Pop Microbiologia

POP MICROBIOLOGIA

Preparação das lâminas: Após 48 horas em estufa microbiana, se houver crescimento

bacteriano, serão montadas as lâminas da seguinte forma: flambar a alça calibrada (10² ou 10³) na chama azul do bico de Bunsen; esperar esfriar; pegar uma colônia isolada no ágar sangue; colocar uma gota de soro fisiológico em uma lâmina; homogeneizar a colônia na lâmina; flambar novamente a alça calibrada e colocar as lâminas na estufa até secar o esfregaço. Coloração de Gram: Após secar, realizar a coloração de Gram, da seguinte forma:

apoiar as lâminas na grade da pia; cobri-las com solução cristal violeta; lavá-las com água destilada; cobrí-las com iodo de Gram; lavá-las com água destilada; descorá-las durante 10 a 30 segundos com agitação suave com solução de acetona (30 mL) e álcool (70 mL); lavá-las com água destilada; cobri-las com fucsina (solução a 2,5% em álcool a 95%) durante 10 a 30 segundos; lavá-las com água destilada e colocá-las para secar em temperatura ambiente. Observar a morfologia das bactérias com o auxílio de um microscópio óptico, na objetiva 100X com óleo de imersão.

Provas de identificação bacteriana: Bactérias cocos gram positivos CATALASE: flambar a alça calibrada; esperar esfriar; pegar uma colônia isolada;

colocá-la em uma lâmina; pipetar 25µl do peróxido de oxigênio; colocá-lo em contato com a colônia; se for catalase positiva, ocorrerá uma efervescência rápida identificando uma bactéria do gênero Staphylococcus; se for negativo, não ocorrerá nada, identificando um Streptococcus.

Staphylococcus sp. CATALASE POSITIVA: Staphylococcus

COAGULASE: NOVOBIOCINA:

CATALASE NEGATIVA: Streptococcus sp. SEMEAR EM ÁGAR SANGUE OBSERVAR A HEMÓLISE

OPTOQUINA: BACITRACINA: BILE ESCULINA E NACL : Enterococcus sp.

BACILOS GRAM POSITIVOS: TSI: SIM: CITRATO:

ANTIBIOGRAMA: Segundo a Clinical and Laboratory Standards Institute - CLSI, o

meio padronizado utilizado para a realização de antibiogramas é o ágar Mueller-Hinton. O inoculo utilizado é uma suspensão direta das colônias padrão 0,5 de McFarland. Essa suspensão é obtida com o auxílio de um swab estéril, pega-se colônias do ágar BHI e dissolve-as em soro fisiológico em um tubo estéril, até esta se igualar à turvação do tubo 0,5 da escala de MacFarland. Com o mesmo swab, inocula-se a placa de ágar Mueller-Hinton. Faz-se uma estria ao redor da placa e estriá-lo pelo menos quatro vezes sem deixar nenhum espaço do meio sem inocular.

Esquema demonstrando a técnica de semeadura do meio Mueller-Hinton para a realização do antibiograma. Aguardar por um período de dez minutos para que o meio absorva o inoculo. O método realizado será o de difusão em disco. Procedimentos: com o auxílio de uma pinça estéril, colocar os discos de antibióticos no meio com um espaço entre eles de 15 mm, pressionando-os levemente cada disco para que fique aderido ao meio.

Esquema demonstrando o espaçamento entre os discos de difusão com antibióticos. Logo depois, serão incubados em estufa microbiológica com temperatura de 33 a 35ºC por 16 a 24 horas. Após esse período, os halos de inibição formados serão medidos com réguas e comparados com os dados da tabela da Clinical and Laboratory Standards Institute  –  CLSI.