UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
Practica 6 Perfil de lípidos completo
Laboratorio de química clínica Q. B. P. Beatriz Portillo Arroyo
Michelle A. Quezada Piceno 235891
3 de octubre de 2012
RESUMEN Se determino que el paciente 1 cursa con alguna patología en el metabolismo de lípidos, ya que el valor de triglicéridos fue muy elevado del rango normal. INTRODUCCION Por medio de un análisis denominado "perfil lipídico", el médico de su hijo podrá ver los diferentes tipos de grasas presentes en la sangre. Si bien muchos padres no piensan en el nivel de colesterol de sus hijos, los niveles elevados contribuyen a las afecciones cardíacas y los accidentes cerebrovasculares. Los médicos miran atentamente los perfiles lipídicos en los niños porque ha quedado demostrado que las afecciones cardíacas se desarrollan en la niñez. El perfil lipídico mide lo siguiente: • •
El colesterol total, que es la suma de los diferentes tipos de colesterol. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen recibir el nombre de colesterol "bueno". Las lipoproteínas pueden considerarse el sistema de transporte de la sangre de su hijo. Las lipoproteínas de alta densidad transportan colesterol al hígado para su eliminación.
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Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) colesterol, generalmente conocidas como colesterol "malo". Las lipoproteínas LDL que se acumulan en el torrente sanguíneo pueden tapar los vasos sanguíneos e incrementar el riesgo de afecciones cardíacas.
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Los triglicéridos, que almacenan energía hasta que el organismo la necesita. Si el cuerpo acumula demasiados triglicéridos, los vasos sanguíneos se pueden tapar y provocar problemas de salud. Por qué se realiza
El perfil lipídico permite verificar los niveles de lípidos en la sangre, que pueden indicar el riesgo de una persona de padecer enfermedades cardíacas o arterosclerosis (el endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las arterias). Algunos expertos consideran que el colesterol elevado en niños es un gran problema de salud pública que en muchos casos pasa desapercibido. Por lo tanto, es importante estar atento a los niveles de colesterol de su hijo, en especial si alguno de los padres sufre de colesterol elevado. Preparación El nivel de lípidos puede verse afectado por la grasa presente en la dieta. Su hijo debe evitar las comidas con grasas la tarde anterior a realizarse el análisis. A menos que el médico indique lo contrario, su hijo no debe comer ni beber ninguna bebida que no sea agua después de la medianoche anterior al análisis. Si no se cumple este requisito, los resultados del análisis pueden verse afectados. Su hijo también debe evitar hacer ejercicio físico entre las 12 y 14 horas anteriores al análisis. Si su hijo está tomando algún medicamento, consulte a su médico para saber si debe interrumpirlo hasta después de realizada la prueba. OBJETIVO
Que el alumno conozca sobre los requisitos de toma de muestra para la cuantificación de lípidos, así como los métodos existentes para la determinación de colesterol total, C-HDL, CLDL y triglicéridos. Así mismo aprenderá sobre los métodos para la cuantificación de lipoproteínas y apoproteínas. MATERIALES Y METODOS -Centrifuga -Tubos de ensaye -Bata de seguridad -Guantes -Tubo vacutainer rojo -Sistema vacutainer para punción venosa -Ligadura -Torundas -Micropipetas -Puntas para pipeta
-Reactivo de trabajo -Reactivo enzimático -STD (200mg/dl) de trigliceridos -STD (200mg/dl) de colesterol -STD (100mg/dl) de glucosa -Reactivo precipitante -Reactivo de colesterol total -Control normal -Control patológico -Humalyzer 2000 -Incubadora
Glucosa 1. Tomar muestra de paciente en ayuno en tubo rojo. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr Estándar CN CP Blanco a Suero 10 μL ----Estándar -10 μL ---CN --10μL --CP ---- 10μL -Reactivo 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL enzimático 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC 4. Leer absorbancia de estándar, CN, CP y muestra contra blanco a 500 nm. Triglicéridos 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr Estándar CN CP Blanco a Suero 10μL ----Estándar -10 μL ---CN --10 μL --CP ---10μL -Reactivo 1mL 1 mL 1 mL 1 mL 1mL Total 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C 4. Leer absorbancia de estándar, CN, CP y muestra contra blanco a 505nm.
