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Preparación de soluciones buffer usadas en inmunología 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Buffer de acetato Buffer de borato – cloruro Buffer de carbonato Buffer de glicina Buffer fosfatos Buffer de tris Buffer veronal Buffer para complemento
BUFFER DE ACETATO (0,1 M; pH 3,6-5,6)
Solución A (ácido acético 0,2M): disolver 11,55 ml de ácido acético glacial en agua destilada completando 1 litro. Solución B (acetato de sodio 0,2 M): disolver 27, 2 g de ac etato de sodio (3 H2O) en agua destilada completando 1 litro. Solu ci ción A (m (ml)
So lu lu ci ció n B (m (ml )
Agu a de st stilada (m (ml)
pH
463
37
500
3.6
440
60
500
3 .8
410
90
500
4
368
1 32
500
4. 2
305
195
500
4. 4
25 5
245
500
4.6
200
300
500
4.8
148
35 2
500
5
105
395
500
5 .2
88
412
500
5 .4
48
45 2
500
5 .6
Si se desea obtener SN buffer de acetato 0,2 M, se elimina el agua destilada de la mezcla. BUFFER DE BORATO – CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M, pH 8,1-10)
Solución A (H3BO3 0,2 m, KCl 0,2 M): disolver 12,4 g de H3BO3 en 400 ml de agua destilada, completando luego a 500 ml. En otro recipiente disolver 14,91 g de KCl en 400 ml de agua destilada, llevando a un volumen un volumen de 500 ml. Mezclar ambas soluciones soluciones.. Solución B (NaOH 0,2 N): disolver 0,8 g de NaOH en 500 ml de agua destilada, completando a un litro. Controlar la normalidad con solución valorada de HCl. Solu ci ción A (m (ml)
So lu lu ci ció n B (m (ml )
Agu a de st stilada (m (ml)
pH
500
49
45 1
8.1
PREPARACI N DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...
500
60
440
8.2
500
72
428
8.3
500
86
414
8.4
500
101
399
8.5
500
118
382
8.6
500
137
363
8.7
500
158
342
8.8
500
181
319
8.9
500
208
292
9
500
236
264
9.1
500
264
236
9.2
500
293
207
9.3
500
321
179
9.4
500
346
154
9.5
500
369
131
9.6
500
389
111
9.7
500
406
94
9.8
500
422
78
9.9
500
437
63
10
http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
BUFFER DE CARBONATO (pH 9-10.8 – fuerza iónica 0,1)
Solución A (bicarbonato de sodio 0,1 M): disolver 84 g de NaHCO3 en suficiente cantidad de agua destilado completando 1 litro. Solución B (carbonato de sodio 0,1 M): 106 g de Na2CO3 anhidro se disuelven en agua destilada completando 1 litro. Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
76.8
7.7
915.5
9
67.6
10.8
921.6
9.2
56.8
14.4
928.4
9.4
45.3
18.2
936.5
9.6
34.3
21.9
943.8
9.8
24.6
25.1
950.3
10
17
27.6
955.4
10.2
11.2
29.5
959.3
10.4
7.1
30.8
962.1
10.6
4.1
31.7
964.2
10.8
PREPARACI N DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...
http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
BUFFER DE GLICINA
Glicina HCl (glicina 0.1 M, pH 2.2-3.6): Solución A (glicina 1M): disolver 75.07 g de glicina en cantidad suficiente de agua destilada, completando un litro. Solución B: HCl 1 N. Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
100
88
812
2.2
100
64.8
835.2
2.4
100
48.4
851.6
2.6
100
33.6
866.4
2.8
100
22.8
877.2
3
100
16.4
883.6
3.2
100
12.8
887.2
3.4
100
10
890
3.6
Glicina NaOH (glicina 0,1 M, pH 8.6-10.4) Solución A (glicina 1 M): disolver 75,07 g de glicina en 1 litro de agua. Solución B (NaOH 1 N): disolver 40 g de NaOH en agua destilada llevando a 1 litro. Verificar normalidad con SN valorada de HCl. Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
100
8
892
8.6
100
12
888
8.8
100
17.6
882.4
9
100
24
876
9.2
100
33.6
866.4
9.4
100
44.8
855.2
9.6
100
54.4
845.6
9.8
100
64
836
10
100
77.2
822.8
10.2
100
91
809
10.4
Para preparar SN buffer de glicina- cloruro a diferentes pH, se incorpora a las SN A indicadas, NaCl a una molaridad 10 veces superior a la deseada. BUFFER FOSFATOS (fosfatos 0,1 M, pH 7.5)
Solución A (NaH2PO4 0,2 M): disolver 27.6 g de NaH2PO4 . H2O en agua destilada, completando un litro. Solución B (Na2HPO4 0,2 M): 53.65 g de Na2HPO4. 7 H2O se disuelven en agua destilada, llevando el volumen final a 1 litro. Si se desea molaridad 0,2 se suprime el agua destilada. Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
467.5
32.5
500
5.7
460
40
500
5.8
PREPARACI N DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...
