TEST DE COOMBS
GENERALIDADES De los sistemas serológicos para demostrar la presencia de antígenos o anticuerpos de grupos sanguíneos, la Prueba de Coombs o antiglobulina humana es considerada como la más eficiente y de mayor valor en el Banco de Sangre. Principio de la prueba: Detectar inmunoglobulinas de la clase IgG y/o fracciones del complemento ( C3d ) unidos a los G.R. Obtención: El reactivo de antiglobulina se prepara inyectando a conejos gamma globulina humana purificada para obtener suero antiglobulina, y otras son inyectadas inyectadas con componentes purificados del complemento ( C3 ) para producir anticuerpos específicos contra ellos .
FUNDAMENTOS
DE LA PR UEBA DE COOMBS
Los anticuerpos anticuerpos y complemento humano son globulinas y además son diferentes a otras especies; por lo tanto, se comportan como antígenos cuando se inyectan a otras animales. Si un animal es inyectado con globulinas g lobulinas humanas purificadas o con suero total, este animal elaborará anticuerpos contra ellas, estos anticuerpos tendrán especificidad antiglobulina humana. El suero antiglobulina humana ( Suero de Coombs ) reaccionará específicamente contra las globulinas humanas. Si los G.R. están sensibilizados por las inmunoglobulinas, el suero de Coombs se combinará con ellas.
MECANISMO DE ACCION DEL REACTIVO ANTIGLOBULINA HUMANA
GENERALIDADES La
sensibilización de los G.R. se puede producir de dos formas:
a) In vivo, vivo, es decir decir,, cuando cuando la reacci reacción ón del del antígeno antígeno con su su correspondiente anticuerpo se efectúa en el organismo, cuando ambos están circulando como sucede, por ejemplo, en caso anemias hemolíticas autoinmunes, enfermedad hemolítica del recién nacido, etc. b) In vitro, la sensibilizaci sensibilización ón de los los G.R. por el anticuerpo anticuerpo se realiza en un tubo de ensayo en el laboratorio. Si en el suero existen anticuerpos contra los los antígenos presentes , se producirá la reacción antígeno-anticuerpo y los G.R. quedaran sensibilizados. Para demostrar la sensibilidad de los G.R. sea in vivo o in vitro existen dos modalidades en la prueba de antiglobulina
PR UEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA Detecta la sensibilización de G.R. in vivo. Tiene valor dx. en: * Enfermedad hemolítica del recién nacido * Anemia hemolítica autoinmune * Anemia hemolítica y sensibilización inducida por drogas * Investigación de reacciones transfusionales. Procedimientono Interpretación: a) Si la prueba prueba de Coombs muestra aglutinac aglutinación, ión, se interpr interpreta eta positiva, significa que hubo sensibilización de los G.R. in vivo, se señala en cruces, vg. 4 + b) Si no hub hubo o aglutinación aglutinación,, la prueba prueba es negativa negativa y significa significa que no existe autosensibilización eritrocítica. La prueba negativa será válida si la prueba prueba control es positiva.