Colesterol 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr a 10μL ----
Estándar
CN
CP
Blanco
Suero ----Estándar 10 μL ---CN -10 μL --CP --10μL -Reactivo 1mL 1 mL 1 mL 1 mL 1mL Total 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C 4. Leer absorbancia de estándar, CN, CP y muestra contra blanco a 500nm. Colesterol HDL 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Se toman 250µl del suero de la muestra y se mezclan con 25µl del reactivo precipitante, se mezcla con agitación 3. Se incuba a temperatura ambiente por 10min 4. Se centrifuga 20min a 4000rpm. 5. Se toman 10µl del sobrenadante y se añaden 1000µl del reactivo de colesterol total. En otro tubo se colocan 1000µl del reactivo de colesterol total, será el blanco. 6. Se mezclan y se incuban 5min a 37°C. 7. Se lee la absorbancia de la muestra contra el blanco a 505nm. RESULTADOS
Triglicéridos Glucosa Colesterol HDL
Paciente 1
Paciente 2
Valor de referencia
395.4mg/dl
112.8mg/dl
<150mg/dl
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75.9mg/dl
75-100mg/dl
134.9mg/dl
177.6mg/dl
<200mg/dl
0mg/dl
------
35-55mg/dl
CONCLUSION Para el paciente 1 se obtuvieron 395.4mg/dl en triglicéridos, muy elevado de lo normal, esto puede ser hipertrigliceridemia familiar, que es un trastorno genético que se da en familias y causa triglicéridos altos. Los niveles de colesterol de personas con este desorden están usualmente en el rango normal. Pero allí probablemente habrá una historia familiar temprana de enfermedad cardiaca. Usualmente, la hipertrigliceridemia doméstica no es descubierta hasta la pubertad o la edad adulta joven. Y, frecuentemente, la obesidad, las hiperglucemias y los altos grados de insulina son también encontrados en el momento. La determinación de un perfil lipídico tiene gran importancia clínica ya que se puede emplear como un diagnostico primario de ciertas enfermedades, así como también en el seguimiento de algunas enfermedades como: diabetes mellitas, necrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos. BIBLIOGRAFIA Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Cátedra de Bioquímica. Universidad Nacional, 1994 Pesce AJ., Kaplan LA.: "Química Clínica. Métodos". Editorial Médica Panamericana. 1990. Anderson Sc., Cockayne S: "Química Clínica". Ed. Interamericana. 1995.
APENDICE Determinación de triglicéridos 1- el glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos. 2- El glicerol de fosforila por la adenosin-5-trifosfato(ATP) para producir glicerol-3-fosfato(G-3P) y adenosin 5-difosfato(ATP) para producir glicerol- 3-fosfato (G-3-P) y adenosin 5- difosfato (ADP) en una reacción catalizada por el glicerol- cinasa. 3- La G-3-P por la glicerol fosfato oxidasaproduciendo (DPA) y peróxido de hidrogeno. 4- Los peróxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia catalítica de la peroxidasa para formar quinoneimina. Determinación de colesterol total La determinación de Colesterol Total está basada en el procedimiento enzimático descrito por Allain, donde el colesterol--estearasa (CE) hidroliza los ésteres de colésterol a colesterol libre y ácidos grasoso. En presencia de oxigeno, el colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa (CO) a cholest-4-en-3-one y peróxido de hidrogeno. Cuando el fenol está oxidativamente acoplado con 4-aminoantipirina en la presencia de peroxidasa (HPO), y peróxido de hidrogeno se produce un cromoforo de quinoneimina. La intensidad de color producido es proporcional a la concentración de colesterol y se mide colorimétricamente a 500nm .
Determinación de HDL-COLESTEROL La separación del HDL-colesterol, está basada en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las Lipoproteínas con excepción del HDL-colesterol. . Después de la centrifugación, el HDL-colesterol contenido en el líquido sobrenadante, se determina con el mismo método que se determinó el colesterol total. Determinación de glucosa El método utilizado en este reactivo se basa en la reacción indicadora de peróxido de hidrógeno que une 4-aminoantipirina a un compuesto fenólico. Glucosa oxidasa 1. Glucosa + O2 + H2O ——————————> Ácido glucónico + H2O2 Peroxidasa 2. H2O2 + HBA + 4-AAP ————————> Tinte de quinonimina + H2O 1. La glucosa se oxida por acción de la glucosa oxidasa para dar ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. 2. El peróxido de hidrógeno reacciona en presencia de peroxidasa con HBA y con 4aminoantipiridina (4-AAP) para dar lugar a un tinte de quinonimina rojo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa y se puede medir fotométricamente entre 460 y 560 nm. RPBI -Bote rojo -Aguja -Suero de muestra (refrigeración) -Bolsa roja -Guantes -Torunda -Tubo rojo
