SPEKTROFOTOMETER SPEKTROFOTOMETER UV - VIS A. Pengertian Pengertian dan Fungsi
Spektrofotometer adalah alat untuk menukur transmitan atau absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Spektrofotometer merupakan gabungan dari alat optic dan elektronika serta sifat-sifat kimia fisiknya. Dimana detector dapat mengukur intensitas cahaya yang dipancarkan secara tidak langsung cahaya yang diabsorbsi. Tiap media akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu tergantung pada senyawa atau warna yang terbentuk.
Gambar 1 Spektrofotometer UV-Vis beserta perangkatnya Spektrofotometri UV-Vis merupakan gabungan antara spektrofotometri UV dan Visible. Alat ini menggunakan dua buah sumber cahaya yang berbeda, yaitu sumber cahaya UV dan sumber cahaya Visible. Larutan yang dianalisis diukur serapan sinar ultra violet atau sinar tampaknya. Konsentrasi larutan yang dianalisis akan sebanding dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat yang terapat dalam larutan te rsebut. Warna yang diserap oleh suatu senyawa merupakan warna komplementer dari warna yang teramati. Beberapa warna yang diamati dan warna komplementernya terdapat pada tabel berikut ini : Panjang gelombang
Warna terlihat
Warna komplementer komplementer
<400
Ultraviolet
-
400-450
Violet
Kuning
450-490
Biru
Jingga
490-550
Hijau
Merah
550-580
Kuning
Ungu
580-650
Jingga
Biru
1
650-700
Merah
>700
Inframerah
Hijau
Tabel 1 Spektrum Warna Sinar dari sumber cahaya akan dibagi menjadi dua berkas oleh cermin yang berputar pada bagian dalam spektrofotometer. Berkas pertama akan melewati kuvet berisi blanko, sementara berkas kedua akan melewati kuvet berisi sampel. Blanko dan sampel akan diperiksa secara bersamaan. Adanya blanko, berguna untuk menstabilkan absorbsi akibat perubahan voltase dari sumber cahaya. Kelebihan Spektrofotometer: 1. Penggunaannya luas. Dapat digunakan untuk senyawa organic, anorganik dan biokimia yang diabsorbsi pada daerah ultraviolet maupun daerah tampak 2. Sensitivitasnya tinggi. Batas deteksi untuk mengabsorbsi dapat diperpanjang menjadi 10-6 sampai 10-7 M 3. Selektivitasnya tinggi 4. Ketelitiannya baik 5. Pengukurannya mudah, dengan kinerja yang cepat Keuntungan dari spektrofotometer adalah yang pertama penggunaannya luas, dapat digunakan untuk senyawa anorganik, organik dan biokimia yang diabsorpsi di daerah ultra lembayung atau daerah tampak. Kedua sensitivitasnya tinggi, batas deteksi untuk mengabsorpsi pada jarak 10-4 sampai 10-5 M. Jarak ini dapat diperpanjang menjadi 10-6 sampai 10-7 M dengan prosedur modifikasi yang pasti. Ketiga selektivitasnya sedang sampai tinggi, jika panjang gelombang dapat ditemukan dimana analit mengabsorpsi sendiri, persiapan pemisahan menjadi tidak perlu. Keempat, ketelitiannya baik, kesalahan relatif pada konsentrasi yang ditemui dengan tipe spektrofotometer UV-Vis ada pada jarak dari 1% sampai 5%. Kesalahan tersebut dapat diperkecil hingga beberapa puluh persen dengan perlakuan yang khusus. Dan yang terakhir mudah, spektrofotometer mengukur dengan mudah dan kinerjanya cepat dengan instrumen modern, daerah pembacaannya otomatis (Skoog, DA, 1996).
2
B. Bagian-bagian Spektrofotometer UV-Vis
Gambar 2 Spektrofotometer UV-Vis di Laboratorium Kimia Anorganik
Bagian-bagian dari Spektrofotometer UV-Vis, yaitu: 1. Sumber cahaya Sumber cahaya pada spektrofotometer UV-Vis ada dua macam: a. Lampu Tungsten (Wolfram) Lampu ini digunakan untuk mengukur sampel pada daerah tampak. Bentuk lampu ini mirip dengan bola lampu pijar biasa. Memiliki panjang gelombang antara 350-2200 nm. Spektrum radiasianya berupa garis lengkung. Umumnya memiliki waktu 1000jam pemakaian. b. Lampu Deuterium Lampu ini dipakai pada panjang gelombang 190-380 nm. Spektrum energi radiasinya lurus, dan digunakan untuk mengukur sampel yang terletak pada daerah uv. Memiliki waktu 500 jam pemakaian. 2. Monokromator Monokromator adalah alat yang akan memecah cahaya polikromatis menjadi cahaya tunggal (monokromatis) dengan komponen panjang gelombang tertentu.
