Praktikum Biokimia Darah
Tujuan •
Mengetahui sifat-sifat darah
•
Membuktikan kandungan zat dalam darah
•
Memahami berbagai fenomena biokimia darah dalam kondisi fisiologis
KOAGULASI DARAH Praktikum 1: Pengaruh ion Ca dan fibrin terhadap koagulasi
2cc darah oksalat + 2- 5 tetes lar.
2cc darah bebas fibrin + 2-5 tetes
5% CaCl2
lar. 5% CaCl2
Gojog, catat waktu koagulasi *Setiap setengah menit, tabung dimiringkan hati2 (lihat terbentuknya koagulum) Hasil: •
Tabung 1 : darah menjendal/membeku (coagulation)
1. Pahami dulu darah oksalat itu Darah oksalat adalah darah yang diberi antikoagulan. 2. Pahami maksud penambahan CaCl2 Membekukan kembali darah yang telah diberi antikogulan 3. Pahami proses koagulasi menurut teori howell a.
Stadium pembekuan darah menurut teori Howell ada 3 stadium yaitu : Pembekuan Protombin, Protombin di pengaruhi ion Ca menjadi trombin, Fibrinogen dipengaruhi trombin menjadi fibrin. Dari penyidikan lebih lanjut ditemukan bermacam – bermacam – macam factor koagulasi darah, bahkan pada permulaan penjedahan darah ada 2 jalan yaitu melalui sisten intrinsic dan ekstrinsik.
b.
Macam – Macam – macam koagulasi darah yaitu : Faktor I Fibrinogen, II Prothombin, IV Calcium, V Labile factor, proacceleator, ( Ac- ) globulin, Proaccelerin. VII Proconvertin, serum prothombin convertion, accelerator ( SPCA ), cothromboplastin, autoprothrombin I, VIII Antihemophilic factor, antihemophilic globulin gl obulin ( AHG ), IX Plasma thromboplastin component ( PTC ) ( Christmas factor ), X Stuart – Stuart – Power factor, XI Plasma thromboplastin component antecedent ( PTA ), XII Hageman factor, XIII Laki-Lorand factor ( LLF ).
4. Pencegahan koagulasi darah dilakukan dengan jalan a. menghilangkan factor – factor koagulasi, cara – cara yang digunakan adalah : Menghilangkan atau menurunkan kadar ion Ca denga pemberian antikoagulan, misalnya : K-Oksalat atau NaSitrat. Oksalat atau sitratnya akan mengikat ion Ca menjadi Ca- oksalat atau Ca-Sitratnya yang tidak terionisir. Darah yang diberi antikoagulan ini disebut darah oksalat atau darah sitrat, yang akan membeku bila di tambah dengan ion Ca, misalnya dengan pmberian CaCl2. b. Antikoagulan lain misalnya dengan heparin dan lain – lain. c. Mengambil fibrinya, yaitu dengan jalan memukuli darah yang baru dikeluarkan dengan sepotong kawat atau lidi yang menyebabkan melengketnya ibrin pada kawat / lidi. Darah yang dibuat tidak membeku ini disebut bebas fibrin, dan tidak dapat membeku lagi dengan penambahan CaCl2. •
Tabung 2 : darah tetap cair •
Tidak adanya fibrinogen menyebabkan penambahan CaCl2 darah tetap cair
PROTEIN SERUM Percobaan 2: Pengendapan Globulin •
Masukan ke dalam tabung 5 cc Protein serum + 5 cc Ammonium Sulfat
•
Saring endapannya
•
Filtratnya disimpan untuk percoban pengendapan albumin
•
Endapan digojog dengan sedikit air
•
Sambil diamati tambahkan air berlebihan
•
Laporkan hasilnya : tampak endapan lagi
Hasil dan Pembahasan: Terbentuk endapan putih. Endapan larut dan terbentuk larutan keruh. (endapan globulin) Dari hasil pengamatan didapatkan bahwa endapan larut dalam aquades dan terbentuk larutan keruh. Hal ini menunjukkan uji globulin dalam serum darah positif(+). 1. Pahami sifat-sifat globulin
Globulin membentuk sekitar 30 % protein plasma, globulin berfungsi untuk pembentukan ab. Globulin terbentuk dari dua komponen, yaitu legumin dan vicilin (Harrow et al., 1962)
Contoh dari globulin adalah mukoprotein, glikoprotein, lipoprotein, metalprotein dan immunoglobulin. Perbedaan albumin dan globulin adalah albumin lebih mudah larut dan BM lebih rendah dengan rasio albumin:globulin= 1,2:1.
