I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang Beratus-r Beratus-ratus atus spesies spesies dapat dapat menghuni menghuni bermacam bermacam-mac -macam am bagian bagian tubuh tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit karena kita ketahui banyak terdapat mikroorganisme mikroorganisme seperti seperti bakteri, virus, jamur dan protozoa protozoa dilingkungan dilingkungan (Pelczar & Chan, 1!"#$ %ntuk melihat seberapa banyak jumlah bakteri yang terdapat terdapat pada lingkung lingkungan an khususny khususnya a laut dapat kita ketahui dengan dengan metode metode perhitungan mikroba$ Banyak tersedia metode untuk menganalisa jumlah mikroorganisme dalam suatu sampel, sampel, diantara diantaranya nya adalah plate count (spread plate, pour plate, spiral plate), membrane filtration, filtration, P', menghitung langsung dengan Petro )ausser ataupun cara lainnya (misalnya aktivitas metabolik, t urbidimetri, urbidimetri, berat kering dll$#$ 'amun 'amun dalam dalam ulasa ulasan n ini ini lebih lebih diteka ditekanka nkan n pada pada metode metode yang yang memerl memerluka ukan n penghitungan koloni pada ca*an petri, seperti membrane filtration, spread plate, pour plate, plate count agar dan lain-lain. O leh karena itu maka perlu diadakan praktek praktek lapang lapang mikrobio mikrobiologi logi laut untuk untuk mengetahu mengetahuii cara perhitun perhitungan gan bakteri bakteri dengan metode plate metode plate count dengan dengan menggunakan berbagai jenis sampel yang berbeda untuk mengetahui jumlah koloni bakteri dan jamur$ B. Tujuan dan Kegunaan +dapun tujuan dari praktikum mikrobiologi mikrobiologi ini adalah untuk mengetahui cara perhitungan organisme melalui agar ca*an tuang ( standar plate count # edangkan kegunaan dari praktikum mikrobiologi dari praktikum ini adalah sebagai bahan pembanding antara teori dan praktek sesuai yang didapat dalam reer reeren ensi si serta serta bahan bahan kuliah kuliah dengan dengan kenya kenyataa taan n yang yang ditemu ditemukan kan pada pada hasil hasil praktek$
II. TINJAUAN PUSTAKA 54
Pemahaman tentang satuan dalam menghitung sel mikroba khususnya bakte bakteri ri adala adalah h sanga sangatt pentin penting$ g$ Pada Pada hasil hasil akhir akhir pengh penghitu itunga ngan n bakte bakteri ri pada pada ca*an digunakan satuan C%.s/volume atau berat$ C%.s adalah singkatan dari Coloni orming %nit.s yang artinya unit-unit / satuan pembentuk koloni$ 0ang dimaksud satuan pembentuk koloni adalah sel tunggal atau sekumpulan sel yang jika ditumbuhkan ditumbuhkan dalam ca*an akan membentuk satu koloni tunggal$ Pada dasarnya dasarnya sel tersebar tersebar homogen homogen pada sampel, sampel, tetapi tetapi ada jenis bakteri bakteri yang yang memang pembelahan selnya dapat terpisah baik sehingga tersebar merata tiap sel dan ada pula bakteri yang setelah membelah sel anakan masih menempel pada induknya induknya,, seperti seperti halnya halnya yang yang terjadi terjadi pada streptoco streptococcus, ccus, diplococ diplococcus, cus, sarcina dll$ sehingga penyebarannya berkelompok-kelompok$ Pada jenis yang seperti ini jika tersebar merata dalam kelompok-kelompok sel maka pertumbuhan menjadi koloni tunggal bukan berasal dari satu sel saja melainkan dari beberapa sel (+nonim, 212#$ enurut +nonim (212#, )al-hal penting yang harus dipikirkan matang sebelum menganalisa sampel untuk diketahui jumlah mikroorganismenya adalah3 1$ emp emper erki kira raka kan n juml jumlah ah mikr mikroo oorg rgan anis isme me yang yang ada ada dala dalam m samp sampel el per per satuan volum$ $ emilih emilih metode metode yang