INTERPRETASI ELEKTROFORESIS HEMOGLOBIN TRI RATNANINGSIH RATNANINGSIH BAG. PATOLOGI KLINIK FK UGM SUB HEMATOLOGI HEMATOLOGI INST. LABORATORIUM LABORATORIUM KLINIK RS DR SARJITO SARJITO
WORKSHOP JOGLOSEMAR SOLO 18 APRIL APRIL 2013 2013
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GL GLOBIN OBIN LAINNY LAINNYA A
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GL GLOBIN OBIN LAINNY LAINNYA A
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GLOBIN LAINNYA
Hb pati
Sindrom Thalassemia
Thalassemia alfa
Thalassemia beta
Silent carrier,trait, HbH disease, hydrops
Minor, Mayor, HPFH
Hb varian
Hb S
AS, SS, SC
Hb C
Hb E
Hb D
AC, CC
AE, EE, Trait β/ βE, β E/βE homozigot
AD, DD
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GLOBIN LAINNYA
alkaline
acid
Pada pH alkali: Hb bermigrasi pada cellulose acetate membrane dari cathode anode dengan urutan sbb:
HbA2, Hb C, Hb E, Hb S, Hb D, Hb Lepore, Hb F, Hb A dan fast moving Hb Bart's dan Hb H
HbA2, Hb C, Hb E, dan O migrasi bersama membentuk single band. Hb S, D dan G juga komigrasi.
Pada pH asam:
Hb C terpisah dari E dan O. Hb S terpisah dari D dan G.
Hb D dan G tetap tidak dapat terpisah
A Normal α+-Thalassemia silent -α/αα α0-Thalassemia trait -α/-α (α+homozigot) atau--/αα(α0heterozigot) ααCS/ααCS Hemoglobin H disease --/-α (α0/α+) --/ααCS (α0/αCS) Hydrops fetalis --/-- (α0/α0)
97
Hemoglobin (%) H (β4) B( 4) Constant pada saat lahir spring 0 0 0
98-100
0
(0-2)
0
85-95 85-95
inklusi 0
(5-15) (5-15)
0 5
70-95 60-90
5-30 5-30
Trace Trace
Trace 5-10
0
5-10
90-95
0
Clinical Syndrome
Genotype
Minor (Trait)
/ or / °
Intermedia Major
Hb (g/dl)
A
F
A2
10-13
90-95
1-5
4-7a
/
7-10
30-50
50-70
0-5
+
<7
2-10
>85
1-6
0
95-100
0-5
+
+
+
/°
or °/° Hb
Minor
Intermedia
Major
Hb A
Dec
Dec
Dec
Hb A2
N to Inc
N to Inc
Usually Inc
Hb F
N to Inc
Increased
Increased
Clinical Syndrome
Genotype
Minor (Trait)
/ or / °
Intermedia Major
Hb (g/dl)
A
F
A2
10-13
90-95
1-5
4-7a
/
7-10
30-50
50-70
0-5
+
<7
2-10
>85
1-6
0
95-100
0-5
+
+
+
/°
or °/° Hb
Minor
Intermedia
Major
Hb A
Dec
Dec
Dec
Hb A2
N to Inc
N to Inc
Usually Inc
Hb F
N to Inc
Increased
Increased
Clinical Syndrome
Genotype
Minor (Trait)
/ or / °
Intermedia Major
Hb (g/dl)
A
F
A2
10-13
90-95
1-5
4-7a
/
7-10
30-50
50-70
0-5
+
<7
2-10
>85
1-6
0
95-100
0-5
+
+
+
/°
or °/° Hb
Minor
Intermedia
Major
Hb A
Dec
Dec
Dec
Hb A2
N to Inc
N to Inc
Usually Inc
Hb F
N to Inc
Increased
Increased
Hemoglobin Hemoglobi nopati
A %
Hb CC Hb AC
50-60
F % 1-7
S %
<2
C % >90
D %
E %
Kelainan klinis ringan
40-50
-
50
Sedang-berat
Hb SC
1-7
50
Hb SS
1-10
80-90
berat
<2
30-45
ringan
Hb AS
55-70
Hb DD Hb AD
50-65
Hb EE Hb AE
<2
95
-
<2
35-50
-
1-5 60-80
95
ringan
20-40
-
Hb pati Hb CC Hb AC Hb SC Hb SS Hb AS Hb DD Hb AD Hb EE Hb AE
A %
F S % % 1-7 50-60 <2 1-7 50 1-10 80-90 55-70 <2 30-45 <2 50-65 <2 1-5 60-80
Hemoglobin C D % % >90 40-50 50
E %
95 35-50 95 20-40
Kelainan klinis ringan Sedang-berat berat ringan ringan -
Pola hemoglobin pada hemoglobinopati kombinasi