Sifat globulin: o
Tidak larut dalam air
o
Bila dihidrolisis menghasilkan asam-α-amino
o
Mengendap dalam larutan ½ jenuh
o
Menggumpal dalam pemanasan (terkoagulasi)
o
Larut dalam garam encer dan membentuk endapan dengan konsentrasi garam yang tinggi
o
o
Mengendap dalam air Ammonium sulfat bersifat higroskopis
2. Apa maknanya globulin itu ? Dalam percobaan tersebut globulin mengendap dalam air. 3. Jenis-jenis globulin –
Alfa globulin dan Beta globulin, disintesis dalam hati dengan fungsi utama sebagai molekul pembawa lipid, beberapa hormon, berbagai substrat dan zat penting tubuh lainnya.
–
Gamma globulin (Ig), di produksi di jaringan limfoid dan berfungsi dalam imunitas.
Percobaan 3: Pengendapan albumin –
Masukan amonium sulfat padar berlebihan ke dalam filtrat percobaan 3
–
Saring endapan yang terbentuk
–
Larutkan endapan dengan air kembali dan amati hasilnya
Hasil dan Pembahasan: Albumin larut lagi dengan pemberian air berlebihan Dari hasil pengamatan didapatkan bahwa endapan larut dalam aquades. Hal ini menunjukkan uji albumin dalam serum darah positif (+) –
Sifat albumin •
Mengendap dalam ammonium sulfat jenuh
•
Larut dalam garam encer
•
Larut dalam air
ZAT – ZAT NONPROTEIN DALAM SERUM DARAH Percobaan 4: Menghilangkan protein serum (Deproteinisasi)
Masukan 5cc serum+ 10 cc air kemudian dimasak
Tambahkan lar. Asam cuka 2% tetes demi tetes sampai terjadi endapan protein
Saring campuran
Filtratnya dibuat menjadi pH 5,4 dengan indikator klorfenol merah (merah muda hilang) •
Proses deproteinisasi : –
upaya untuk membuang atau menghilangkan semua unsur protein dalam darah
–
Melalui denaturasi dengan pemanasan dan pemberian asam
–
Pengendapan dan penyaringan
•
3 cara deproteinisasi –
Denaturasi melalui pemansan, efek asam kuat dan radiasi
–
Penetralan muatan
–
Dehidrasi
Percobaan 5: Menunjukkan adanya Klorida –
–
–
Masukan 1-2 cc filtrat + HNO3 + AgNo3 Amati adanya endapan putih (AgCl) Klorida yang ada dalam filtrat serum darah berikatan dengan Ag+
Hasil dan pembahasan: Dari hasi pengamatan, filtrat yang ditambah larutan AgNO3 encer dan HNO3 didapatkan endapan putih AgCl dengan larutan keruh. Hal ini menunjukkan uji adanya ion klorida dalam darah hasilnya positif (+). HNO3 pekat mengubah Cl organik menjadi Cl anorganik. Cl organik dapat diikat oleh AgNO Reaksi yang terjadi: Cl- + AgNO3 → AgCl + NO3Contoh senyawa organik adalah H2O dan anorganik adalah H2SO4 Percobaan 6: Menunjukkan adanya fosfat –
–
Masukan 1-2 cc filtrat + 5 tts HNO3 + 5 tts Ammomium molibdat Akan terbentuk warna kuning jeruk seela dipanaskan
Hasil dan pembahasan: Endapan kuning jeruk yang terbentuk adalah ammonium fosfomolibdad. HNO3 mengubah P organik menjadi P anorganik. P anorganik ketika bereaksi dengan ammonium molibdad menjadi amonium fosfomolibdad. Reasksi yg terjadi: H3PO4 + ammonium molibdad