yang cocok cocok sehingga sehingga dihasi dihasilkan lkan data data yang yang akurat$ akurat$ 4$ engeta engetahui hui jenis/gol jenis/golonga ongan n mikroorganis mikroorganisme me yang akan dihitung dihitung,, misalny misalnya a bermaksu bermaksud d akan menghitu menghitung ng yeast , bakteri, atau bakteri genus tertentu saja$ 5$ enentu enentukan kan media media pertum pertumbuh buhan an yang cocok$ cocok$ 6$ Benar Benar-be -benar nar menge mengetah tahui ui perbe perbeda daan an moro morolo logi gi koloni koloni antar antara a bakte bakteri, ri, yeast dan molds$ molds $ "$ enc encar arii tahu tahu stan standa dar/ r/ bata batas s amba ambang ng// juml jumlah ah maks maksim imum um aman aman jika jika sample yang dianalisa memerlukan reerensi tersebut$ 55
7$ emperki emperkiraka rakan n jumlah sampel sampel (volum/ (volum/bera berat# t# yang perlu perlu ditampung ditampung pada pada saat pengambil pengambilan an sampel sampel yang disesuai disesuaikan kan dengan dengan sample sample size size dari metode teretentu$ eorang eorang mikrobio mikrobiologi logi*an *an sebaikny sebaiknya a mampu mampu mempredi memprediksi ksi jumlah jumlah sel mikrob mikroba a dalam dalam suatu suatu sampe sampell terten tertentu tu atau atau yang yang diseb disebut ut dengan dengan cell density density sebelum sebelum mengana menganalisa lisanya$ nya$ 8ensitas 8ensitas sel sangat sangat tergantu tergantung ng dari jenis jenis sample$ sample$ 9emampuan mengira-ira ini dapat diperoleh dari pengalaman, membaca atau bahkan bagi yang :expert : expert ; didapat dari perasaan$ ungsi utama memperkirakan dens densit itas as sel sel ini ini adal adalah ah untu untuk k mene menent ntuk ukan an perl perlu u atau atau tida tidakn knya ya dila dilaku kuka kan n penge pengence nceran ran atau atau untuk untuk menen menentuk tukan an jumla jumlah h sampe sampell yang yang akan akan diana dianalis lisa$ a$ 9eputusan ini adalah sangat penting (+nonim, 212#$ ebag ebagai ai pijaka pijakan n a*al, a*al, harus harus diketa diketahu huii bah* bah*a a hasil hasil yang yang paling paling baik baik adalah antara 42-422 koloni per ca*an , ada juga yang menyebutkan 6-62 kolo koloni ni per per ca* ca*an$ an$
)al )al ini ini ditu dituju juka kan n untu untuk k memi memini nima mali lisi sirr kemu kemung ngki kina nann-
kemu kemung ngki kina nan n kesa kesala laha han n dala dalam m pros proses es anal analis isa, a, teru teruta tama ma statistica statisticall error error (Anonim, 200)$ 200)$ yarat yarat perhitun perhitungan gan jumlah jumlah bakteri bakteri adalah adalah (Pangast (Pangastuti uti dan , hasilny hasilnya a dirata-r dirata-rata, ata, tetapi tetapi bila? bila? , yang dipakai jumlah bakteri dan pengenceran sebelumnya$ d$ Bila dengan dengan ulanga ulangan n dan hasil hasil memenuhi memenuhi syarat, syarat, hasilnya hasilnya dirata-r dirata-rata ata enurut uria*iria (1!6# bah*a cara perhitungan yang paling umum digunakan yaitu 3 56
a$ Pen Pengence encera ran n 8eng 8engan an penge pengence nceran ran disiap disiapkan kan beber beberapa apa buah buah tabung tabung yang yang berisi berisi a@uades a@uades steril steril sebanyak sebanyak ml$ kepada kepada masing-ma masing-masing sing tabung kemudia kemudian n ditambahkan 1 ml sampel yang mau diterimah secara bertahap yaitu 1# 1 ml sampel sampel kedalam kedalam tabung tabung pertama pertama hingga hingga konsentras konsentrasii larutan larutan dalam dalam tabung pertama menjadi 12 -1$ # 1 ml d ari ari tabung tabung pertam pertama a ketabu ketabung ng kedua, kedua, hingga hingga konsentr konsentrasi asi laruta larutan n