestras de pacientes, usualmente 4-5 4-5 por lote • Exámenes Exámenes repetidos de muestra muestra de pacientes de lotes anteriores anteriores 4-5 por • lote Examen de un control con cada lote de muestras. • Observación: Este es el procedimiento más sencillo de realizar; si el trabajo del día permite cada muestra debería ser analizada por duplicado; si la carga de trabajo lo hace impractico, impractico, deberán procesarse procesarse por duplicado 4-5 muestras muestras consecutiv consecutivas as a distintas distintas horas del día. Calcular la desviación estándar de la sumatoria de la diferencias al cuadrado entre los duplicados.
Interpretación: Ninguno de los resultados duplicados deberá diferir uno de otro en mas de 2DS calculada, si las pruebas se efectúan incorrectamente en forma sistemática, el valor de la Ds será muy alto y no permitirá la identificación de errores individuales. Exámenes de comprobación a intervalos (diarios o semanales) Verificación de la calibración e controladores y hemoglobinometros • *Hemoglobina Preparación de referencia de cianometahemoglobina Hemolisado *Eritrocitos: Sangre preservada Preparación estabilizada de eritrocitos * Leucocitos Sangre humana estabilizada Sangre de ave estabilizada ( como sustituto de leucocitos) * Plaquetas: Preparación de plaquetas humanas estabilizadas. Pruebas confirmadas Estas se procesan de manera semejantes a las pruebas duplicadas pero se emplean especimenes que fueron analizados originalmente en una corrida anterior. Interpretación Los resultados deben ser semejantes entre si dentro del intervalo de +/- 2Ds Este procedimiento detectara el deterioro de aparatos o reactivos que pueda haber ocurrido entre las corridas, siempre que no exista el deterioro de las muestras durante su almacenamiento, por ello este procedimiento es apropiado para la Hba, en menor grado para el recuento de eritrocitos y leucocitos e inapropiado para hematocrito si existe un retraso d e 6 horas o mayor entre una y otra determinación. Un valor mayor de la desviación estándar de las pruebas confirmadas es indicación clara de que existe un deterioro de aparatos o reactivos, siempre y cuando las muestras no hayan sufrido alteraciones. Pruebas repetidas en muestras control Las determinaciones repetidas en una sola muestra definirán el error de reproducibilidad (precisión) y constituyen un método para evaluar la excelencia técnica y/o la estabilidad o inestabilidad de un instrumento. Dado que todas las determinaciones se llevan acabo con las mismas pipetas y reactivos, el método no detectara errores en esto. Este procedimiento puede llevarse acabo en cualquier muestra de sangre en buenas condiciones pero es útil usar materiales de control. Cuando la Ds de las mediciones repetidas a sido obtenida, esta puede usarse para la grafica de control, para hemoglobina debe utilizarse hemolisado o sangre preservada.
4. CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGIA 4.1 FASE PREMETROLOGICA Esta comienza desde la solicitud de la prueba más indicada para hacer el diagnostico, la comunicación (que debe preceder a la toma de la muestra) con el paciente, el estado del paciente antes de la punción, el procedimiento utilizado en la recolección de la misma, la hora de llegada de la sangre al laboratorio, el almacenamiento y las características finales de la muestra.
Para toda prueba que se realice en el laboratorio, el paciente debe recibir el día anterior las instrucciones por escrito sobre su preparación y la hora de llegada. Es importante recordar que cualquier variación en la proporción de anticoagulante puede ser causa de error en los resultados. El uso prolongado del torniquete afecta los recuentos celulares y altera las pruebas de coagulación entre otras. La experiencia del personal es otro factor importante, debido a que de la toma de la muestra, de una buena mezcla del espécimen, la preparación del extendido y su coloración depende la correlación de las pruebas y, por tanto el diagnostico final. Es necesario evitar la formación de los microcoágulos de Fibrina que no son visibles al ojo humano y que se forman en la jeringa o aguja mientras se realiza la mezcla con el anticoagulante. La Fibrina formada interfiere con los volúmenes celulares, lo que produce errores en los informes, tanto de blancos como de rojos y plaquetas. 4.2. FASE ANALITICA A partir de una buena muestra los procedimientos de hematología se deben realizar dentro de los límites de tiempo que garantizan estabilidad. MANUAL DE CALIDAD INTERNO Y EXTERNO Fecha 01-07-2010 Pagina 24 de 35 El control de calidad interno en hematología se lleva a cabo a través de controles de precisión ya que los contadores automatizados vienen con calibradores de nivel anormal bajo, normal y anormal alto; se corren diariamente y se verifica la linealidad del equipo, comparando los valores encontrados con un rango asignado. PROCEDIMIENTO Se retira el control del refrigerador y, antes de usarlo, se deja que alcance la temperatura ambiente (18-30 grados centígrados) durante 15 minutos. Para mezclarlo: Colocar el tubo horizontalmente entre las palmas de las manos y se hace rodar adelante y atrás durante 20-30 segundos. •
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Mézclelo invirtiéndolo rápidamente para que las células se suspendan. Si los tubos han permanecido almacenados durante mucho tiempo puede que sea necesaria una mezcla adicional. Invierta los tubos con suavidad de 8-10 veces inmediatamente antes de usarlo.