3
3. Kompartemen sampel Kompartemen ini digunakan sebagai tempat diletakkannya kuvet. kuvet merupakan wadah yang digunakan untuk menaruh sampel yang akan dianalisis . 4. Detektor Detektor akan menangkap sinar yang diteruskan oleh la rutan. Sinar kemudian diubah menjadi sinyal listrik oleh amplifier dan dalam rekorder dan ditampilkan dalam bentuk angka-angka pada reader (komputer). 5. Visual display Merupakan system baca yang memperagakan besarnya isyarat listrik, menyatakan dalam bentuk % Transmitan maupun Absorbansi. 6. Penguat (amplifier) Berfungsi untuk memperbesar arus yang dihasilkan oleh detektor agar dapat dibaca oleh indikator.
C. Cara penggunaan spektrofotometer uv-vis
1. Connecting power (menghubungkan power) (1) Pastikan button power instrument pada posisi off (mati/0) (2) Pastikan tegangan listrik sesuai dengan spesifikasi alat (220 V) (3) Masukkan konektor kabel power ke sumber tegangan 2. Turning ON power and initialization (menyalakan dan proses inisialisasi) (1) Button power berada di sisi belakang instruments (2) Periksa sampel kompartmen harus dalam keadaan kosong (3) Tekan button power pada posisi ON untuk menyalakan instruments (4) Secara otomatis instruments akan melakukan proses inisialisasi. Apabila terjadi gangguan maka akan muncul comment NG (Not Good), jika tidak ada masalah maka akan muncul command OK (5) Setelah proses inisialisasi selesai, pada layar akan muncul menu utama (MODE SELECTION MENU) 3. Analisis sample 3.1. Photometric mode (mode fotometrik) Fungsi : untuk mengukur absorban atau % transmittan pada panjang gelombang tertentu 4
Prosedur : 1) Tekan [1] PHOTOMETRIC pada keypad 2) Tekan [GO TO WL] → masukkan numeric panjang gelombang yang diinginkan → [ENTER] 3) Tekan [F1] untuk mengubah mode pengukuran dari ABS ke % T dan sebaliknya 4) Masukkan kuvet yang berisi larutan blangko ke dalam kompartemen sampel 5) Tekan [AUTOZERO] untuk mengenolkan sinyal 6) Ganti kuvet yang berisi larutan blangko dengan kuvet yang berisi sampel yang akan dianalisa 7) Tekan [START] untuk membaca nilai absorban (ABS) atau transmittannya (%T) 8) Ulangi langkah 6-7 untuk sampel berikutnya 3.2. Spectrum mode (Metode spectrum) Fungsi : scanning sampel pada range panjang gelombang tertentu untuk mengukur besarnya panjang gelombang dimana absorban, % transmittan, atau E maksimal dari sampel. Prosedur : 1) Tekan [2] SPECTRUM pada keypad 2) Ganti parameter sesuai kebutuhan : 1. Meas mode : untuk memilih mode pengukuran (ABS, %T, atau E) Tekan [1] → ENTER 2. λ Range : Tekan [2] → [ENTER] → atur range panjang gelombang tertinggi → [ENTER] → atur panjang gelombang terendah → [ENTER] 3. Rec Range : untuk mengatur skala sumbu y (ABS, %T atau E) yang akan ditampilkan. Tekan [3] → [ENTER] → atur range terendah → [ENTER] → atur range tertinggi → [ENTER] 4. Scan Speed : tekan [4] → [ENTER] → [1] / [2] / [3] / [4] / [5] → [ENTER] 5. No. Of Scan : untuk mengatur banyaknya pengukuran yang akan dilakukan. Tekan [5] → [ENTER] → [1] / [2] / [3] dst → [ENTER] 6. Display mode : untuk mengatur macam tampilan pada layar. Tekan [6] → [ENTER] → Sequential (layar menampilkan spectrum hasil analisa yang terbaru) / Overlay (layar memunculkan semua hasil s pectrum) 3) Masukkan kuvet yang berisi larutan blangko ke dalam kompartemen sampel 4) Tekan [F1] untuk melakukan koreksi baseline → tunggu hingga selesai 5) Ganti kuvet dengan kuvet yang berisi larutan sampel → [START] 5