dalam tabung kedua menjadi 12 -$ 8ari tiap-tiap tiap-tiap tabung tabung kemudian kemudian diambil diambil 1 ml larutan larutan dan ditambahkan ditambahkan kedalam kedalam ca*an ca*an Petri Petri yang yang berisi berisi media media padat$ padat$ Pertumbuh Pertumbuhan an koloni koloni yang yang kemudian tumbuh pada tiap-tiap ca*an dihitung$ 8idalam cara perhitungan ini harus harus diper diperhi hitun tungka gkan n actor actor-a -akto ktorr kerap kerapata atan n koloni koloni$$ 9aren 9arena a kalau kalau pertum pertumbuh buhan an terlal terlalu u rapat rapat maka maka biasan biasanya ya sulit sulit dipert dipertan anggu ggug g ka*abk ka*abkan an hasilnya$ hasilnya$ =uga pertumbuhan yang terlalu jarang$ b$ Penggu Penggunaa naan n ruan ruang g pengh penghitu itung ng 0aitu 0aitu hasil pengenceran pengenceran tidak ditanamkan kedalam ca*an yang berisi media, tetapi ditetaskan dalam ruang penghitung$ Pemeriksaan selanjutnya diba*ah mikr mikros osko kop p
terh terhad adap ap sel sel
mikr mikrob oba a
yang yang terd terdap apat at
dala dalam m
kolo kolomm-ko kolo lom m
penghi penghitun tung$ g$ Perhi Perhitun tungan gan langs langsung ung melal melalui ui alat alat ruang ruang hitun hitung g memil memiliki iki keuntungan dan kerugiannya$ 9euntungannya yaitu bah*a sel mikroba baik yang masih hidup ataupun yang sudah mati akan terhitung secara langsung$ edang edangkan kan kerug kerugian ianny nya a kesal kesalaha ahan n menghi menghitun tung g akan akan didap didapatk atkan an kalau kalau system pegencerannya pegencerannya tidak homogen lagi$
c$ Penggu Penggunaa naan n turbi turbidim dimete eter$ r$
57
Cara ini merupakan perhitungan kerapatan suatu materi (sel# didalam larutan yang yang diberi diberi cahay cahaya$ a$ 9uali 9ualitas tas bias bias suatu suatu cahay cahaya a dapat dapat dilak dilakuka ukan n ident identilil dengan kerapatan materi sel yang berada dalam larutan$ +nalisis mikrobiologi meliputi perhitungan jumlah bakteri (8inoto, 226#$ bakteri dihitung secara tidak langsung dengan membuat taburan dalam ca*an petri$ petri$ Pada mulanya mulanya dibuat dibuat
pengenc pengenceran eran bahan bahan dengan dengan kelipatan kelipatan 12$ 8an
masing-masing pengenceran diambil 1 ml dan dituangkan ke dalam ca*an petri$ %ntuk menghitung bakteri digunakan medium nutrien agar, 8alam penentuan ini dibuat seri pengenceran dan 12 -6 sampai 12-7$ etelah diinkubasi dihitung jumlah koloni bakteri dalam tiap gram berat berat kering bahan$ edang *aktu inkubasi inkubasi yang dibutuhkan 5 jam (Pangastuti dan
III. METODOLOGI PRAKTEK 58
A. aktu dan Te!"at Te!"at Praktek mikrobiologi laut dilaksanakan pada hari =umat " aret 212 jam 2$22 sampai selesai di Aaboratorium ikrobiologi ikrobiologi laut jurusan ilmu 9elau 9elautan tan,, akult akultas as lmu lmu 9elau 9elautan tan dan dan Perika Perikanan nan,, %niver %niversit sitas as )asan )asanudd uddin in,, akassar$ B. Alat dan Ba#an +lat-alat yang yang digunakan dalam dalam praktikum ini ini adalah 3 ca*an ca*an petri 4 buah sebagai tempat tempat medium, bunsen atau lampu lampu spritus 1 buah untuk sterilisasi, sterilisasi, rak tabun tabung g 1 bauh bauh untuk untuk menyi menyimpa mpan n tabung tabung reaksi reaksi , Pipet Pipet skala skala buah buah untuk untuk memindahkan memindahkan larutan pengencer pengencer pada ca*an petri , A+ ruang ruang isolasi sebagai tempat tempat mencam mencampu purr
media media dan larutan larutan penge pengence ncer, r, ruang ruang inkub inkubato atorr untuk untuk