COOMBS DIRECTO PROCEDIMIENTO
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PREPARACIÓN PARA LA PRUEBA
a. Lavar los eritrocitos del paciente paciente cuando menos 3 veces en solución salina con una concentración al 4 %
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Adición del Suero Anti-Humano a. Colocar en un tubo de ensayo una una a dos gotas gotas del suero de Coombs Coombs b. Agregar una gota de eritrocitos lavados al tubo de ensayo c. Mezclar bien con una suave agitación. Centrifugar Centrifugar 20 seg. a 3,400 RPM
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REACCIÓN
a. Resusp Resuspender ender los eritroc eritrocitos itos para ver ver aglutinaci aglutinación ón macroscóp macroscópica ica b. Una reacció reacción n negat negativa iva confi confirmarla rmarla por medio de examen microscópico
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INTERPRETACIÓN
a. TUBO SUPERIO SUPERIOR: R: Aglutin Aglutinación ación eritroc eritrocitos itos cubierto cubiertos s con anticuer anticuerpo po b. TUBO INFER INFERIOR IOR : Sin aglut aglutinació inación n Antic Anticuerpo uerpos s no demos demostrado trados s en los
PR UEBA DE COOMBS INDIRECTA Permite detectar G.R. sensibilizados in vitro. El suero en estudio es incubado con los G.R. por el tiempo adecuado, luego se lavan para eliminar anticuerpos y otras inmunoglobulinas que no se han fijado en el eritrocito. Se investiga anticuerpos irregulares en el suero sue ro La
detección de anticuerpos presentes en el suero se realiza con: a) G.R. especialme especialmente nte selecciona seleccionados: dos: células células detectaras detectaras,, en las cuales se encuentran presentes los antígenos de grupos sanguíneos correspondientes a los anticuerpos de mayor frecuencia frecue ncia e importancia clínica. b) G.R G.R.. de genétic genéticaa conoci conocida da ( panel panel ). Se usa despu después és de haber haber demostrado anticuerpos irregulares mediante las células detectoras. c) Con G.R. G.R. descono desconocid cidos os com como o en la Prueba Prueba de compat compatibi ibilid lidad. ad.
COOMBS INDIRECTA PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR LA PRESENCIA DE ANTICUERPOS EN EL SUERO ( PRUEBA CRUZADA MAYOR )
1
PREPARACIÓN PARA LA PRUEBA
a. Lavar G.R. del donan donante te en soluci solución ón salina norma normall con una concen concentració tración n al 4 % b. Coloq Coloque ue dos gotas gotas del del suero del del receptor receptor en cada cada uno uno de los tubos. tubos. Agregar Agregar
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SENSIBILIZACIÓN DE LOS ERITROCITOS
a. Agregue Agregue una una gota gota de eritrocito eritrocitos s lavados lavados a cada uno uno de los los tubos tubos de ensayo b. Mezcle con suave agitac agitación ión e incub incube e duran durante te 15 a 60 minut minutos os a 37º C
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LAVADO DE LOS ERITROCITOS ANTES DE LA PRUEBA DE COOMBS
a) Lave los eritrocito eritrocitos s tres veces veces con con una solución solución salina salina normal normal,, decantando tanta solución como sea posible después del último lavado
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ADICIÓN DEL SUERO ANTI-HUMANO
a) Agr Agregu egue e una una o dos gotas gotas del del suero suero de Coomb Coombs. s. b) Mezclar bien y centrifu centrifugar gar y resuspender resuspender los los eritrocitos eritrocitos.. Observar Observar si hay aglutinación. c) Una reacció reacción n negat negativa iva puede ser confi confirmada rmada por examen
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INTERPRETACIÓN
TUBO SUPERIOR: Aglutinación incompatible
Prueba cruzada mayor
PR UEBA DE COOMBS INDIRECTA Interpretación a) Si hay aglutinaci aglutinación: ón: prueba prueba de Coombs Coombs indirecta indirecta posit positiva, iva, presencia de anticuerpos irregulares en el suero. b) Si no hay aglutinación aglutinación : Coombs Coombs indirecto indirecto negativa. negativa. Es válido el resultado si la prueba control de Coombs es positiva, y si esta última es negativa, la prueba es inválida. Debe repetirse el procedimiento. Indicaciones embarazo, donantes de sangre, * Como screening en: embarazo, *Pacientes que está recibiendo transfusiones o ya las ha recibido * Identificar cualquier anticuerpo encontrado en el screening * Pruebas de compatibilidad * Determinación de ciertos grupos sanguíneos, como D u, Kell, Kidd, Duffy
RESULTADO DE TECNICAS DE AGLUTINACION Y DE ELISA EN PACIENTE PACIENTE CON PR UEBA DE COOMBS NEGATIVA