6) Untuk mencetak spectrum tekan [PRINT] 7) Untuk melihat puncak spectrum hasil analisa tekan [F2] PEAK 8) Untuk mengubah ke tabel lembah tekan [F3] VALLEY 3.3. Quantitation Mode (metode kuantitatif) Fungsi : digunakan untuk analisa kuantitatif sampel dengan cara : a. Membandingkan sampel terhadap satu konsentrasi standar (single point calibration curve method) b. Membandingkan sampel dengan kurva standar yang dibuat dengan lebih dari satu konsentrasi standar (multi point calibration method) c. Membandingkan standar dengan suatu kurva yang telah diketahui nilai K dan Bnya terlebih dahulu (K-Factor Method) Prosedur : 1) Tekan [3] → [ENTER] 2) Ubah parameter analisa : 1. MEAS : Tekan [1] → [1] 1 λ / [2] 2 λ / [3] 3 λ → masukkan numeric panjang gelombang → [ENTER] 2. METHOD : Tekan [2] → pilih metode yang diinginkan a. K-Faktor (C = K*ABS + B) Tekan [1] → isi nilai K → [ENTER] → isi nilai B → [ENTER] → masukkan kuvet berisi blangko → [AUTOZERO] → lanjut ke prosedur 3) b. Single point (C = K*ABS, K diperoleh dari satu konsentrasi standar) Tekan [2] → isi konsentrasi standar → [ENTER] → bila nilai absorbansi standar sudah diketahui tekan [1] (Key In) → masukkan nilai absorbansi → [ENTER]; Bila nilai absorbansi belum diketahui tekan [2] (measure) → masukkan kuvet berisi larutan blangko → [AUTOZERO] → masukkan kuvet berisi larutan standar → [START] → lanjut ke prosedur 3) c. Multi point Tekan [3] → isi jumlah konsentrasi standar yang digunakan → [ENTER] → [1] (order) → [ENTER] → pilih melewati nol (zero intercept) atau tidak → [START] → isi konsentrasi standar yang digunakan → isi nilai absorban dengan menekan [1] bila nilainya sudah diketahui atau [2] bila belum diketahui → lanjut ke prosedur 3)
6
3. No of Meas : Tekan [3] → isi banyaknya pengulangan yang akan dilakukan → [ENTER] 4. Unit : Tekan [4] → pilih unit pengukuran yang diinginkan dengan menekan numeriknya → [ENTER] 5. Data Print : Tekan [5] → YES (bila hasil langsung dipri nt) / NO (bila bila hasil tidak diprint) Langkah 3) – 4) hanya untuk multipoint method, untuk K-faktor dan single point langsung ke 5) 3) Masukkan
kuvet
berisi
larutan
blangko
ke
kompartemen
sampel
→
[AUTOZERO] 4) Masukkan kuvet yang berisi larutan standar → [START] → masukkan semua nilai konsentrasi standar ke dalam tabel → [START] → ulangi untuk standar standar berikutnya sampai selesai Tekan [F1] (CalCurve) untuk menampilkan kurva kalibrasi Tekan [F2] (StdChg) untuk mengubah data Tekan [F3] (SmplMeas) untuk kembali ke tabel pengukuran Tekan [F4] (StdPrint) untuk mengeprint data 5) Masukkan kuvet yang berisi larutan sampel → [ENTER] → ulangi untuk sampelsampel berikutnya Tekan [F1] (SmplNo) untuk memasukkan no sampel Tekan [F2] (DataFile) untuk menyimpan data ke dalam memori Tekan [F3] (DataDisp) untuk memunculkan kembali data Tekan [F4] (Equation) untuk memunculkan