Lab. N° 6 - Preparación de medios de cultivo ‘’
Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático ’’
Universidad Agraria La Molina Facultad Ciencias Departamento de Biología
INFORME Nº 6 Título: Integrantes:
Mesa Nº:
“Preparación de medios de cultivo’’
20111351 2012 Gabilan Bendezu, Doris. 20120452 20120452 Mandujano Ugarte, Gina 20111380
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Grupo de práctica: Jueves de 11:00pm- 1:00 pm
2014-II Prof. Ramos Chaupin, Roberto Raúl
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I.
INTRODUCCIÓN.
II.
OBJETIVO.
Preparar y esterilizar medios de cultivos de diferentes características para el cultivo de microorganismos.
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III.
MARCO TEÓRICO.
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IV. PARTE EXPERIMENTAL. 4.1 Materiales.
4.2 Metodología.
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4.3. Resultados.
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V.
DISCUSIONES. En el laboratorio el grupo (mesa2) preparó el medio de cultivo, Agar nutritivo y según Rodriguez, (2005) Agar nutritivo es un cultivo no selectivo, en el cual el extracto de carne y la peptona constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano, es decir la parte del caldo nutritivo. Mientras que el Agar es el agente solidificante y el que sirve de soporte inerte; puede ser enriquecido con sangre, carbohidratos, u otras sustancias, para fines determinados Cuando se preparó el Agar nutritivo, el preparado fue rápido, ya que según Fernandez del barrio, (1994) el agar nutritivo se obtiene luego de la gelatinización del caldo nutritivo, ya que el único procedimiento realizado al medio de cultivo liquido es adicionarle cierta concentración de agar, el cual será la sustancia que permitirá solidificar al caldo nutritivo, debido a que al ser un polisacárido presenta la propiedad de gelatinización, dando como resultado un medio de cultivo sólido. Este último, permite un mejor aislamiento de las colonias puras, debido a que su crecimiento en este tipo de medio es más ordenado que en un medio de cultivo líquido. En algunos medios se necesita hacer un ajuste de pH, como en el agar gelatina ya que según Stryer (2008), algunas enzimas tienen un pH óptimo y fuera de un rango de pH determinado, estas decrecen su velocidad de reacción hasta inactivarse. Es por eso que en algunos medios de cultivo se necesita ajustar el pH para evitar la inactivación de algunas enzimas de las que dependen algunos microorganismos para subsistir además según Madigan (2003), existen algunos factores que pueden inhibir agentes microbianos por ejemplo la temperatura, el pH, la salinidad, etc. Es por esto que algunos medios de cultivo son esterilizados antes y luego se les somete a condiciones extremas donde solo pueden proliferar ciertos microorganismos. López (2006) afirma que el manitol es el único carbohidrato y rojo de fenol como indicador de pH, cuyo ámbito de viraje esta entre pH 8,4 (rojo) y pH 6,8 (amarillo). Cuando hay producción de ácido a causa de la fermentación del manitol, las colonias aparecen rodeadas de un halo amarillo; el medio permanecerá sin cambio de color o acentuará el rojo del medio, cuando las colonias no fermentan el manitol. Para los preparados de los medios de cultivo se utilizó agua destilada y componentes en ciertas proporción, en el caso del agar nutritivo, se utilizó 0.96g del frasco de agar ya que según Madigan (2003), los medios de cultivo definidos se preparan añadiendo cantidades precisas de compuestos orgánicos e inorgánicos, y agua destilada. Tiene componentes específicos como Na2HPO4, glucosa, NH4CL, etc. Los medios complejos se
