COMPTE-RENDU DE TP EXTRACTION DE L'ENZYME
‘-,
BUT T ET PR PRIN INCI CIPE PE : I. BU Le DNS (3,5- dinit!"#$i%&$ie) en *+"en%e de "%e" +d%te" d+e$!**e n *!dit +dit de %!$e ne en i$ie #"ie. L# te%/nie d DNS e"t n !&en de d+tein#ti!n de $# tene en "%e" +d%te" $ie" *+"ent" d#n" $e" $ e" +%/#nti$$!n" 0 d!"e.
II. RÉSUMÉ : On # et#it $2en&e 0 *#ti de $# $ee !$#n4e. Pi", e6e%t+ ne +#%ti!n d2/&d!$&"e d "#%%/#!"e *# $2inet#"e #e% 7 1
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Te*+#te 9 3:;. P/9<.=. A*" 5 in !n # #>t+ $# +#%ti!n en #?!t#nt $e DNS. On *+*#e 7 Une 4#e +t#$!nne (DNS @ "%e +d%te) De te" *! te"te $# *et+ de "#%%/#!"e et $2ineti""e On %/#6+ $e" te" en 1::;C et e"e $# den"it+ d "%e +d%te d#n" $e" te" de $# 4#e +t#$!n en ti$i"#nt $e "*e%t!*/!t!te. • •
III. MATÉRIEL ET RÉACTIFS : #. MATÉRIEL : P! $2inet#"e 7
Pi*ette i!$e" ?#4+e" Be%/e Centi4e"e M!tie et *i$!n
P! $e d!"#4e de" "%e" +d%te" 7
B#in #ie 0 1::;%. #in #ie 0 3:;% Te" n+!t+" Pi*ete"
. RÉACTIFS P! $2inet#"e 7
L# $ee de !$#n4eie T#*!n %it#te 1:M 0 */ T!$ne +t/#n!$.
P! $e d!"#4e de" "%e" +d%te" 7 8
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S!$ti!n +t#$!n de "#%%/#!"e" /&d!$&"+ 5M T#*!n #%+t#te de "!di 5:M 0 */ <,= R+#%ti # DNS
IF. METHODE : #) EXTRACTION DE L’INVERTASE :
D#n" n !tie, ""*ende 8: 4 de $ee de !$#n4eie d#n" 1: $ de t#*!n +i4++ de %it#te de "!di 1: M (*G 9 ). On #?!te en"ite et en !de $e" "!$ti!n" +i4++e" "i#nte" 7 1: $ d $# >e t#*!n %it#te. :.5 $ d +$#n4e de t!$ne+t/#n!$. T#n"#"e $e %!nten d !tie d#n" n te 0 %enti4e. B!%/e $e te et #4ite i4!e"eent # !te. Centi4e 15 in 0 3::: * . Fe"e $enteent $e "n#4e#nt, $+4eent #+, d#n" ne H!$e ?#4+e 5: $ et %!*$+te #e% d t#*!n %it#te P/9. • •
)
PRÉPARATION DES TUBES :
On # ti$i"+ = te" "!nt n+!t+" : 0 = . Le" te" de n+! : 0 5 "!nt $e" te" de $# 4#e +t#$!n, $e te N; et $e te N;= "!nt de" te" *! te"te $# *et+. On et 1 $ de DNS d#n" t!" $e" te".et !n #?!te $# "!$ti!n d "#%%/#!"e /&d!$&"+ (5 $) d#n" $e" "i te" de $# 4#e +t#$!n.
3
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P! $e" te N; et N; = 7 !n et 1 $ de $# "!$ti!n d "#%%/#!"e :.:3 M d#n" $e te N; ,et $2et#it de $2inet#"e d#n" $e te N;=. Pi", !n #?!te $e t#*!n #%+t#te d#n" t!" $e" te", #*" !n %/#6e 0 1:: ; *end#nt 5 in et !n et 5 $ d2e# di"ti$$+ EnHn, !n e"e $# den"it+ de" te" : 0 5 0 $2#ide d2n "*e%t!*/!t!te 0 5<: n.