persamaan dari kurva kalibrasi 4. Turning OFF instruments (mematikan instruments) (1) Tekan menu RETURN pada keypad hingga muncul pada posisi ―Mode Select ion Screen‖. (2) Pastikan sampel kompartmen kondisi kosong (tidak ada kuvet). (3) Tekan button power pada posisi OFF pada sisi belakang instruments (4) Cabut kabel power dari sumber tegangan 5. Maintenance & Installation Function Check 5.1. Baseline Flatness Procedure (1) Nyalakan instruments diamkan 60 menit setelah inisialisasi (2) Pilih mode [2] spectrum (3) Set measurement mode ke ABS [enter] ―1‖ 7
(4) Set range panjang gelombang [enter] [2] masukkan numeric 1100 tekan [enter] masukkan numeric 200 tekan [enter] ―untuk UV-VIS‖. Jika ―visible‖ set range panjang gelombang 1100~325 nm (5) Set photometric range (~0,01) (6) Set kecepatan scan ke mode ―Fast‖ (7) Tekan F1 untuk perform baseline correction tunggu sekitar 6 menit (8) Mulai pengukuran, tekan [start/stop] (9) Tekan button print untuk mencetak hasil (10)
Untuk mengulangi pengukuran tekan [start/stop]
5.2. Wavelength Accuracy Procedure Mulai dari prosedur no 3 pada Baseline Flatness (1) Set measurement mode ke ―E‖ tekan [1] (2) Set range panjang gelombang 660~650 nm (3) Set recording range 0~150E (4) Set gain ―3‖ tekan [7] [3] (5) Set sumber cahaya ―light source‖ ke D2 (6) Mulai pengukuran tekan [start/stop] (7) Tekan [F2] untuk mengetahui peak detection, jika masih OK maka muncul Abscis 656,3 ± 1,0 nm dan E 80,6 (8) Tekan button print untuk mencetak hasil (9) Kembali ke parameter screen dengan menekan [return] (10)
Set range panjang gelombang 490~480 nm
(11)
Set recording range 0~30E
(12)
Mulai pengukuran tekan [start/stop]
(13)
Tekan [F2] untuk mengetahui peak detection, jika masih OK maka muncul Abscis 486,1 ± 1,0 nm dan E 17,9
(14)
Tekan button print untuk mencetak hasil
D. Cara Perawatan dan Penyimpanan Alat
1. Sebelum digunakan, biarkan mesin warming-up selama 15-20 menit. 2. Spektrofotometer sebisa mungkin tidak terpapar sinar matahari langsung, karena cahaya dari matahari akan dapat mengganggu pengukuran. 3. Simpan spektrofotometer di dalam ruangan yang suhunya stabil dan diatas meja yang permanen. 8
4. Pastikan kompartemen sampel bersih dari bekas sampel. 5. Saat memasukkan kuvet, pastikan kuvet kering. 6. Lakukan kalibrasi panjang gelombang dan absorban secara teratur.
E. Cara Pembersihan
1. Day light plate pada refraktometer dibuka. 2. Bersihkan sampel pada bidang prisma dengan menggunakan tissu kering dengan cara diusapkan ke sampel secara perlahan-lahan & hati-hati. 3. Refraktometr setelah dibersihkan dengan tissue lalu dibersihlkan refraktometer menggunakan kertas lensa. 4. Penutup prisma ditutup secara perlahan-lahan dan disimpan.
F. Prinsip kerja Spektrofotometri UV-Vis
Spektrofotometri uv-vis mengacu pada hukum Lambert-Beer. Apabila cahaya monokromatik melalui suatu media (larutan), maka sebagian cahaya tersebut akan diserap, sebagian dipantulkan dan sebagian lagi akan dipancarkan. Secara sederhana Instrumen spektrofotometri yang disebut spektrofotometer te rdiri dari: sumber cahaya – monokromator – sel sampel – detektor – read out (pembaca).