Normal Hemoglobin E Trait β/ βE β E/βE homozigot E/ β Thal βE/β0 E/ α Thal Hemoglobin S Trait β/ βS β S/βS homozigot S/ β Thal βS/β0 βS/β+ Hemoglobin C Trait β/ βC β C/βC homozigot C/ β Thal βC/β0 βC/β+
A 97
Hemoglobin F <1
A2 2-3
60-65 0 0 70
1-2 0 45 0
2-3 5 1-5 2-3
60-70 0 0 20-30
1-2 5-10 5-10 5-10
2-3 4-7 4-7
5-10 5-10
3-5 -
55-65 0 0
E/S/C 0 E 30-35 95 40-50 30 S 30-40 90-95 80-90 50-70 C 30-40 90-95 90-95 6
Hemoglobin A F A2 E/S/C Normal 97 <1 2-3 0 Hemoglobin E E Trait β/ βE 60-65 1-2 2-3 30-35 β E/βE homozigot 0 0 5 95 E/ β Thal βE/β0 0 45 1-5 40-50 E/ α Thal 70 0 2-3 30
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GLOBIN LAINNYA
Data hematologi
Manifestasi klinis
Informasi ras/etnik
Elektroforesis ANALISIS GLOBIN HPLC
Identifikasi Hb pati dg Probabilitas terbesar
Capillary electrophoresis
Analisis Gena
Mendukung kecurigaan jenis varian yg prevalen
Analisis Globin
(PDS Patklin) Darah vena Pemeriksaan CBC
MCV >80 fl dan atau MCH >27 pg
MCV <80 fl dan MCH <27 pg
Review morfologi eritrosit Eritrosit mikrositik hipokrom dan/ atau ditemukan kelainan morfologi eritrosit
SELESAI
Eritrosit normositik normokrom, tidak tampak kelainan morfologi eritrosit
Analisis hemoglobin
HbA2 > 8 %
8%> HbA2 >3,5%
HbA2< 3,5%
HbF < 1,0% 5%> HbF > 1,0%
Thalassemia beta trait Analisis lebih lanjut untuk Hb varian
Thalassemia heterozigot ganda
HbF >5% Analisis lebih lanjut untuk HPFH, thalassemia beta intermedia atau atau Hb varian lain
Lakukan pemeriksaan analisis hemoglobin dengan metode HPLC atau capillary electrophoresis sesuai dengan petunjuk pemeriksaan dengan masing-masing alat. Pada setiap run, lakukan pemeriksaan bahan kontrol untuk menilai validitas pemeriksaan. Untuk metode HPLC, syarat-syarat untuk kalibrasi harus terpenuhi, dan hasil pemeriksaan bahan kontrol masuk dalam rentang nilai kontrol. Selain itu, total area di bawah kurva harus berkisar antara 1.000.000-4.000.000. Lakukan interpretasi hasil dengan menilai kadar HbA2, HbF dan melihat adanya Hb varian yang mungkin terdeteksi.
Flowchart diagnosis hemoglobinopati berdasarkan
indeks eritrosit
1
PRODUKSI HEMOGLOBIN
2
KLASIFIKASI HB PATI
3
PEMERIKSAAN ELEKTROFORESIS PADA HB PATI DAN THALASSEMIA
4
STRATEGI DIAGNOSIS HB PATI
5
TEKNIK ANALISIS GLOBIN LAINNYA
Retention time dari berbagai varian Hb Retention time A2 dan E sama Ditemukan beberapa kesamaan antara retention time dan pola pada alkaline electrophoresis
HPLC and Capillary Hb electrophoresis patterns of an adult with HbH disease. The HbH (β4 tetramers) peak elutes from the column as a compressed fraction, and as a fast moving fraction
β o thalassemia major (b) β 1 thalassemia homozygous E (c)
terimakasih
HbA2 range Interpretation >
0
, e n e
3.8 –
0
3.4 – 3.7
2.0 –
a th l tr t
r
n. l m ta tio e
e ef ci ency β t h l t r t ; Δ in a ra n wt β t h l t r t . β βth l io n α l tr it ; ta tio S k ng t in ; in io n α - H
3 Δ
< 2.0
t o r fy sr tu l β e o
βth l e s
Δ β t h l lp a l n e
t β
F l tr it
t H F d e it; H H is
d
e te ; a th l tr t. i s i ng w t h e t h Δ α t h l t r t . te Δ
n
r eta
