ALUNO(A): ___________________________ __________________________________________ ____________________________ ________________________ ___________ SÉRIE/ANO: º série
DATA:
/03/2011
Protocolo para extração de DNA da banana Objetivo: conh conhecer ecer os princípios princípios básicos básicos da extração de mate material rial genético a partir de tecidos tecidos
vegetais e animais. Introdução:
Para análise do DNA de células eucarióticas, a primeira etapa importante é o seu isolamento. Os procedimentos que seguem são utilizados para extrair grande quantidade de DNA de fontes vegetais (banana). A extração de DNA de células eucarióticas consta fundamentalmente fundamentalmente de três etapas: 1. Ruptura (física ou química) das membranas celulares para liberação do material genético; 2. De Desm smem embr bram amen ento to do doss crom cromos osso somo moss em se seus us co comp mpon onen ente tess bá bási sico cos: s: DNA DNA e PROTEÍNAS; 3. Separação do DNA dos demais componentes celulares. Materiais
• 200 mL de álcool gelado • 1 banana madura • Gelo picado • Bastão • Peneira • 2 béqueres de 500 mL • NaCl ou seja, sal de cozinha • detergente incolor • água filtrada • saquinho de plástico para amassar a banana • Gelo e isopor Procedimentos Preparar a solução de lise − Em um béquer, misturar água com o NaCl e duas colheres de sopa de detergente
inco incolo lorr e de deix ixar ar no ge gelo. lo. Faça Faça es essa sa prep prepar araç ação ão un unss de dezz mi minu nuto toss an ante tess de co come meça çarr o experimento para que esteja gelada. − Descascar as bananas e colocar no saco plástico. Esmagar por 2 minutos. − Retirar a banana batida e colocar em um béquer. − Acrescentar a solução de lise (GELADA). − Coloque o béquer com a mistura no gelo e agite por 10 minutos com o bastão com movimentos delicados. (DENTRO DO GELO)
− Filtrar a mistura em um béquer (preencher até 150 mL do béquer);
Acrescentar ao filtrado 150 mL de álcool (GELADO) vagarosamente pelas bordas do béquer; − Esperar formar uma superfície de separação nítida entre o etanol (superior) e a água (inferior). − Formam-se fios esbranquiçados, que são aglomerados de moléculas de DNA. −
Questões
1. Por que devemos macerar bem a banana? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 2. Por que é usado o detergente? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 3. Qual a função do NaCl (sal de cozinha)? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ 4. Qual a função da adição do álcool? ____________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________
Respostas:
1. A maceração rompe a parede celular das células da banana. 2. O detergente dissolve a bicamada lipídica, desintegrando assim os núcleos e liberando o DNA. 3. O NaCl ajuda a manter as proteínas dissolvidas no líquido, impedindo que elas se precipitem junto com o DNA 4. O álcool etílico gelado faz o DNA se aglutinar, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada. 1) QUAL A FUNÇAO DO SAL? A função do sal proporcionou o DNA um ambiente favorável, pois o sal contribuiu com os íons positivos que neutralizaram a carga negativa do DNA, para que assim as numerosas células de DNA pudessem coexistir na solução, através da precipitação das proteínas. 2 ) O QUE ACONTECE QUANDO SE ADICIONA O DETERGENTE? O detergente irá lisar as membranas, visto que estas são constituídas de lipídios, estes são insolúveis em água, mas são solúveis em detergente. Com a ruptura dessa membrana o conteúdo celular, incluindo as proteínas e o DNA, soltou-se e dispensou-se na solução. 3 )QUAL O PAPEL DO ÁLCOOL? Como o DNA é insolúvel em álcool, esta forma uma aglomeração de moléculas, portanto o álcool permite o isolamento do DNA. 4) PORQUE VOCÊ NÃO PODE VER A DUPLA HÉLICE? Porque para vermos a dupla hélice, necessitamos do microscópio eletrônico. Conclusão Essa prática permitiu a visualização do DNA, através de substâncias usadas, agentes físicos e químicos, permitindo que no final da prática conseguíssemos ver o DNA da banana, através da lise da membrana, a precipitação salina e o isolamento do DNA.