Gambar 3 Prinsip kerja Spektrofotometer UV-Vis
9
Proses Absorbsi Cahaya pada Spektrofotometri
Ketika cahaya dengan panjang berbagai panjang gelombang (cahaya polikromatis) mengenai suatu zat, maka cahaya dengan panjang gelombang tertentu saja yang akan diserap. Di dalam suatu molekul yang memegang peranan penting adalah elektron valensi dari setiap atom yang ada hingga terbentuk suatu materi. Elektron-elektron yang dimiliki oleh suatu molekul dapat berpindah (eksitasi), berputar (rotasi) dan bergetar (vibrasi) jika dikenai suatu energi. Jika zat menyerap cahaya tampak dan UV maka akan terjadi perpindahan elektron dari keadaan dasar menuju ke keadaan tereksitasi. Perpindahan elektron ini disebut transisi elektronik . Apabila cahaya yang diserap adalah cahaya inframerah maka elektron yang ada
dalam atom atau elektron ikatan pada suatu molekul dapat han ya akan bergetar (vibrasi). Sedangkan gerakan berputar elektron terjadi pada energi yang lebih rendah lagi misalnya pada gelombang radio. Atas dasar inilah spektrofotometri dirancang untuk mengukur konsentrasi suatu suatu yang ada dalam suatu sampel. Dimana zat yang ada dalam sel sampel disinari dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang tertentu. Ketika cahaya mengenai sampel sebagian akan diserap, sebagian akan dihamburkan dan sebagian lagi akan diteruskan. Pada spektrofotometri, cahaya datang atau cahaya masuk atau cahaya yang mengenai permukaan zat dan cahaya setelah melewati zat tidak dapat diukur, yang dapat diukur adalah It/I0 atau I0/It (perbandingan cahaya datang dengan cahaya setelah melewati materi (sampel)). Proses penyerapan cahaya oleh suatu zat dapat digambarkan sebagai berikut:
10
Gambar 4 Proses penyerapan cahaya oleh zat dalam sel sampel. dari gambar terlihat bahwa zat sebelum melewati sel sampel lebih terang atau lebih banyak di banding cahaya setelah melewati sel sampel Cahaya yang diserap diukur sebagai absorbansi (A) sedangkan cahaya yang hamburkan diukur sebagai transmitansi (T), dinyatakan dengan hukum lambert-beer atau Hukum Beer, berbunyi: ― jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet, inframerah dan sebagainya) yang diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan merupakan suatu fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal larutan‖. Berdasarkan hukum Lambert-Beer, rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya cahaya yang hamburkan:
dan absorbansi dinyatakan dengan rumus:
dimana I0 merupakan intensitas cahaya datang dan I t atau I1 adalah intensitas cahaya setelah melewati sampel. Rumus yang diturunkan dari Hukum Beer dapat ditulis sebagai:
dimana: A = absorbansi b= tebal larutan (tebal kuvet umumnya 1 cm) c = konsentrasi larutan yang diukur ε = tetapan absorptivitas molar (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam molar) a = tetapan absorptivitas (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam ppm).
G. Kalibrasi
Dalam bidang kimia, pengukuran analitik memiliki peranan yang sangat penting .Tujuan dari pengukuran analitik ini adalah untuk menentukan ―nilai sebenarnya‖dari suatu
11
parameter kuantitas kimia, seperti konsentrasi, pH, nilai absorbansi maupun transmittance dari pengukuran dengan spektrofotometer UV-VIS. ―Nilai sebenarnya‖ adalah nilai yang mengkarakterisasi suatu kuantitas secara benar dan didefenisikan pada kondisi tertentu yang eksis pada saat kuantitas tersebut diukur. Beberapa contoh parameter yang dapat ditentukan secara analitik adalah konsentrasi, pH, temperature, titik didih, kecepatan reaksi, dan lain-lain. Dalam pengamatan eksperimen secara umum, hasil yang diperoleh pasti tidak dapat terlepas dari factor kesalahan. Nilai parameter sebenarnya yang akan ditentukan dari suatu perhitungan analitik tersebut adalah ukuran ideal. Nilai tersebut ini hanya bias diperoleh jika semua penyebab kesalahan pengukuran dihilangkan dan jumlah populasi tidak terbatas. Faktor penyebab kesalahan ini dapat disebabkan oleh berbagai hal antara lain adalah:
factor bahan kimia, peralatan, analis, kondisi pengukuran dan lain-lain. . Salah satu cara yang dapat digunakan untuk mengurangi kesalahan dalam