450
50
500
5.9
438.5
61.5
500
6
425
75
500
6.1
407.5
92.5
500
6.2
387.5
112.5
500
6.3
367.5
132.5
500
6.4
342.5
157.5
500
6.5
312.5
187.5
500
6.6
282.5
217.5
500
6.7
255
245
500
6.8
225
275
500
6.9
195
305
500
7
165
335
500
7.1
140
360
500
7.2
115
385
500
7.3
95
405
500
7.4
80
420
500
7.5
65
435
500
7.6
52.5
447.5
500
7.7
42.5
457.5
500
7.8
35
465.473.5
500
7.9
500
8
26.5
http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
BUFFER DE TRIS (tris hidroximetil-aminometano)– HCl (tris 0,05 M, pH 7.2-9)
Solución A (tris 0,2 M): se obtiene disolviendo 24.23 g de Tris en agu a destilada, llevando a volumen de un litro. Solución B: HCl 1 N Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
250
44.2
705.8
7.2
250
41.4
708.6
7.4
250
38.4
711.6
7.6
250
32.5
717.5
7.8
250
26.8
723.2
8
250
21.9
728.1
8.2
250
16.5
733.5
8.4
PREPARACI N DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...
250
12.2
737.8
8.6
250
8.1
741.9
8.8
250
5
745
9
http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
BUFFER VERONAL
Veronal – veronal sódico – cloruro sódico (pH 7.4-8.9 – fuerza iónica 0,1): Solución A (veronal 0,025 M): se prepar a disolviendo 4,605 g de veronal en agua destilada llevando a un litro. Solución B (veronal sódico 0,05 M): disolver 10,30 9 g de veronal sódico en agua destilada llevándolo a un litro. Solución C (cloruro de sodio 0,5 M): 29. 2 g de NaCl se disuelven en agua destilada hasta 1 litro. Solución A (ml) Solución B (ml) Solución C (ml) Agua destilada (ml)
pH
639
10
190
161
7.4
403
10
190
397
7.6
636
25
175
164
7.8
401
25
175
399
8
506
50
150
294
8.2
639
100
100
161
8.4
403
100
100
397
8.6
509
200
0
291
8.8
321
200
0
479
8.9
Veronal sódico HCl (pH 6.8-9.6 – fuerza iónica 0,1): Solución A (veronal sódico 0,5 M): 103.09 g de veronal sódico en agua destilada y completar 1 litro. Solución B: HCl 1 N Solu ción A (ml)
So lu ció n B (ml )
Agu a de stilada (ml)
pH
104.2
47.8
848
6.8
107.2
46.4
846.4
7
110.8
44.6
844.6
7.2
116.2
41.9
841.9
7.4
123.2
38.5
838.3
7.6
132.4
33.8
833.8
7.8
143.2
28.4
828.4
8
153.8
23.1
823.1
8.2
164.7
17.8
817.5
8.4
174.2
12.9
812.9
8.6
181.2
9.2
809.6
8.8
187.2
6.4
806.4
9
PREPARACI N DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...
190.4
4.8
804.8
9.2
194.8
2.6
802.6
9.4
197
1.5
801.5
9.6
http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
Soluciones Veronal – Veronal sódico para electroforesis (fuerza iónica 0,1): Veronal (g)
Veronal sódico (g)
Agua destilada
pH
4.90
17.4
Hasta 1 litro
8.4
3.41
18.95
Hasta 1 litro
8.6
2.34
20.62
Hasta 1 litro
8.8
BUFFER PARA COMPLEMENTO
Debe guardarse en la heladera. En el momento de usar se diluye al 1/5 en agua destilada. NaCl
42.5 g
Ác. dietilbarbitúrico (veronal ácido)
2.875 g
Dietilbarbiturato de sodio (veronal sódico) 1.875 g CaCl2 anhidro
0.2 g
MgCl2 . H2O
1.0 g
H2O destilada, c.s.p.
1000 ml
Disolver el veronal ácido en aproximadamente 500 m l de agua caliente. Disolver el veronal sódico en agua fría y agregarle en frío, manteniendo el orden, los siguientes componentes: NaCl, CaCl2 y MgCl2. Mezclar con la soluc ión de veronal sódico y medir el pH, el que debe oscilar entre 7, 3 – 7, 4. Si fuera necesario ajustar con HCl o NaOH de normalidad adecuada. Completar a un litro con agua destilada.
Trabajo enviado por: MARIANA PUCCIARELLI Estudiante de Farmacia – Buenos Aires - Argentina
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http://www.monografias.com/trabajos11/prepsolu/prepsolu.shtml
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