%) RÉSULTA : AHn de %#$%$e $e n!e de !$e" de" "%e" +d%te", !n ti$i"e $# e$#ti!n "i#nt 7
n9 CF Ee*$e *! $e te N;1 7 !n # 7 %9 5 1:(-3) , 9:.1 $ n9% 9 5 1:(-3) :.1 1:(-3) 9: .5 J!$ !n *+"ente $e" +"$t#t" !ten d#n" %e t#$e# 7 Te : N!e : de i%!!$ e" De "%e +d%te " DO :
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F. LES LIMITES DE DNS : RESSOURCE 7 GTTP7 .AUR .UNI .EDU F=N8M ILOSIQ8: ET Q8: AL Q8: PP
Q8:=-1K.PD
- Le d!"#4e de" "%e" *# DNS, e"t ne +t/!de ti$i"+e *! d+te%te $e" "%e" +d%te" (4$%!"e, %t!"e et #te" !n!"#%%/#ide") . Ce*end#nt, %ette +t/!de # e$e" $iite" i diinent "!n ti$i"#ti!n. D2#!d, $e "#%%/#!"e ne *et *#" >te die%teent d+te%t+ *# $e DNS. Le" +%/#nti$$!n" %!nten#nt d "#%%/#!"e d!ient en %!n"+ent "i de" +#%ti!n", *eett#nt $'#**#iti!n d 4$%!"e et d %t!"e, et %e "!nt %e" *!dit" i !nt >te d+te%t+" *# $e +#%ti DNS 7 Si $e" +%/#nti$$!n" en e"ti!n %!ntiennent d S#%%/#!"e #in"i e d'#te" !n!"#%%/#ide", L# %!n%ent#ti!n t!t#$e (Hn#$e) d "#%%/#!"e ne "e# d!n% %#$%$+e '#*" $'/&d!$&"e %!*$te de $'+%/#nti$$!n +tdi+. N+#n!in", $2#?!t d DNS #>te $# +#%ti!n de $2/&d!$&"e *# !ie en&#tie %e i *et ent#ine de" ee". En e#n%/e, d2#te" +#%ti" te$" e $2/e!&n#"e "!nt %!*#ti$e" #e% $2inet#"e et d!n% $2/&d!$&"e e"t %!*$te. En"ite, $e DNS *+"ente ne $#4e "*+%iH%it+, i$ *et d+te%te t!" $e" "%e" +d%te", %e i *!"e P!$e $!"2!n et d+teine $# %!n%ent#ti!n de $2n de %e" "%e" "#n" $e" #te". EnHn $# +t/!de d DNS e"t %!nne 0 >te !in" "en"itie et e$$e ne *eet *#" d2#!i de" d!nn+e" "t%/i!+tie" *! $e" !$i4!"#%%/#ide", d!nn#nt de" #$e" *$" +$e+e" e %e$$e" !tene" *# D2#te" +t/!de" P! %!n%$e en d+*it de" $iite" e %ette +t/!de P+"ente, e$$e # +t+ e%!#nd+e *# L22 IUPAC %!i""i!n d#n" $e d!#ine de i!te%/n!$!4ie. De *$" "e" #**$i%#ti!n" $ti*$e" "!nt t" ti$i"+e" d#n" $e" $#!#t!ie" *#t!t d#n" $e !nde. Cette +t/!de e"t t" +n+He %# e$$e n!" *eet de +#$i"e $2e*+ien%e d#n" de" %!nditi!n" #%i$e" en tee" de *G et de te*+#te, *# e$$e ne *et >te ti$i"+e en %#" de d!"#4e d2n +$#n4e %!*$ee de 4$%ide" +d%te".
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FI. CONCLUSION : A*" #!i %/#6+ $e" te" 0 1:: ;C #e% n #in #ie, !n e#e e $# %!$e de" te" N; et N;= i %!nten#it $2inet#"e et d DNS e"t ?#ne, %e i *!e $e" de "!$ti!n" ne "!nt *#" %!nt#in+" *# de" "%e" +d%te" et 2i$" "!nt *e".
=