pengukuran analitik ini adalah dengan proses kalibrasi. kalibrasi adalah kegiatan untuk menentukan kebenaran konvensional nilai penunjukkan alat ukur dan bahan ukur dengan cara membandingkan terhadap standar ukur yang mampu telusur ( traceable ) ke standar nasional untuk satuan ukuran dan/atau internasional. Tujuan kalibrasi adalah untuk mencapai ketertelusuran pengukuran. Hasil pengukuran dapat dikaitkan atau di telusur sampai ke standar yang lebih tinggi atau teliti ( standar primer nasional atau internasional) melalui rangkaian perbandingan yang tak terputus. Manfaat kalibrasi adalah: 1. Mendukung system mutu yang di terapkan di berbagai industry pada peralatan laboratorium dan produksi yang di miliki. 2. Mengetahui seberapa jauh perbedaan ( penyimpangan) antara harga benar dengan harga yang ditunjukkan oleh alat ukur. Prinsip Dasar Kalibrasi: 1. Obyek ukur ( Unit Under test) 12
2. Standar Ukur (Alat standar kalibrasi, Prosedur/ Metode standar ( Mengacu ke standar kalibrasi internasional atau prosedur yang dikembangkan sendiri oleh laboratorium yang sudah teruji (diverifikasi) ) 3. Operator /teknisi ( Dipersyaratkan operator / teknisi yang mempunyai kemampuan teknis kalibrasi (bersertifikat) ) 4. Lingkungan yang dikondisikan (Suhu dan kelembaban selalu dikontrol, gangguan factor lingkungan luar selalu diminimalkan — -sumber ketidakpastian pengukuran) Sementara internal kalibrasi adalah : 1. Kalibrasi harus dilakukan secara periodik 2. Selang waktu kalibrasi dipengaruhi oleh jenis alat ukur, frekuensi pemakaian dan pemeliharaan 3. Bisa dinyatakan dalam berbagai cara yaitu : dengan waktu kalender dan dengan waktu pemakaian kombinasi cara pertama dan kedua, tergantung mana yang lebih dulu tercapai. Pada spektrofotometer UV-VIS, yang perlu dikalibrasi adalah panjang gelombang dan absorbansi. 1. Kalibrasi Panjang gelombang Dengan menggunakan filter gelas holium oksida yang memupnyai panjang gelombang acuan (nm) : Kemudian pasang filter gelas holium oksida pada kompartemen sampel dan kompartemen pembanding dibiarkan kosong (udara), dan yang terakhir Scan spektrum serapan holium oksida, bandingkan panjang gelombang spektrum yang diperoleh dengan data panjang gelombang acuan. 2. Kalibrasi Absorbans Mula-mula buat larutan kalium dikromat 50 + 0,5 mg dalam 1 liter 0,005 mol/L asam sulfat (larutan A) ekmudian buat larutan kalium dikromat 100 + 1 mg dalam 1 liter 0,005 mol/L asam sulfat (larutan B), dan buat larutan 0,005 mol/L asam sulfat sebagai pembanding dan bandingkan hasilnya dengan data acuan (+ 2%).
13
H. Hal-hal yang harus diperhatikan
1. Larutan yang dianalisis merupakan larutan berwarna Apabila larutan yang akan dianalisis merupakan larutan yang tidak berwarna, maka larutan tersebut harus diubah terlebih dahulu menjadi larutan yang berwarna. Kecuali apabila diukur dengan menggunakan lampu UV. 2. Panjang gelombang maksimum Panjang gelombang yang digunakan adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Hal ini dikarenakan pada panajgn gelombang maksimal, kepekaannya juga maksimal karena pada panjang gelombang tersebut, perubahan absorbansi untuk tiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar. Selain itu disekitar panjang gelombang maksimal, akan terbentuk kurva absorbansi yang datar sehingga hukum Lambert-Beer dapat terpenuhi. Dan apabila dilakukan pengukuran ulang, tingkat kesalahannya akan kecil sekali. 3. Kalibrasi Panjang gelombang dan Absorban Spektrofotometer digunakan untuk mengukur intensitas cahaya yang dipancarkan dan cahaya yang diabsorbsi. Hal ini bergantung pada spektrum elektromagnetik yang diabsorb oleh benda. Tiap media akan menyerap cahaya pada panjang gelombang tertentu tergantung pada senyawa yang terbentuk. Oleh karena itu perlu dilakukan kalibrasi panjang gelombang dan absorban pada spektrofotometer agar pengukuran yang di dapatkan lebih teliti. Faktor
penyebab
kesalahan
sistematik
yang
sering
terjadi
dalam
analisis
menggunakan spectrophotometer adalah: 1. Adanya serapan oleh pelarut Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan blangko, yaitu larutan yang berisi matrik selain komponen yang akan dianalisis. 2. Serapan oleh kuvet Kuvet yang dapat digunakan adalah dari bahan gelas atau kuarsa. Kuvet kuarsa memberikan kualitas yang lebih baik, namun tentu saja harganya jauh lebih mahal. Serapan oleh kuvet ini dapat diatasi dengan penggunaan jenis, ukuran dan bahan kuvet yang sama untuk tempat blanko dan sample. 3. Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi sangat rendah atau sangat tinggi. Hal ini dapat diatur dengan pengaturan konsentrasi , sesuai dengan kisaran sensitivitas dari alat yang digunakan (melalui pengenceran atau pemekatan )
14