menumbuh menumbuhkan kan jamur, jamur, vorte vorte untuk untuk menghomo menghomogen genkan kan larutan larutan pengenc pengenceran eran,, colo colony ny coun counte terr untu untuk k meng menghi hitu tung ng juml jumlah ah kolo koloni ni dan dan pena penang ngas as air air untu untuk k mengencerkan media agar dan Plate Count +gar (PC+#, *aterbath digunakan untuk memanaskan larutan, timbangan digital, botol pengencer 2ml$ edangka edangkan n bahan bahan yang yang digunaka digunakan n dalam dalam praktikum praktikum ini adalah adalah kapas, kapas, tissue roll, kertas kertas label, label, plate count count agar, agar, air laut, laut, air air sumur, sumur, larutan phospate buffered 6ml$ $. Pr%&edur Kerja +dapun prosedur prosedur kerja dari dari praktiku ini adalah adalah 3 1$ enyiapk enyiapkan an alat alat dan dan bahan bahan yang yang digun digunakan akan$$ $ +mbil +mbil semua semua alat alat dan bahan bahan dan diker dikerjaka jakan n di A+ A+ 4$ asukkan asukkan larutan larutan buered buered sebanya sebanyak k 6 ml kedalam kedalam botol yang disteril disterilkan kan didalam autokla$ 5$ engambi engambill 6 ml sampel sampel masuk masuk kedal kedalam am larutan larutan bue buered red kedalam kedalam botol botol$$ 6$ +duk dan dan kocok kocok agar larutan larutan dalam dalam sampel sampel berca bercanpur npur ( pengen pengenceran ceran 12 12 -1# 59
"$ elakuka elakukan n penegence penegenceran ran dengan dengan memasukka memasukkan n 1 ml sample air sumur sumur yang telah bercampur dengan larutan buered kedalam tabung reaksi yang telah berisi ml ini merupakan pengenceran ke 12 -$ menghomogenkan larutan dengan vorte$ melakukan pengenceran hingga tiga tingkat pengenceran$ 7$ engambi engambill masingmasing-masi masing ng 1 ml penge pengencera nceran n 12- dimasukkan kedalam c 12 -4 lalu dihomogenkan , hal ini dilakukan sampai pengenceran 12 -"$ !$ enuang enuang larutan larutan sebany sebanyak ak 1ml ke masing masing masing masing ca*an ca*an petri dan digoy digoyang ang perlahan hingga medium dan sampel tercampur$ $ embiara embiarakan kan medium medium hingga hingga dingin dingin dan memadat memadat dan dan masukkan masukkan kedalam kedalam inkubator selama 5! jam$ 12$ enghitung enghitung jumlah koloni dengan dengan menggunkan colony counter. D. Anal'&'& Data Dumus metode Plate count 3 =umlah sel E v n 1/ 8imana 3 F E volume sampel yang ditambahkan ' E jumlah koloni dalam ca*an E aktor pengenceran pengenceran
I(. HASIL DAN PEMBAHASAN 60
A. Ha&'l +dapun hasil hasil yang didapatkan didapatkan dalam praktikum praktikum ini adalah adalah 3
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN ILMU KELAUTAN )AKULTA )AKULTAS S ILMU KELAUTAN KELAUTAN DAN PERIKANAN PERIK ANAN UNI(ERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 9eterangan 3 1$ Plat Plate e Count ount +gar $ Bakt Bakter erii bia biaka kan n 4
1
'ama Biakan 3 Bakteri pada pengenceran 12 - LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN ILMU KELAUTAN )AKULTA )AKULTAS S ILMU KELAUTAN KELAUTAN DAN PERIKANAN PERIK ANAN UNI(ERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 9eterangan 3 1$ Plate Count +gar $ Bakteri biakan
1
'ama Biakan 3 Bakteri pada pengenceran 12 -4 61
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN ILMU KELAUTAN )AKULTA )AKULTAS S ILMU KELAUTAN KELAUTAN DAN PERIKANAN PERIK ANAN UNI(ERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 9eterangan 3 1$ Plate Count +gar $ Bakteri biakan
1
'ama Biakan 3 Bakteri pada pengenceran 12 -5
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN ILMU KELAUTAN )AKULTA )AKULTAS S ILMU KELAUTAN KELAUTAN DAN PERIKANAN PERIK ANAN UNI(ERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR
62
