Auxiliar de Laboratorista Químico
27 de octubre de 2015
TÉCNICA ASÉPTICA ASÉPTICA Práctica No. 1 | Capacitación | Auxiliar de Laboratorista Químico
Objetivo
Introducción
El alumno conocerá y aplicará la técnica aséptica que les proporcionará proporcionará los conocimientos en los procedimientos habituales en el área de microbiología.
El procedimiento que se llevará a cabo requiere el entendimiento de lo que se necesita en el mantenimiento de un ambiente aséptico cuando se manejan cultivos de microorganismos. En esta actividad tendremos la oportunidad de trabajar con cultivos de diferentes tipos de medios para desarrollar aquellas habilidades que se requieren en el mantenimiento de la asepsia.
Acerca de la técnica En un laboratorio de microbiología todas las manipulaciones deben ser llevadas a cabo de tal modo que se impida la contaminación en el área de trabajo. Los procedimientos utilizados para conseguirlo se conocen con el nombre de "Técnica aséptica”. La "Técnica aséptica" tiene un doble objetivo: a) evitar que el operador se contamine con microorganismos procedentes de las muestras o cultivos y b) evitar la contaminación de las muestras y cultivos con microorganismos procedentes del ambiente o del propio operador.
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La transferencia aséptica de un cultivo desde un medio a otro es exitosa solo si los microorganismos contaminantes no son introducidos durante el proceso. Una transferencia puede involucrar el transporte de organismos desde una colonia aislada sobre una placa de medio sólido hacia un tubo con caldo, o inoculando varios medios " sólidos s ólidos o líquidos # desde un caldo de cultivo para varios tipos de pruebas. El procedimiento general es de la siguiente manera:
Desinfecci Desin fección ón del área de trabajo . El área de trabajo es primero tratada con un desinfectante para matar cualquier microorganismo que pueda estar presente. Este paso destruye células vegetativas y virus; las endosporas, sin embargo, no son destruidas con esta breve aplicación de desinfectante. Asas y agujas. El transporte de organismos será realizado con una asa o aguja de inoculación. Para esterilizar el asa o aguja antes de tomar la muestra de organismos, requerimos calentarlo en la flama de mechero Bunsen hasta que alcance a brillar al rojo vivo. Flamear Flamear el tubo de cultivo. Antes de insertar el asa o aguja ya frío dentro de un tubo de cultivo, el tapón del tubo será quitado y la boca del tubo de cultivo flameado con el mechero. Una vez que los microorganismos han sido removidos del tubo, la boca del tubo debe ser flameado otra vez antes de volver a colocar colocar la tapa del tubo. 1
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Inoculación en medio líquido . Si un tubo de medio líquido será inoculado, la boca de dicho tubo será flameado antes de insertar la asa dentro del tubo. Para dispersar los organismos en el asa, ésta debe moverse de adelante hacia atrás en el medio. Si una aguja de inoculación es usado para sembrar por picadura en un medio sólido, la aguja será insertada profundamente dentro del medio.
Flameado final . Una vez que la inoculación este completada, la asa o aguja será quitada del tubo, flameada como se realizó previamente y regresada a un receptáculo. Estas herramientas nunca deben ser colocadas en la mesa de trabajo. El tubo inoculado es también flameado antes de colocarle la tapa. Inoculación en placas de Petri . Para inocular en una placa Petri, no se aplica calor a la placa y una asa bacteriológica será usado para la transferencia. Cuando generar las estrías en la superficie del medio, la cubierta " la tapa de la placa # debe estar colocada en forma diagonal con respecto a la placa inferior para evitar la contaminación del medio por el aire. Desinfección final . Cuando todo el trabajo este terminado, el área de trabajo será tratada con desinfectantes para asegurar que cualquier microorganismo adherido en la mesa de trabajo durante cualquiera de los procedimientos sea eliminado.
Materiales Caldo de cultivo de Escherichia coli / Agar de cultivo inclinado de Escherichia coli Tubos de caldo nutritivo estéril / Tubos con agar de cultivo inclinado estériles Asa de inoculación Mechero Bunchen Desinfectante !fenol 5"; cloruro de benzalconio 5", cloro 5"# Marcador indeleble
Desarrollo Actividades preliminares 1. Prepara tu mesa de trabajo limpiándola con un desinfectante. Usa una esponja. 2. Con un marcador indeleble etiqueta dos tubos con caldo nutritivo estéril con tus iniciales y E. coli. 3. Crea un ambiente estéril, dejando prendido el mechero Bunsen durante 15 min.
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Procedimiento (Transferencia de un caldo de cultivo a otro) Emplear bata, guantes y cubrebocas en todo momento.