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preparan utilizando nutrientes extraidos directamente por medio de alimentos como por ejemplo la caseína hidrolizada de la leche. Por lo tanto no tienen componentes con concentraciones específicas, sino con diversas concentraciones y con componentes no conocidos. Por lo tanto podemos afirmar que todos los medios de cultivo realizados en esta práctica son medios complejos ya que poseen sustancias derivadas de productos alimenticios y no se puede saber su concentración específica de nutrientes. Según Cavallini (2005) el Agar Manitol Sal es un medio altamente selectivo, pues tiene una alta concentración de cloruro de sodio (7,5 por ciento), que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias pero, tolerada por el grupo de los estafilococos. También afirma que el crecimiento de la mayoría de las bacterias se inhibe si se colocan en un medio de presión osmótica elevada, como por ejemplo, superior al 2% de sal (NaCl). Siendo el NaCl (7.5%) el que da el carácter selectivo del Agar Manitol Sal. Observar que hay una diferencia notoria con el Agar Mac Conkey cuya concentración de NaCl es 1.5% Según Vera (1995) los medios de cultivo diferenciales permiten distinguir características metabólicas específicas de diversas especies o géneros de bacterias o de ciertos grupos de las mismas. Esto se da debido a que este tipo de medio de cultivo posee sustancias específicas que pueden ser metabolizadas solo por cierto tipo de microorganismo, los cuales podrán crecer en este medio de cultivo y metabolizar dicha sustancia, generando productos específicos como resultado de este. Para que se pueda detectar la presencia de estos productos como resultado del metabolismo de la sustancia particular añadida, es necesario generalmente en este tipo de medio de cultivo, la presencia de indicadores, los cuales mediante cambios de color en la mayoría de casos, permitirán reconocer la presencia de estos; y con esto identificar el metabolismo especifico realizado por cierto tipo de microorganismo.
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VI.
CONCLUSIONES:
La preparación de muestras cultivo diferencial nos ayuda a tener una primera identificación o clasificación.
Algunos medios de cultivo se necesita ajustar el pH para evitar la inactivación de algunas enzimas de las que dependen algunos microorganismos para subsistir
La mayoría de medios de cultivos contienen muy bajos porcentajes de proteínas, ya que estos son los nutrientes principales de los microorganismos.
El crecimiento de la mayoría de las bacterias se inhibe si se colocan en un medio de presión osmótica elevada.
Las condiciones a las que un medio de cultivo se somete y la selección apropiada de este, son cuestiones importantes para lograr un crecimiento óptimo de una determinada bacteria.
El agar manitol salado es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
El agar mantiene en estado sólido al cultivo a una temperatura de 37°C lo que no hace la gelatina, es por eso que se prefiere usar agar cuando se tiene que incubar en baño maría.
Se debe esterilizar el medio antes de incubar, pues alguna clase de microorganismo puede contaminar.
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VII.
CUESTIONARIO.
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VIII.
BIBLIOGRAFÍA.
CAMACHO, E. 2005. Importancia de la proteasa peptona N°3 en la producción de pigmentos por Streptococcus agalactiae en el medio granada. Tesis UNIVERSIDAD DE GRANADA. FERNANDEZ, GARCIA P. y PAREDES, F. 1994. Microbiología clínica práctica. 2º edición. Servicio de publicaciones de la Universidad de Cadiz.
López Tévez, Leonor; Torres, Carola. 2006. Medios de Cultivo. Microbiología General- Carrera Farmacia. Universidad Nacional del Nordeste.
MADIGAN, MARTINKO & PARKER. 2003. Brock Microbiologia de los microorganismos. Editorial Prentice Hall. Décima Edicion. Impreso en España, pag 107. RODRÍGUEZ, E.; GAMBOA, M.; HERNÁNDEZ, F; GARCIA, J. 2005. Bacteriología general: Principios y Prácticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica.
STRYER, BERG, TYMOCZKO. 2008. Bioquímica. Editorial Reverté. Impreso en España. TORTORA G., Funke B., Case C. 2007.Introducción a la microbiología. Novena Edición. Ed. Médica Panamericana. Madrid, España
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IX. ANEXOS. Anexo 1: Medio químicamente definido
para
el
crecimiento de un microorganismo quimioheterótrofo típico
como Escherichia
coli. ( Fuente: Tortora, 2007)
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Anexo 2: Análisis típico de la proteosa peptona. Fuente (Camacho, 2005)
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