9eterangan 3 1$ Plate Count +gar $ Bakteri biakan 1
'ama Biakan 3 Bakteri pada pengenceran 12 -6
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI JURUSAN ILMU KELAUTAN )AKULTA )AKULTAS S ILMU KELAUTAN KELAUTAN DAN PERIKANAN PERIK ANAN UNI(ERSITAS HASANUDDIN MAKASSAR 9eterangan 3 1$ Plate Count +gar $ Bakteri biakan
1
'ama Biakan 3 Bakteri pada pengenceran 12 -"
Ta*el Pengen+eran -
12 12-4 12-5
Ju!la#
Ju!la# &el
Ju!la# t%tal
K%l%n' 157 11 !4
*akter' 15722 11222 !42222
*akter' ,ALT4,1! 126 Cu/ml
63
B. Pe!*a#a&an +nalisis mikrobiologi mikrobiologi berupa perhitungan perhitungan jumlah koloni bakteri dari air sumu sumurr
dipe dipero role leh h
dari dari hasi hasill
peng pengen ence cera ran n
menggunakan teknik agar tuang ( palte count #
seba sebany nyak ak
enam enam kali kali deng dengan an
pada pada media media !late "ount Agar
(PC+#$ )asil pada pada pengenceran pengenceran 12 - didapatkan jumlah koloni bakteri sebanyak 157 koloni, pada pengenceran 12 -4 sebanyak 11 koloni, pada pengenceran 12 -5 sebany sebanyak ak !4 koloni koloni,, pada pada pengen pengencer ceran an 12 -6 sebany sebanyak ak " kolon kolonii dan dan pada pada pengenceran 12 -" sebanyak 46 koloni )asil ini menunjukan semakin tinggi tingkat pengenceran maka semakin rendah jumlah dari koloni bakteri$ Gleh karena itu maka dalam dalam perhitungan jumlah koloni koloni bakteri digunakan digunakan syara syaratt menuru menurutt Panga Pangastu stuti ti dan , hasilnya dirata-rata, tetapi bila? , yang dipakai jumlah bakteri dan pengenceran sebelumnya$ Pada hasil pengukuran ini jumlah koloni bakteri dengan perbandingan perbandingan pengenceran pengenceran > sehingga hasilnya dirata-r dirata-rataka atakan$ n$ =umlah ini termasuk termasuk dalam dalam
pertumbu pertumbuhan han yang cukup cukup baik$
Pertumbuhan bakteri bakteri yang baik adalah jika jumlah jumlah koloni tiap ca*an ca*an petri antara 42H422 koloni ('ursyir*ani ('ursyir*ani dan adli, 224#$ =umlah total bakteri didapatkan dari hasil rata-rata jumlah bakteri pada tingkat pengenceran dibagi banyaknya jumlah pengenceran$ pengenceran$ )asilnya )asilnya adalah !,67 !,67 12 " Cu/ml$
LAMPIRAN
=umlah sel E v n 1/
8imana 3 F E volume sampel yang ditambahkan 64
' E jumlah koloni dalam ca*an E aktor pengenceran pengenceran a$ Peng Pengen ence cera ran n 12- =umlah sel E 1 ml 157 1/12- E 15722 b$ Peng Pengen ence cera ran n 12-4 =umlah sel E 1 ml 11 11 1/12-4 E 11222 c$ Pen Pengence encera ran n 12-5 =umlah sel E 1 ml !4 1/12-5 E !42222 =umlah
15722I11222I!42222
E 4,1! 12 6Cu/ml
4
I(.
SIMPULAN DAN SARAN
A. S'!"ulan )asil pada pengenceran 12 - didapatkan jumlah koloni bakteri sebanyak 157 koloni, sedangkan 12 -4 sebanyak 11, pengenceran 12 -5 sebanyak !4 koloni,$ =umlah total bakteri didapatkan dari hasil rata-rata jumlah bakteri pada tingkat
65
pengenceran dibagi banyaknya jumlah pengenceran$ )asilnya adalah 4,1! 12 6 Cu/ml$ B. Saran ebai ebaikny knya a asiste asisten n bisa bisa membu membuat at data datarr antri antri pada pada prakt praktika ikan n dalam dalam pemakaian atau penggunaan agar praktikum dapat berjalan dengan lancar$
DA)TAR PUSTAKA +nonim, 212$ http3//blogkita$in http3//blogkita$ino/perhitunga o/perhitungan-jumlah-bakteri n-jumlah-bakteri// (diakses tanggal ! +pril 212# 212# 8inoto, 8inoto, 226, Joogle, http3//*** http3//***$renik$5t$com/artikel $renik$5t$com/artikel21$htm 21$htm 8iakses pada hari inggu tanggal aret 212, pukul 1"$ 2 K<+$ Pangastuti )estining dan
66
Pelcz Pelczar ar,, =, icha ichael el dan Chan, Chan, 1!", 1!", #asar #asar-- #asar #asar $i%rob $i%robiol iologi ogi,, %niversitas ndonesia (%-Press#, =akarta$
67