4. Ten a tu alcance los materiales a trabajar, ya que nadie te puede asistir durante el procedimiento. 5. Esteriliza de forma completa el asa de inoculación, es decir todo el alambre, hasta que se ponga al rojo vivo " figura 1 #. 6. Con la mano que te queda libre, agita gentilmente el tubo para dispersar el cultivo " figura 2 #. 7. Presiona el tapa del tubo con el dedo meñique de la mano con la cual sostienes el asa de inoculación y quita el tapón del tubo. Flamea la boca del tubo como se ilustra " figura 3 #.
8. Inserta el asa de inoculación en el cultivo " figura 4 #. 9. Saca el asa que contiene una muestra del cultivo, flamea la boca del tubo otra vez " figura 5 # y vuelve a colocarle la tapa al tubo " figura 6 #. Coloca los tubos en una gradilla.
10. Toma con la mano libre, un segundo tubo con caldo nutritivo estéril, cuidadosamente quita la tapa del tubo con el dedo meñique y flamea la boca del tubo " figura 7 #. 11. Sin flamear el asa de inoculación, insértalo en el caldo estéril, inoculándolo " figura 8 #. Para dispersar a los organismos en el medio, mueve el asa de adelanta hacia atrás en el tubo. 12. Saca el asa del tubo y flamea la boca " figura 9 #. Vuelve a colocar la tapa en el tubo " figura 10 #. Cobach 08
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13. Esteriliza el asa en el mechero " figura 11 #. Deja el asa en un receptáculo. 14. Incuba los cultivos que han sido inoculados a 37 grados centígrados durante 24 $48 hrs.
Procedimiento (Transferencia de un medio de cultivo inclinado a otro) 1. Con un marcador indeleble etiqueta dos tubos con agar de cultivo inclinado estéril con tus iniciales y E. coli. 2. Esteriliza tu asa de inoculación, calienta todo el alambre hasta que este al rojo vivo " figura 12 #. Deja que se enfríe completamente el asa. 3. Usando la mano que esta libre, toma el cultivo inclinado con E. coli y retira la tapa usando el dedo meñique de la mano que sostiene el asa " figura 13 #. 4. Flamea la boca del tubo e inserta el asa, previamente enfriada, dentro del tubo. Toma una porción de la muestra con el asa " figura 14 # y saca el asa del tubo. 5. Flamea la boca del tubo " figuras 14 y 15 # y vuelve a colocarle la tapa. Regresa el tubo a la gradilla. 6. Toma un medio de cultivo inclinado estéril con tu mano libre, retira la tapa del tubo con el dedo meñique y flamea la boca del tubo " figura 16 #.
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7. Sin calentar el asa que contiene el cultivo, inserta el asa en el tubo e inocula suavemente en la superficie del medio inclinado, moviendo el asa de adelante hacia atrás sobre la superficie del agar " figura 17 #. Esto debe involucrar un tipo de movimiento para generar estrías. 8. Retira el asa del tubo, flamea la boca del tubo y vuelve a colocarle su tapa " figura 18 #. Coloca el tubo en la gradilla.
9. Calienta el asa de inoculación, el alambre completo hasta que se ponga al rojo vivo " figura 19 #, déjalo enfriar y coloca el asa en su contenedor. 10. Incuba el agar inclinado inoculado a 30 grados centígrados durante 24 $48 hrs.
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Procedimiento (Transferencia de una placa Petri a un medio de cultivo inclinado) La transferencia de organismos de colonias que se encuentran sobre pacas de agar a tubos con caldo o medios inclinados es muy similar a los procedimientos usados previamente en la práctica. Las siguientes reglas deben observarse.
Asas vs. Agujas. En algunos casos una asa puede ser usada. En otras circunstancias una aguja es preferible. Cuando un inoculo grande es necesario transferir, una asa será usada. Las agujas son preferibles, sin embargo, cuando se realizan las transferencias en aislamientos de cultivos puros y para cultivos por picadura. En aislamientos de cultivos puros, una aguja es insertada en el centro de una colonia para la transferencia. Esta técnica es usada, principalmente, cuando se trabajan con cultivos mezclados.
Manejo de la placa. Los medios en placas deben estar siempre protegidos contra la contaminación. Para evitar la contaminación del aire, las cubiertas siempre deben dejarse cerradas. Cuando los organismos son trasladados de una placa de cultivo, la cubierta debe estar parcialmente abierta. Procedimientos de flameo. Las asas o agujas de inoculación deben ser calentadas de la misma manera como se ha venido realizando en esta práctica. La diferencia es cuando se trabaja con placas y es que estas nunca deben ser flameadas. Etiquetado de placas. Las placas de Petri con medio de cultivo en ellas son siempre etiquetadas sobre la parte inferior de la placa. Las placas inoculadas son preferiblemente almacenadas boca abajo.
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