Universidad Galileo de Guatemala Facultad de Ciencias de la Salud Licenciatura en Química Biológica Ángela André Bentzen
Carnet : 13000240
Lic. María Teresa Meneses
19 de noviembre de 2013 INFORME DE LABORATORIO No. 7
COCOS GRAM POSITIVO: prueba de CAMP, TAXO A y TAXO P
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INTRODUCCIÓN Los cocos Gram positivo son redondeados de color violeta, se pueden clasificar en dos grupos, en si están agrupados en racimos y S t r e p t o c o c c u s si si si se encuentran en cadenas. Staphylococcus También pueden ser clasificados por sus requerimientos de oxígeno y por su patogenicidad. Los cocos Gram positivo patógenos se aíslan en agar enriquecido y suplementado con sangre de carnero. Algunas especies tienen capacidad hemolítica, la cual puede ser parcial (Alfa hemólisis) la cual se presenta como un halo color verdoso, o total (Beta hemólisis) la cual se presenta como un halo color amarillo. Los estreptococos se pueden clasificar en 13 subgrupos, según sus antígenos, esta clasificación es conocida como de Lancefield, los grupos más importantes son:
A: S t r e p t o c o c c u s p p y o g e n e s : forman colonias de 1-2 mm, sin color, transparentes, beta hemolítico y de alta virulencia. Estos microorganismos son sensibles a la Bacitracina. B: S t r e p t o c o c c u s agalactiae agalactiae : prueba de CAMP positiva en una hemolisis marcada en forma de punta de flecha en el punto de unión de su crecimiento con S t a p h y l o c o c c u s aureus . D: S t r e p t o c o c c u s fecalis fecalis : es el único que crece en EMB. S t r e p t o c o c c u s p p n e u m o n i a e desarrolla colonias de 1-3 mm, sin pigmento, alfa hemolíticos en condiciones aerobias y beta hemolíticos en anaerobiosis. Las colonias virulentas dan colonias mucoides debido a su cápsula, este microorganismo es sensible a la Optoquina.
Uno de los principales Cocos Gram positivo que estudiaremos en esta práctica es Staphylococcus aureus , el cual es el único coagulasa positivo, forma grandes colonias cremosas, es Beta hemolítico y puede presentar una coloración amarillenta si se incuba a temperatura ambiente, es resiste a la acción de calor, luz, desecación, agentes químicos y puede sobrevivir semanas o meses en el ambiente, es altamente resistente a las concentraciones al tas de sal, puede crecer en Manitol Sal desarrollando colonias amarillas de 3mm de diámetro y vira el medio a color amarillo brillante, este m icroorganismo es resistente a la penicilina. MATERIALES Y REACTIVOS Mechero Asas en punta y en argolla Taxo A = Bacitracina 0.04 U Taxo P = Optoquina 5g/ml
Agar sangre Cultivo puro de Streptococcus agalactiae Cultivo puro de S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s Cultivo puro de S t r ep t o c o c c u s p n e u m o n i a e
OBJETIVOS
Aprender la técnica correcta de inoculación para la realización de la prueba de CAMP Entender el fundamento de la prueba de Taxo A y Taxo P y lograr identificar el halo que ambas pruebas deben formar al inhibir el crecimiento.
RESULTADOS Muestra
Taxo A
Taxo P
S. agalactiae
S. pneumoniae
y CAMP S t ap h y l o c o c c u s a u r e u s Streptococcus agalactiae
Resultados
Taxo A positivo, se observa halo alrededor del disco por lo tanto S. agalactiae es del grupo A. Taxo P negativo, ya que no hubo crecimiento de halo >15 mm por lo que no hubo inhibiciòn de la bacteria. CAMP positivo, se observa una zona aumentada en la hemolisis en la zona en la que se une el crecimiento de ambas bacterias.
DISCUSIÓN Los cocos Gram positivos pueden presentar tres tipos de hemólisis, la Alfa hemólisis, la cual es parcial y dejando un halo de color verdoso, la Beta hemólisis, la cual es completa y presenta un halo de color amarillo y la Gama hemólisis que no presenta un halo del todo claro. Para identificar los estreptococos se realizan distintas pruebas, entre ellas pruebas que inhiben el crecimiento bacteriano y detiene la hemólisis, entre estas prue bas están:
Prueba de la Bacitracina: Taxo A: para identificar estrepetococos del grupo A, la prueba es positiva si se haya un halo alrededor del disco, en esta práctica el halo observado es muy tenue, probablemente debido al método de sembrado o condiciones ambientales inadecuadas para el crecimiento bacteriano. Prueba de la Optoquina: Taxo P: en esta práctica la prueba fue negativa ya que no hubo un halo mayor o igual a 15 mm por lo tanto no hubo una verdadera inhibición de la bacteria. Prueba de CAMP: se estrió sobre la línea media S . aureus , perpendicular a esté se estrían cuatro líneas de S . agalactiae , estas cuatro líneas se realizan sin que se lleguen a unir con la línea central, la prueba es positiva si al unirse ambos crecimientos de hemólisis la unión se ve en forma de flecha. En la práctica realmente no se observa esta forma esto puede ser debido al gran inoculo central que se realizó o por las condiciones ambientales en las que se encontraba el cultivo.
CONCLUSIONES
Es necesario que los discos de Bacitracina contengan estrictamente 0.04 U, si no la prueba puede dar falsos positivos o falsos negativos La sepa de S t r e p t o c o c c u s agalctiae utilizada en la práctica pertenece al 5% de cepas sensible a la Bacitracina. En la prueba de sensibilidad a la Bacitracina o Taxo A la presencia de un halo es considerado ya como positivo. En la prueba de sensibilidad a la Optoquina o Taxo P la presencia de un halo <15mm es indicativo de una prueba negativa, para ser positiva debe ser igual a 15 o mayor. La prueba de Taxo P es utilizada para diferencias S . p n e u m o n i a e es utilizada para diferenciar este microorganismo de otros estreptococos alfa hemolíticos.
RECOMENDACIONES
Observar los cultivos cerca del mechero para que no sufran contaminación. Manipular los cultivos y muestras con las normas de bioseguridad pertinentes para no sufrir de una infección. Realizar un estriado de gran tamaño para realizar la prueba de Taxo A y Taxo P para lograr observar la inhibición de crecimiento. Al realizar el inoculo central de la prueba de CAMP no remarcarlo, es suficiente con una línea firme.
FUENTES CONSULTADAS
Michael T.Madigan, etal. Brock. Biología de los Microorganismos, Décima edición, Pearson Educación, S.A., Madrid, 2004 Practica de Bacteriologia “Laboratorio No. 7, Cocos Gram positivo, Prueba de CAMP, Taxo A y Taxo P”, Maria Teresa Meneses, QB.MSc. https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/identificacionbacteriana/capacidad-hemolitica
http://intimicro.blogspot.com/p/virus.html