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Aspirar una muestra del tubo.
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Limpiar el borde del tubo y la tapa con un paño sin hilachas.
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Volver a tapar el tubo asegurándose que queda bien tapado.
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Se corren los otros dos tubos de la misma forma.
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Se guardan nuevamente en refrigeración para garantizar la estabilidad de los mismos hasta su fecha de caducidad. Los datos de la corrida diaria son registrados en los formatos de control de calidad interno diseñado para hematología. Se tabulan los datos estadísticos y se construyen las graficas de LEVYS-JENNY guardando las mismas recomendaciones y formulas que para el análisis de datos en química clínica.
PRUEBA DE REPRODUCIBILIDAD
Semanalmente se corre una muestra 3 veces y se comparan los resultados, los cuales deben guardar la reproducibilidad pertinente. PRUEBA DE CORRELACION
Semanalmente y al azar se corre un cuadro hemático por el método automatizado y se hace la verificación manual de los datos. Se procede hacer los registros. CONTROL DE CALIDAD INTERNO DE LA COLORACION
Cada nuevo lote de colorante se estandariza teniendo en cuenta la cantidad de colorante utilizado por lámina y el tiempo de acción así como del Buffer (PH 6.8 a 7.2). Filtrar el colorante de uso diario. Se realiza un extendido de aproximadamente 3 cms de largo, con una parte gruesa, una medianamente gruesa, y una delgada o cola. Un buen colorante hematológico utilizado con un Buffer de Ph neutro y un procedimiento estandarizado, nos permitirá observar los glóbulos rojos de color rosado, el núcleo de los linfocitos morado intenso, las granulaciones de los monocitos de color rosado, la membrana de los neutrófilos bien definida, el estroma de las plaquetas nítido, sin presencia de artefactos ni precipitados. CONTROL DE CALIDAD INTERNO PARA LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR.
Es importante recordar que este parámetro se puede alterar (aumentar) por la temperatura alta, por las vibraciones y por el desnivel. Montar muestras al azar permite evaluar la reproducibilidad. CONTROL DE CALIDAD DE PLAQUETAS
Los métodos automatizados son los más precisos; sin embargo, es muy importante tener en cuenta que el anticoagulante EDTA pude inducir agregación plaquetaria; p o r t a n t o , i n f o r m a r f a l s o s recuentos bajos de plaquetas. Este hallazgo debe ser confirmado por medio del extendido en donde se considera normal un recuento (en 1000 aumentos) entre 7 y 21 plaquetas (factor 21000). Semanalmente se escogen dos cuadros hemáticos uno con un recuento inferior a 100.000 plaquetas y otro con un recuento superior
a 300.000 se leen manualmente y se aplica la formula descrita en el formato de control de calidad. CONTROL DE CALIDAD EXTERNO
El control de calidad interno evalúa la precisión en el desempeño de un laboratorio en un momento determinado y aunque los resultados sean buenos es necesario compararse con otros laboratorios. El control de calidad externo mide la precisión de un laboratorio en el tiempo y a su vez lo compara con otros laboratorios con base a la desviación con respecto a los demás participantes. MUESTRAS
En hematología se utilizan sangre humana o sangre de aves estabilizada para la lectura de hemoglobina. El material usado en este producto ha sido verificado por métodos aprobados y encontrado no reactivo al Antígeno de superficie de Hepatitis B, anti HCV, y acs HIV. Manejar con precaución como si fuera potencialmente infeccioso. También se distribuyen láminas para recuento diferenciales, reticulocitos y Hemoparásitos. CARACTERISTICAS
Se hacen envíos bimensuales y se tienen los reportes al mes de la fecha del envío. Se evalúan ítems con un valor porcentual de 12.5% hasta alcanzar el 100%. Por encima del 85% será óptimo Entre un 65-75% la calificación será aceptable. Por debajo de 65%, se considera Fuera de Rango. Para el análisis de los resultados, al igual que en química clínica, se procede a la tabulación estadística para levantar las correspondientes graficas y hacer sus respectivos análisis, estableciendo acciones correctivas ALERTA y ACCION