ammonium fosfomolibdad + air
Percobaan 7: Menunjukkan adanya kalsium –
–
Masukan 1-2 cc filtrat + K- oksalat Akan terbentuk kekeruhan
Hasil dan Pembahsan: o
Dari hasi pengamatan, filtrat ditambahkan larutan (NH4)2C2O4 didapatkan endapan putih CaC2O4 dengan larutan keruh. Hal ini menunjukkan uji adanya ion kalsium dalam darah hasilnya positif (+). Reaksi yang terjadi: Ca2+ + (NH4)2C2O4 → CaC2O4 + 2NH+
o
Karena afinitas Ca > K, jadi Ca mengganti K pada K- oksalat
Percobaan 8: Menunjukkan adanya glukosa –
Masukan 3 cc filtrat + 3 tts gliserol + Na2CO3 tidak berair + 2 tts larutan CuSO4
–
Dimasak 1 menit
–
Akan terbentuk kekeruhan kuning
Hasil dan Pembahasan: Dari hasi pengamatan, filtrat yang ditambah larutan gliserol, natrium karbonat padat, dan larutan cupri sulfat menghasilkan endapan merah bata Cu2O. Hal ini menunjukkan uji adanya glukosa dalam darah hasilnya positif (+) Reaksi yang terjadi:
+2Cu2+ + 4OH- →
–
+ Cu2O + 2H2O
Na2CO3 anhidrat memberikan suasana basa sehingga glukosa menjadi enol reaktif. Enol reaktif mereduksi Cu2+
–
Percobaan ini sama seperti benedict, hanya saja Na sitrat diganti dengan gliserol. Karena Na sitrat lebih mudah mengikat Ca daripada Cu, maka digunakan gliserol yang mudah mengikat Cu
PIGMEN DARAH Percobaan 9: Pemecahan eritrosit –
Satu tetes darah + 10 cc air dimasak
–
Dipakai untuk percobaan benzidin
Hasil dan Pembahasan: Eritrosit pecah (tampak warna merah-coklat/pucat) –
Air bersifat hipotonis sedangkan darah bersifat hipertonis. Air akan masuk ke dalam sel darah sehingga eritrosit menggembung dan pecah
–
Hb menyebabkan warna merah. Fe2+ keluar dari heme sehingga warna menjadi merahcoklat
Percobaan 10: Percobaan Benzidin –
2 ml reagen tauber + 2 cc hidrogen peroksida + tetes demi tetes darah yang sudah dipecah
Terbentuk warna hijau biru
Hasil dan Pembahasan: – –
– –
Reagen tauber:benzidin, asam asetat glasial Asam asetat glasial memecah Hb menjadi heme dan globin dan memecah secara spontan H2o2 menjadi H2o + On (radikal bebas) On (Onasen) mengoksidasi Fe2+ menjadi Fe3+ Fe3+ ditambah benzidi menjadi hijau/ biru
Percobaan 11 : Percobaan Hemin –
Oleskan setetes kecil darah di atas slide , keringkan
–
Tambahakn 2 tetes lar. KCL – jod 0,1 % dan bromida dalam as. Cuka glasial. Tutup dan panaskan sampai keluar gelembung
–
Tambahkan 2 tetes lar. Halida melalui gelas penutup
–
Periksa kristalnya dibawah mikroskop
Hasil dan pembahasan: – – – –
Iod dan Br mengoksidasi Fe2+ menjadi Fe3+ Fe3+ mengikat Cl membentuk FeCl3 (hemin) Asam cuka glasial menstabilisasi Br (agar Br tidak mengendap), memecah Hb Halida menstabilkan Hemin
